Immunomorphologic表现在小鼠肝脏感染流感A / H5N1, /鹅/ Krasnoozerskoye / 627/05压力

文摘

H5N1高致病性禽流感(HPAI H5N1病毒可以感染哺乳动物,包括人类,导致严重的系统性疾病与免疫系统的抑制和高死亡率。在淋巴组织耗竭条件下,肝脏在宿主防御病毒中起着重要的作用。小鼠肝脏感染高致病性禽流感H5N1病毒的变化研究了/鹅/ Krasnoozerskoye / 627/05。它已经表明,病毒在肝脏导致持久性促炎细胞因子(TNF的表达α,il - 6)和胞内蛋白酶(溶菌酶、组织蛋白酶D和髓过氧化酶)枯氏细胞。有缺陷的抗病毒反应加剧破坏过程在肝脏加速肝功能衰竭的发展。

1。介绍

流感需要一个特殊的位置在人类感染病理,因为它没有疾病的患病率和发病率。病原体的高致病性禽流感A / H5N1高致病性H5N1病毒()是特别感兴趣的。它的特征是广泛的地理分布和高致病性对人类造成严重疾病与高死亡率没有人口中的特定免疫(1- - - - - -3]。恒大流行的威胁,由于流感病毒的不断发展,人口密度高的地区活跃的循环的高致病性禽流感H5N1病毒,它能够直接从鸟类传染给人类,和重组的可能性与病毒适应人口(4- - - - - -6]。

传染病引起的高致病性禽流感H5N1病毒发生损害许多器官和系统的有机体和严重中毒的症状7,8]。学习时的分布高致病性禽流感H5N1病毒在受感染动物的组织的内部器官的研究,结果表明,他们能够复制不仅在肺,肺外器官还包括肝、肾、脾、和大脑9- - - - - -11]。潜伏期一般为高致病性禽流感H5N1病毒太短暂了,主要的发生体液反应(12),疾病的初期发生的抑制干扰素反应和减少血液中的干扰素(10]。同时,许多研究人员报道重要的淋巴组织消耗的大量细胞凋亡淋巴细胞在感染(13,14]。在这一点上,一个特殊的角色获得特异性的生物的保护机制,尤其是单核吞噬细胞系统的细胞,一个重要的是集中在肺和肝脏(12]。巨噬细胞能吞噬病毒,破坏他们(12,15];然而,在感染高致病性病毒的情况下,包括高致病性H5N1病毒,他们成功的复制发生在巨噬细胞细胞病理效应的发展表达了在许多器官,这往往导致致命的结果(16]。

因为pneumotropic流感病毒,大多数研究都致力于调查高致病性H5N1病毒的形态表现在肺部(1,2,8,16,17]。然而,肝脏解毒和免疫的中心器官是一个重要的生物病毒传播的障碍。枯氏细胞,肝的常驻巨噬细胞,除了吞噬功能,有很高的分泌活动。分泌的产品中最重要的是炎症(il - 1、il - 6、TNF -α、引发、il - 12)和抗炎细胞因子(il - 10, TGF)18]。

由于溶酶体装置开发,巨噬细胞显示杀菌剂的溶酶体蛋白酶的分泌活动。在病毒感染最重要的条件是集团的蛋白水解酶肽链内切酶(溶菌酶、组织蛋白酶D和髓过氧化酶),要求细胞内蛋白质结构的瓦解病毒(18,19]。

因此,高致病性禽流感H5N1型高致病性的哺乳动物与免疫反应的特点相关联。肝细胞的结构和功能状态在这一过程中扮演了重要的角色。上述这一研究的目的是研究细胞的结构和功能变化的肝脏(枯氏细胞、肝细胞和内皮细胞)的老鼠感染高致病性禽流感H5N1病毒/鹅/ Krasnoozerskoye / 627/05。

2。材料和方法

研究了240远系繁殖6-8-week-old白色实验动物托儿所的雄性老鼠FBRI SRC VB向量。动物被安置在标准条件与免费的食物和水。一段动物适应住房条件在实验之前两个星期。调查进行了符合赫尔辛基宣言国际原则。老鼠的实验通过位错的乙醚麻醉下颈椎椎骨。

/鹅/ Krasnoozerskoye / 627/05 (H5N1)流感病毒(以下简称A / H5N1病毒),从肺分离的鹅死于2005年9月在禽流感家畜流行病Krasnoozerskoe村,新西伯利亚地区,俄罗斯,作为传染病。小鼠鼻内感染了MLD 10₅₀A / H5N1。

实验与研究高致病性禽流感H5N1病毒株一直在按照卫生规定执行安全与iii iv致病性微生物组和单独工作。研究进行了三个实验在80只老鼠在每个第一组(控制)包括完整的动物(老鼠)20日和第二组由60小鼠感染/鹅/ Krasnoozerskoye / 627/05 (H5N1)流感病毒。

肝脏样本的动物感染A / H5N1得到1,3,6,感染后10天,10动物在每个实验时间。控制动物退出实验第一和第十天。标本在10%福尔马林固定,脱水醇浓度的增加,嵌入在石蜡混合物浇注“HISTAMIX”(“BioVitrum”,俄罗斯)。部分准备3微米厚度的旋转式切片机HM355S (“Microm,”德国)和苏木精和伊红染色标准程序和免疫组织化学(包含IHC)方法。

免疫组织化学(包含IHC)分析是由使用间接streptavidin-peroxidase方法与特定的主要流感抗体抗原(正/ FITC (“Abcam”)), TNF -α(DBS)和il - 6 (“Novocastra”)和溶酶体酶(组织蛋白酶D (DBS)、髓过氧化物酶(DBS)和溶菌酶(DBS))。脱蜡、水化包含IHC研究部分。在微波炉抗原暴露后20 - 25分钟在700 W功率和蒸馏水洗涤,磷酸盐缓冲剂,内源性过氧化物酶被阻塞在5分钟之内。曝光时间的主要抗体是30 - 45分钟37°C。部分是孵化streptavidin-peroxidase复杂,DAB-substrate,进一步与迈耶的苏木精复染色。可视化抗体检测系统“NovoLink”(“Novocastra”)使用。

的形态学研究的组织结构元素进行使用测试系统组成的100点收盘,广场μ米²。有注册体积密度()的破坏性的变更(如萎缩和坏死)和炎症浸润在肝脏和数值密度()的细胞表达研究包含IHC标记(20.]。统计分析的结果是使用统计分析计划执行Microsoft Office Excel 2007和标准软件包STATISTICA v。算术平均值()和平均数标准误差()测定。识别的概率意义差异的平均值相比我们学生的使用以及。被认为具有统计显著性差异在5%显著性水平()。

3所示。结果与讨论

在实验感染小鼠流感病毒A / H5N1 /鹅/ Krasnoozerskoye / 627/05我们观察到高死亡率的75%。动物的死亡是在7 - 11天后注册感染。死去的动物的最大数量记录在8天的实验。

在以前的病毒学研究,显示选中的孤立的高致病性H5N1 /鹅/ Krasnoozerskoye / 627/05高致病性的老鼠和能够复制在许多器官,包括肝脏、未经改编(10]。

包含IHC可视化的病毒抗原的肝脏被感染的老鼠实验表明,在第一天,此后,最高的A / H5N1流感病毒的复制在正弦内皮细胞和枯否细胞(数字1和2),这是与他们的吞噬功能有关。细胞的最大数量与A / H5N1流感病毒复制的迹象在第三天发现老鼠的肝脏感染。优惠的病毒抗原检测正弦细胞可能是增加的证据由于破坏感染细胞的病毒血症和释放新的病毒粒子进入血液。

在受感染动物的肝脏的组织学检查前六天,我们注册的主要血管和血窦扩张和充血停滞的迹象和红细胞的溶血。从感染后的第一天,我们在一种营养不良的状态,观察肝细胞坏死。肝细胞体积密度的破坏性变化6天postinfection是最大的,达到93.78%(图3),这表明小计损害肝细胞和肝衰竭的发展。第十天的实验,对该指标的值有所下降(图3),这可能表明激活修复过程的幸存的动物。

在IHC细胞因子的研究,我们注册TNF的表达α由枯氏细胞il - 6和正弦内皮细胞在细胞水平。肝细胞的数量与il - 6表达最大的感染和3天逐渐下降到第十天的实验(图4)。肝细胞的总数字密度与TNF的表达α高第一天,6天达到最大值。在整个实验中,枯氏细胞肝细胞表达促炎细胞因子的主要类型。

评估的水解能力枯氏细胞的老鼠感染A / H5N1病毒,溶菌酶的生产,组织蛋白酶D,髓过氧化物酶研究。增加这些酶的表达阶段的实验观察。

已经在第一天的感染显著增加细胞表达溶菌酶在肝脏被感染的老鼠,其中绝大多数是由枯氏细胞。这个指数的值增加到第三天;然后有一个观察减少细胞表达溶菌酶的浓度到实验的最后(图5)。lysozyme-secretory活动检测内皮细胞,但它们的数量与枯氏细胞相比就微不足道了。可能是细胞表达溶菌酶的患病率在早期感染后具有自适应特性的这种酶广泛的活动,属于酶的“快速反应”破坏肽聚糖信封病毒和提高吞噬作用的有效性(21,22]。

后来,azurophilic颗粒动员。它们包含组织蛋白酶,包括组织蛋白酶D最常见的(23]。细胞的数量表达组织蛋白酶D在小鼠的肝脏感染A / H5N1病毒还在3天达到最大值的疾病逐渐减少(图105)。

数值密度在受感染小鼠的肝细胞表达髓过氧化物酶与其他研究相比酶水平最高的所有阶段的观察,同时也达到了最大3天。10天,有一个1.6倍减少这个参数(数字5和6)。髓过氧化酶氧化代数余子式,将其转化为一个活跃的形式,从而提供一个强大的杀菌剂的效果(24]。然而,髓过氧化物酶在细胞外空间的输出通过胞外分泌或吞噬破坏会导致病理条件下的酶作用的发展,例如,低pH值在缺血。由此产生的强氧化剂造成组织损伤的生物25]。

分析的结果表明,在条件损耗高致病性H5N1病毒引起的淋巴组织,一个特殊的角色在保护生物体免受感染属于肝的关键器官特异性的保护。

高致病性禽流感H5N1病毒高取向对血管内皮细胞的器官促进早期感染的病毒血症和泛化。A / H5N1病毒在细胞不同的组织发生与持久性显著激活细胞介导免疫性,导致增加生产促炎细胞因子(TNF -α和il - 6),一方面,是一种保护机制包括免疫细胞进入招聘的重点在再生过程的激活感染和器官通过生长因子。另一方面,过度积累的炎性细胞因子促进降解的起始过程(12]。

A / H5N1病毒感染的老鼠是伴随着早期激活髓过氧物酶的表达,通过枯氏细胞溶菌酶和组织蛋白酶D。胞内蛋白酶的最重要的因素是特异性的保护提供了细胞内瓦解病毒的蛋白质。但是,显然,这些机制是高致病性禽流感H5N1病毒无效。

高水解能力的细胞,早期非特异性保护因子,同时,可以触发点启动的裂解宿主细胞(次生蚀变)的发展传播破坏性并发症的器官,以防病毒颗粒的吸收后吞噬溶酶体膜不稳定。

因此,有缺陷的抗病毒反应引发一连串cytokine-mediated反应,只是加剧了破坏性的过程在实验动物的肝脏,它与氧气供应不足造成的损害肺部导致不可逆的结构和功能变化和急性肝衰竭的早期发展。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

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