文摘
目的。调查是否HLA类我多态性可以影响清除乙肝表面抗原(HBsAg)在启东市汉族人口。方法。我们基因分型抗原,b和c位点与HBV持续感染448人和140人自发的间隙HBsAg通过聚合酶链反应序列为基础的输入(PCR / SBT)。所有的个人都无关的男性从启东市汉族人口登记,随访10年。结果。的频率抗原*33:03:01G在持续提高乙型肝炎病毒感染组(值是0.028),而频率HLA-B*13:01:01G增加在HBsAg清除组(值是0.0004)。结论。这些发现表明主机HLA类我多态性是一个重要的因素在决定乙型肝炎病毒感染的结果。
1。介绍
乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个重大的公共卫生问题。预计将有二十亿人感染了乙肝病毒在他们的一生中,估计大概有3.5亿慢性携带者(1,2]。如今,在中国大约有1.2亿乙肝病毒慢性携带者(3]。乙型肝炎病毒感染可引起广谱的疾病,如慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(4]。乙肝病毒清除的机制和发病机制尚未明确,但宿主遗传因素是至关重要的贡献者之一,其中包括年龄、性别、免疫反应等(5- - - - - -8]。因此,了解宿主遗传变异性的角色在乙型肝炎病毒感染的发病机制将帮助我们发现这种病毒持久的基础。
人类白细胞抗原(HLA)是不可分割的组成部分,大多数宿主的免疫反应基因的研究重点。众多报道描述了协会高度多态的HLA基因与多种传染性疾病的结果。因为抗病毒细胞毒性T淋巴细胞(ctl)被认为发挥重要作用在根除感染由于他们识别和杀死病毒感染细胞的能力通过识别病毒多肽由HLA类我分子(9]。因此,HLA分子被认为是控制疾病的病理进程,或者回归以及病毒和环境因素。
HLA位点的基因是位于6号染色体的短臂上。他们被安排在三个集群:类I, II类和III类。许多先前的研究显示某些HLA的关联类我与乙型肝炎病毒感染的基因,但这些关联不一致甚至在相同的人口(10,11]。汉族是中国最大的民族。在汉族居民地区,江苏启东是中国一个著名的地方,居民乙型肝炎病毒感染的发病率高。在这项研究中,确定的HLA等位基因与阻力或对乙型肝炎病毒感染的易感性在启东市汉人,我们分析了HLA的多态性的等位基因在人HBV持续感染或那些HBsAg清除使用高分辨率的测序技术。
2。材料和方法
2.1。道德声明
协议是经伦理委员会批准的启东肝癌研究所入学前,所有的病人提供书面知情同意。
2.2。研究对象
共有728名无关的男性患者血清中乙肝表面抗原(HBsAg)积极参加了肝癌研究所1995年江苏启东。他们随访10年了,再次检测乙型肝炎病毒感染。2005年,588人被包含在这群因为追踪损失和排斥的患者接受anti-HBV疗法。其中588人,448年仍然HBsAg阳性(名为HBV持续感染组),而140年为阴性HBsAg但阳性anti-hepatitis B病毒核心抗原(HBc)和anti-HBsAg(名叫HBsAg清除组)。所有的受试者对丙型肝炎病毒(HCV), D型肝炎病毒(HDV为),和人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体。都是汉族人口。
2.3。血清学和病毒测试
血浆样本获得的所有主题和储存在−20°C。关于HBsAg血清学的地位、anti-HBs anti-HBc,乙型肝炎病毒e抗原(e抗原)和anti-HBe是由酶联免疫吸附试验根据制造商的指示(Boehringer-Mannheim,慕尼黑,德国)。
2.4。提取基因组DNA和HLA等位基因的基因
提取基因组DNA为每个单独的使用QIAamp DNA从外周血单核细胞血液工具包(试剂盒Inc .,就是查,CA)。所有的DNA样本(100 - 200 ng / mL)被储存在4°C(短期)或−20°C(长期)TE缓冲(10毫米Tris-HCl, pH值8.0,2毫米乙二胺四乙酸)和稀释10 - 12在PCR ng / mL。
放大了基因组DNA标准HLA locus-specific引物(12]。根据常规序列输入(SBT)方法,第2和第3外显子测序在正向和反向方向使用3730 xl DNA分析仪(应用生物系统公司,培育城市,CA)和BigDye终结者v3.1循环测序反应工具包(应用生物系统公司)做好了准备。序列进行分析使用在线软件SBT接口(MHC数据库;国家生物技术信息中心;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/mhc/)。所有组的HLA等位基因相同的核苷酸序列跨外显子编码肽绑定域(外显子2和3我等位基因HLA类)指定的代码,如一个*33:03:01G,它本质上包含一个*33:03:01,*33:15,*33:25,等等(http://hla.alleles.org/alleles/g_groups.html)。
2.5。统计分析
等位基因频率计算等位基因的数量除以总样本的数量的两倍。等位基因的意义联想决心通过卡方检验或确切概率法(当有不到5科目在细胞)。为了减少的数量与力量不足,只有等位基因频率不少于3%(29等位基因在这个人口)进行了分析。重要性水平的多个测试使用Bonferroni调整修正。根据Bonferroni调整,HLA等位基因的频率被认为是只有当未修正的统计不同价值低于Pc (0.05/29 = 0.0017)。HLA基因型的频率不少于3%的人检查哈迪温伯格平衡使用测试。数据通过SPSS 13.0分析数据分析软件包。优势比(或)及其95%置信区间计算。
3所示。结果
3.1。病人的特点
588启东市汉被测试为HBsAg阳性的人在1995年被纳入本研究。448年被列为HBV持续感染组,因为他们仍然十年后HBsAg阳性。HBsAg清除组包括剩余的140人负HBsAg但正anti-HBc和anti-HBs后10年随访。年龄分布显示两组之间没有统计学差异。
3.2。频率的抗原,HLA-B, HLA-C等位基因的学习小组
共有31个抗原等位基因54 HLA-B等位基因,和35 HLA-C等位基因被发现在两个学习小组(表1- - - - - -3)。其中,29个等位基因的频率高于3%。* 24:02:01G是最常见的抗原等位基因(表1),而B*46:01:01G和B*40:01:01G是最常见的HLA-B等位基因(表吗2),C*01:02:01G是最常见的HLA-C等位基因(表吗3)。与此同时,四个新等位基因(HLA-C*12:10:02,HLA-B*40:122,HLA-B*40:127,和HLA-B*55:49)通过我们之前的研究从这个队列,并命名的命名法委员会(13,14]。哈迪温伯格平衡(HLA基因型频率是一致的)。
3.3。比较的频率抗原,HLA-B, HLA-C等位基因之间的持续感染和HBsAg清除组
维护统计力量,只有那些等位基因频率不少于3%的持续感染和HBsAg清除组之间的比较。的频率抗原*33:03:01G等位基因在HBV持续感染组高于HBsAg清除组(分别为6.36%和2.86%,,,95%置信区间CI: 1.09 - -4.90),而的频率HLA-B*13:01:01 gHBsAg清除组高于在持续组(分别为8.57%和3.46%,,95%置信区间:1.51—-4.54)。然而,只有的频率HLA-B*13:01:01 g在HBsAg清除组显著增加Bonferroni调整。
4所示。讨论
这无疑是宿主遗传因素相关的临床结果不同的传染病。人类宿主因素,可能会影响对病毒感染的易感性是HLA基因(15,16]。我在HLA基因中,HLA类基因编码抗原,HLA-B, HLA-C蛋白质表达的所有有核细胞的表面。HLA类我可以绑定病毒多肽分子并将其呈现在表面的感染病毒的细胞,可被CD8 +细胞毒性t淋巴细胞。而HLA分子可绑定和现在的病毒肽,细胞可以被CD4 + T淋巴细胞。HLA类我和HLA二类都发现与乙型肝炎病毒感染的结果(11,17,18]。一些HLA类分子可以作为自然杀伤(NK)细胞受体的配体,成为重要的监管机构对NK细胞(19,20.)和CD8 + T细胞(21,22]。协会研究其他病毒感染的结果,如丙肝病毒(23],艾滋病毒[24,25),人类乳头状瘤病毒(26),而巨细胞病毒(CMV) (27),支持HLA的重要作用时我是杀手细胞immunoglobulin-like受体的配体(吉珥)。高等人观察到一些吉珥和特定HLA-C基因的组合与乙型肝炎的发生(28]。我们还报道,HLA类的多态性我和吉珥可能影响HBV-associated肝癌的发展29日]。我调查是否HLA分子为吉珥配体可能影响HBsAg清除这一群人,我们分组抗原,HLA-B,和HLA-C等位基因为三个吉珥配体类:Bw4HLA-C组1,HLA-C组2(描述30.),然后将他们的频率之间的持续感染和HBsAg清除组。然而,没有观察到协会(数据没有显示)。
HLA类之间的关系我多态性和乙型肝炎病毒感染的结果之前一直在探索,但这种关系似乎并不普遍调查以来数量是不同的。在台湾原住民,抗原*0206年是容易感染乙肝病毒和长期性,HLA-B*4001年可能与病毒的消除(10]。在美国白种人,抗原*01-B*08-DRB1*03 B*44-Cw1601,和B*44-Cw*0501年单体型与病毒有关持久性和抗原*0301年与病毒有关。在欧洲白种人,HLA-B*8有关与乙型肝炎病毒疫苗接种情况说明(11]。卡兰et al .,在土耳其,在他们的研究报告HLA-A24和CW1是预防慢性乙型肝炎病毒(31日]。除此之外,在土耳其东部,HLA-B35和HLA-CW4慢性乙肝病毒组显著高于自然恢复组(32]。
在这项研究中,我们研究了一群启东市汉族人口住在乙型肝炎病毒感染的高发地区。样本由无关的男性和10年的随访。没有以前的前瞻性群组研究之间的关系进行了澄清HLA等位基因的多态性,在这样一个人口乙型肝炎病毒感染的结果。我们发现抗原*33:03:01G更频繁的HBV持续感染组比HBsAg清除组(分别为6.36%和2.86%,,,95%置信区间CI: 1.09 - -4.90),符合结果发现在伊朗北部[33和韩国人口34)尽管在这些人群中,校正后的差异没有达到显著水平。
的频率HLA-B*13:01:01GHBsAg清除组显著高于在持续组(分别为8.57%和3.46%,,,95%置信区间CI: 1.51 - -4.54),这表明HLA-B*13:01:01G与保护作用对启东市汉族人口持续的乙型肝炎病毒感染。HLA-B*13:01:01G不是一个吉珥配体,因为它没有携带Bw4主题。因此,它不太可能,NK细胞可以通过这个功能KIR-HLA交互。有趣的是,的频率HLA-B*13:02:01G几乎是相同的两组(2.86% HBsAg清除组和3.46%持续感染组)。HLA-B*13:02:01G不同于HLA-B*13:01:01G只有三个氨基酸的位置94,95和97。这种three-amino-acid差异可能影响MHC结合构象的凹槽和结果的能力目前病毒肽CD8 + ctl,乙型肝炎病毒感染后导致不同的预后。这个需要测试在未来可能的分子机制研究。
总之,我们发现HLA-B*13:01:01G与保护作用对持久在启东市汉族人口乙型肝炎病毒感染。我们的研究提供了一个新的了解HLA类我多样性的影响在这个人口乙型肝炎病毒感染的自然历史。这些发现表明,宿主HLA多态性是一个重要的因素在决定乙型肝炎病毒感染的结果。潜在的分子机制的研究需要在未来。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
作者感谢江苏启东肝癌研究所提供的样品。他们要感谢Youji他批判阅读的论文博士。这项工作是由国家自然科学基金(30571703)、国家自然科学基金对于年轻学者(81201601)、国家杰出青年科学基金(30325017)的中国,江苏省卫生部门科学基金会H200745),和科学的基础科学和技术的南京(200702067)。投资者没有参与研究设计、数据收集和分析,决定发表或论文的准备。