文摘

巨细胞病毒(CMV)感染是最重要的一个移植的感染性并发症。监控CMV-specific CD8 T细胞免疫是有用的预测活性巨细胞病毒感染和指导有针对性的抗病毒药物治疗。在这项研究中,我们调查了四个基本参数的验证CMV-specific四聚物染色和肽刺激化验,涉及五类最常见的HLA等位基因。我们还研究了CMV-specific CD8的潜在用途⁺T细胞的数量和功能和细胞溶解的反应在两个自体HSCT受者治疗多发性骨髓瘤。变异系数(CV %)内部精密的化验是3.1−24% HLA-tetramer染色,对干扰素- 2.5−47%γ和3.4−59.7% CD107a / b对肽刺激生产。分析之间的精度是5−26%四聚物染色,对干扰素- 4−24%γ,5−48% CD107a / b。检测极限是0.1−0.23细胞/μL四聚物染色的血液,0−0.23 cell /μL干扰素-γ,0.11−0.98细胞/μ为CD107a L / b。线性和具体分析。95%置信水平的参考区间是0−18细胞/μL为四聚物染色,0−2细胞/μL干扰素-γ,0 - 3细胞/μ为CD107a L / b。我们的研究结果提供可接受的测试性能指标对巨细胞病毒的免疫能力分析CD8的表征⁺T细胞反应以绝对细胞计数/具有重要的意义μ我的血液。

1。介绍

临床巨细胞病毒(CMV)是一种发病率和死亡率的重要原因病人在接受同种异体造血干细胞移植(HSCT)或固体器官移植(说),尽管抗病毒治疗的可用性(1- - - - - -3]。像所有的疱疹病毒,主要的巨细胞病毒感染导致几乎所有器官和建立无症状的病毒性传播延迟immune-competent主机(4]。巨细胞病毒暴露在普通人群中非常普遍。根据人口统计和地理参数、巨细胞病毒seroprevalence利率范围从40到100% (5]。

细胞毒性CD8⁺T细胞起着重要的作用在急性巨细胞病毒感染的控制和维护低病毒载量在巨细胞病毒延迟(6,7]。这种控制是调节在一个HLA类我限制的方式,CMV-specific CD8⁺通过CD8 T细胞专门识别受感染的目标⁺T细胞的T细胞受体(TCR)和HLA分子呈现特定的病毒抗原表位。在这个特定的识别之后,CD8⁺后激活T细胞成为大规模的扩散和对感染细胞效应功能的发挥。炎性细胞因子,包括干扰素-γ,结合其他分子参与的脱粒的溶解性颗粒(例如,CD107a和CD107b)参与直接杀死(8,9]。

预防性抗病毒治疗是有效的防止侵入性巨细胞病毒病,具有重要的意义,但是通常是在有限的时间内由于累积药物毒性和成本(10]。因此,预防停止后,有巨细胞病毒激活的风险和/或免疫抑制疾病发展巨细胞病毒血清反应阳性的患者(11]。之前的研究表明,超过一半的HSCT患者巨细胞病毒疾病发展缺乏可检测anti-CMV t细胞反应(12]。准确的监测和巨细胞病毒特异性CD8的量化⁺T细胞免疫有潜力改变具有重要的抗病毒治疗的方式利用在周期具有重要的意义。

HLA类我四聚体是一个重要的工具使抗原CD8的物理枚举和表型鉴定⁺T细胞(13,14]。此外,在体外肽刺激细胞内染色干扰素-紧随其后γ和CD107a / b是一个行之有效的方法来测量这些细胞的功能和cytotolytic特征相应的(9,15]。我们研究的目的是验证CMV-specific HLA类我四聚物染色和肽stimulation-based功能和细胞溶解的化验,涵盖最常见的HLA类我等位基因一般人群。我们已经检查了四个基本参数的试验验证(线性、精度、灵敏度和特异性)和CMV-specific CD8提出参考范围⁺T细胞以及它们的数量产生IFN -γ和CD107a / b分子肽刺激。此外,我们目前的例子的效用评估CMV-specific CD8化验⁺接受HSCT患者T细胞免疫状态。

2。方法

2.1。捐助者和样品

全血标本获得健康,CMV-seropositive成人捐助者()进行HLA * 01:01, * 02:01, B * 07:02, B * 08:01,和/或B * 35:01等位基因。的平均年龄是37岁(范围、23 - 66);11个女性和22岁男性。我们也获得了多发性骨髓瘤患者的样本进行串联自体HSCT。这些主题也被筛选每周对巨细胞病毒激活使用自己开发的实时定量巨细胞病毒PCR分析。根据批准所有的血液进行了指导过程建立了奥雅纳犹他大学的实验室和医院。中提供的血样heparin-anticoagulant管。外周血单核细胞(PBMC)孤立从血液样本Ficoll-Paque溢价介质(通用电气医疗集团)。所有患者样本包含在本研究确定了根据7275年协议,犹他大学的机构审查委员会批准,以满足病人健康信息的保密准则可移植性和责任法案。

2.2。枚举的CMV-Specific CD8⁺T细胞和HLA-Tetramers数珠子

CMV-specific CD8的枚举⁺全血T细胞进行了(50μL),用荧光标记抗体和小组的HLA-tetramer试剂限于HLA a * 01:01, * 02:01, B * 07:02, B * 08:01和/或B * 35:01等位基因在桌子上1。CD3 FITC, CD8⁺PE-Cy5买来BD生物科学;四聚体从beckman coulter获得。使用的试剂根据制造商。染色后,整个血样处理500μL BD赖氨酸溶液(BD生物科学)去除红细胞然后转移到管数珠子(BD Trucount管,BD生物科学)。染色细胞的流式细胞仪分析第二章流式细胞分析仪。数据是在四个不同的点收集的情节与盖茨将注册的事件三个细胞群和珠子。向前散射(FSC)和侧散射(SSC)点阴谋被用于设置一个门淋巴细胞数量,可以清楚地认识到和粒度大小。的CD3 FITC和CD8⁺PE-Cy5点阴谋起源于淋巴细胞门,将对应于CD3收集事件⁺CD8⁺T细胞数量。的CMV-specific HLA-tetramer与CD8⁺点是来源于CD3的阴谋⁺CD8⁺收集CMV-specific CD8 T细胞大门⁺上面放置一个门CD8 T细胞⁺和巨细胞病毒HLA-tetramer积极的细胞群。第四个点阴谋,散射与CD8⁺,包括收集计数珠子位于右上角的阴谋。

2.3。CMV-Specific功能和Cytotolytic化验

对t细胞功能和细胞毒的评估进行了与全血的HLA-tetramer染色,使用以前公布的协议(15,18]。PBMC分离从相同的全血样品用于确定HLA-tetramer的绝对数量⁺和CD3⁺CD8⁺T细胞。抗原的刺激是通过添加一个CMV-specific肽(10μg / mL),其等位基因同源,CD28 (1μ和CD49d (1 g)μg) costimulatory抗体(eBioscience)文化与分离PBMC (1×10⁶细胞)。为了促进干扰素的胞内积累γ和防止再循环CD107a CD107b刺激期间,文化与Brefeldin补充(论坛)和莫能菌素在过去4小时的激活。我们还增加了CMV-specific HLA-tetramer跟踪响应和反应迟钝的CMV-specific CD8⁺T细胞。共有6个小时刺激后,离心收集的细胞并与CD8染色⁺、CD107a CD107b fluorochrome-conjugated单克隆抗体。检测干扰素-γ是通过清洗和透化作用saponin-based缓冲区(BD Cytofix / Cytoperm, BD生物科学)和随后的染色与干扰素-γAPC-conjugated抗体。CD107a和CD107b FITC-conjugated抗体从eBioscience购买;干扰素-γAPC收购BD生物科学。染色细胞在FACSCanto II流式细胞分析仪进行了分析。数据在四个不同的点阴谋与盖茨将注册的事件4细胞群。向前散射(FSC)和侧散射(SSC)点阴谋被用于设置一个门在淋巴细胞的数量。SSC和CD8⁺PE-Cy5点情节来源于淋巴细胞的人口和代表CD8将收集事件⁺T细胞。的CMV-specific HLA-tetramer和干扰素-γAPC点是来源于CD8的阴谋⁺收集CMV-specific CD8 T细胞大门⁺T细胞产生干扰素-γ通过将一个四象限门。来点阴谋CMV-specific HLA-tetramer与CD107a / b FITC点也来源于CD8的阴谋⁺注册CMV-specific CD8 T细胞大门⁺T细胞表达细胞溶解的蛋白质。

2.4。确定CMV-Specific CD8的绝对计数⁺T细胞

绝对的CMV-specific CD8计数⁺T细胞/ 1μ手动L血的决心,根据BD Truecount管(BD生物科学、猫。不。340334)指令,使用以下方程:[不。四聚物的事件⁺门]/[不。事件的珠子门]×[不。的珠子每个试管]/[测试卷的全血]。这个分析也确定了绝对的淋巴细胞和CD3计数⁺CD8⁺细胞使用以下公式:[不。在淋巴细胞门]/[没有的事件。事件的珠子)×没有门。(每个试管的珠子)/(全血的测试卷),和[不。CD3的事件⁺CD8⁺门]/[不。事件的珠子)×没有门。(每个试管的珠子)/(全血的测试卷)。绝对的CMV-specific CD8计数⁺T细胞产生干扰素-γ或CD107a / b依赖数据来自CMV-specific CD8的枚举⁺T细胞通过细胞计数珠子结合频率从功能和细胞溶解的测定获得:干扰素-γ⁺春节⁺绝对= [CD8计数⁺T细胞每μL(血液)×(没有。事件干扰素-γ⁺春节⁺]/[不。事件CD8⁺T细胞]、[CD107a / b⁺春节⁺绝对]= [CD8计数⁺T细胞每μL(血液)×(没有。事件干扰素-γ⁺春节⁺]/[不。事件CD8⁺T细胞)。

2.5。验证参数

根据协议验证实验进行临床和实验室标准协会推荐的小修改(http://www.clsi.org/]。简单,线性是由串行PBMCs稀释,CMV-seropositive隔绝,和匹配的捐献者,然后用肽沾四聚物或刺激。实验进行了一式三份。在五复制精度内进行化验。之间的精密化验确定从三个独立的实验,进行了一式三份。分析灵敏度四聚物染色和功能和细胞毒性分析确定使用全血或孤立的从三个CMV-seronegative PBMC捐助者。检测的极限计算阳性细胞的平均浓度之间的捐助者+ 2个标准差。分析特异性评估使用HLA-mismatched样本和hla健康的捐赠者。参考范围的分析建立了使用样本33健康CMV-seropositive捐助者。

2.6。统计分析

内的数据线性、精密分析和化验分析使用EP评估者之间软件(David g . terry Rhoads Associates Inc .)。参考范围与R软件进行数据分析(R统计计算的基础),(http://www.R-project.org/),通过引导参考区间为95%的10000倍。

3所示。结果

3.1。精密内化验

为了确定变化的程度在HLA-tetramer染色和CMV-peptide刺激化验(intra-assay),我们使用全血样品来自5健康CMV-seropositive捐助者与HLA类我限制表示抗原* 01:01抗原* 02:01 HLA-B * 07:02 HLA-B * 08:01, HLA-B * 35:01等位基因。收集到的数据来源于实验在5复制样本进行化验每个捐赠者。我们确定的平均和标准偏差(SD)使用CMV-specific CD8的绝对数量⁺T细胞和产生干扰素-γ和CD107a / b,然后计算变异系数(CV %)。表2显示了实验的结果。中的可变性HLA-tetramer染色试验是在介于24%和3.1之间。类似的模式在CMV-peptide刺激样本。CMV-specific CD8⁺T产生干扰素-γ细胞显示CV %范围从2.5到47%,而CD107a / b阳性细胞的数量在59.7%和3.4之间。

3.2。之间的精度分析

确定之间的精密化验的目的(interassay)是确定一个给定的可变性分析在不同时间点执行。我们使用相同的捐赠者和整体实验大纲,除了分析自己分别进行了三次3或5复制。细胞的平均数字μL(全血测定每个3分的HLA-tetramer染色和CMV-peptide刺激化验。然后我们使用这些数据来计算的平均和SD值3分,用它们来确定interassays CV %。结果如表所示3。CMV-specific CD8的CV %⁺全血T细胞由四聚物染色是在从4到12%。干扰素- CV %γ和CD107a / b细胞生产相应的3 - 15%,从2到48%。

3.3。线性

CMV-specific CD8⁺T细胞通常出现在非常低的频率在健康巨细胞病毒血清反应阳性的捐助者。为了包括更广泛的在分析,四聚物阳性细胞PBMC与血清反应阳性的,匹配的捐献者,细胞密度调整给5倍增长相比,四聚物阳性细胞数量预计在全血。HLA-tetramer染色和肽化验,样本2 -或三倍稀释,然后直接沾HLA-tetramers在固定体积和转移到管与珠子或刺激与相应CMV-peptide costimulatory抗体的存在和干扰素- HLA-tetramers和分析γ和CD107a / b生产。肽刺激也转移到样品管与珠为了获得固定数量的样本事件。化验都进行了一式三份。图1显示了结果散点图。所有化验是线性的。

3.4。分析灵敏度

为了确定CMV-specific CD8的检测极限⁺T细胞及其子集产生干扰素-γCD107a / b,我们执行四聚物染色的全血和CMV-peptide刺激PBMC隔绝三CMV-seronegative捐助者。阳性细胞的平均为每一个分析计算,代表所有五个HLA等位基因和相应的CMV-epitopes(表4)。我们公布了四聚物染色灵敏度的范围从0.1到0.23每uL的血液细胞。干扰素-分析灵敏度γ和CD107a / b CMV-specific细胞范围从0到0.23,从0.11到0.98每个细胞μ相应的L的血液。

3.5。分析特异性

分析特异性被比较的数量评估CMV-specific四聚物阳性细胞和干扰素-子集γ和CD107a / b细胞生产肽刺激,使用样本三个HLA-mismatched和三个hla CMV-seropositive捐助者。每组阳性细胞的绝对数字代表的捐赠者和hla等位基因与相应CMV-epitopes如表所示5和6。没有明显的大的血液和peptide-stimulated样本中检测等位基因不匹配的捐献者。正如所料,所有的等位基因匹配的捐献者展出容易检测,CMV-specific CD8的不同子集⁺T细胞产生干扰素-γ和CD107a / b(表5和6)。特异性水平测量样本HLA-mismatched捐助者低于检测极限。

3.6。参考范围

这项研究是使用全血样品来自33个健康CMV-seropositive个人。的可报告范围HLA-tetramers染色来自全血的直接染色,而肽刺激数据来自刺激PBMC中描述的材料和方法。我们测量CMV-specific CD8⁺T细胞使用所有5种不同的四聚物试剂和巨细胞病毒多肽局限于抗原* 01:01 * 02:01,B * 07:02, B * 08:01, B * 35:01等位基因。共有62个不同的HLA-restricted结果(像一些捐助者是积极的不止一个四聚物)收集的化验。HLA-tetramer染色参考区间和置信水平95%是0 - 18细胞每μ全血的L。干扰素-γ生产、参考区间是0到2细胞/μ全血的L。CD107a / b CMV-specific CD8的参考区间⁺T细胞是0到3细胞/μ全血的L。

3.7。监控CMV-Specific CD8⁺T细胞和确定其功能和细胞溶解的活动HSCT患者

然后我们检查CMV-specific CD8⁺两个自体HSCT受者T细胞免疫复苏治疗多发性骨髓瘤。移植前患者巨细胞病毒血清反应阳性的。血液样本采集前高剂量化疗自体HSCT管理,然后再在干细胞输注后15 - 45天。数据显示在图2。基线代表每个病人巨细胞病毒CD8⁺HSCT治疗前T细胞免疫状态。两个病人显示CD8的数量急剧减少⁺和无CMV-specific CD8 T细胞⁺T细胞免疫post-HSCT 15天。恢复CMV-specific CD8⁺T细胞的数量和功能和细胞溶解的活动显然在个人治疗后45天。然而,复苏细胞的数量在一个病人更明显比另一个。在后者中,总CMV-specific CD8的绝对数量⁺T细胞和产生干扰素-γ和CD107a CD107b仍低于基线值。

4所示。讨论

巨细胞病毒是最重要的一个机会致病菌影响HSCT受者,与有害健康的直接和间接影响1- - - - - -3]。复活的病毒出现在70 - 80%血清反应阳性的患者,如果不及时治疗,20 - 35%的他们将开发tissue-invasive巨细胞病毒疾病,与重要的相关发病率和死亡率(直接影响)19]。巨细胞病毒的基因组编码的病毒蛋白质能够downmodulate宿主的免疫系统,从而促进其他机会性感染的发展以及同种异体移植物(间接影响)20.]。巨细胞病毒病的预防可以实现抗病毒预防具有重要的意义。虽然被证明是有效的,有几个担心antiprophylactic治疗。药物只是有效,而病人服用,药物相关的副作用是有据可查的3]。此外,巨细胞病毒也可以长时间暴露于抗病毒治疗后会产生耐药性。

检查CMV-specific T细胞免疫的病人在接受HSCT或酗酒者是至关重要的一个全面的医疗评估患者可能在发展中巨细胞病毒疾病的风险。理想的免疫监测分析T细胞数量和功能的应提供测量结果。有各种各样的T细胞检测巨细胞病毒免疫的实验设置没有明确的临床应用(21]。大多数分析依赖检测干扰素-γ通过ELISA或ELISPOTs与巨细胞病毒特定抗原刺激后。在这些化验测试灵敏度降低移植后淋巴细胞减少和免疫抑制。此外,这些化验不能区分CD4细胞⁺和CD8⁺T细胞。方法针对评估CMV-specific T细胞免疫能力在单细胞水平,如HLA-tetramer-based化验结合细胞内细胞因子染色在肽刺激,克服这些问题。虽然CMV-specific CD8的枚举⁺细胞与HLA-tetramers决定了这些细胞的绝对数量在全血样品,细胞内细胞因子染色,染色的细胞溶解的标记提供了一个评估这些细胞的功能。

理想CMV-specific T细胞免疫能力分析临床使用应该准确,重现性好,有一个快速的周转时间,足够强劲,能够允许航运专业推荐实验室的标本。在这项研究中,我们集中精力验证三个分析旨在衡量CMV-specific CD8的数量⁺T细胞并确定其功能和细胞溶解的活动对干扰素的生产γ和CD107a / b分子。这项研究是为了确定细胞的绝对数量的血液样本而不是简单地测量细胞的频率。理性是(1)淋巴细胞总数和CD8等其他主要的子集⁺从一个人到另一个T细胞变化;(2)患者接受移植治疗大大降低了数字的淋巴细胞亚群,这使得它很难确定收件人的巨细胞病毒的免疫能力水平。我们选择五个HLA类我等位基因(抗原* 01:01 * 02:01,B * 07:02, B * 08:01,和B * 35:01) > 80%的人群中发现(22作为起点和计划未来更多的等位基因进行验证。

分析的数据来源于CMV-specific CD8的再现性研究⁺T细胞定量显示一个相对广泛的CV值在内部和interassays (3 - 24%)。比较有趣的是,CVs透露的逆相关的绝对计数CMV-specific细胞:细胞计数越高越低的简历。因此,提高CMV-specific CD8的CV值被发现⁺T细胞表达干扰素-γ和CD107a CD107b分子HLA-B * 35:01(高达60%),因为他们通常代表抗原人口总数的10 - 50%。类似的观察是在其他研究[23]。瞿婉明和同事相比三个化验(有关酶联免疫斑点)HLA-tetramer染色,细胞内细胞因子染色,检测抗原* 02:01巨细胞病毒反应局限于单一抗原决定基三个血清反应阳性的捐助者。尽管他们测量细胞频率而不是绝对的细胞数量,在他们的研究中,CVs interassays的四聚物染色的10 - 35%范围和胞内干扰素- 7 - 50%γ分析(23]。当这两项研究的结果进行比较,可以得出这样的结论:简历范围再现性研究依赖于细胞群的大小而不是限制HLA等位基因和抗原决定基有关。

线性研究挑战进行的小尺寸CMV-specific CD8 T细胞通常出现在血液健康的捐赠者。为了克服这个障碍,我们调整了细胞密度获得5倍增加tetramer-specific细胞/μL的一个示例。系列稀释后的样品在四聚物和肽刺激化验,CMV-specific CD8 T细胞的频率及其子集产生干扰素-γ和CD107a / b淋巴细胞总数和CD8 T细胞的人口保持不变(数据没有显示)。这表明减少稀释后淋巴细胞和抗原呈递细胞的总数没有影响的质量分析。绝对细胞计数,我们测量稀释后对HLA等位基因在不同范围限制和相应的CMV-epitope。四聚物的染色,起点是高达500个细胞(抗原* 01:01)和低至9细胞/ ul的一个示例(HLA-B * 35:01)。线性被发现在各方面衡量。同样,肽刺激样品已经非常广泛,虽然有点低于四聚物染色,和线性。线性等一系列使两个化验有效健康和感染者的临床研究,后期可能会表现出更高的细胞计数的时期CMV-specific CD8 T细胞的病毒复活。

在验证研究中分析灵敏度是另一个重要参数。它允许确定最低染色强度高于非特异性水平(24]。在目前的研究中,我们测试了样品从3为每一个分析和相应的HLA-tetramers CMV-seronegative捐助者。我们的数据与以前公布的研究结果相一致的四聚物染色(25]。四聚物的检测极限染色和肽刺激化验是0.10 - -0.23(春节⁺),0 - 0.23 (IFN -γ),0.1 - -0.98 (CD107a / b)细胞/ ul的血液。这些数字只有科学价值;临床医生使用这些化验应该使用整数在临床研究更清晰的解释。

分析特异性研究的目的是确定一个给定试剂的性能与其特定的目标(24]。在本研究中我们使用样本HLA-mismatched, CMV-seropositive捐赠者决定为所有三大分析的水平。正确的特异性的例子来自实验,进行了匹配的样本,CMV-seropositive捐助者。所有化验结果显示很强的特异性水平和四聚物试剂绝对细胞计数低于检测的局限性。罕见的例子可交叉反应的CD8 T细胞抗原表位和HLA等位基因已被描述在人类和老鼠26,27]。没有这样的数据是在这项研究中获得的。

确定参考间隔提供重要的信息关于CMV-immune状态的病人。在这项研究中,我们调查了健康CMV-seropositive捐赠者,假设他们会代表数字表明保护CD8 T细胞免疫水平的巨细胞病毒再活化。参考间隔四聚物染色(0-18细胞μL)、干扰素-γ(0 - 2细胞每μL)和CD107a / b(0 - 3细胞μL)化验测定95%置信水平,排除数据从两个捐助者。那些被定义为解雇,显示65.75和89.88四聚物阳性细胞μ我的血液。我们认为这些异常高的数字可能表示最近无症状的巨细胞病毒激活记录之前(4]。一贯的低数字发现干扰素-γ和CD107a / b CMV-specific CD8 T细胞,四聚物阳性细胞相比,反映持续性感染潜伏性的本质而不是优势的分析。反应迟钝,不正常的CD8 T细胞特定于巨细胞病毒和EBV潜伏性描述了持续性感染广泛(18]。

最后,我们研究了CMV-specific CD8的潜在用途⁺T细胞的数量和功能和细胞溶解的反应在两个自体HSCT受者治疗多发性骨髓瘤。两个病人巨细胞病毒感染血清学阳性的移植。在这两种情况下,移植后没有给出任何anti-CMV预防。预防巨细胞病毒疾病的早期发起先发制人的治疗结果的基础上每周等离子巨细胞病毒定量实时聚合酶链反应测试。结果表明,两种患者CD8的数量减少⁺T细胞检测灵敏度和缺乏CMV-specific CD8以下⁺T细胞功能和细胞毒性反应在自体HSCT后15天(图2)。这预计由于调节治疗,患者接受移植前。有趣的是,测试完成后45天移植透露,一个病人有一个CMV-specific CD8明显复苏⁺T细胞的数量和功能和细胞溶解的活动,而在其他总CMV-specific CD8的绝对数量⁺T细胞和产生干扰素-γ和CD107a CD107b仍低于或接近基线值(图2)。的差异CMV-specific CD8的速度复苏⁺T细胞的数量和功能和细胞溶解的病人之间的活动表明,一个病人可能会更早恢复免疫力抗巨细胞病毒感染,另一个。在这两种情况下没有证据表明巨细胞病毒激活记录了病毒复制测试最初的45天期间。具有重要的意义值得注意的是,巨细胞病毒免疫力发达的缓慢复苏患者CMV病毒血症62天需要先发制人的治疗具有重要的意义,而患者快速复苏仍然自由的巨细胞病毒激活一年没有抗病毒预防具有重要的意义。

CMV-specific CD8的结果⁺T细胞的免疫能力和病毒复制监控这两个病人建议结合使用这些分析可以指导抗病毒治疗具有重要。在这方面,最近的一项研究使用HLA四聚体预测复发或持续的巨细胞病毒感染或疾病在同种异体HSCT发现延迟复苏CMV-specific T细胞(< 7细胞移植后的头65天期间/毫升)是一个重要的因素对于发展中反复或持续的巨细胞病毒感染患者相比,显示快速复苏(25]。没有CMV-specific CD8的功能或细胞毒性活动⁺分析了T细胞的患者。需要更多的研究来确定特定的阈值在CMV-specific T细胞的数量和功能活动可以用来指导预防性协议。

5。结论

本研究为巨细胞病毒的免疫能力提供目标值化验CD8的表征⁺T细胞反应以绝对细胞计数/具有重要的意义μ我的血液。简历范围精度研究依赖于细胞群的大小而不是限制HLA等位基因和抗原决定基有关。巨细胞病毒tetramer-based功能和细胞毒性监测可以临床医生的一个重要工具巨细胞病毒疾病的风险评估和指导预防和先发制人的治疗选择具有重要的意义。

作者的贡献

e . v . Ravkov和j·c·德尔珈朵设计和监督。i . y .巴甫洛夫参与所有的数据分析。k·e·汉森提供病人样本和参与临床资料分析。e . v . Ravkov起草论文所有作者的建议和意见。

承认

作者非常感谢Tracie Profaizer为她优秀的技术援助。