预测和识别潜在的Immunodominant抗原表位在糖蛋白B, C, E, G,我单纯疱疹病毒2型

文摘

20 B候选抗原表位的糖蛋白B (gB2), C (gC2), E (gE2), G (gG2),我(gI2)单纯疱疹病毒2型- 2)预测使用DNAstar Biosun和Antheprot方法结合多项式的方法。随后,肽的生物功能是通过实验测试在体外。20表位肽中,17日可以与相应的父蛋白的抗血清反应环评测试。特别是,五肽,即gB2_{466 - 473}(EQDRKPRN) gC2_{216 - 223}(GRTDRPSA) gE2_{483 - 491}(DPPERPDSP) gG2_{572 - 579}(EPPDDDDS)和gI2_{286 - 295}与抗血清(CRRRYRRPRG)有强烈反应。五肽的轭合物与载体蛋白BSA可以刺激小鼠产生抗体。这些肽的抗血清反应强烈与相应的父糖蛋白免疫印迹试验期间,和肽反应强烈父糖蛋白抗体在环评测试。针对五肽的抗血清中和HSV-2感染在体外直到现在还没有公布。这些结果表明,immunodominant抗原表位筛选使用软件算法可以用于对HSV-2病毒诊断和疫苗设计。

1。介绍

单纯疱疹病毒2型主要引起生殖器感染(- 2)1]。HSV-2糖蛋白结构组件的病毒粒子信封,已涉及病毒诱导哺乳动物细胞的改变2,3]。此外,HSV-2在感染细胞等离子体膜糖蛋白表达,作为主要的抗原刺激宿主的细胞和体液反应(2,3]。一些病毒糖蛋白,如糖蛋白B (gB2), C (gC2)和E (gE2),描述了(4]。糖蛋白G (gG2),我(gI2)和gB2 gC2, gE2显然HSV-2免疫反应中扮演主要的角色。证据支持以下建议:(i)纯化gB2, gC2, gE2, gG2, gI2 HSV 1型(口服,1型单纯疱疹病毒)或HSV-2(生殖器)刺激高滴度的类型来实现virus-neutralizing抗体(5,6];(2)与单克隆抗体对gB2被动免疫,gC2 gE2 gG2, gI2保护老鼠从使用致命剂量的HSV感染7- - - - - -9];(iii) gB2 gC2、gE2 gG2, gI2介导锁定,complement-mediated细胞毒性和锁定,细胞介导细胞毒性(7,10,11];(iv)的纯化gB2、gC2 gE2, gG2, gI2能保护小鼠免受致命感染1型单纯疱疹病毒或HSV-2。

我们最近的预测和识别的抗原表位阻止gD2参与其生物和免疫活动使用一组gD2-specific抗体识别四个独立分子的抗原表位。一些抗原表位特定类型和有很强的virus-neutralizing活动在体外。在当前的研究中,20 immunodominant从HSV-2五蛋白质抗原表位,即gB2, gC2, gE2 gG2,和gI2预测,通过实验进行验证。五的20个抗原表位强大的抗原性和免疫原性,因此他们可以保护小鼠免受HSV-2感染。

2。材料和方法

2.1。一般材料和动物

Medium199 (Applichem)包含5%的新生牛血清,抗生素,和20毫米N-2-hydroxyethylpiperazine-N′2-ethanesulfonic酸(玫瑰)。Bio-Rad miniprotean细胞(美国大力神,CA)、硝化纤维膜(美国Amersham,阿灵顿高地,IL), peroxidase-labeled山羊anti-mice免疫球蛋白G(博士德,中国),和发射极耦合逻辑检测系统(Amersham,法玛西亚生物技术,乌普萨拉,瑞典)在目前的实验中使用。gB2抗体,gC2、gE2 gG2, gI2 ABcam公司买的。老鼠(公里,中国,4 - 6周大,女)从安徽大学动物中心购买的中药。

2.2。表位预测和合成

六个糖蛋白b细胞抗原表位分析,即gB2 (AAA60540.1 gI2: 6234000), gC2 (AAA66442.1 GI: 330266), gE2 (ABU45439.1 gI2: 156072176), gG2 (ABI32310.1 GI: 113200389)和gI2 HSV-2 (ACA28832.1 GI: 168805625),是基于三个相关软件算法,即Biosun DNAstar, Antheprot。b细胞抗原表位被指的预测参数,如β词发生、亲水性、表面概率,和灵活性,这已被证明是象征潜在的抗原区域。缩氨酸组成Asn-X-Thr / Ser序列(糖基化网站),提出membrane-spanning地区,c端membrane-anchor序列被排除在外。肽显示常见结果从上面的软件算法被选为候选抗原表位。抗原,surface-located地区(b细胞表位)的主要结构的糖蛋白HSV-2应该预测生成的抗体可能是活性的糖蛋白和可能中和病毒传染性(12- - - - - -14]。一些nonepitope肽证实使用环评测试被选为控制。Jinsite公司(中国)化学合成表位肽的筛选。

2.3。使用环评抗原性分析测试

预测抗原表位的抗原性决定使用环评和抗体相应的父糖蛋白(gB2, gC2, gE2、gG2 gI2)。96孔板在100年被涂上免费的肽μL (2.5μg / mL)的50 mM碳酸氢钠缓冲/ 0.6 M氯化钠(pH值9.6)为每个在一夜之间在4°C。第二天,130人μL屏蔽解决方案(1×PBS, 1%牛血清白蛋白)添加到每个后洗盘子在4°C PBST隔夜的5倍。五个蛋白质的抗体gB2、gC2 gE2, gG2,和gI2稀释使用1:100,然后一个双重的连续稀释。因此,100年μL添加到每个好然后在37°C孵化1 h。板块与PBST洗五次。随后,100μL 1: 10000稀释peroxidase-labeled山羊anti-mice免疫球蛋白G(博士德)添加到每个好然后在37°C孵化1 h。所有抗体或抗血清稀释了磷酸盐(PBS)补充补间80年0.2 M氯化钠和0.3%。与PBST盘子都洗了5次,颜色是由增加100μL(三甲衬底,过氧化氢溶液(0.006%,卷/期)和o-phenylenediamine (0.02%, wt /卷)在2% methanol-50 mM钠磷酸盐缓冲剂(pH值为5.6),孵化在37°C在黑暗中10分钟。通过添加50反应停止μL 2 M H₂所以₄。的一个_450年价值是衡量使用Titertek断层分光光度计(Titertek,芬兰赫尔辛基)。

2.4。结合载体BSA的肽

结合的肽载体BSA(据报道方法执行15]。共轭反应后,样本透析对PBS (pH值为7.4)。摩尔肽/ BSA比各种配合决心通过氨基酸分析peptide-carrier共轭和未经处理的组织。摩尔肽/ BSA比率是5到10。肽载体配合储存在−20°C。

2.5。小鼠免疫和抗血清制备

二十个老鼠与10老鼠分成两组。大约4μ克peptide-BSA当时乳化完全弗氏佐剂第一注射和皮下注射的老鼠。大约2μg的纯化peptide-BSA乳化不完全弗氏佐剂后14天皮下注射第二针。第三个注射是类似于第二次注射。PBS,控制,注射使用相同的上述过程。血液样本收集第三次免疫后14天,然后储存在−20°C。

2.6。使用环评肽免疫原性检测

Peptide-BSA-specific抗血清中免疫球蛋白抗体测定使用端点与peptide-BSA环评作为抗原,如前所述[16]。滴度是表示为倒数血清的稀释比例最高的值为2.1。gE2,此外,蛋白质gB2 gC2 gG2, gI2用作检测抗原的抗血清使用环境影响评价。

2.7。肽特异性用免疫印迹分析

大约10μL (peptides-BSA结合使用10% sds - page分离Bio-Rad miniprotean细胞(大力神、钙、美国),然后转移到一条硝化纤维素膜(美国Amersham,阿灵顿高地,IL)。硝基地带被使用阻断缓冲区(5%的脱脂牛奶20毫米Tris-HCl, pH值7.5,与500毫米生理盐水、0.05%渐变20),然后摇动2 h在37°C或一夜之间在4°C。随后,加沙地带与抗血清稀释1:孵化博彩:10000使用阻断缓冲区,然后摇动2 h在37°C或一夜之间在4°C。膜然后洗3分钟到5分钟与PBST五次。HRP-labeled山羊anti-mouse抗体(博士德,中国)1:10000稀释加入地带和孵化在37°C 1 h。膜与PBST 3分钟到5分钟洗五次,然后添加发光底物时,露出一个x射线胶片使用ECL检测系统(Amersham,法玛西亚生物技术,乌普萨拉,瑞典)在一个黑暗的房间。

2.8。病毒中和试验

的抗血清中和HSV-2(应变干腊肠)在体外化验使用50%蚀斑减少试验(17]。抗血清灭活在56°C为30分钟灭活补充。抗血清的稀释使用1:4,紧随其后的是双重的连续稀释,然后用同等体积的HSV-2孵化(150μL, 600微升)。HSV-2病毒和血清稀释介质199 (Applichem),包含5%的新生牛血清、抗生素、和20毫米N-2-hydroxyethylpiperazine-N′2-ethanesulfonic酸(玫瑰)。大约有100μL孵化的混合物被镀成层的维洛细胞生长在6-well托盘每2 h后孵化在37°C。覆盖介质含有0.5%甲基纤维素被添加到混合1 h后吸附在37°C。这些细胞被固定,然后沾着染色的存储解决方案2 - 3天后37°C。斑块被数,中和效价计算的倒数血清稀释倍产生蚀斑减少50%。

2.9。动物保护实验

六十小鼠10只小鼠随机分为六组。五组分别与五个抗原表位免疫,,最后一组免疫与PBS的控制。每个老鼠皮下注射免疫三次使用8μ表位肽的g,为期两周的间隔免疫接种。大约4μ克表位肽乳化完全弗氏佐剂用于第一次免疫,4μg的表位肽乳化不完全弗氏佐剂用于第二次免疫,和4μ克表位肽仅用于最后的免疫接种。对照组与PBS使用相同的免疫程序。老鼠被麻醉,然后被挑战与HSV-2干腊肠应变三周后最终的免疫接种。免疫和sham-immunized小鼠皮下注射2毫克的孕酮(Jinsite,中国)50μL H₂O /鼠标在progesterone-dominated同步发情周期阶段。第五天黄体酮管理后,所有的老鼠都被质疑HSV-2干腊肠应变通过阴道和外生殖器皮肤。阴道关闭膜破裂了saline-moistened棉签一小时前病毒的挑战。每个鼠标的拭子插入了阴道,来回扭曲五次,然后删除外部生殖器擦拭。受感染的老鼠每天检查阴道炎症,神经系统疾病,和死亡,然后被1 - 5年级得分取决于疾病的严重程度,报道的一篇论文中描述(17]。老鼠的生存比例计算。

2.10。统计分析

数据的平均值至少三个不同的实验,用平均数±标准差表示。学生的以及被用来比较不同的数据集。组之间的差异相比,另一个使用单向方差分析。被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。b细胞抗原表位的预测和识别

20 b细胞immunodominant在糖蛋白抗原表位gB2、gC2 gE2, gG2, gI2 HSV-2使用DNAstar预测算法。预测的β词、灵活性、线圈区域,糖基化网站,抗原的抗原表位值表中列出1。预测的抗原性immunodominant抗原表位被发现使用抗体相应的环评父糖蛋白。抗原的表位肽被涂96 -孔板,100μL (2.5μg / mL)在每一个。抗体相应的父糖蛋白gB2, gC2, gE2, gG2,和gI2 (ABcam)反应的抗原表位,分别。的一个_450年值测定,结果(表1)表明,17的20个抗原表位有不同程度的抗原性。三个抗原表位,即gB2_{468 - 475},gB2_{300 - 306},gC2_{326 - 335},被预测有强壮的抗原性使用软件算法,但他们的抗原性被证明是软弱的环评测试(表1)。总的来说,结合使用这三个软件算法预测结果(表1(表)环境影响评价结果1和2),至少五个抗原表位(列在表中1以粗体显示),即gB2_{466 - 473}(EQDRKPRN) gC2_{216 - 223}(GRTDRPSA) gE2_{483 - 491}(DPPERPDSP) gG2_{572 - 579}(EPPDDDDS)和gI2_{286 - 295}(CRRRYRRPRG)被证实为强大的B细胞抗原决定。五肽的轭合物与载体蛋白BSA可以刺激小鼠产生抗体。此外,五肽反应强烈的抗血清与相应的父糖蛋白环评测试期间,和肽反应强烈与父糖蛋白抗体相应的环评测试(表2)。

3.2。Antipeptide抗体的特异性

五个抗原表位特异性的抗血清是检查进一步利用免疫印迹分析。的epitope-BSA轭合物被用作检测抗原抗体相应的父母发现蛋白质和抗血清的五个抗原表位与相应的父蛋白质gB2 gC2, gE2 gG2, gI2。结果(表3,数据1和2)表明,epitope-BSA轭合物与相应的抗体反应特别是父母蛋白没有任何交叉诉讼和五个抗原表位的抗血清与对应的父蛋白质反应。

3.3。病毒抗血清中和活动

virus-neutralization活动针对五个抗原表位的抗血清的使用50%的蚀斑减少试验进行了测试。结果(表4)表明,抗血清抗原表位的五个可能会阻止HSV-2感染。针对gB2中和滴度的抗血清_{466 - 473}和gE2_{483 - 491}1:256,中和滴度的抗血清对gC2吗_{216 - 223},gG2_{572 - 579},gI2_{286 - 295}1:128年,他们在本质上是相同的中和效价。另一方面,控制从PBS-vaccinated小鼠血清和抗血清BSA没有显示中和活动。

3.4。动物保护实验

与致命剂量免疫小鼠的阴道内的挑战(5×10⁶空斑形成单位,500年LD₅₀为每个鼠标)HSV-2干腊肠的压力。阴道外部疾病检查每天炎症,病变和平均每日分数衡量一日之后的第14天挑战。原发病的严重程度进行评估(1 - 5分)使用病变评分系统(17]。所有组的小鼠免疫与五个抗原表位,分别被免于死刑在一定程度上在致死剂量,而对照组的老鼠患上严重的疾病和死亡,在第三天的挑战。接种疫苗的老鼠显示一些扩展保护级别,受感染的老鼠不同的病变评分后第四天的五组(图的挑战3)。第四天的挑战后,小鼠免疫gB2_{466 - 473}/ BSA或gE2_{483 - 491}/ BSA显示保护水平高,病变评分小于1,而与gC2小鼠免疫_{216 - 223}/ BSA, gG2_{572 - 579}/ BSA,或gI2_{286 - 295}/ BSA显示保护水平相对较低,损伤分数大于1。这些结果表明,抗原表位的免疫小鼠的炎症严重程度显著降低。

受感染的老鼠的存活率每天计算。的存活率epitope-immunized范围从50%到80%(图组4),而所有PBS-vaccinated老鼠会产生严重的疾病和死亡后的第3和第5天之间的挑战。挑战后第八天,gB2的存活率_{466 - 473}免疫小鼠最高(80%),和gE2的存活率_{483 - 491}/ BSA-immunized老鼠是70%。保护作用的5个表位肽显著优于对照组(学生的以及,),gB2_{466 - 473}是最好的,其次是gE2吗_{483 - 491},保护作用没有显著差异在其他三个表位肽(学生的以及,)。从最高到最低,保护的五个gB2抗原表位_{466 - 473}/ BSA > gE2_{483 - 491}/ BSA > gC2_{216 - 223}/ BSA > gG2_{572 - 579}/ BSA > gI2_{286 - 295}/ BSA。结果表明,每五个抗原表位的部分保护作用,但他们无法完全保护小鼠免受感染。

4所示。讨论

预测抗原,surface-located地区(b细胞抗原表位)从主父母糖蛋白的结构是必要的选择表位肽可以刺激小鼠产生抗体,这些抗体能够与相应的父糖蛋白和中和反应病毒传染性(18]。目前已经开发出了一些方法来预测序列b细胞抗原表位在糖蛋白(线性和构象)[18]。在最近的研究中,糖蛋白gB2的抗原表位,gC2, gE2, gG2, gI2 HSV-2预测因为这些糖蛋白体液免疫中扮演很重要的角色。一些抗原表位,如gG2_{472 - 479}选择,因为他们的高β词概率、亲水性和预测的灵活性(19,20.]。另一方面,一些B细胞抗原表位,如gE2_{483 - 491}选择,因为他们的高亲水性的价值。大多数预测抗原表位使用软件算法具有良好的抗原性。例如,gB2_{466 - 473}有高抗原性值预测算法和强烈反应的环评测试。只有一些预测抗原表位的弱抗原性。例如,gB2_{468 - 475},gB2_{300 - 306},gC2_{326 - 335}高抗原性值的预测算法,但低环境影响评价中的值测试,表明预测抗原表位使用软件算法用于选择immunodominant抗原表位。

与此同时,其他软件算法,如曲面图预测算法,也被用于选择线性氨基酸序列区域(b细胞抗原表位)的蛋白质21]。的方法,包括Chou-Fasman二级结构,糖基化网站,β词算法,类似于目前的研究的预测算法。在我们看来,任何预测方法是有限的选择在病毒蛋白抗原表位,可能引起的中和抗体,和所有的预测算法明显优于其他方法。因此,b细胞抗原决定从HSV-2糖蛋白筛选在当前的研究中使用三个软件算法,即Biosun, DNAstar,和Antheprot算法,结合多参数算法。软件算法的共同结果是作为候选人的b细胞抗原表位抗原表位。几个例子在文学与埋藏地区的抗原免疫原性。例如,两个网站在新品的脊髓灰质炎病毒外壳蛋白诱导显著中和反应大鼠和兔子的,尽管这些地区已经被证明是深深埋在室内使用x射线晶体研究[22]。在当前的研究中,b细胞抗原表位的筛选是线性抗原区域表面的分子并没有构象或停止抗原表位。

的抗原决定基(473 - 730 aa) gB2报道高抗原性(22),这是符合当前的研究的结果,在466 - 473 aa gB2 gB2 immunodominant抗原决定基的。的抗原决定基(210 - 230 aa) gC2被报道是immunodominant抗原决定基(23),这是符合预测在当前的研究中。然而,抗原决定基(216 - 223 aa) gC2被选在当前的研究中,因为它有更高的抗原性比抗原决定基(126 - 132 aa) gC2,如环评结果所示。三个抗原表位,即350 - 364 aa, 286 - 295 aa,和526 - 539 aa gG2,也被报道(24),但选择的抗原决定基(472 - 479 aa) gG2在当前的研究中有一个更强的抗原性。在当前的研究中,五个预测抗原表位,即466 - 473 aa gB2 216 - 223 aa gC2, 483 - 491 aa gE2, 472 - 479 aa gG2,和286 - 295 aa gI2,之前都没有被证实使用环评,免疫印迹,动物保护实验。

五个预测抗原表位诱导小鼠产生特异性抗体,和所有的抗血清病毒中和活动。一些先前的研究已经表明,中和抗体是重要的保护HSV-2感染和≥1的效价:10被认为是表明保护性免疫(25]。平均中和抗血清的效价与gB2小鼠免疫_{466 - 473}或gE2_{483 - 491}1:256年,平均中和抗血清的效价与gC2小鼠免疫_{216 - 223},gG2_{572 - 579},或者gI2_{286 - 29}g是1:128。这些抗体滴度高到足以中和病毒感染。此外,五表位肽部分可以保护小鼠免受HSV-2感染。然而,没有一个五表位肽可以完全保护小鼠免受HSV-2感染;因此,他们应该作为一个混合一起使用免疫原引发更强和更完整的免疫保护。

5。结论

五个预测immunodominant表位肽,即gB2_{466 - 473},gC2_{216 - 223},gE2_{483 - 491},gG2_{572 - 579},gI2_{286 - 295}从糖蛋白B, C, E, G,我HSV-2,分别通过实验被证实。五个表位肽显示优秀的抗原性和能刺激小鼠产生特定抗体能够中和HSV-2感染在体外。五个表位肽部分还可以保护小鼠免受HSV-2感染。因此,这些表位肽可以用于HSV-2感染诊断和疫苗的设计。

确认

作者承认拨款支持中国国家高科技研发项目(“863”计划,没有。2006 aa02a226,没有。SS2012AA020905),中国江苏省自然科学基金(没有。BK2008068),(没有中国江苏省社会发展的基础。BE2010603)。明捷锅,Xingsheng王是共同第一作者。

引用

1. a . j .纳米亚斯j . Dannenbarger c . Wickliffe和j . Muther临床方面的感染单纯疱疹病毒1和2,卷2,爱思唯尔,纽约,纽约,美国,1980年。
2. b . Norrild“单纯疱疹病毒糖蛋白的免疫化学”,微生物学和免疫学的当前主题卷,90年,第106 - 67页,1980年。视图:谷歌学术搜索
3. h·a·Blough和j·m·蒂芙尼细胞膜和病毒信封、学术出版社,纽约,纽约,美国,1984年。
4. p·g .矛”,指定由单纯疱疹病毒膜蛋白。即识别四个糖蛋白前体及其产品在1型感染细胞,”病毒学杂志,17卷,不。3、991 - 1008年,1976页。视图:谷歌学术搜索
5. g·h·科恩,m·卡茨c . Hydrean-Stern和r·j·艾森伯格”式公CP-1单纯疱疹病毒抗原与59000 -分子重量包膜糖蛋白,”病毒学杂志,27卷,不。1,第181 - 172页,1978。视图:谷歌学术搜索
6. j·s·r·j·沃森j . h . Weis Salstrom,和l . w .•“单纯疱疹病毒1型糖蛋白D基因核苷酸序列和表达在大肠杆菌中,“科学,卷218,不。4570年,第384 - 381页,1982年。视图:谷歌学术搜索
7. n . Balachandran s Bacchetti和w·e·罗尔斯“防止致命的挑战BALB / c小鼠单克隆抗体的被动转移5糖蛋白的单纯疱疹病毒2型,”感染和免疫,37卷,不。3、1132 - 1137年,1982页。视图:谷歌学术搜索
8. r·j·艾森伯格D长,r·霍格Angeletti和g·h·科恩,“伴单纯疱疹病毒的糖蛋白D序列类型1和2,“病毒学杂志卷,49号1,第268 - 265页,1984。视图:谷歌学术搜索
9. a·k·卡普尔,a·a·纳什和p . Wildy“单纯疱疹病毒的发病机理:先天无胸腺的老鼠相对细胞和体液免疫的角色,”普通病毒学杂志,60卷,不。2、225 - 233年,1982页。视图:谷歌学术搜索
10. b . Norrild s . l .海岸和a·j·•纳米亚斯说:“单纯疱疹病毒糖蛋白:参与个体的单纯疱疹病毒1型糖蛋白抗原与之前确定glycopolypeptides immunocytolysis及其相关性,”病毒学杂志,32卷,不。3、741 - 748年,1979页。视图:谷歌学术搜索
11. j . t .校长r . n . Lausch和j·e·奥克斯”使用单克隆抗体依赖抗体免疫分析眼单纯疱疹病毒1型感染,”感染和免疫,38卷,不。1,第174 - 168页,1982。视图:谷歌学术搜索
12. 黄y . x, y l·鲍郭y, y . Wang c . g .周x和y,“Pep-3D-Search:基于mimotope b细胞表位预测方法分析,“BMC生物信息学9卷,货号。538年,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. j . Sollner r . Grohmann r . Rapberger p . Perco a·卢卡斯和b . Mayer”分析和保护连续b细胞抗原表位预测病原体蛋白质,”Immunome研究,4卷,不。1,货号。1,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. j . Ponomarenko h。李Bui, w . et al .,“ElliPro:一个新的小工具对抗体抗原表位的预测,”BMC生物信息学第514条,卷。9日,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. w . j . Weijer j . w . Drijfhout h . j . Geerligs et al .,“抗体合成肽的单纯疱疹病毒1型糖蛋白D体外中和病毒传染性和他们的能力,”病毒学杂志,卷62,不。2、501 - 510年,1988页。视图:谷歌学术搜索
16. r·考尔g . Sachdeva, s . Vrati”对日本脑炎病毒质粒DNA免疫:membrane-anchored和分泌包膜蛋白的免疫原性,”《传染病杂志》上的研究,卷185,不。1、1 - 12,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. h·h·李,s . c . Cha d . j .张成泽et al .,“免疫结合HSV-2糖蛋白B2: D2基因dna:防止致命的小鼠阴道内的挑战,”病毒基因,25卷,不。2、179 - 188年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. r·j·艾森伯格D长,m·庞塞德利昂,“定位抗原表位的单纯疱疹病毒1型糖蛋白D,“病毒学杂志,53卷,不。2、634 - 644年,1985页。视图:谷歌学术搜索
19. m·p·威廉森·m·j·霍尔,b . k .手中,“作业1 h - nmr和二级结构的单纯疱疹病毒糖蛋白d 1抗原域,“欧洲生物化学杂志,卷158,不。3、527 - 536年,1986页。视图:谷歌学术搜索
20. m·p·威廉姆森b·k·翰达岛和m . j .大厅,“单纯疱疹病毒糖蛋白D抗原的二级结构域,“国际期刊的肽和蛋白质的研究,27卷,不。5,562 - 568年,1986页。视图:谷歌学术搜索
21. n . c . j . Strynadka m·j·雷德蒙j·m·r·帕克·D·g . Scraba r·s·霍奇斯,“使用地图的合成肽抗原决定因素单纯疱疹病毒的糖蛋白D,“病毒学杂志,卷62,不。9日,第3483 - 3474页,1988年。视图:谷歌学术搜索
22. f·c·本德m . Samanta e . e . Heldwein et al .,“单纯疱疹病毒糖蛋白B的抗原和突变分析显示四个功能区域,”病毒学杂志,卷81,不。8,3827 - 3841年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. G·阿克曼·阿克曼、h·j·艾格斯维兰德,和j·e·库恩”的线性映射在糖蛋白抗原决定因素C的单纯疱疹病毒1型和2型被人类血清免疫球蛋白G抗体,”医学病毒学杂志,55卷,不。4、281 - 287年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. j . A。Liljeqvist, e . Trybala j . Hoebeke b . Svennerholm和t . Bergstrom”单克隆抗体和人类血清直接分泌糖蛋白G单纯疱疹病毒2型识别特定类型的抗原决定因素,”普通病毒学杂志,卷83,不。1,第165 - 157页,2002。视图:谷歌学术搜索
25. g .级别的b . Dalmadi Mucsi, s . Bosze E。Rajnavolgyi f . Hudecz,“基于肽疫苗设计:支多肽的合成和免疫学特性配合由276 - 284年immunodominant 1型单纯疱疹病毒抗原决定基的糖蛋白D,“肽科学杂志》,8卷,不。3、107 - 117年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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