文摘
背景。多发性骨髓瘤(MM)及其治疗可能引起严重受损体液免疫。我们已经进行了纵向分析igg抗体反应对流感病毒(流感)和破伤风类毒素(TT)代理MM患者B细胞介导免疫标记。方法。1094 190 MM患者的血清样本和样本分析了100名健康的捐赠者为流感,TT-specific ELISA抗体。结果。MM患者证明流感,TT-specific抗体水平低于健康对照组()。免疫反应性降低疾病进展和临床状况恶化。水平的流感——TT-specific抗体增加alloSCT后不久(0 - 6个月)(),一个时段期间静脉注射免疫球蛋白(丙种球蛋白)是经常应用。此后,抗体浓度下降,仍抑制3年FLU-specific和5年以上的TT-specific抗体。结论。我们发现MM与深刻的疾病——therapy-related免疫抑制,这是补偿alloSCT后几个月,最有可能应用丙种球蛋白。这和抗流感的差异对经济复苏和anti-TT抗体滴度在接下来的几年里需要考虑优化应用丙种球蛋白和免疫alloSCT之后。
1。介绍
多发性骨髓瘤(MM)是一种疾病引起的恶性浆细胞克隆增殖的骨髓(BM) [1]。一方面,越来越多的肿瘤质量导致减少正常的造血作用,,其次,骨髓瘤细胞产生细胞因子/趋化因子微环境有利于恶性表型,而抑制本地和系统性免疫(2]。这两个因素导致的免疫失调出现在骨髓瘤患者(3]。MM患者证据表型和功能缺陷的体液和细胞免疫。特别是b细胞反应的状态改变,功能低丙球蛋白血症,导致风险增加在MM患者机会性感染(3]。因此对细菌和病毒的保护性免疫受损,感染代表一个MM患者死亡的主要原因4]。静脉注射免疫球蛋白(丙种球蛋白)的管理已经被用于暂时恢复抗体介入免疫力,特别是大剂量的化疗之后(5]。然而,它是未知的,在多大程度上多长时间的被动转移体液免疫补偿严重疾病和therapy-related骨髓瘤患者的免疫抑制。
MM本身是依赖于抑制和适应性免疫反应的失调,不同模式的免疫疗法的发展似乎是一个有吸引力的选择对提高治疗骨髓瘤患者。同种异体干细胞移植是最有前途的方法之一,恢复免疫系统识别的能力和破坏MM细胞(6]。健康的转移,donor-derived免疫系统,这是不宽容的恶性浆细胞克隆,是目前唯一潜在的治疗方法为MM患者(6]。免疫graft-versus-myeloma效应(GvM)是强大,但它伴随着很大的风险移植物抗宿主反应(GvHD),代表了一种潜在的致命的威胁通常需要强有力的预防(有时治疗)免疫抑制(6,7]。优化策略是必要的,以确定到底需要多少免疫抑制抑制有害同种免疫的反应,同时仍然允许临床需要graft-versus-myeloma效应(7]。
为了提高我们对治疗和疾病的理解在骨髓瘤患者的体液免疫缺陷,抗体反应过程中需要反复评估疾病。记忆免疫反应引起的常规接种疫苗或自然曝光,像那些针对流感病毒(流感)和破伤风类毒素(TT),可以作为标记为广大病人的免疫能力在给定的时间点(8,9]。令人惊讶的是,数据的纵向行为免疫反应等常见的抗原是稀缺和MM患者没有被系统地解决10,11alloSCT后],特别是不。在这里,我们已经完成了最大纵向分析流感,TT-specific MM患者的抗体反应评估恶性肿瘤本身的后果以及不同模式的体液免疫疗法。
2。材料和方法
2.1。病人
患者承认可用于诊断和/或治疗到汉堡大学医学中心。重复的血液样本中获得常规诊断程序,和所有参与者提供知情同意前样本集合。总共有1094外周血(PB)从194年连续MM患者血浆样本收集。此外,100 PB血清获得健康的捐赠者。样本收集如前所述[12,13]。患者包括2004年12月至2008年2月。为毫米。所有患者诊断和治疗的病人没有收到新药剂如bortezomib lenalidomide或萨力多胺。AutoSCT通常被执行两次串联设置。诱导治疗alloSCT通常包含140毫克/米2美法仑,150毫克/米2氟达拉滨和30 - 60毫克每公斤anti-thymocyte球蛋白。外周造血移植被用于移植和环孢霉素(直到180年)和霉酚酸酯(直到天54)被用作GVHD预防。没有病人接受整合或维护治疗。只有单一的患者接受偶尔收到供体淋巴细胞注射。所有患者接受静脉输液免疫球蛋白1天,7、14、21、28日,54岁的alloSCT后和86年。升压流感疫苗alloSCT一年后申请和TT,分别。
本研究进行了符合赫尔辛基宣言。协议收到了当地伦理委员会的批准(OB-038/06数量决定)。
2.2。蛋白质和多肽
重组流感核蛋白(流感)生产的大肠杆菌是来自Imgenex(美国圣地亚哥,CA)和破伤风类毒素(TT)提供的凯龙星贝林(马尔堡,德国)。控制蛋白质流感和TT抗体检测是表达的销售税大肠杆菌(电池系统,圣Katharinen,德国)。
2.3。酶联免疫吸附试验(ELISA)
ELISA进行如前所述[13]。所有样本,消费税背景值被从流感或TT-specific OD减去了405海里。
2.4。统计分析
使用GraphPad软件进行统计分析。为了避免偏见的重复抽样,样本分层根据他们取样的时间框架中(例如,在alloSCT alloSCT)或3个月后,所有样品的平均值计算给定的患者收集在一个给定的时间框架。在第二个步骤中,这些值被用来确定对各自的组患者(即意味着。,所有的骨髓瘤患者每时间框架)所建议的平淡和奥特曼14,15]。Mann-Whitney U测试是用来计算不同的患者人群之间的区别。协方差分析是用来评估流感之间的相关性和TT-specific抗体。临床病理的变量之间的相关性和流感——或者TT-specific抗体是由培生的测试。所有的测试进行单变量分析。差异被认为重要的如果。
3所示。结果
3.1。骨髓瘤患者证据减少流感,TT-Specific IgG抗体水平与健康对照组相比
在4年的时间进程,连续194 MM患者纳入本研究,从各自的病人,1094 PB样本收集。平均数为5.4(范围1-47)血清样本收集每个病人在平均随访时间11.4个月(范围1-39个月)。大多数病人都包括在疾病的晚期阶段II和III(主要是根据鲑鱼和Durie分类),但10个病人接受化疗,自体干细胞移植(autoSCT),或alloSCT,分别为最大治疗之前学习包容(见表1病人的特点)。
当我们比较水平之间的免疫球蛋白抗体针对流感或TT骨髓瘤患者和健康的捐赠者(),我们发现两种类型的体液反应显著降低的患者(图1(一))。地址如果流感抗体,TT-specific反映一般体液容量给定组的受试者在相当程度上,我们进行了相关分析。事实上,我们观察到水平的流感——TT-specific免疫球蛋白抗体相关的积极和高度显著的患者以及那些捐助者(图1 (b))。这一发现进一步表明,状态一般有免疫抑制患者,无论给定的抗原的性质。然而,重要的是要注意,骨髓瘤患者相比,选择,匿名献血者,我们,因此,不能排除差异观察到部分相关的混杂因素,也就是说,每一组的受试者的平均年龄。
(一)
(b)
3.2。流感和TT特定抗体显示瞬时AlloSCT后增加了持久的抑制
因为alloSCT和autoSCT已知明显影响患者的免疫能力,我们问对流感的免疫球蛋白抗体反应和TT是如何影响每种类型的移植。只有这样患者纳入分析曾收到autoSCT或alloSCT作为最大的治疗。当我们监控水平的流感——TT-specific抗体autoSCT之前和之后,我们没有发现任何重大变化在随访期间相比,移植前值(图2)。相比之下,流感和TT抗体显著增加在前三个月后alloSCT水平与健康的捐赠者。此后,体液反应显著下降,抑制3和5年以上在流感TT-specific抗体,分别。
(一)
(b)
(c)
(d)
分析alloSCT对体液免疫的影响对流感和TT更详细的方式,我们选择其中一群病人能够得到样品在过去的6个月之前alloSCT第一alloSCT后6个月。比较水平的流感——TT-specific抗体同质集体在两个时间点,我们确认我们的观察alloSCT后显著增加(图3(一个))。相比之下,没有发现明显的变化,当我们比较同一时间点的一组病人收到autoSCT(图3(一个))。接下来我们样品相同的病人相比,收集后6个月或更少时间点= alloSCT alloSCT后与样本收集了超过6个月。我们能够证明,6个月代表一个重要截止后对MM患者的体液免疫alloSCT(图3 (b))。相比没有区别流感——或者TT-specific抗体被发现当autoSCT同期患者监测时间(数据未显示)。
(一)
(b)
3.3。流感和TT抗体水平负相关与不良预后的标志在毫米
下一步,我们将流感和TT抗体水平与各种各样的临床病理的措施(表2)。FLU-specific抗体,唯一显著关联发现总免疫球蛋白的含量较低的免疫球蛋白g骨髓瘤免疫球蛋白浓度与抗流感抗体水平升高(表2)。另一方面,较高的TT-specific抗体明显与年轻的年龄(< 60年)和正常血清钙和白蛋白以及正常免疫球蛋白骨髓瘤免疫球蛋白浓度。总的来说,这些关联表明,一般免疫反应性随疾病进展和恶化病人的临床状态。
4所示。讨论
分析迄今最大的MM患者群体的存在流感TT-specific抗体,我们发现骨髓瘤患者显著降低,两种抗原的抗体水平的证据。MM患者被认为是缺乏多克隆免疫球蛋白(16]。在疫苗接种MM患者显示IgM延迟增加,更快地转向免疫球蛋白和抗体的滴度较低的目标抗原(17]。一般在骨髓瘤患者b细胞功能障碍导致抗体滴度低于保护水平,呈现MM患者更容易受到感染,尽管疫苗(3,18]。流感,TT-specific抗体水平进行了调查在小群MM患者,主要揭示抗体滴度在毫米低于健康对照组(18- - - - - -21]。在大型纵向研究,我们能够证实这些结果,我们相信这些减少的抗体水平两个选定的目标的确反映了负面影响恶性肿瘤和以前治疗的体液(也可能细胞)骨髓瘤患者的免疫力。这个想法也会支持我们的观察TT -之间的负相关和/或FLU-specific抗体水平和不良预后的标志物毫米如副蛋白水平和血清钙和白蛋白的浓度以及病人的年龄。
除了上述参数我们发现一个强大的影响alloSCT TT的水平——FLU-specific骨髓瘤患者的抗体免疫球蛋白。我们观察到抗体水平升高在第一次alloSCT后6个月后跟一个抑制体液免疫5年等等。治疗如化疗、autoSCT alloSCT曾被证明能够显著影响癌症患者的免疫系统(9,10,22,23]。毫米,小研究表明alloSCT损害体液免疫反应,但对抑制发展的过程中,在理想的时间点和数据疫苗接种是有争议的11,24]。在我们目前的研究中,我们能够证明,在其他疾病需要alloSCT,对流感的免疫力和TT减少移植后随着时间的推移,最有可能作为一个代理长期免疫抑制的标志(25]。另一方面,我们也发现了一个瞬态的增加流感和TT抗体在alloSCT后的前6个月。虽然有很多可能的解释增加,我们相信,它是最有可能造成静脉置换与多克隆静脉注射免疫球蛋白(丙种球蛋白)通常表现在我们中心在第一个月后移植(26]。这一假设,将符合先前的研究描述大量的流感和TT-specific抗体的部分丙种球蛋白制剂(27]。
另一个有趣的观察我们在我们当前的分析是,初始放大后对TT和NP体液免疫反应,抗体水平抑制了至少3年的FLU-specific免疫力而TT-specific抗体仍低于post-alloSCT早期(< 6个月)水平对整个观察期。有四种可能的解释的差异这两个抗体特异性的行为。首先,基于这一事实FLU-specific免疫通常是自发而获得TT-specific体液反应总是由疫苗接种,反复自然暴露流感抗原可能提高抗体反应(8,18]。另一方面,严格执行TT-specific疫苗接种可能低于FLU-specific疫苗接种,因为与流感感染破伤风感染不是MM患者死亡率的主要原因。这个假说是最不可能适合,因为在我们的机构,TT例行监测和低滴度抗体导致反复升压接种疫苗。第三,埃克等人曾报道,在白血病患者TT的水平——但不是流感嗜血杆菌特殊抗体与复发相关的负面和不保护这些免疫抑制患者8]表明确实treatment-induced体液免疫抑制的程度可能取决于特定抗原的类型(8]。因此,它曾被描述抗病毒抗体反应更稳定的半衰期高达50年10年相比,抗菌反应,也就是说,对TT (28]。因此,我们认为后者的概念是最有可能解释不同的正规,直到复苏TT, NP-specific alloSCT后抗体。
总的来说,我们目前的发现支持了概念,毫米与深刻的疾病——therapy-related免疫抑制,补偿后几个月alloSCT应用静脉注射免疫球蛋白。这和抗流感的基本差异对经济复苏和anti-TT抗体滴度在接下来的几年里需要考虑优化策略应用丙种球蛋白alloSCT后和主动免疫。
确认
这项工作是支持由埃普多夫克雷布斯和Leukamiehilfe,德意志卡雷拉斯Leukamie-Stiftung,从癌症研究所(d . Atanackovic)。