文摘
客观的。治疗效果的目标是探索mometasone糠酸盐膏对地衣sclerosus et atrophicus (LSeA)外生殖器的男孩和其相关toll样受体4 (TLR4)和骨髓分化因子88 (MyD88)。方法。总共100个男孩在我们医院接受治疗从2021年1月到2023年1月由于临床表现在外部生殖器被选为研究对象。所有男孩接受了冗余的包皮环切术治疗,其蛋白表达TLR4和MyD88包皮组织由BCA蛋白质分析和免疫印迹,测量和mometasone糠酸盐膏应用于那些病理诊断为LSeA,以便比较血清炎症因子的水平和尿动态指标在儿童患者治疗前后。结果。LSeA儿童患者的临床疗效总率高达90.79%;治疗后,孩子的最大和平均尿流率患者明显高于治疗前 ;与non-LSeA组相比,蛋白质的TLR4的表达,MyD88, NF -κB是增加LSeA组 ,的mRNA表达TLR4、MyD88和NF -κB在LSeA组显著增加 ;ROC曲线的结果表明TLR4 AUC值最高,治疗期间,儿童患者的不良反应的发生率为6.58%。结论。LSeA会增加儿童患者的炎性反应,及其发病机理可能与TLR4的upregulation MyD88, NF -κB TLR4的表达,从而激活/ MyD88 / NF -κB信号通路。应用mometasone糠酸盐奶油LSeA病人后多余的包皮环切术能有效减少体内的炎症反应,提高尿动态指标,用确切的疗效。进一步的研究将有利于建立一个更好的治疗方案这样的儿童患者。
1。介绍
地衣sclerosus et atrophicus (LSeA),炎症细胞介导慢性皮肤疾病,病因不明(1),通常出现在肛门和生殖器和女性比男性更普遍,男性/女性发病比为1:10 40 - 50岁和偏爱。高级男人和男孩是两个男性人群容易受到疾病和儿童9 - 12年的发病率更高。临床研究显示2)遗传、自身免疫、潮湿的环境中,局部感染、创伤,以及妨碍LSeA所有风险因素诱发。近年来,一些学者提出了(3]的概念LSeA外生殖器的男孩,提高人们的意识的这种疾病。早期LSeA男孩涉及外部生殖器的包皮,随着病情发展,包皮内板将展览补丁融合成碎片用硬质感和弹性差,形成一个害怕狭窄环,所以包皮紧紧坚持龟头与分离困难,最终导致排尿困难(4,5]。冗余包皮环切是最常见的一种泌尿手术,是目前常见的手术方法治疗LSeA男性,但患者仍显示手术后尿道口分泌物,甚至脱皮等当地症状表现(6];因此,实现接受多余的包皮环切术的患者的术后干预改善疾病的预后的关键。据报道(7)的临床和病理表现LSeA lymphocyte-mediated慢性炎性细胞浸润导致严重纤维化病变上皮。Mometasone糠酸盐奶油,外用药物,有多个效果如免疫抑制、抗炎、和antihyperplasia特色与快速发病和皮肤耐受性好,容易被患者接受,通常用于治疗皮肤疾病,如神经皮疹,湿疹8),效果很好,已经证明了它的效力的儿童包皮过长(9]。此外,生物机制发现toll样受体4 (TLR4)中扮演一个重要的角色在炎症和免疫反应的过程。TLR4介导的蛋白质生物或非生物源的刺激和打开门户体内炎症反应(10),这是一个重要的转移膜受体相关信号的细菌革兰氏阴性细菌脂多糖。如图所示的研究报告(11],TLR4的差异表达水平可以激活炎症反应机制和体内免疫系统,诱导心肌细胞凋亡,导致心肌重塑,加重心脏结构和功能损伤,和发挥重要作用的发展和进展慢性心脏衰竭。骨髓分化因子88 (MyD88)是一个关键的衔接分子的toll样受体(TLR)信号通路12),上游传输消息中发挥的重要功能和疾病的起始和进展。TLR4和MyD88 inflammasome激活先天免疫途径,解决在一些研究和评论13]。然而,没有研究证实的治疗效果mometasone糠酸盐奶油LSeA外生殖器的男孩与TLR4和MyD88及其相关性。因此,在这项研究中获得的治疗效果可以作为临床诊断的基础上提升减轻疾病在儿童患者中,理解相关的分子机制和发病机理,为临床治疗提供指导。
2。材料和方法
2.1。病例选择
总共有100个男孩在我们医院接受治疗从2021年1月到2023年1月由于外部生殖器的临床表现(例如,尿道口狭窄,未能翻转和公开尿道口,白色斑点,和明显的疤痕包皮的口在某些情况下,导致弱流尿和排尿困难)被选为研究对象,他们3 - 14岁。研究了世界医学协会赫尔辛基宣言》(14]。
2.2。方法
所有儿童患者接受冗余包皮环切术治疗。局部浸润麻醉了阴茎的基地管理0.5毫升盐酸利多卡因注射液(制造商:上海朝晖药业有限公司。NMPA没有批准。H31021072;规格:5毫升:0.1 g)通过皮下环形注入。尿流率测定手术前、手术后在发送包皮组织进行病理检查,和尿流率重新度量界限手术后1个月。儿童患者病理诊断为LSeA, mometasone 0.1%糠酸盐膏(制造商:拜耳医药保健有限公司。NMPA没有批准。H19991418;规格:5 g: 5毫克)在本地应用。 Partial prepuce tissues of LSeA cases and non-LSeA cases were measured by BCA protein assay and western blot, so as to further clarify the protein expression of TLR4 and MyD88 in child patients of the two groups.
2.3。观察指标
功效的决心。治愈:各种临床症状的儿童患者治疗后消失,和真菌显微镜检查的结果,文化是消极的;明显有效:临床症状缓解,灭绝的皮肤病变≥60%,真菌显微镜检查的结果和文化是负面的;改善:临床症状缓解,灭绝的皮肤病变≥20%,真菌显微镜检查的结果和文化是积极的;无效:没有临床症状的减少甚至恶化,灭绝的皮肤病变< 20%,真菌显微镜检查的结果和文化是积极的。总疗效率=(治愈病例数+显著有效病例数)/总病例数100%。
各种儿童患者治疗前后尿动态指标测定。首先,尿常规测试进行了检查孩子是否患者尿路感染症状,如果没有,可以进行测量。儿童患者躺在检查床上,两腿分开在90°充分暴露外生殖器,外部消毒使用碘载体后,测压的管是直接通过尿道插入膀胱和外部连接到尿动态仪器(模型:ZN999-Nidoc970A;制造商:北京Haifuda科技有限公司)。油管连接后,尿液在膀胱完全清空,仪器自动灌输无菌生理盐水到膀胱速度取决于患者的耐受性,儿童患者的最大和平均尿流率和有效的排泄时间记录的工具。
4毫升的空腹静脉血是来自LSeA儿童患者治疗前后的血清标本,然后测量血清白细胞介素- 6 (il - 6)的水平值,interleukin-17 (IL-17)和肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α采用ELISA法,包购自南京Sbjbio科技有限公司有限公司
儿童患者的术后包皮组织放入电均质器均化;蛋白质裂解缓冲和phenylmethylsulfonyl氟化物的最终浓度1更易/ L(生产商:Beyotime生物技术;项目编号ST506)添加;适量的组织被放入细胞裂解缓冲,然后全面地组织溶解(制造商:上海市景心科技有限公司有限公司;项目编号Tissuelyser-24)和细胞溶解在冰上10分钟和12000×g离心10分钟,和上层清液提取的蛋白质定量测量与BCA蛋白质分析工具包(生产商:Beyotime生物技术;项目编号P0010S)。后以最低浓度为标准,添加一定量的裂解缓冲是为了调整每组的蛋白质浓度相等,蛋白质与相同体积的sds - page样本稀释加载缓冲区(1 x)(生产商:Beyotime生物技术; item no. P0015A), and then, the protein specimens were taken for sodium dodecyl sulphate (manufacturer: Meilunbio; item no. P0015A)-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) to separate the protein. The proteins on the gel were then transferred onto the 0.22 μ聚偏二氟乙烯(PVDF)膜1.5 h(320毫安),传输电流设置为250毫安和传输时间60 - 120分钟。膜贩运后,蛋白质被5%脱脂奶粉1 h在室温下,和TLR4的稀释剂,MyD88, NF -κB,和GAPDH主要抗体稀释1:1000(生产商:Servicebio;项目编号G2025)添加孵化一夜之间在4°C或/ 2 h下37°C。孵化后,膜冲洗3次,1×TBST,每次10分钟。二次抗体稀释剂(制造商:Servicebio;项目编号G2009)补充道,和膜放在摇床(生产商:SCILOGEN;模型:SK-L180-E) 1 h孵化在室温下,然后,膜被冲洗3次,1×TBST,每次10分钟。PVDF膜放入化学发光仪,和接触液体A和B混合比为1:1,然后掉在膜均匀接触。图像分析与图像J,结果表示为光密度的比值靶蛋白的蛋白质GAPDH内部参考。
rt - pcr:部分包皮组织切除两组儿童患者,放入液氮,磨成粉;提取总RNA浓度和测量;互补脱氧核糖核酸合成根据规范在总包反应20卷μl;逆转录条件在25°C, 30分钟30分钟42°C, 30分钟在85°C。2μl互补脱氧核糖核酸模板被扩张的体外根据扩张规范的实时PCR反应总额的20倍μl;扩张条件5分钟变性在95°C。与β肌动蛋白作为内部参考,每个小组获得的Ct值,和2基因表达进行了分析−△△Ct方法。引物序列如下:TLR4上游地区:5ʹ标签CCA TTG CTG CCA ACA TC-3′;下游地区:5ʹaca CCA ACG GCT CTG手枪AA-3ʹ;MyD88上游地区:5ʹgca TGG TGG TGG TTG TTTCT-3′;下游地区:5′tct GTT GGA CAC CTG GAG AC-3ʹ;NF-kβ上游地区:5′亚美大陆煤层气有限公司ATC TGC CGA GTAAAC CG-3′;下游地区:5ʹ太极拳CGT棉酚ATA CAC CTCAA-3ʹ;β肌动蛋白上游地区:5′ctt猫TGA有条件现金援助CAACTA猫GG-3′;下游地区:5ʹctc GCT有条件现金援助GGA AGATGG TGA条t - 3ʹ。
不良反应的发生在儿童患者治疗期间被记录和比较。
2.4。统计方法
在这项研究中,数据处理的专业统计软件SPSS26.0画图软件GraphPad棱镜7(美国圣地亚哥GraphPad软件)、枚举数据检查X2测试和表达的n(%)),测量数据检查t以及和平均数±标准差表示,由皮尔逊相关分析方法和绘制ROC曲线,和被认为是统计上的显著差异 。
3所示。结果
3.1。疗效评价
结果显示术后组织病理学诊断,有24 non-LSeA孩子病人和76个LSeA病人。在LSeA儿童患者中,痊愈率为71.05%(54/76),明显有效率为19.74%(15/76),提高率为7.89%(6/76),无效的率为1.32%(1/76),和总临床疗效率为90.79% (69/76)。
3.2。比较各种尿动态指标
治疗后,孩子的最大和平均尿流率患者明显高于治疗前 ,和有效的排泄时间低于治疗前 (见表1)。
3.3。炎症因子
治疗后,LSeA儿童患者的各种炎症因子水平明显低于治疗前 (见表2)。
3.4。蛋白质的表达TLR4、MyD88和NF -κB在儿童患者包皮组织
与non-LSeA组相比,蛋白质的TLR4的表达,MyD88, NF -κB增加LSeA组 (见图1)。
3.5。信使rna的表达TLR4、MyD88和NF -κB在儿童患者包皮组织
与non-LSeA组相比,信使rna的TLR4的表达,MyD88, NF -κB是增加LSeA组 ,的变化趋势与免疫印迹结果(参见图一致2)。
3.6。ROC曲线LSeA预测每个索引的结果
3.7。不良反应
在治疗期间,烧灼感和3 2例患者恶心LSeA组,和不良反应的总发生率为6.58% (5/76)。
4所示。讨论
LSeA是一种慢性炎性疾病中最常见的外生殖器和关注许多临床学科。临床上,它的特点是萎缩性白色斑块生殖器区域,龟头和包皮被涉及的主要网站,通常发生在成人中。外国学者(15)认为,这种疾病的发病率在男孩大约是30 - 40%,这将导致继发性病理包茎在男孩,瘙痒症的临床表现的阴茎头或包皮伴随着当地的脱色和dermatauxe和局部毛细血管扩张在某些情况下,导致破坏性的纤维增生病变部位,包括阴蒂头,尿道口,甚至前尿道,从而导致尿道口狭窄和贫困儿童排尿,这严重影响他们的生活质量。LSeA通常表现为慢性,在不知不觉中进步的疾病没有明显的早期症状,随着病情的发展,乳白色斑块出现在包皮和龟头的内板,和大量脓性分泌物分泌,伴随着刺痛和灼烧感。它已经被记录(16),有一个潜在的LSeA恶化风险,并造成的包茎,阴茎垢积累是重要的致癌因素,因此,应当密切关注LSeA。冗余包皮环切术是目前主要的外科手术治疗LSeA [17),可有效减轻潮湿的环境和尿液的刺激,降低龟头的炎症反应在某种程度上,但大多数患者仍出现尿道口分泌物和地方剥落和缓慢的复苏进程。一些报道指出,在中国(18冗余包皮环切后临床症状可以提高本地应用局部药物,如红霉素软膏和四环素软膏,但这些药物可能导致局部刺激的症状和过敏反应后使用。外用药物,mometasone糠酸盐膏能有效治疗相关症状地衣sclerosus引起的外阴通过减少血管通透性和施加影响的局部抗炎,antiepidermal增殖,血管收缩,改善皮肤损伤(19]。这项研究的结果显示,总临床疗效率应用mometasone糠酸盐膏治疗LSeA儿童患者的90.79%,因为mometasone糠酸盐膏是一种intermediate-acting皮质类固醇激素与抗炎和抗过敏作用,发病迅速,缓解瘙痒的效果好,经皮肤吸收和低利率,已广泛应用于儿科皮肤疾病。以往的临床研究表明[20.]lesional皮肤网站LSeA儿童患者往往伴有炎症细胞的浸润,促进疾病的发展。肿瘤坏死因子-α是由激活单核吞噬细胞和内皮细胞能促进中性粒细胞减少粘连,刺激身体的局部炎症反应。IL-17导致炎症和组织损伤作用于内皮细胞,巨噬细胞、上皮细胞、il - 6在炎症反应很重要21],它可以诱发c反应蛋白(CRP)的生产和原降钙素(PCT),直接相关的炎性疾病和感染的程度。研究结果表明,治疗后,各种炎症因子的水平在LSeA儿童患者显著低于治疗前 ,表明mometasone糠酸盐膏能有效地减少LSeA患者的炎性反应,在改善疾病预后具有重要意义。
TLR4在TLR家族中扮演着重要角色在免疫炎症反应和上游体内的先天免疫反应的关键因素,而MyD88适配器蛋白质通常和TLR4的下游因子,主要在信号转导(22]。TLR4激活时,与下游MyD88相互作用,导致MyD88激活,下游和传输信号,然后由激酶磷酸化激活NF -κB信号通路,从而促进炎性因子的释放如TNF -α和il - 6。TLR4 MyD88 / NF -κB通路,为炎症激活先天免疫途径,已经证明在不同的疾病,如动脉粥样硬化、缺血性中风后抑郁,溃疡性结肠炎(23]。众多研究显示[24],TLR4信号通路起着重要的作用在人类炎症反应,TLR4可以生产各种炎症介质和因素通过其下游MyD88-dependent MyD88-independent信号转导通路。MyD88和TRAF-6 MyD88-dependent中的分子参与细胞内信号通路,这一系列信号事件后,激活MAPK和NF-kB信号通路,导致促炎细胞因子il - 6和il - 1的表达β和肿瘤坏死因子-α然后引发炎症反应(25]。在这项研究中,术后的蛋白表达水平的TLR4和MyD88包皮组织儿童患者使用BCA蛋白质分析和免疫印迹检测到,并发现TLR4和MyD88显示LSeA孩子的包皮组织高表达,这是由于TLR4参与调解MyD88 LSeA病理反应,和孩子们的身体有害因素与脂多糖可以促进MyD88 TLR4信号,然后激活其下游的信号,从而促进炎症因子和趋化因子的释放在lesional皮肤,,反过来,可以促进NF -激活κB,形成恶性循环,导致疾病的恶化。
总之,治疗LSeA男孩mometasone糠酸盐膏具有良好的有效性和高安全性。LSeA的发病机制可能归因于TLR4的upregulation MyD88, NF -κB TLR4的表达,从而激活/ MyD88 / NF -κB信号通路参与。
数据可用性
数据支持本研究的发现可以在合理的请求从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。