对感染疟疾儿童血管生成素1和2的评价

摘要

背景。疟疾可能会影响到所有年龄段，最特别是幼儿的人。该研究评估血清血管生成素-1（ANG-1）和血管生成素-2（Ang-2的），其是内皮激活和完整性与一些血液参数的关键调节剂（总的白血细胞数（WBC），总红细胞的水平在疟疾感染儿童细胞计数（RBC），血小板计数，和疟原虫密度）。方法。对来自6个月至15岁儿童的92份血样进行了分析。其中重度疟疾患者30例，轻度疟疾患者40例，健康对照组22例。采用酶联免疫吸附法测定血清ang1和-2水平。血液学参数采用世界卫生组织标准确定。结果。有显著的下降( ）单纯疟疾和严重疟疾患者血清Ang-1较对照组显著升高( ）在的Ang-2和Ang-2的观察/中Ang-1的比率在无并发症的疟疾和重症疟疾与对照组相比。RBC和血小板呈显著下降，而WBC在重症疟疾无并发症疟疾和对照组相比，表现出显著上升。结论。本研究显示，疟疾感染者ang2和ang2: Ang-1比值显著升高，但Ang-1比值显著降低。ang1和ang2可用于确定疟疾感染的严重程度，因为与对照组相比，它们在疟疾受试者中的水平有显著差异。

1.简介

疟疾是一种常见的威胁生命的疾病是高发病率的热带和亚热带地区[1]。疟疾可能会影响到所有年龄段，最特别是幼儿的人。恶性疟原虫是的疟原虫引起的疟疾感染非洲最常见的品种，它是疟原虫经常昏迷或贫血[杀了人的最积极的品种2]。疟疾影响所有性别和年龄的人，但最脆弱的人是儿童、孕妇、艾滋病毒/艾滋病患者以及来自非疟疾流行地区的国际旅行者[3]。在风险群体中，非洲疟疾流行地区的幼儿，特别是6个月至5岁的幼儿最容易感染严重疟疾，这是全世界疟疾死亡的主要原因[4，五]。疟疾感染发生是由于无论是简单的疾病或严重的疾病[6]。这两种形式的疟疾可通过对疑似疟疾阳性患者的仔细评估加以区分。因此，必须仔细区分急性无并发症疟疾和严重疟疾，因为这可能影响这种疾病的治疗和预后，从而导致进一步的并发症[7]。

1.1。血管生成素-1

血管生成素是内皮细胞上表达的Tie-2受体配体，在正常生理功能中调节内皮细胞的静止。它们是与内皮的稳定性密切相关的蛋白质，在各种炎症条件下，其水平的改变主要是由于内皮的激活[8，9]。在正常的生理条件下，储存在血小板中的高水平ang1促进血管内皮的平静。在恶性疟原虫疟疾中，血管生成因子的产生主要与感染红细胞对血管内皮细胞的细胞粘附增加有关[10]。

1.2。Angiopoietin-2

Ang-2的是在去稳定内皮细胞和血管周细胞之间的相互作用的分泌糖蛋白，其调节血管通过促进内皮细胞存活，增殖和迁移重塑和也有帮助。它被存储在怀布尔-Palade小体与血管性血友病因子一起和内皮细胞的活化过程中快速动员并释放到血流中[11]。Ang-2的被认为是放大的Ang-1激活由相对的Ang-1 [效果12]。Ang-1存在时，Ang-2作为功能拮抗剂，Ang-2- tie -2相互作用阻断了Ang-1的保护、抗炎和抗凋亡作用[13]。

1.3。疟疾感染期间血管生成素1和2的相互作用

在感染过程中，存在由疟原虫感染到作为所述确定因子的疾病的严重程度和发展中的一个的内皮红血细胞的异常附着（cytoadhesion）14]。在炎症或暴露于受疟原虫感染的红细胞中，血管生成素-2与维贝尔-帕拉德体内的血管性血友病因子一起被迅速动员并大量释放到血流中[11]。红细胞的改变也可能是由嗜血栓性因素和血小板异常引起的，也可能导致血管血栓形成[15]。然后，血管生成素-2与Tie-2受体结合，促进促炎和血栓前通路以及微血管泄漏，从而干扰内皮细胞中的血管生成素-1 (ang1)/Tie信号传导。血管生成素失调表明正常的低ang2: ang1比值的改变，可能是由于Angiopoietin -2增加或Angiopoietin -1减少，甚至是两种情况的结合[16]。因此，由于血管生成素-1和血管生成素-2是内皮激活和完整性的关键调节剂，它们的疟疾的受试者的血清样品中的水平可以帮助严重和复杂的疟疾之间进行区分。因此，建立研究组在疟疾感染的儿童，以评估血清血管生成素-1和血管生成素-2与部分血液生化指标（总白细胞计数，总红细胞计数，血小板计数，和疟原虫密度）的水平。

2。材料和方法

该研究共有92人参与调查（6个月至15岁）采用分层抽样的方法在谁是在联邦教学医院，伊多 - 埃基蒂，埃基蒂州承认科目，为三月和六月之间疟疾感染2018年伦理学批准为也从联邦医疗中心，伊多 - 埃基蒂，并和医学院健康科学，AFE巴巴洛拉大学，阿多埃基蒂，样品采集之前收集的。血液样本是从谁的孩子对呈阳性收集恶性疟原虫仅疟疾后他们的父母自愿放弃知情同意书。所有样品分析均在医疗化验科学系，AFE-巴巴洛拉大学，ADO-埃基蒂，埃基蒂州的实验室设施内进行。出招募为测试对象92名的儿童，30有严重的疟疾（根据临床表现），40有不复杂的疟疾，和22分别为对照组。孩子们还分为基于年龄范围（0-5，6-10，11-15和）三组。

About 3 ml of blood sample was collected from each volunteer subject. 1 ml of blood sample was dispensed into a 1 ml EDTA sample bottle containing 10 μl的EDTA，而剩余的血液(2ml)被分送到普通样本瓶中。EDTA样品瓶中的血液样本使用一层厚血膜检测疟原虫的存在，并制备一层薄膜来识别引起感染的疟原虫种类。然后分别计算白细胞、红细胞、血小板计数及疟原虫密度。平原的血液样本瓶被允许结块,收回,并在每分钟3000转离心5分钟(RPM)后血清与红细胞分离,转移到另一个光管,储存在−20°C到所需的分析而angiopoietin-2。

2.1。分析方法

疟原虫的检测：使用既厚和薄膜[进行疟疾的诊断17-19]。WBC，RBC，和血小板计数，使用手动方法[估计20采用WHO的推荐[]和寄生虫密度计数21]。血管生成素-1和-2血清中使用利用Melsin医疗有限公司，中国[酶联免疫吸附测定（ELISA），测定22]。分析时用厂家提供的样品稀释液稀释样品(1 / 5)。

2.2。统计分析

Data collected were subjected to statistical analysis using Statistical Package for Social Sciences (SPSS) version 23. Values were expressed as mean ± standard deviation (SD). Analysis of variance (ANOVA) was used to determine the level of significance. ，和 被认为具有统计学意义。同时进行受试者工作特性(ROC)分析。

3.结果

WBC，RBC，血小板，和血管生成素-1和-2电平的结果列于表如下给出。

表格1shows the mean ± SD of angiopoietin levels, WBC, RBC, and platelet counts in malaria and control subjects. There was a significance difference ( 和 ）将疟疾受试者的参数与对照组受试者进行比较。健康对照、无并发症疟疾和严重疟疾受试者的Ang-1水平显著下降;然而，在健康对照、无并发症疟疾和严重疟疾受试者中，ang2水平显著增加。ang2: ang1的比值也显著增加( ）严重疟疾患者和简单疟疾患者之间也存在同样的问题但是简单疟疾患者和对照组患者之间就不存在同样的问题了。

表格2显示不同年龄组的无并发症疟疾患者的白细胞、红细胞、血小板、MP密度和血管生成素水平。各参数无显著差异。

表格3显示了白细胞，红细胞，血小板，MP密度，并根据年龄组重症疟疾的血管生成素水平。有显著上升（ ）在的Ang-1和Ang-2的基于年龄组的水平观察到。

表格4显示ROC分析，以评估参数在重症和非重症疟疾中作为标记的能力。ROC曲线下面积显示，WBC、RBC、血小板、MP密度、angiopoitin -2、ang2 / ang1具有显著的能力( ）区分疟疾感染的严重性。

4。讨论

在这项研究中，昂达-1的水平之间观察到显著下跌严重的健康对照者，也无并发症疟疾和健康对照组之间，但不严重，无并发症疟疾主体之间。这项研究的结果与一些研究人员进行的研究[23结果显示，与严重疟疾和无并发症疟疾相比，健康对照组的Ang-1水平更高，而与对照组相比，严重疟疾和无并发症疟疾的Ang-1水平显著下降。

与对照组相比，重症疟疾和非重症疟疾患者的ang2水平也显著升高。在所有年龄和年龄组中，重症疟疾患者的Ang-2水平高于正常疟疾患者和健康对照者。这些发现与一项研究相似，该研究表明患有严重疟疾的印度尼西亚成年人中ang2水平较高[10]。观察死亡比其他的疾病标志物，如乳酸的更好的预测中的Ang-2水平的变化。它也与马拉维儿童的另一个研究是一致的，其中据报道，更高水平的Ang-2被认为在重症疟疾儿童与那些具有复杂的疟疾相比[24]。因此，我们的研究结果，与以往的报告相比获得，表明Ang-2的是疟疾严重的可量化的和公正的标志。虽然这项研究没有报告是否昂-1和Ang-2可用于预测与简单疟疾的儿童的进展缓慢严重的疟疾，得到的结果，但是，显然表明，减少昂-1和血管紧张素增加2级是严重疟疾疾病，无并发症疟疾和重症疟疾之间的有效区分的敏感性和特异性体征。因此，血管紧张素-1和Ang-2之间的稳定性可能是相对于所述内皮细胞的活化和疾病的严重程度主要很有帮助[10]。Furthermore, our findings are in agreement with another finding in which the ratio of Ang-2 : Ang-1 was found to be the lowest in healthy control subjects, and higher levels were seen in severe malaria [25]。显著下降( ）严重疟疾组与正常疟疾组以及正常疟疾组的Ang-2: Ang-1比值均为，而正常疟疾组与健康对照组的Ang-2: Ang-1比值均为0。这一发现还将血管生成素的失调作为疟疾感染的一个促成因素，这可能最终导致内皮功能障碍和疾病的严重程度。这进一步表明，ang1和ang2之间的平衡感可能有助于提供有关内皮状态和疾病严重程度的信息。另外，一项与我们的发现相似的研究发现，重度患者的ang2: ang1水平高于非重度患者恶性疟原虫更好地显示了疾病的严重程度[10]。虽然寄生虫的较高水平通常与重症疟疾的风险增加有关，但也可能发生在个人与相对较低的寄生虫[24]。ROC分析还确定了ang2和ang2: ang1作为疟疾及其严重程度的良好生物标记物的有效性。虽然Ang-1没有显示出良好的鉴别能力，但它的分析是必要的，以确定Ang-2和Ang-1的比率。

有白细胞计数一个显著增加，那些有严重的疟疾感染或者复杂的疟疾或对照组相比，虽然基于两个严重和复杂的疟疾年龄组的WBC之间无显著差异。这增加白细胞的水平可在激活状态下，抵抗感染的白细胞的结果。

本研究的结果表明：在红细胞计数团的显著减少，而RBC的数量增加在其类似于先前的研究健康对照组观察[26]。严重和不复杂的疟疾组红细胞水平下降可能是由于期间发生的红细胞隔离造成的恶性疟原虫诱发感染疟疾，甚至在治疗。这些发现也类似于先前的工作，其中减少的血小板计数被认为严重疟疾组与简单疟疾组中获得的值进行比较，而对照组中观察到更高水平的血小板计数[27]。的Ang-1的疟疾的受试者的水平降低证明的事实的Ang-1由血小板颗粒分泌的，并且因此它的血清样品中的浓度取决于循环血小板的数量[28]。血小板的低水平支持下降的ang1水平，因为据说ang1储存在血小板中，血小板减少据说是严重疟疾感染的一个突出特征。

随后，各研究组分为其中0和5年，6年和10年，而11和15岁的孩子组成三个年龄组。这些分组表明，在重症疟疾组儿童的许多人（63.3％）为0至5岁之间的年龄与其他年龄组相比。这一发现是类似于谁指出，严重的疟疾感染的发病率是在0岁至5岁之间的儿童与其他年龄段，由于小的存在或没有免疫力感染[相比更高的其他研究人员的报告29，三十]。此外，与其他年龄组相比，严重疟疾感染的11至15岁儿童中ang1和ang2水平显著增加。虽然这可能是由于年龄差异导致的个体荷尔蒙和基因组成的差异，但由于之前的研究人员尚未对这一群体进行充分的研究，导致这些发现的原因尚不清楚。但值得注意的是，11-15岁重度疟疾感染者的ang2水平高于ang1水平，这可能对受试者有害。

5.结论

这项研究表明,受试者有严重疟疾有显著增加Ang-2 Ang-2: Ang-1比率,但面对Ang-1水平明显降低,红细胞,和血小板与简单的疟疾和对照组相比有更高水平的Ang-1,红细胞,血小板和低水平的Ang-2 Ang-2: Ang-1比率。提示血管生成素的失调可能与严重疟疾的发病机制有关。因此，本研究结果提示，ang1和ang2可以作为判断疟疾感染严重程度的生物标志物。

数据可用性

对于符合机密数据访问标准的研究人员，可以从通信作者处获得数据。

利益冲突

作者宣称，有感兴趣的关于这篇文章的发表任何冲突。

作者的贡献

A. O和B. O负责项目设计、调研、统计计算和稿件撰写。我和O. O负责实验分析和对手稿的科学概念性贡献。A. O是项目负责人。

致谢

提交人感谢尼日利亚埃基蒂州伊多-埃基蒂联邦教学医院化学病理学部的法尔eye先生在样本收集过程中提供的协助。作者也承认资助这篇文章发表的Afe Babalola大学的管理。

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