文摘

目的。胰岛素受体(InsR)增敏剂是一种新型的治疗剂治疗糖尿病,2 - - - - - -O-methylperlatolic酸(2-O-M)作为一个潜在的InsR靶向药物。本研究的目的是确定是否2-O-M函数作为激活剂的胰岛素信号通路,调节葡萄糖通过InsR止血和发挥降糖作用在糖尿病的动物模型。方法。SPR-based分析是用来检测不同浓度的绑定2-O-M InsR。IR的蛋白质含量β、p-IR AKT, p-AKT Hepa C2C12细胞系和肝脏和肌肉组织是由西方墨点法。在C2C12细胞葡萄糖摄取能力确定。体外实验糖尿病小鼠随机分为4组:对照组,胰岛素治疗,2-O-M治疗,胰岛素和2-O-M治疗相结合。老鼠注射2-O-M或生理盐水和120分钟后的平均血糖浓度,和血清胰岛素,胰高糖素和c -肽测定。接下来,执行中存在检测mRNA在脂质和糖代谢相关基因的表达在肝脏和肌肉组织。结果。2-O-M InsR结合到细胞外的领域。此外,结合2-O-M和胰岛素治疗导致显著的胰岛素信号通路的激活在体外和重大刺激的葡萄糖摄取能力C2C12肌管。与体外实验小鼠糖尿病,2-O-M显著延长血液胰岛素降糖效果,显著降低外源性胰岛素的分泌,降低血糖浓度在活的有机体内。此外,治疗仅2-O-M显著增强的一种蛋白激酶磷酸化的肌肉组织,增强葡萄糖吸收的C2C12肌管。此外,2-O-M显著增加胰高糖素分泌的功能障碍和增强肝脏糖质新生预防低血糖。结论。2-O-M增强胰岛素通过胰岛素信号通路的降糖效果,可以作为补充胰岛素。这种协同作用的效应可以降低所需剂量的胰岛素和保护β细胞。

1。介绍

糖尿病的发病率增加了以惊人的速度,使它成为全球重大公共卫生问题。回顾从1980年到2014年在110个国家人口健康鉴定3.66亿糖尿病患者在2011年,这个数字预计将增加到5.52亿年的2030 (1]。糖尿病有四种类型:1型糖尿病(胰岛素不足),2型糖尿病(胰岛素抵抗),特定类型糖尿病和妊娠期糖尿病(2]。高循环浓度的葡萄糖引起的糖尿病可以导致各种慢性疾病,包括视网膜病变、糖尿病肾病、心血管疾病和慢性(3- - - - - -5]。糖尿病也会增加癌症的风险6]。此外,糖尿病对个人和家庭沉重的经济负担以及卫生保健系统(7]。

有效的药物治疗糖尿病(血糖控制是关键8]。目前,主要用于治疗糖尿病的药物包括胰岛素,胰岛素类似物,二甲双胍,sodium-glucose cotransporter-2 SGLT2抑制剂,和天然化合物(9- - - - - -11]。药用天然化合物的治疗和预防疾病,包括糖尿病,有着悠久的历史与传统药物。此外,草药药物可能被用作有效和可持续的替代治疗糖尿病(10]。许多植物已经证明抗糖尿病的活动,其主要成分是茶多酚(12]。在许多植物中发现的多酚化合物能提高胰岛素敏感性,降低血糖在糖尿病动物模型13- - - - - -17]。因此,研究新的抗糖尿病的药物从天然化合物越来越相关在寻找新的治疗糖尿病。

InsR是其中最重要的糖尿病药物发现的目标(18,19]。InsR胰岛素增敏剂可以绑定到InsR激活胰岛素通路独立;因此,InsR增敏剂有可能减轻胰岛素抵抗,减少低血糖的风险(19]。InsR增敏剂增加2型糖尿病患者的胰岛素敏感性,降低1型疾病患者的血糖水平。考虑到这些属性,InsR增敏剂代表一个机会来开发一种新型的治疗药物治疗糖尿病。然而,只有两个InsR增敏剂,TLK19781 [19]和TLK16998 [20.,21),已确定。因为药物胰岛素增敏剂提供太多的治疗优势,寻找新的天然化合物的例子,这些药物可能发挥重要作用在改善糖尿病患者的生活质量。

在这项研究中,表面等离子体共振(SPR)分析是用来确定绑定之间的亲和力InsR的天然化合物和细胞外的域。多酚化合物,2 - - - - - -O-methylperlatolic酸(2-O-M),是一种单胺氧化酶B抑制剂提取Pertusaria parasommerfeltii,它直接与InsR绑定。2-O-M的组合与胰岛素增强insulin-induced降糖效果的功能通过胰岛素信号通路的激活1型糖尿病小鼠和2型糖尿病小鼠模型。在这项研究中,链脲霉素(STZ)诱导糖尿病小鼠代表一个1型糖尿病模型,db / db老鼠代表2型糖尿病胰岛素抵抗引起的典范。我们发现2-O-M体内平衡调节葡萄糖刺激的胰岛素信号通路在肝脏和肌肉组织中,合成糖原、脂质和糖质新生的基因。

2。材料和方法

2.1。动物

本研究所有动物保护和动物实验动物伦理委员会批准的云南农业大学(没有。202010057)。成熟和健康的BALB / c小鼠和db / db小鼠年龄在6 - 8周是从Cawens购买实验动物有限公司(常州,中国)。老鼠单独住在一个环境可控的房间(通风,22°C,相对湿度 )12小时的光暗周期。老鼠有免费的水和食物。

前两周开始建模实验,美联储BALB / c小鼠高脂饮食(D12492,研究饮食)和脂肪占总热量摄取的60%。这些老鼠被禁食过夜,然后注射链脲霉素的55毫克/公斤(美国圣路易斯Sigma-Aldrich)连续3天。7天之后,血糖测量。如果血糖≥15更易/ L,被认为是2型糖尿病模型成功建立了(22]。糖尿病小鼠随机分为4组(每组4 - 8只老鼠):对照组,胰岛素组2-O-M组和联合(胰岛素+ 2-O-M)治疗组。胰岛素皮下注射剂量的0.5 U /公斤,和尾静脉注射2-O-M浓度1毫克/公斤。我们购买2-O-M(纯度95.0%)从BioBioPha(昆明,中国),溶解在二甲亚砜(DMSO) 10更易/ L原液,并存储在−20°C在黑暗中,直到尾静脉注射接种。

糖尿病db / db小鼠随机分为4组(每组6只老鼠):对照组,胰岛素组2-O-M组和联合(胰岛素+ 2-O-M)治疗组。的db / db老鼠实验前应禁食过夜。胰岛素注射的剂量皮下注射1 U /公斤,和尾静脉注射2-O-M浓度1毫克/公斤。

2.2。细胞培养和治疗

小鼠肝细胞细胞系、Hepa 1 - 6和骨骼肌细胞,C2C12,维护在杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)补充10%胎牛血清(的边后卫;美国沃尔瑟姆Gibco)和1% penicillin-streptomycin液体(Solarbio生命科学,北京)。分化,C2C12细胞被置于2%马血清DMEM 6 - 7天,孵化37°C在湿润条件下95%的空气和5%的有限公司₂。每次实验开始前,这些细胞被洗与磷酸盐(PBS)缓冲区和维护在DMEM没有的边后卫至少4 h。测量的蛋白质磷酸化,细胞治疗1纳米胰岛素或4μM 2-O-M 20分钟后收集细胞溶解产物为西方墨点法。胰岛素作为阳性对照。

2.3。细胞生存能力分析

2-O-M对细胞生长的影响被评估使用3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazolium化验。简单地说,Hepa 1 - 6细胞被播种 在96孔板细胞/好,培养过夜,然后用不同浓度的2-O-M (1 - 16μ米)或1纳米胰岛素24 h。上层清液被删除后,DMSO溶液添加到井,492纳米的光密度是衡量标(FlexStation 3;分子器件、桑尼维尔美国)。细胞生存能力是规范化的控制细胞。

2.4。实时定量聚合酶链反应分析

试剂盒(TransGen生物技术,北京)被用来从肌肉和肝脏组织中提取总RNA。接下来,互补脱氧核糖核酸合成按照制造商的指示使用PrimeScript RT试剂盒和gDNA橡皮擦(豆类、日本)。进行了PCR检测和量化使用结核病绿色®预混料交货Taq™II (Tli RNaseH +)(豆类、日本)和罗氏480(罗氏、巴塞尔、瑞士)快速实时PCR系统。使用2基因表达水平进行了计算^−ΔΔCT方法和规范化β肌动蛋白表达在肝组织和规范化α微管蛋白表达在肌肉组织。所有的引物序列表中列出1。

2.5。免疫印迹分析

里帕缓冲和支持PMSF (Solarbio生命科学,北京)被用来提取从Hepa细胞总蛋白质含量,C2C12细胞、肝脏和肌肉组织。蛋白质浓度测定采用BCA决心工具包(Beyotime生物科技、上海、中国)。同等质量(60μg)的每个蛋白质样本加载到8%的钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)凝胶。蛋白质被转移到0.45μm PVDF膜,非特异性结合膜被孵化的5% ( )脱脂奶粉in1X TBST 1 h。膜然后在4°C表示主要抗体孵育过夜用颤抖:anti-insulin受体β,anti-phospho-insulin受体β、anti-Akt anti-phospho-Akt,反β微管蛋白。抗体是恢复,膜清洗三次5分钟每三羟甲基氨基甲烷缓冲液包含渐变20 (TBST)。免疫印迹洗是孵化与辣根peroxidase-conjugated二级抗体稀释5%的脱脂奶粉1 x TBST在室温下用颤抖的1 h。免疫印迹被可视化使用UltraSignal敏感ECL化学发光底物(4 a生物技术,北京)β微管蛋白染色作为加载控制。

2.6。SPR的研究

SPR实验使用Biacore售价仪器(Biacore,通用电气医疗集团)25°C。细胞外域InsR (10μ在10毫米醋酸钠,g / mL pH值4.5)是固定在一个年代CM5传感器芯片(通用电气医疗集团)使用一个胺耦合工具包。浓度的分析物(2-O-M 6.25 -100μM,双重的稀释)经过固定化InsR在传感器表面。流量被设置为30μL / min的绑定时间90年代和90年代的分离时间。动能和关联分析使用Biacore售价评估软件(版本1.1,通用电气医疗集团)。

2.7。葡萄糖吸收试验

C2C12细胞治疗4μM 2-O-M和1纳米胰岛素和葡萄糖摄取能力的细胞测定葡萄糖吸收设备(美国Promega)。葡萄糖吸收试验是基于2-deoxyglucose-6-phosphate (2 dg6p)分析供哺乳动物细胞吸收葡萄糖的检测。当2-deoxyglucose添加到细胞,是运输到细胞通过GLUT2 /细胞膜GLUT4蛋白和迅速一样葡萄糖磷酸化。然而,酶,进一步修改glucose-6-phosphate不能修改2-deoxyglucose-6-phosphate,和反应物无法穿透细胞膜,所以membrane-impermeable分析物在细胞中积累。文化媒体被移除的细胞,这些细胞被细胞溶解使用酸文化。裂解后生成的检测2-deoxyglucose-6-phosphate积极反映细胞的葡萄糖摄取能力。

2.8。检测血清激素

糖尿病小鼠随机分为四组指定。适当的治疗后,血糖水平在120分钟测试。随后,小鼠安乐死,血液收集与肝素钠从眼角到微型离心机管或一个包含EDTA-2Na抗凝管和抑肽酶。血液样本在3000 g离心20分钟在4°C,和血清一直冻结在−80°C到分析。水平的胰岛素、胰高血糖素和c -肽测定和分析使用相关的工具(晶体化学、美国)按照制造商的协议。

2.9。统计分析

实验数据的统计分析是使用SPSS 17.0和执行GraphPad棱镜6。给出的数据 。使用单向方差分析组之间的差异进行了分析; 被认为是显著的。

3所示。结果

3.1。2-O-M结合InsR

确定2-O-M(图1(一))与InsR SPR-based分析用于检测绑定的2-O-M受体在不同浓度。2-O-M如图的化学结构1(一)。不同浓度的2-O-M (6.25 -100μ米)流过InsR蛋白,固定化的CM5芯片。结果表明,2-O-M可以绑定到InsR,用88.72μM(图1 (b))。

确认的工作浓度2-O-M细胞上,我们决定在Hepa 2-O-M 1 - 6细胞的细胞毒性,和实验表明细胞的异常并不受2-O-M(图1 (c))。2-O-M是否影响细胞增殖在1纳米胰岛素,它模仿浓度在流通,Hepa 1 - 6细胞中含有不同浓度的孵化2-O-M(主/μ米)和1纳米胰岛素。在1纳米胰岛素,4μ米和8μM 2-O-M显著增强细胞活力;然而,低浓度的2-O-M (1μ米和2μ米)没有改善细胞的生存能力(图1 (d))。

3.2。2-O-M增强Insulin-Activated胰岛素信号通路和刺激细胞葡萄糖摄取

不利影响从高剂量的胰岛素包括体重增加和过度的低血糖。低剂量的胰岛素,加上其他药物,已成为主要的治疗糖尿病(23]。检查胰岛素受体磷酸化,Hepa 1 - 6细胞和C2C12-differentiated细胞都接受胰岛素(1纳米)和2-O-M (4μ米)。InsRs的自身磷酸化,磷酸化的激酶显著增加胰岛素(1纳米)组与对照组相比。受体的自身磷酸化和一种蛋白激酶的磷酸化是组合(胰岛素+ 2-O-M)显著的高于治疗组相比,胰岛素组(数字2(一个)和2 (b))。

胰岛素信号通路激活的目的是促进葡萄糖摄取能力的细胞。我们确定的能力结合胰岛素和2-O-M增强葡萄糖吸收。这种组合显著增强在C2C12细胞葡萄糖摄取能力相比insulin-only治疗细胞(图2 (c)),这个结果符合免疫印迹结果如图2 (b)。

3.3。2-O-M增强Insulin-Activated糖尿病小鼠血糖过低的影响

的6-8-week-old BALB / c小鼠被喂以高脂肪食物(含60%的脂肪千卡)前2周试图建立的体外实验模型糖尿病。老鼠注射STZ 55毫克/公斤的连续3天。血糖 表明一个成功建立疾病模型(22]。体重和空腹血糖浓度的变化如图1。体重显著降低小鼠注射STZ后(图1),血糖水平显著增加注射STZ后7天(图1B)。

探索2-O-M的降糖效果在活的有机体内,2-O-M和胰岛素注入STZ-induced糖尿病小鼠,并收集血样和组织为血糖分析注射后长达120分钟。血糖水平显示,平均血糖浓度显著低于在60 - 120分钟组接受胰岛素和胰岛素和对照组相比2-O-M。此外,血糖胰岛素组(图回到其初始水平3(一个))。此外,我们2-O-M和胰岛素注入db / db老鼠和120分钟的血糖水平决定的。我们的数据显示,平均血糖浓度明显降低在90和120分钟组接受胰岛素和2-O-M相比insulin-only组(图4(一))。

我们检测血清胰岛素,胰高血糖素、c -肽在每组STZ-induced糖尿病小鼠血清胰岛素水平,并没有发现差异的组织(图3 (b))。2-O-M组小鼠的平均胰高血糖素水平显著高于胰岛素组(图3 (c))。联合治疗组的血清c -肽水平明显低于对照组(图的水平3 (d)),没有明显差异的控制,胰岛素,2-O-M组(图3(e))。同样,胰岛素的水平,胰高糖素和血清c -肽的db / db老鼠被发现。没有差异,每组的血清胰岛素水平(图4 (b))。2-O-M组血清胰高血糖素水平显著高于2-O-M组。的c -肽水平2-O-M结合胰岛素组也显著低于对照组。

2-O-M和胰岛素的结合可以显著提高糖尿病小鼠的胰岛素降糖效果,需要额外的探索,揭示了特定的机制(s)和葡萄糖的命运在活的有机体内。因此,我们研究了胰岛素信号通路相关蛋白的表达在肝脏和肌肉组织的老鼠在治疗后120分钟。InsR的磷酸化和AKT在联合治疗组显著降低肝组织的胰岛素组(图5(一个))。然而,相比胰岛素组,磷酸化InsR和AKT的联合治疗组显著增加在肌肉组织(图5 (b))。此外,一种蛋白激酶的磷酸化2-O-M组显著高于其它三组(图5 (b))。在db / db老鼠,胰岛素信号通路的关键蛋白质2-O-M肌肉注射后被检测到。我们发现2-O-M和胰岛素的结合可以显著激活InsR和一种蛋白激酶磷酸化。此外,一种蛋白激酶的磷酸化2-O-M组也显著高于对照组和胰岛素组。

3.4。2-O-M对糖原合成、脂肪合成、糖质新生糖尿病小鼠基因

探索2-O-M是否削弱了胰岛素对脂质代谢和糖代谢的影响小鼠的肝脏和肌肉组织中,我们确定脂类代谢相关基因的mRNA表达和葡萄糖代谢与2-O-M 2 h后的治疗。在肝脏组织,脂质合成基因的表达Fas和Acc1在联合治疗组明显减少与胰岛素组,而胰岛素倾向于提高脂肪合成基因的表达(数据吗6(一)和6 (b))。在db / db小鼠模型,2-O-M显著增强Fas基因表达和抑制Acc1基因表达(图7(一)和7 (b))。糖原合成基因表达的检测显示的相对表达水平Gys2在联合治疗组显著降低,表达水平的Gys2控制和2-O-M组之间的相似(图6 (c))。然而,在db / db老鼠,没有差别Gys2在所有组(图表达7 (c))。此外,糖质新生的基因(G6pase和Pepck)在两个糖尿病小鼠模型2-O-M组显著提高(数字6 (d),6 (e),7 (d),7 (e))。肌肉组织,脂肪合成基因的表达Fas显著增强2-O-M组。胰岛素组相比,的表达Acc1在联合治疗组明显减少。的表达Fas和Acc1在合并后的公司相比,明显高于其他组(数字7 (f)和7 (g))。糖尿病小鼠模型的表达Gys1联合治疗组明显增强,所不同的是,在STZ-induced模型中,的表达Gys1结合组也显著增强。

4所示。讨论

血糖控制(InsR是一个重要的目标18,19]。先前的审查表明,所有InsR领域有潜力成为药物靶点[20.,21]。胰岛素增敏剂是一种新型糖尿病治疗药物的病人。胰岛素增敏剂结合变构InsR并进行宣传行动,减轻胰岛素抵抗和胰岛素低血糖的风险最小化。然而,胰岛素、胰岛素模拟或orthosteric InsR活化剂可能增加糖尿病患者低血糖的风险,可能导致患者血糖控制差。因此,这些因素代表限制更广泛的采用胰岛素产品或InsR活化剂。到目前为止,只有两个InsR增敏剂,TLK19781 [19]和TLK16998 [20.,21),已报告。因此,它将有利于发现新的小分子天然化合物可以作为药物胰岛素增敏剂用作赞美为糖尿病患者胰岛素。

在这项研究中,我们利用SPR筛选400个小分子天然化合物,发现2-O-M结合的细胞外领域最高的InsR响应值(结果未显示)。进一步的研究发现,2-O-M有可能绑定到域InsR蛋白质的细胞外值为88.72μM(图1 (b)),2-O-M用于实验的剂量范围没有毒性细胞(图1 (c))。在C2C12和Hepa 1 - 6细胞株,我们使用胰岛素作为一个积极的控制和治疗后的胰岛素信号通路显著激活1 nM 2-O-M 20分钟。我们还发现2-O-M不能激活胰岛素信号通路,但可以增强胰岛素的作用,显著增加胰岛素信号通路的表达和改善葡萄糖吸收(图2)。这些结果表明,2-O-M直接绑定到InsR但不能单独激活胰岛素信号通路,2-O-M可以显著提高insulin-activated胰岛素信号通路显著增强细胞对葡萄糖的吸收能力。此外,在这项研究中,结合应用与2-O-M导致改善胰岛素降糖效果单独胰岛素相比,即使独自2-O-M似乎没有发挥降糖效果(图3(一个))。因此,胰岛素2-O-M作为敏化剂,协助胰岛素激活胰岛素信号级联。先前的研究已经报道,几个InsR增敏剂,如TLK16998 TLK19781,琥珀酸和dicholine没有激活胰岛素信号但InsR磷酸化可以提高胰岛素的作用[19,21]。因为他们可能减轻胰岛素抵抗,减少低血糖的风险,胰岛素增敏剂是一种互补的糖尿病治疗方法19]。

在这项研究中,结合注射胰岛素和2-O-M糖尿病小鼠显示2-O-M能有效地延长胰岛素的降糖效果在活的有机体内(图3(一个))。考试的血清浓度的胰岛素、c -肽、胰高糖素120分钟后注入小鼠显示平均胰岛素水平组间相似,但c -肽的平均水平显著降低在联合治疗组(数字3 (b)和3 (c))。外源性胰岛素可以显著抑制内源性胰岛素的分泌(24]。这个反应是观察小鼠胰岛素治疗。相反,在小鼠胰岛素和2-O-M治疗,观察内源性胰岛素分泌的抑制作用,与小鼠的胰岛素反应与胰岛素治疗(图3)。血清胰岛素水平、胰高血糖素和c -肽db / db老鼠发现,结论是一样的,在STZ-induced糖尿病小鼠(数字4 (b)。这些结果表明,2-O-M可以改善外源性胰岛素的影响在活的有机体内并进一步减少内源性胰岛素分泌。因此,联合政府的2-O-M胰岛素不仅产生更好的降糖效果,减少低血糖的风险,但也减少内源性胰岛素的分泌来保护β细胞的功能。

如图3(一个)胰岛素组的血糖水平回到最初的水平在120分钟,所以没有发现不同水平的磷酸化AKT和InsR在肝脏和肌肉组织中分离出胰岛素组(图5)。在肝组织中蛋白表达分析显示的磷酸化水平AKT在合并后的集团和2-O-M-treated组显著降低(图5(一个))。然而,在肌肉组织中,胰岛素信号通路显著激活在合并后的集团和显著提高糖原的积累在糖尿病小鼠的肌肉组织(图5 (b))。的肌肉组织db / db老鼠,磷酸化AKT的水平和InsR 2-O-M结合胰岛素组显著增加,表明2-O-M治疗直接激活肌肉组织一种蛋白激酶磷酸化。此外,2-O-M打得非常不同的角色在糖尿病小鼠的肝脏和肌肉组织,展示组织异质性可能反映了明显的异质性InsR结构在不同组织(25]。

STZ-induced糖尿病小鼠的表达Acc1和Fas是来增加组。虽然这不是重要的,这些基因的表达显著抑制肝组织的联合治疗组(数字6(一)和6 (b))。然而,的表达Acc1和Fas2-O-M组显著增加肌肉组织,这是符合高的AKT激活肌肉(图5 (b))。这些结果表明,胰岛素的结合与2-O-M可以抑制脂肪合成在肝脏和肌肉组织,这可能有助于减少脂质积累在活的有机体内。因此,进一步的研究应关注的机制抑制insulin-induced 2-O-M脂肪生成。先前的研究表明,增加磷酸化AKT的表达会导致葡萄糖转运体的膜转移和促进葡萄糖摄取26]。在db / db老鼠,2-O-M结合胰岛素仍显著抑制的表达Fas和Acc1在肝脏。然而,在肌肉,2-O-M结合胰岛素的表达增强Fas和Acc1。这可能与不同的脂质代谢的机制两种动物模型。在两个糖尿病模型小鼠,Gys1在联合治疗组小鼠的肌肉明显增强,表明2-O-M和胰岛素的结合可以显著提高肌肉糖原合成的两种模型。但不同之处在于,独自2-O-M治疗也可以显著增加的表达Gys1基因在肌肉STZ-induced糖尿病老鼠,这表明2-O-M展品不同机制的行动在两个模型小鼠7 (h))。

在这项研究中,我们发现2-O-M激活一种蛋白激酶磷酸化的肌肉组织,而不是通过激活InsR(图5 (b))。此外,2-O-M没有显示出对降低糖尿病小鼠血糖的影响(图3(一个))。这些结果暗示可能存在其他机制驱动2-O-M激活一种蛋白激酶的磷酸化。我们还发现,在小鼠血清胰高血糖素的浓度2-O-M组的浓度明显高于其他组(数字3 (c)和6 (d))。我们确定基因的mRNA表达参与糖质新生(G6pase和Pepck)在肝脏组织STZ-induced糖尿病小鼠,发现这些基因的表达显著增加2-O-M组(数字6 (d)和6 (e))。我们还发现相同的结果db / db老鼠(图7 (d)和7 (e))。这些数据表明,2-O-M增加胰高血糖素分泌,诱发糖尿病小鼠的肝脏中糖质新生组织。胰高血糖素和胰岛素是完全竞争对手在活的有机体内(27]。因此,2-O-M可能激活一种蛋白激酶磷酸化和糖质新生在活的有机体内;支持这一假设缺乏2-O-M降糖效果的在活的有机体内。

5。结论

SPR实验证明2-O-M InsR结合到细胞外的领域。2-O-M和胰岛素的结合极大地激活胰岛素信号通路在体外并显著刺激葡萄糖摄取能力C2C12肌管。此外,2-O-M显著减少内源性胰岛素的分泌,降低血糖浓度在活的有机体内。此外,独自2-O-M显著增强肌肉组织中的一种蛋白激酶磷酸化水平,也提高了葡萄糖摄取C2C12肌管。相比之下,2-O-M显著增强胰高糖素的分泌和肝脏的糖质新生来缓解低血糖的风险。因此,2-O-M可以用作补充胰岛素,允许低剂量的胰岛素的注射,这可能减少注射胰岛素的潜在的不利影响(如低血糖和肥胖)来保护β细胞的功能。

数据可用性

数据分析在研究过程中并没有公开。严格的分析的数据,以确保结果的客观真实性。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突,关于这篇文章的出版。

作者的贡献

盛小君、王Xuanjun和吴小云本研究设计;王英豪和关Qiaoli执行大部分的实验和数据分析;刘饮片进行动物实验的一部分,免疫印迹;王、吴小云和英豪写道。王英豪和关Qiaoli同样这项工作。

确认

这项工作得到了中国自然科学基金(批准号81760667)和云南省的重大科技专项项目(批准号2018 zg013和2018 zg010)。

补充材料

图S1:体重变化(A)和(B)血糖浓度注射STZ后的老鼠。 ; ; 与天0。(补充材料)