文摘

女性在绝经后期大约三分之一的生活。在绝经后女性2型糖尿病(DM2)是最常见的慢性疾病之一。这些条件促进氧化的变化,代谢,免疫炎症的概要文件被更高的细胞外72 kDa-heat休克蛋白(eHSP72)。在这里,我们调查了更年期的时间是否与细胞氧化应激标志物水平与DM2的绝经后妇女。六十四妇女被招募( 在pre -(岁) )和绝经后期( )期间,( )或没有DM2 ( ),和空腹采血评估代谢,氧化、炎症标志物。我们发现更年期DM2影响代谢和氧化参数提出了协同对血浆lipoperoxidation水平的影响。此外,绝经后妇女eHSP72最高浓度水平与年绝经后期。我们得出这样的结论:更年期的时间影响的标记细胞压力和增加氧化应激的风险,主要是当它与DM2相关联。

1。介绍

人口老龄化在大多数国家导致了女性在绝经后三分之一的生活条件(1]。更年期结束标志着生殖生命和特点是17的衰落β雌二醇水平。它易诱发氧化应激2),血管舒缩性症状(3)、骨质疏松症和慢性疾病,如肥胖和2型糖尿病(DM2) [4]。

DM2是绝经后妇女中最常见的慢性疾病之一,特点是代谢紊乱,以及慢性低度炎症和氧化不平衡。氧化应激似乎中央DM2发展以来lipoperoxidation增加根据疾病严重程度(5]。因此,全球(代谢、氧化、炎症)损伤特征DM2可以增加易感性相关并发症,当雌激素水平较低(6]。

DM2和hypoestrogenism意味着细胞应激反应的变化,主要是72年kDa-heat休克蛋白(HSP72) [7]。抗炎、抗凋亡和cytoprotective HSP72的角色在细胞内介质与它在细胞外介质的影响(8]。HSP72释放到细胞外环境(eHSP72),当循环,它可以绑定到toll样受体和促炎和损伤的信号9]。因此,管理其原生质的浓度可能代表一种很有潜力的治疗目标10,11]。

之前报道,HSP72的循环水平与糖尿病的绝经后妇女患心血管疾病的风险(12]。从这个意义上讲,eHSP72预测在临床条件的作用[10,11),主要是慢性炎症的,已经调查(13]。因此,eHSP72原生质的浓度在绝经期可以帮助识别physiopathological绝经后期和DM2之间的关系。然而,是否敏感的低度炎症标志绝经后期加上DM2的后续这个场景年绝经后仍不清楚。因此,我们在此评估如果绝经后期的时间影响eHSP72的循环水平在糖尿病妇女如果是与氧化和炎症有关。

2。方法

妇女参与护理组在巴西南部的一个小镇的家庭健康策略被招募,参加我们的研究。最初,73名妇女进行面对面的访谈获得社会人口信息,慢性疾病病史,闭经,使用药物和膳食调查。进一步,我们应用排除标准的当前使用激素替代疗法,癌症、自身免疫、急性感染,参与高血压、吸烟、接受化疗治疗和常规或最终使用胰岛素。我们最终与64名妇女参与我们的研究。样本数量的计算是基于预期的差异最重要的变量在这项研究中,eHSP72的循环浓度,如Nakhjavani et al。14)的研究,表明每组15科目。我们使用一个统计的95%,0.05%的显著性水平。值得注意的是,在研究过程中,使用的样本数量为每个参数变化(表示在图和表的传说)由于其技术条件的分析。

最初参与者被分成两组:妇女( )和绝经后期( )。绝经后期被定义为闭经的12个月,至少,这证实了雌激素(17β雌二醇水平(妇女: 和绝经后期 )。最后,他们被分成子组:妇女不DM2 ( ),妇女与DM2 ( ),绝经后期没有DM2 ( ),与绝经后期DM2 ( ),基于医学诊断的DM2或禁食 和 (15]。基于Nakhjavani et al。(14]研究表明,长期糖尿病eHSP72水平高于控制,我们预计类似的生物学证据(eHSP72水平的差异 )达到95%的统计能力,显著性水平为0.05%时比较妇女没有与DM2 DM2与绝经后期。研究了95.0%力量来检测0.509使用T统计或更好的效果(0.489)使用Z统计量代替T统计数据。

这项研究是在协议与研究涉及人类的监管准则和规范,根据国家健康委员会的决议(CNS) n°。伦理委员会批准的466/2012,(n°1.173.158)。

2.1。人体测量分析

体重(公斤)验证了使用刻度尺和高度(cm)和腰围(WC)、腹部(AC)、臀围(HC),一个标准的卷尺。分析WC,我们承认肥胖的巴西指南2009 - 2010及其代谢并发症的风险值(16]。我们也评估之间的腰臀比直接商腰和臀围,分类根据切割点世界卫生组织推荐的(16]。

我们计算身体质量指数(BMI)使用Quetelet方程, 和分析根据巴西肥胖研究协会的指南(16]。作为一个补充,我们使用方程评价肥胖指数 (17根据公式)和圆锥度指数 。

2.2。血液采集

在收集到的病人血液生化分析10到12小时的禁食。血液立即被分离在真空管和乙二胺四乙酸(EDTA)。血液与EDTA用于总血液整除和血浆分离。血没有EDTA被用来获得血清。能整除的血浆和血清离心机30分钟3.000 rpm。总血是用来测量糖化血红蛋白,红细胞沉降率,和leukometry;血清是用来测量E2水平以及脂质、血糖和肝的概要文件。血浆样本在液态氮冷冻苯基甲基磺酰氟(σP7626 PMSF, )( )为后续测量丙二醛(MDA)和eHSP72水平。

2.3。剂量的17β雌二醇

定量剂量的17岁β雌二醇(E2)进行血清样本通过自动化系统ADVIA半人马XP(西门子医疗诊断)化学发光方法灵敏度和体外测试极限高于20 pg / mL。研究结果表示在pg / mL。

2.4。血脂、血糖和肝概要文件

总胆固醇、高密度脂蛋白、甘油三酯水平和空腹血糖分析enzymatic-colorimetric血清样本的方法使用Bioclin-Quibasa BS200-Mindray自动化工具。低密度脂蛋白是间接验证了Friedewald方程 ,在哪里 代表了胆固醇绑定到VLDL-C [18]。

糖化血红蛋白测定的总血整除的高效液相色谱法(HPLC),用百分比表示。平均血糖估计的公式 ,同意建议糖尿病[巴西社会的15]。其他研究结果表示在mg / dL。

肝酶测定血清样本。碱性磷酸酶(ALF) glutamic-oxaloacetic转氨酶(得到),glutamic-pyruvic转氨酶(GPT)和gamma-glutamyl转移酶(GGT)被动态测量方法使用Biclin-Quibasa包。研究结果表示在U / L。

2.5。炎症状态

超灵敏的c反应蛋白测定的血清样本比浊法。mg / dL表达的结果。总血液中红细胞沉降率验证了魏氏的吸管技术。Leukometry测量阻抗计算,获得总白细胞的数量/毫米3。

eHSP72水平验证了在等离子体由一个高度敏感的酶联免疫吸附试验样品。我们使用了一个HSPA1A-specific HSP72酶联免疫试剂盒(恩佐生命科学,劳动部-工具- 101)根据生产的建议。标准曲线是由已知稀释HSP72重组蛋白允许eHSP72血浆浓度的定量评估。量化是通过使用一个微型板块读者(迈瑞先生- 96 a)在450 nm,和intra-assay变异系数被确认为< 2%。研究结果表示在η克/毫升。

2.6。Lipoperoxidation

Lipoperoxidation由MDA水平测量使用硫代巴比土酸活性物质的方法(TBARS) [19]。简单地说,25μL(等离子体与20孵化μL水,125μL硫代巴比土酸(稍后通知,0.6%),5μL丁羟甲苯(二叔丁基对甲酚,10毫米),300年μL磷酸(H3阿宝41%),25岁μ8.1%十二烷基硫酸钠(SDS) 60分钟在100°C。在这之后,管离心机,上层的收集,和吸光度验证板读者(dr - 200 bs模型、Kasuaki公关、巴西)在505海里。MDA标准准备1.1.3.3-Tetramethoxypropane(从0.0005 - -0.016毫克/毫升)。结果表达更易与MDA /毫克的蛋白质。

2.7。统计分析

起初,我们验证了Kolmogorov-Smirnoff正常的数据测试。我们比较E2和eHSP72之间的水平和使用学生的绝经后妇女 - - - - - -测试和评估绝经和eHSP72水平之间的关系通过卡方检验。

我们进一步分布式组织根据女性更年期的“时间”和“时代”基于中位数的值绝经后期时间和年龄(年)表达。我们比较eHSP72、CRP和E2水平建立组之间用单向方差分析,其次是图基。我们也评估DM2之间的交互和更年期的影响在不同的参数通过使用双向方差分析,其次是图基。

人体测量之间的关系的分析,代谢参数,更年期,DM2,和时间的DM2 eHSP72水平(因变量),我们使用了单变量和多变量回归和皮尔逊相关性。我们调整了二次线性回归。

9.0数据处理Graphpad棱镜,表达的结果 。

3所示。结果

64名妇女的平均年龄 年。绝经前女性( )提出了 年,绝经后妇女( ), 年。腹部周长(AC)的平均值高于88厘米(价值指示代谢风险)在所有的组织,达到94%的绝经后妇女和86%的绝经前妇女。大约30%的女性被包含在DM2组。63%的报道,这些女性潮热相比没有DM2绝经后的42%。在绝经后妇女中,88%(37)报道使用他汀类药物和低密度脂蛋白水平低于150 mg / dL。

正如预期的那样,空腹血糖、糖化血红蛋白和梅格高糖尿病女性没有不同的预处理和绝经后妇女。

低密度脂蛋白被这两个风险因素影响,孤立或相关(表1)。绝经后女性DM2呈现较低的低密度脂蛋白浓度相比,绝经后妇女没有DM2(表1),这些值呈负相关的使用他汀类药物。DM2也增强的甘油三酯水平,这种效果是类似的pre -和绝经后妇女。总胆固醇是受糖尿病影响,没有额外的更年期的影响(表1)。

表1
人体测量、代谢、氧化、炎症和肝参数从pre -和绝经后妇女,有或没有DM2诊断。

一般来说,肝也被更年期,DM2。血清GGT水平被因素之间的相互作用增强。绝经前女性糖尿病患者提出GGT水平高于其他组。此外,患有糖尿病的绝经后妇女GGT水平高于无糖尿病的绝经后妇女。阿尔夫是受更年期,女性有或没有DM2的效果类似。转氨酶不响应的因素(表1)。

此外,我们验证了在等离子体lipoperoxidation评估MDA水平,我们发现它是受到这两个因素的影响,孤立的或关联。绝经后妇女与DM2提出更高水平的MDA与绝经前妇女有或没有DM2相比,DM2以及绝经后妇女相比(表1)。因此,我们进行了多元回归分析MDA水平(独立变量)和绝经状态,女人的年龄,DM2诊断,统计数据证实了MDA水平之间的关联,DM2诊断(R2aj0.27; )。

leukometry分析显示一个更年期的影响和风险因素之间的相互作用的方式相比,绝经后妇女DM2提出更多的白细胞没有DM2的绝经后妇女。红细胞沉降率(ESR)也是影响绝经期之间的交互,DM2虽然多重比较分析没有说明组之间的差别。有趣的是,c反应蛋白水平不适应更年期状态或DM2条件(表1)。

因此,我们也分析了eHSP72水平的生物标志物炎症状态。卡方检验表明,83.3%的绝经后妇女提出了可检测水平的循环eHSP72,而只有50%的绝经前妇女提出了可检测水平( )。此外,绝经后妇女( , )提出更高的eHSP72水平相比,绝经前女性( , ),这效果是独立于DM2诊断(图1)。我们根据他们的年龄分层女性(组27-59岁组60 - 83岁),考虑到绝经后妇女的平均年龄。eHSP72水平没有组间差异( )。


图1
血浆eHSP72水平在绝经前妇女没有DM2 ( )和DM2 ( )和绝经后妇女没有DM2 ( )和DM2 ( )。数据表达 。双向方差分析,其次是图基。更年期 ;糖尿病 ;交互 。 一个与妇女。

我们四个初始组之间的比较后,我们实现了一个详细的评估绝经后妇女的条件。我们进行了多元回归分析(因变量)和17 - eHSP72水平β雌二醇(E2更年期)的水平,时间,DM2诊断,只考虑绝经后妇女。我们发现这两个因素影响eHSP72水平(表2)。

表2
eHSP72之间的多元回归分析、年龄、E2水平,在绝经后妇女的更年期,DM2。

分析更年期eHSP72和时间之间的关系揭示了因素之间的曲线关系,减少值在绝经期后的第一个11年和随后的海拔(图2(一个))。线调整等离子体之间的二次回归表明积极的协会eHSP72更年期和时间(R20.23541, )(图2(一个))。

(一)
(一)
(b)
(b)
图2
(一)更年期eHSP72水平和时间之间的关系。正相关,线性化的二次回归( ; )。(b) eHSP72与时间关系的更年期女性12 - 29年绝经后期。线性和简单的回归,正相关( ; )。

此外,我们分层绝经后妇女分成两组根据绝经时间的中位数。我们建立了两个群体:一个由女性绝经后期一年到11年的,其他的由12 - 29年绝经后期的女性。因此,我们在每组eHSP72之间的相关性分析,绝经期的时间。我们发现一个线性和积极联系eHSP72水平和时间12 - 29年的女性的更年期绝经期(R20.33; ; )(图2 (b))。

因此,我们证实这些结果通过比较eHSP72水平之间的绝经后组(组1 - 11年绝经后期和组12年绝经后期)和绝经前妇女。女性绝经后期的12 - 29年eHSP72水平高于绝经前女性(图3(一个))。另一方面,c反应蛋白组没有差异(图3 (b))。正如所料,这两个绝经后组提出E2水平较低与绝经前女性相比,但不影响更年期(图的时间3 (c))。

(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
图3
(一)eHSP7;(b) c反应蛋白(CRP);和(c) 17β雌二醇(E2)水平在绝经前(premen) ( )和绝经后妇女1到11年( )和12 - 29年绝经后期( )。单向方差分析,其次是图基。一个与绝经前妇女, 。

4所示。讨论

在我们的研究中,绝经后期,eHSP72水平增加,E2水平的影响,DM2,,最重要的是,绝经期的时间。此外,我们发现更年期结合DM2倾向于等离子体氧化损伤和影响肝脏功能。此外,绝经后期代表一个额外的风险因素脂质稳态时紧随其后的是药物治疗。因此,我们的数据支持的假设eHSP72可以免疫和炎症状态的潜在生物标志物在绝经后期条件。

绝经期的复杂性反映了在人体代谢和内分泌的变化(20.]。由卵巢逐渐衰败的E2生产通常是紧随其后的是身体成分的变化,如肌肉的逐渐减少和肥胖症的增加,主要集中处理(21]。不足为奇的是,94%的绝经后妇女和86%的绝经前妇女从我们研究腹部围优于88厘米,代表代谢风险。

胰岛素抵抗的肥胖是一个重要的风险因素(22),尽管没有必要因为hypoestrogenism本身影响血糖稳态(23]。在我们的研究中,正如所料,糖尿病女性提出了更高的空腹血糖和糖化血红蛋白在前和绝经后期,没有更年期状态之间的不同。因此,我们只分析了健康妇女(没有DM2, normotensives,目前没有使用药物),并在绝经后我们发现HbA1更高。此外,49%的“健康”的绝经后妇女在DM2的风险(糖化血红蛋白6.4%和5.7之间)的发展。

除了血糖稳态的障碍,血脂异常的发生二次的E2垮台在绝经后妇女中是很常见的24]。在我们的研究中,我们没有发现任何影响绝经后期条件的高密度脂蛋白水平。它可能与已经报道的功能失调的高密度脂蛋白,其次是增加补偿其水平在绝经期条件下(25,26]。此外,低密度脂蛋白也受更年期,但是它没有DM2水平高于女性。这些有趣的结果可能与使用降胆固醇药物,如他汀类药物,与低密度脂蛋白的水平。DM2也影响甘油三酯的水平,已经描述(27]。

糖尿病增加了循环水平的脂肪酸,可过载肝脏。因此,我们通过测量肝酶评价肝脏功能。虽然有和GPT持平,更年期增强阿尔夫DM2独立的水平,和GGT受到这两个因素的影响。除了作为生物标志物的肝脏功能、GGT在细胞内谷胱甘肽合成过程中发挥作用和抗氧化反应28]。这种抗氧化反应可能在DM2受损,这是慢性和低品位氧化和炎症条件,遵循代谢改变29日]。

因此,DM2的绝经后妇女提出了最高的原生质的lipoperoxidation水平。雌性激素,主要是17β雌二醇(E2),是一种强大的抗氧化剂28)通过调节几种抗氧化酶的表达和活性。因此,hypoestrogenism在绝经后期影响氧化还原状态2,30.),这是加剧了糖尿病妇女。我们证实了lipoperoxidation和DM2之间的联系通过执行一个多元回归。因此,这些结果表明,更年期,DM2存在协同效应,及其协会使具有潜力氧化损伤的风险。

E2也是一个强大的抗炎激素,它所代表的缺乏的风险建立慢性低度炎症状态。在我们的研究中,更年期孤立和结合DM2的方式增强了leukometry绝经后妇女与DM2的最高数字。白细胞增多主要代表了增强骨髓细胞生产和流通的数量的中性粒细胞和单核细胞在衰老31日)和高血糖,这标志着炎症状态(31日,32]。因此,更年期的协同效应和DM2发现在我们的研究支持,绝经后妇女DM2暴露在一个额外的心血管风险的结果(33]。

同意,绝经期之间的交互和DM2也影响ESR,经常使用生物标志物的炎症。ESR不能快速响应炎症过程的初始阶段,仍然是更长时间比升高急性期蛋白,如c反应蛋白(34]。有趣的是,c反应蛋白水平不受到这些风险因素的影响。c反应蛋白是一种急性期生物标志物的肝引起的生产和释放il - 6和TNF -α、高可用性在更年期35]。此外,CRP不仅仅是一个生物标志物还肥胖发展的一个至关重要的因素(36]。

尽管作为一个公认的炎症生物标记,在我们的研究中,c反应蛋白是不受更年期或糖尿病。因为c反应蛋白被称为最强的因素与超重有关(37),响应能力的缺乏可能是因为女性参与我们的研究没有在人体测量差异尽管糖尿病的诊断。因此,它让我们调查HSP72是否可以更敏感更年期+糖尿病轻度炎症的背景。

HSP72起着基本的作用作为一种伴侣蛋白,抗炎,抗氧化,抗凋亡蛋白(38)的表达式是由E2 (39,40]。然而,先前的研究表明,短和中间剥夺E2并不表达下调HSP72表达(41,42),这表明细胞对压力的反应在hypoestrogenism可能取决于绝经后期的时间(43]。我们发现eHSP72之间的曲线关系水平和更年期的时候,第一次11年下降值和增加绝经期12 - 29年之间的值。因此,我们分层的绝经后妇女更年期的时候,发现该集团与绝经后期更长eHSP72水平高。

绝经后期的时候自然是与寿命有关。考虑到热休克反应,重新安家,独立的E2剥夺(43),我们分析了eHSP72水平在绝经后妇女是否可能与他们的年龄而不是更年期的时间。因此,我们比较年轻的绝经后妇女(≤60年)和年龄超过60岁(≥60岁),和eHSP72水平没有组间差异。这些数据增强的响应性eHSP72更年期的时候,这可能代表一个人试图恢复氮oxide-HSP72轴高度需要在雌激素垮台和绝经后期(3]。

在细胞外介质的重要性eHSP72驻留在警告信号(9)、免疫调节和中介促炎通路(44,45]。此外,eHSP72水平与动脉粥样硬化的严重程度(46和诊断DM2的时间47]。直到这一刻,eHSP72能否帮助马克更年期阶段的复杂性还不清楚。我们还表明,eHSP72水平敏感绝经后期的时候,相关慢性病的潜在生物标志物代谢障碍存在于绝经后期。此外,考虑到公认的炎症生物标记CRP (36,37,48)没有反应在我们的研究中,我们还建议,在更年期+糖尿病轻度炎症背景、血清eHSP72水平可能更敏感和更好的生物标志物的临床前阶段。

5。结论

更年期的时候提高血浆的eHSP72水平,对E2水平,DM2也敏感。此外,DM2更年期是被一个额外的系统性氧化损伤的风险。更年期和DM2呈现协同效应在代谢,氧化和炎症参数,需要特别注意。最重要的是,在绝经期+ DM2慢性低度炎症背景,eHSP72水平可以后续的潜在生物标志物和一个更好的选择比行之有效的生物标志物。

数据可用性

和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者在合理的请求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

延长CFVA YPSL,完成所有的采访中,血液采集和生化分析。CFVA, LMS、实验室和TGH执行统计分析。ABS、LCCB和LMS lipoperoxidation和HSP72分析执行。延长,LCCB PBGF TGH,韩剧cowrote手稿。所有作者批准了最终版本。

确认

这项研究得到了西北地区大学的南里奥格兰德(UNIJUI)状态。