B-Cell-Produced抗体的定性和定量分析玻璃体的2型糖尿病患者糖尿病视网膜病变

文摘

目的。分析玻璃体的B-cell-produced抗体的水平或没有糖尿病性视网膜病变(DR)患者定性和定量。方法。共有52个2型糖尿病(T2DM)病人体内博士患者和52对照组无糖尿病或炎性疾病包含在这个前瞻性研究。免疫球蛋白的水平(Ig), IgM,免疫球蛋白亚型测定使用磁color-bead-based多元分析。结果。IgA的浓度、IgM博士总抗体组明显高于对照组(所有 ),但是没有显著差异在4免疫球蛋白亚型Bonferroni调整后两组之间。皮尔森相关分析显示低之间的负相关性的抗体水平(IgA, IgM)和估计的肾小球滤过率(表皮生长因子受体, , ,分别都 )。此外,多元线性回归分析了三个方程预测IgA的浓度,IgM抗体和总在玻璃体据eGFR和其他临床变量( , ,和 ,分别为, )。结论。水平的提高IgA、IgM抗体总由B细胞观察玻璃体的2型糖尿病患者之间有较低的负相关性水平的博士(IgA, IgM)和表皮生长因子受体的抗体。

1。介绍

糖尿病(DM)是一种慢性代谢疾病,特点是高血糖,导致胰岛素抵抗。根据最新的统计,目前有4.63亿人与世界上DM,这持续上升(1]。2型糖尿病(T2DM)病人体内最常见的DM,占91%的糖尿病,高血糖控制降低了死亡率和微血管并发症与疾病相关联(2,3]。糖尿病性视网膜病变(DR)是糖尿病重要的微血管并发症之一,是导致失明的DM人口。炎症被认为是一个关键的组件在博士的发病机理4,5]。患者的临床表现包括(1)博士水平的提高等炎症生物标记血管内皮生长因子(VEGF)和血清c反应蛋白(6];(2)增加水平的炎性细胞因子和趋化因子如肿瘤坏死因子-α、白介素- 1 (IL), IL - 6,碳碳图案配体(CCL) 3在水和玻璃体(7,8];和(3)检测中性粒细胞等炎症细胞,巨噬细胞,淋巴细胞增生性外层膜的病人(博士9]。这些反过来证实炎症因素的贡献在博士的发病机理。

B细胞在生产上发挥了关键作用的细胞因子和抗体在人类和老鼠10,11),发现调节炎症患者DM (12- - - - - -15]。抗原激活B细胞产生的抗体是一线防御病原体的接触表面,这是通过中和抗原,促进吞噬作用和抗原表达(16]。此外,反应抗体参与组织的破坏和启动自身免疫疾病17]。因此,B-cell-mediated免疫反应和调节免疫反应是很重要的,而这些B细胞功能也可能有助于发展然而,博士有有限的证据在博士患者B细胞的活化。

在最近的研究中,B-cell-produced免疫球蛋白(Ig)的浓度,IgM,免疫球蛋白亚型在玻璃体的2型糖尿病患者和对照组博士进行了分析。此外,这些抗体的浓度之间的相关性及临床变量的博士。

2。材料和方法

这项前瞻性研究从2018年5月到2020年3月根据赫尔辛基宣言的原则。本研究获得的道德当地的研究伦理委员会的批准广东省人民医院(号码:2016232)进行研究。从所有患者知情同意了。包括人口和分析的流程图如图1。2型糖尿病诊断的内分泌学家根据美国糖尿病协会的诊断标准18]。博士被证实的诊断和分类根据国际临床糖尿病视网膜病变严重程度量表(19]。玻璃体出血患者进行玻璃体切除术,增生性外层膜,包括或牵引性视网膜剥离。对照组包括病人没有DM但接受了特发性玻璃体切除术前膜,特发性黄斑孔,或裂孔性视网膜剥离。这项研究的主要终点是在玻璃体切除术手术一个月后随访。患者定期随访。排除标准如下:(1)与其他眼部病症的病人与炎症相关的(如年龄相关性黄斑变性、青光眼、和葡萄膜炎),(2)历史的眼部手术或创伤,(3)接受抗vegf治疗,和(4)历史的严重的全身性炎性疾病,原发性肾脏疾病,或任何其他肾脏疾病,是导致非DM其次。所有的受试者都接受一个完整的眼部检查和血压、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c),血清肌酐(sCr)、血尿素氮(BUN)测定,估计肾小球滤过率(eGFR)和尿白蛋白肌酐比值(UACR),测定手术前。表皮生长因子受体的价值计算基于慢性肾脏疾病流行病学合作(CKD-EPI)方程根据一位经验丰富的指导肾脏(利维20.])。所有患者接受术后玻璃体切除术按照标准化操作规程使用23-gauge套管针套管系统(爱尔康实验室公司沃斯堡,特克斯。美国)。约0.2 - -0.4毫升的玻璃体是吸进眼内灌注前无菌注射器。的玻璃样本离心机立即在4°C 2500 rpm 10分钟。上层清液吸气,随后储存在-80°C,直到进一步的分析。

Bio-Plex Pro™人类同形像面板,6-plex工具包(# 171 a3100m,控制64190954,Bio-Rad实验室,Inc .)、大力神、钙、美国)被用来测量6人类抗体的浓度,包括IgA, IgM, IgG1, IgG2 IgG3, IgG4。实验过程进行了根据制造商的指示。接下来,40μl(未稀释的玻璃体液样本用于反应,最后分析了荧光强度的免疫测定使用Bio-Plex™200系统(软件6.1版本,Bio-Plex经理Bio-Rad实验室)。

2.1。统计方法

使用IBM SPSS统计分析进行统计19.0版本(IBM SPSS统计;美国IBM公司,芝加哥,IL)。单向方差分析进行评估之间的性别差异博士组和对照组。正常数据证实了Shapiro-Wilk测试。独立的双尾学生的 - - - - - -测试进行比较其他临床变量和抗体的浓度在两组之间。Bonferroni-corrected意义阈值( )用于测量两组之间的抗体的多样性。皮尔森相关测试被用来分析临床变量之间的关联和抗体的浓度。此外,多元线性回归分析用于收益率方程计算抗体浓度根据临床变量在皮尔逊相关分析的统计学意义。样本大小的计算是由使用一个基于web的简单的力量/样本容量的计算,加州大学旧金山分校生物统计学:权力和样本大小项目,https://www.stat.ubc.ca/转入/统计/ ssize /, (Bonferroni调整后), ,和双边测试。小动物——一张长有 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。基线特征包括的科目

博士52例(10眼,玻璃体出血24与增生性外层膜的眼睛,和18眼睛牵引性视网膜剥离根据初步诊断)和52 non-DR科目(17眼与特发性前膜,与特发性黄斑孔17的眼睛,和18眼睛裂孔性视网膜脱离)招募了,其中包括63名男性和41岁女性。博士和对照组的临床特征提出了在桌子上1。光纤光栅的水平,糖化血红蛋白,可控硅,包子,UACR博士组显著增加(所有 ),而表皮生长因子受体明显减少( )与对照组相比。没有明显差异在其他临床特征包括年龄、性别、收缩压和舒张压之间的两组( 对于所有)。

3.2。B-Cell-Produced抗体的玻璃样品

B-cell-produced抗体的浓度博士和对照组之间如表所示2。所有的抗体的浓度在探测范围内,结果显示,IgA, IgM,博士总抗体组明显高于对照组Bonferroni调整后(所有 )。详细描述水平的IgA, IgM,两组间总抗体如图2。四个免疫球蛋白亚型显示Bonferroni调整后两组之间没有显著差异( 对于所有)。

3.3。相关性

有临床变量之间的相关性和B-cell-produced抗体水平低(表3)。IgA的浓度呈正相关,与光纤光栅(低相关性 , )与表皮生长因子受体(低相关和负相关 , )。IgM的浓度呈正相关,UACR(低相关性的 , )与表皮生长因子受体(低相关和负相关 , )。

3.4。计算方程玻璃体的抗体

多重线性回归分析使用临床变量(如糖尿病和博士期间,表皮生长因子受体,和UACR)进行预测IgA, IgM,和总抗体值,产生了三个方程:

, , ,和标准误差 。

, , ,和标准误差 。

, , ,和标准误差 。

这三个方程表明,IgA的浓度,IgM,博士和总抗体的玻璃体与表皮生长因子受体相关的患者,肾脏损害的标志。

4所示。讨论

系统性炎症与二型糖尿病的整个过程,它的发展和发展中发挥着重要作用激活B细胞导致博士DM近年来的发展(21- - - - - -23]。然而,B细胞介导的免疫反应已经很少报道患者[博士24]。本研究分析了B-cell-produced抗体包括IgA, IgM,四个免疫球蛋白亚型玻璃体的2型糖尿病患者博士定性和定量。IgA的浓度、IgM抗体总显著增加在博士组与对照组相比。此外,抗体水平之间有较低的负相关性(IgA, IgM)和表皮生长因子受体。这些结果可能会揭示小说的见解关于B细胞的作用的开发和进展。

在目前的研究中,IgA的浓度,IgM,和总抗体,但没有一个免疫球蛋白亚型,增加患者的玻璃体博士IgA的增加的原因可能是因为这种类型的抗体被吞噬细胞“幸免”的眼睛,因为它主要具有为Fc受体片段的其他抗体,如免疫球蛋白(24]。另一方面,IgM的增加可能是由于血液vessel-retinal组织屏障的破坏和博士是紧随其后的是大量的抗原和炎症细胞进入视网膜玻璃体引发急性炎症反应(25]。在未来,上述假设和抗体的功能角色博士的发病机理需要进一步调查。关于免疫球蛋白的浓度,DR患者和对照组之间无显著差异。这些发现是类似于先前的研究结果26]。综上所述,这些研究结果表明,免疫球蛋白g可能不会发病机制中发挥重要作用的博士,第一个搞笑,是合成在体液免疫反应的早期阶段IgM,充当一线防御。体液免疫系统切换到生产的免疫球蛋白作为随后的防御和免疫记忆负责。IgM水平的增加患者博士的研究表明,博士的发展可能与急性眼体液免疫反应有关。然而,类似的病人和对照组博士表明,免疫球蛋白水平长期免疫记忆的触发因素可能不发达与博士的眼睛。

的抗体水平之间相关性分析显示低负相关性(IgA, IgM)和表皮生长因子受体,肾脏损伤的标志。这些消极的相关性表明,肾脏损害患者往往是更严重的强B-cell-mediated免疫反应。此外,多元线性回归预测IgA的浓度产生了三个方程,IgM,和总根据eGFR抗体在玻璃体,暗示可能糖尿病视网膜病和肾病发展之间的联系(27- - - - - -29日]。眼部B-cell-produced抗体之间的关联机制和表皮生长因子受体2型糖尿病仍然是未知的。考虑到糖尿病肾病和糖尿病性视网膜病变是二型糖尿病微血管并发症,可能存在一个潜在的“共同通路”的潜在机制。一项研究表明,持续的高血糖和胰岛素抵抗可能导致血管炎症和内皮细胞的功能障碍的发展(30.]。当这个过程发生在肾脏,引起肾小球滤过功能障碍,导致糖尿病肾病(31日]。当类似的过程会影响眼睛,它导致了进步hematoocular屏障,出现故障(博士32]。如果微血管并发症发生,那么激活B细胞到达受损的网站通过血管壁和产生抗体。此外,循环激活B细胞产生的抗体也可以进行血流受损的网站。这些病理生理过程背后的机制可能是抗体浓度的增加2型糖尿病患者玻璃体的博士,但进一步的研究是必要的,找出确切的机制。此外,基于上述结果的相关性分析和多元线性回归分析,眼b细胞活化程度的患者显示相关博士的玻璃体某些血清指标的水平。这些研究结果提醒我们的眼科医生合作的必要性与内分泌学家和肾内科医生监测糖尿病的微血管损伤(33,34]。

本研究首次报道,当地的体液免疫反应参与博士在2型糖尿病的发病机理,表明B细胞可能发挥重要作用的发展和发展然而博士,有几个限制应该承认在当前的研究中。首先,研究样本量不大,不是随机选择可能导致偏见。虽然显著差异观察使用包括数量的样本,以人群为基础的随机研究需要大样本大小来验证本研究的结果。其次,它将会更有说服力,如果一组糖尿病患者没有博士补充说。然而,在病人招募,很少T2DM病人没有DR who满足入选标准是指我们的诊所。第三,血清样本中的抗体浓度没有分析。尽管先前的研究已经证明,等离子体抗体的水平增加(博士14,35),它会更好,如果我们的病人的血清抗体测定。

5。结论

这项研究显示,高水平的IgA, IgM,和总B细胞产生的抗体被发现玻璃体的2型糖尿病患者有低浓度之间的负相关性的IgA博士和IgM玻璃体和表皮生长因子受体,表明二型糖尿病视网膜病变、肾病之间潜在的关系。还需要进一步的调查来验证的功能角色B细胞在博士和其他糖尿病微血管并发症。

数据可用性

在当前的研究中使用的数据可从相应的作者以合理的要求。

伦理批准

本研究按照执行赫尔辛基宣言的原则和当地的研究伦理委员会批准广东省人民医院(号码:2016232)。

同意

从受试者知情同意了。

信息披露

发起人或资金组织没有参与这项研究的设计或行为。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

怡君胡Baoyi Liu,侨威吴co-first作者。

确认

作者感谢统计局,信息和统计信息中心、广东省人民医院、广东省医学科学院,协助统计分析。我们要感谢H.Y.和T.L.概念、设计、行政支持,重要的修改,和监督;他们被认为是cocorresponding作者。这项研究得到了国家自然科学基金的拨款81870663中国(红花Yu),授予202002030074从广州的科技项目(红花Yu),格兰特KJ012019087优秀青年人才培训项目的广东省人民医院(红花Yu),格兰特KJ012019457 GDPH科研基金的主要医疗人才和杰出的年轻学者在广东省(红花Yu),格兰特Y012018145人才引进基金的广东省人民医院(红花Yu),和2018年格兰特sk50106湖南省从技术创新的指导程序(胡怡君)。

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