不同提取方法对Furanosesquiterpenoids内容和抗菌活性没药myrrha树脂

文摘

的oleo-gum-resin没药myrrha是最著名的自然抗菌药物之一,主要是由于其furanosesquiterpenes。基于样本的验证方法提取的基质固相分散(MSPD)其次是高性能柱层析法(HPLC)测定应用于分析两个furanosesquiterpenoids,即2-methoxyfuranodiene (cm - 1)和2-acetoxyfuranodiene (CM-2),现有的c . myrrha。试验参数,提取潜在的控制进行了研究和优化。这些包括分散剂的性质,质量比样品的分散剂,洗脱溶剂的体积。比较抗菌研究使用的最低抑制浓度测定MSPD之间(MIC)方法,超声波,没药和索氏提取也进行了。使用最优MSPD参数(i) 15毫升的甲醇作为洗脱溶剂应用;(2)硅胶/样品质量2:1的比例;和(iii)分散吸着剂选为硅胶。监管技术检索从96.87%提高到100.54%,相对标准偏差(rsd)从1.24%降至4.45%。没药myrrha-MSPD (CM-MSPD)提取显示最高的抗菌活性对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌(156.25μ和312.5克/毫升μg / mL,分别为(156.25)和抗真菌的活动μg / mL)。收益率通过MSPD技术比收益率从其他提取技术(声波降解法和传统回流提取方法)以更少的消耗时间,样品和溶剂。的抗菌作用方式cm - 1, CM-2阐明了进行分子对接与细菌DNA促旋酶。这两个化合物与DNA促旋酶的关键残基。

1。介绍

的药用植物没药myrrha(家庭橄榄科)生产芳香oleo-gum-resin,称为没药。属没药包括超过150种树木和灌木主要分布在非洲、印度、也门和沙特阿拉伯的南部地区。(1]。数以百计的植物化学物质没药被确定和检查各种治疗活动以来,植物被发现(2]。没药的成分是30% - -60%胶(包括酸性多糖),树脂25% - -40%和3% - -8%挥发油(丁香酚、herbolene和许多furanosesquiterpenes) (3]。两个furanosesquiterpenoids 2-methoxyfuranodiene (CM1)和2-acetoxyfuranodiene (CM2),以前ethanolic提取物的分离和确定没药(4]。使用细胞毒性MTT试验,这两个化合物呈现出一种很有前途的活动对肝脏(HepG2)和乳腺癌癌细胞(MCF-7)集成电路₅₀值3.6和4.4μ米,分别5]。此外,变化的影响2-methoxyfuranodiene和2-acetoxyfuranodiene内容17商业样品的生物属性没药myrrha显示,furanosesquiterpenoids内容可变性与抗氧化活性最高(cm - 1和CM-2)样本收集从沙特阿拉伯4]。因此,简单,有效,快速的提取技术是必要的这两个主要的植物化学的成分(即。,2-methoxyfuranodiene 2-acetoxyfuranodiene)。巴克等人提出了矩阵固相分散(MSPD)创新作为一种新的技术使医疗机构从动物组织(6]。此后,MSPD技术得到了广泛的浓厚的兴趣,它在一个步骤进行提取和清洁,成功地分离了半固体,固体,和高粘性的样品(7]。MSPD最近作为替代传统提取技术将从治疗植物成分7- - - - - -11]。根据文献综述,没有可用的MSPD的审判是一种提取2-methoxyfuranodiene和2-acetoxyfuranodienec . myrrha目前我们知道的。张等人以及AlZain等的提取方法和采用(12,13]。

2。材料和方法

2.1。化学药品和试剂

2-Methoxyfuranodiene (CM1)和2-acetoxyfuranodiene (CM2)被选为标准。这些化合物的化学结构如图所示1。

2.2。植物材料

的oleo-gum-resinc . myrrha使用从Alothaim市场购买在利雅得,沙特阿拉伯。5个100克的样品磨胶树脂用于实验。

2.3。高效液相色谱仪器及色谱条件

量化的联盟2695分离模块配备2487双波长吸光度检测器(水域仪器,Inc .,米尔福德,妈,美国)使用。色谱分析是使用以下设备:内置四元泵;顶峰C18柱(5μ米、250×4.6毫米);四通道脱气器;和一个autosampler可编程温度(25°C)。流动相是由不同比例的0.5%的甲酸超纯水(A),和1:1乙腈和甲醇的混合物(B)使用1毫升/分钟的流量。优化的梯度程序如下:(我)约分钟B (10% - -30%)(2)16 - 17分钟B (30% - -40%)(3)17 - 20分钟B (40% - -60%)(iv)B - min (60% - -95%)(v)B - min (95% - -85%)(vi)第23 - 25分钟(B) 85% - -10%(七)25 - 30分钟(10%)

样品被PDVF 0.45过滤μm注射器过滤器,然后注入系统20μl .(254海里)的输出信号检测和处理使用授权软件,版本2。

2.4。MSPD提取方法

一个c . myrrha粉和硅胶(100和200毫克,resp)放在一起,混合5分钟获得均匀一致。此后,混合物转移到玻璃注射器(5毫升)底部预装棉花作为吸附剂层。防止污染和泄漏,第二块棉花是附加在上面的混合物。收集洗脱液是在容量瓶中执行填满15毫升的甲醇。一个过滤器(0.45μ米)是用于过滤获得提取随后通过高效液相色谱分析。

2.5。索氏提取法

几个世纪以来,索氏提取代表的标准方法中有效提取不同提取工艺(14,15]。约500毫克c . myrrha是装在一个顶针,然后放在索氏提取器。回流下,甲醇(90毫升)然后添加到蒸馏烧瓶加热6 h。100毫升容量瓶提取与CH轻轻地转填满₃哦。在高效液相色谱分析,提取的解决方案是透过一个0.45μm过滤器。

2.6。声波降解法提取方法

的c . myrrha声波降解法提取是通过加权250毫克的样品,放入20毫升容量瓶和提取30毫升的甲醇。此后,20分钟的混合物受到声波降解法。样品溶液过滤0.45μm过滤器在高效液相色谱分析。

3所示。生物研究

3.1。抗菌活性的测定

3.1.1。测试微生物

四个物种包括两个革兰氏阳性细菌(金黄色葡萄球菌并写明ATCC 25923;粪肠球菌和写明ATCC 29212)和两个革兰氏阴性(大肠杆菌并写明ATCC 25922;变形杆菌属寻常的写明ATCC 8427),以及一个白色念珠菌(写明ATCC 60193)真菌菌株用于这个调查。

3.1.2。最低抑制浓度

中等收入国家的methanolic提取物c . myrrha造成三个提取(CM-Sonication CM-Soxhlet, CM-MSPD)检测他们的抗菌活性被曼和马卡姆(16]。双重的连续稀释的提取(100μ信用证)是用移液器吸取96 -文化板块。提取物在所需的肉汤媒体获得2000 - 31.2毫克/毫升的浓度。暂停100μL和1106 CFU /毫升细菌和真菌接着说,在适当的温度孵化24 h和72 h,分别。最低浓度(MIC)显示没有检测到细菌或真菌的生长。5毫升的井没有显示出增长和被转移到琼脂板上。他们培养24小时或72 h最低杀菌(MBC / MFC) /抑菌浓度。庆大霉素和制霉菌素被用作积极控制。

3.2。分子对接

绑定和交互的cm - 1和CM-2细菌DNA促旋酶B是评估通过分子对接使用AutoDock4.2如前所述Al-Shabib et al。17]。2 d cm - 1,结构CM-2 ChemSketch被吸引。PyRx v0.8用于最小化能量的cm - 1, CM-2采用通用力场(终于)。最小化的cm - 1和CM-2转化成ready-to-dock PyRx v0.8 pdbqt格式。细菌DNA的三维坐标旋转酶B (PDB ID: 4 kfg)从RCSB下载数据库,进行分子对接前预处理。水分子和配体被移除,添加了氢原子,和债券订单在该结构中定义的DNA促旋酶b .新鲜的H-bonds网络的定义,和完整的系统的能量最小化使用风浪[18]。分子对接在执行22.5×17.5×20.7维网格框集中在30.2×18.5×2.3−0.375间距。拉马克学说的遗传算法结合索利斯和才子本地搜索的方法是利用分子对接,如前所述,拉巴尼et al。14]。cm - 1的初始位置和CM-2,方向,和扭力不加选择地。总共有10对接运行枚举。对于每个运行,最多2500000年能源条件计算。人口规模是设置为150,和转化步骤是固定在0.2。扭力和四元数设置为5。结果进行了分析,最后发现工作室也准备了图片(Accelrys)。对接亲和力(K_d)cm - 1和CM-2 DNA促旋酶B的激酶结构域确定对接能量( )使用下面的方程(15]: 在哪里R和T分别代表玻耳兹曼气体常数和温度。

4所示。结果与讨论

4.1。优化MSPD过程

MSPD是一种广泛使用和有效的提取技术,包括提取、破坏和净化功能在一个单一的步骤。因此,获取最大两furanosesquiterpene化合物的提取率c .没药,最方便的提取的因素从MSPD过程进行了优化。实验进行了规范要素,如散射吸附剂比样本,散射吸附剂,淋洗的体积可分解的最终确定最终精矿的提取率。

以下4.4.1。选择分散吸着剂

吸着剂分散作为绑定和粗糙的溶剂。它分解示例矩阵,扰乱其组件,提高溶剂之间的相互作用通过MSPD混合过程和示例。因此,MSPD的具体选择方法是完全依赖于吸附剂应用(19]。三个分散溶剂尝试在这个阶段,包括硅胶,使用C18和交联葡聚糖LH-20。图2说明了cm - 1, CM-2提取收益率c . myrrha从三个不同的获得分散溶剂。提取收益率cm - 1和CM-2当使用硅胶高于与C18提取的收益率。因此,硅胶被选为散射吸附剂指定的MSPD的方法,因为它提供了最好的提取生产的两个furanosesquiterpenes(即。,2-methoxyfuranodiene和2-acetoxyfuranodiene)和相对便宜的购买。

4.1.2。样品吸着剂质量比的影响

平衡散射吸附剂比样本可以建立测试之间的接触区和散射吸着剂,可以改善考试散射吸附的吸附。正因为如此,四个不同sample-to-silica凝胶质量比率进行了研究,从0.5:1 - 1:3。这些结果显示在图中3。1:2 sample-to-silica凝胶质量比导致2 furanosesquiterpenes提取率最高。然而,进一步提高质量比1:3导致这两个化合物的提取产量的减少。因此,在这项工作中,1:2被选为最佳质量比。

4.1.3。洗脱溶剂体积的影响

当执行一个MSPD方法时,洗脱体积是要考虑的一个重要因素。萃取过程进行了使用四种不同的有机溶剂甲醇(5、10、15和20毫升)。结果(图4)表明,收益率的cm - 1, CM-2从5毫升甲醇量增加而上升到15毫升;收益率是固定后最终增加到20毫升。因此,本文选取15毫升,以确保完整的化合物的扩散吸附解吸装置至少溶剂消耗。

4.2。MSPD-HPLC分析

高效液相色谱色谱的联合标准的解决方案c . myrrha提取是描绘在图5。发达的方法验证建立的事实,其性能特性是符合期望的性能分析c . myrrha样品化合物。验证的方法进行基于设定的准则国际协调会议(20.]。以下验证特性进行评估:线性,定量分析物的限制,可重复性的结果(精度),和恢复。

建筑外部校准曲线线性度进行评判,每个复合使用工作标准解决方案包含两个化合物。校准曲线,研究了基于线性相关性分析物的峰面积(y设在)及其浓度(μg / mL), 6个不同浓度水平(0.5,1.0,2.0,5.0,12.00,和25.00μg / mL)。每个浓度的混合标准溶液注入一式三份,和回归参数计算。相关的估计系数(r²)的校准曲线比0.996,从而证明提出的线性量化方法(表1)。

灵敏度的计算方法进行检测的局限性(LOD)和量化(定量限)的两个分析物。LOD和定量限计算基于校准曲线和计算根据示例(1)和(2):(1)LOD = 3.3σ/年代(2)定量限= 10σ/年代在哪里σ响应的标准偏差和吗年代校准曲线的斜率。

发达的LOD方法是0.60和0.62μ分别为cm - 1, g / mL CM-2定量限和相应的值分别为1.82和1.87μ克/毫升(表1)。开发方法的精度决定基于两个参数:重复性和中间结果的精度。重复性的评估是基于复制的结果分析(n= 3)同一天内进行(盘中)。中间精度评估是根据连续分析的结果(n= 3)进行了超过三天(interday)。重复性和中间精度的方法表示为相对标准偏差(RSD)。%相对标准偏差的重复性测试范围0.28% - -3.91%为cm - 1 CM-2为-1.05%和0.29%,分别。相应的中间精度范围是0.36% - -4.00%和0.45% - -1.15%(表2)。提供令人满意的试验结果总体%相对标准偏差值内部和interday测试都不到4.00%,这表明发达的方法是按照要求规范。

开发方法的精度评估的复苏实验;从获得的峰面积c . myrrha以前强化与已知数量的标准样品分析物(cm - 1和CM-2)比较空白的“unfortified”样本在三种不同浓度水平(高、中,低)。复苏百分比计算基于下列方程:(确定数量×原始总额)/添加数量×100%。表3显示意味着复苏的范围内分析了化合物的95.13% -100.39%,RSD小于1.41%,表明发达足够精确的量化方法c . myrrha化合物。

4.3。抗菌药物研究

产生的抗菌效果c . myrrha三种提取方法(CM-Sonication CM-Soxhlet, CM-MSPD)麦克风和MBC / MFC显示在表中4。CM-MSPD比CM-Sonication和CM-Soxhlet提取物表现出更强的抗菌活性;最敏感的革兰氏阳性菌株金黄色葡萄球菌和粪肠球菌(粪大肠;麦克风:156.25毫克/毫升)。MBC或MFC值大约两倍高于中等收入国家(表4)。这可能是为了应对成分含量高的植物化学成分的存在,包括2-methoxyfuranodiene和2-acetoxyfuranodiene。

4.4。比较MSPD索格利特,声波降解法程序

表5显示了MSPD的比较、索格利特和声波降解法提取方法。结果表明,MSPD显示最大两个furanosesquiterpenes化合物的萃取率(38.7毫克/克)和索格利特(33.75毫克/克)和提取方法(29.3毫克/克)(图6)。MSPD方法也只需要0.1克样品,15毫升溶剂,提取目标furanosesquiterpenes 15分钟c . myrrha。样本,这表明,溶剂和时间消耗都减少了MSPD方法与传统提取方法相比,如索格利特声波降解法等新技术。更重要的是,MSPD的提取不需要加热。最终,MSPD方法作为工具标准工具是有益的。实现该方法只需要一个负担得起的墨盒和迫击炮,可以由任何化学实验室13]。这些好处表明MSPD的提取c .没药应该是一个适当的方法提取目标furanosesquiterpenes。

4.5。分子对接分析

细菌的DNA促旋酶II型拓扑异构酶,可以绑定和引入负超螺旋DNA复制的ATP水解。发现在所有细菌和真核生物高缺席,因此作为一个潜在的目标设计抗菌药物。它包含两个子单元,A和B,这联系在一起形成A2B2复杂的酶活性形式。DNA促旋酶的亚基结合DNA和港口活性部位为解理酪氨酸残基,而B亚基的DNA促旋酶港口一个ATP水解发生的激酶结构域。在这项研究中,furanosesquiterpenes的能力(cm - 1和CM-2)结合DNA促旋酶用分子对接的激酶结构域是评估。cm - 1和CM-2 DNA促旋酶B的对接导致多个低能的姿势。绑定的姿势与最低能量进一步追究详细protein-ligand交互(图7和表6)。很明显,cm - 1和CM-2绑定到ATP结合位点的DNA促旋酶b . cm - 1 2静电相互作用形成Arg76: NH1 Glu50: OE1;和7疏水相互作用Arg76、Gly77 Ile78, Pro79, Ile90。其他一些残留物形成范德瓦耳斯相互作用与cm - 1 Asn76, Gly75, Asp73, Gly164, Thr165,和Val167。对接的能量和相应的DNA促旋酶的亲和力的cm - 1 B被估计为−7.5千卡摩尔⁻¹和3.17×10⁵米⁻¹,分别。相反,CM-2与DNA促旋酶B通过传统的氢键Arg76: HH12,和6与Ile78疏水相互作用,Ile90, Val167。Ala47,残留Asn46 Glu50、Asp73 Gly77, Pro79, Thr165参与的形成与CM-2范德瓦耳斯相互作用。

的对接能量CM-2-DNA促旋酶B交互确定−7.9千卡⁻¹的亲和力,而DNA促旋酶B CM-2为6.23×105米⁻¹。同源配体之间的比较分析,对接(控制)和执行提出了x射线晶体结构与DNA促旋酶B(图7和表5)。控制配体2传统形成氢键Asp73: OD1和3与Asn46碳氢键:OD1, Val71:啊,和Gly77: O .此外,卤素债券之间的F离子和Asn46: CG也观察到控制配体和DNA之间进一步促旋酶B,控制ligand-DNA复合促旋酶B被7疏水相互作用与Asn46稳定:C, O-Ala47: N, Gly77: C, O-Ile78: N, Ile78 Thr165: CG2。一些其他残留物,如Val43 Ala47 Glu50, Gly75, Arg76, Pro79, Ile90, Val120, Arg136, Val120评估。对接能源和控制配体DNA促旋酶B的亲和力测定−9.3千卡米⁻¹和9.3×106米⁻¹,分别。

很明显,cm - 1, CM-2被绑定到一个DNA促旋酶B地方控制配体结合。氨基酸驻留常被cm - 1占领和控制配体是Glu50, Asp73, Gly75, Arg76, Gly77, Ile78, Pro79, Ile90, Thr165, Val167,而氨基酸残基常被CM-2占领和控制配体是Ala47, Glu50, Asp73, Arg76, Gly77, Ile78, Pro79, Ile90, Val120 Thr165, Val167。先前的研究已经报道,芦丁也占据相同的结合位点DNA通过Asn46促旋酶B和互动,Ala47, Asp49, Glu50, Ala53, Asp73, Gly75, Arg76, Gly77, Ile78, Pro79, Ile90, Val118, Gly119, Val120, Arg136, Thr165 [21]。在DNA促旋酶的晶体结构,Asp73形成氢键的腺苷酸氨基AMP和突变Asp73 Ala73或Asn73完全废除了atp酶和DNA成为超螺旋活动(22]。同样,Gly77接近附近的腺嘌呤环(∼从c - 2碳和5.1∼4.3 n - 3)。因此,任何突变Gly77戏剧性影响ATP结合概率,从而导致ATP水解活动减少。另一个重要的残渣,Ile78,谎言4.5∼高于腺嘌呤环和发挥了重要作用,及其产生的水解ATP绑定。Thr165是一个关键的保护氨基酸残基在所有DNA促旋酶B亚单位和II型拓扑异构酶。它也起着至关重要的作用在ATP的绑定(22]。

5。结论

MSPD成功利用,其次是高效液相色谱法的提取和检测两个furanosesquiterpenesc . myrrha为了获得最大的收益。调整要素的属性组成的溶剂体积,吸附剂分散,分散吸附剂比样本furanosesquiterpenes MSPD提取能力的主要评估和优化。整个认证然后确定高效液相色谱法(HPLC),包括量化的两个furanosesquiterpene化合物,线性度,灵敏度限制,精度,及复苏。此外,提取获得的收益率产生的MSPD技术比较与传统超声和索格利特技术。

数据可用性

这些发现是相关的所有数据包括在手稿中。

的利益冲突

作者宣称,他们没有任何的利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢研究者支持项目(没有。RSP-2021/132),沙特国王大学,利雅得,沙特阿拉伯。

引用

1. k . Başer b . Demirci a Dekebo, e . Dagne”一些Boswellia spp。精油,没药和愈伤草,”《香料与香味杂志》上发表18卷,第156 - 153页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. s . r . Ahamad a . r . Al-Ghadeer r·阿里·w·Qamar和s . Aljarboa”分析没药树脂的无机和有机成分,用气和icp:强调药用资产,”沙特医药杂志,25卷,不。5,788 - 794年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. 答:舍瓦,药用植物的百科全书DK出版,英国伦敦,1996年。
4. a . s . Alqahtani o·m·诺曼·m·t·拉赫曼et al .,“furanosesquiterpenoids内容变化的影响商业样品没药的生物属性,“沙特医药杂志,27卷,不。7,981 - 989年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. a . s . Alqahtani f . a . Nasr o·m·诺曼et al .,“细胞毒性评价和抗血管生成的影响两个furano-sesquiterpenoids没药没药树脂,”分子,25卷,不。6,1318年,页2020。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. s . a .巴克a。r .长,c . r .短,“隔离药物残留的组织通过固相扩散,”杂志的色谱,卷475,不。2、353 - 361年,1989页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. y洪教授和陈.“槲皮素的提取草Lysimachiae分子imprinted-matrix固相分散,”色谱法B杂志卷。941年,38-44,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. 刘问:张先生,香港,j . et al .,“Multiwalled-carbon-nanotubes-based基质固相分散萃取结合高效液相色谱法测定厚朴和厚朴酚和自由基清除的皮层,“分离科学杂志》,37卷,不。11日,第1336 - 1330页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. b . Barfi a . Asghari m . Rajabi a . Barfi i Saeidi,“简化小型ultrasound-assisted基质固相分散萃取和高效液相色谱测定七类黄酮在柑橘类果汁和人类流体样品:hesperetin和柚苷配基生物标记,”杂志的色谱卷。1311年,30 - 40,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. y z . Wang r .太阳,小王et al .,“决心蜂胶原料的酚酸和类黄酮silica-supported离子液态基质固相分散萃取高效液相chromatography-diode阵列检测”色谱法B杂志卷,969年,第212 - 205页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. 问:张、d . Cai和j .刘”基质固相分散萃取加上HPLC-diode阵列检测方法分析根的倍半萜烯内酯光学披巾C.B.Clarke,”色谱法B杂志,卷879,不。26日,第2814 - 2809页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 问:张w·朱h .关et al .,“发展基质固相分散萃取结合高效液相色谱法测定五味子对五木酚素,”色谱法B杂志卷,1011年,第157 - 151页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. m . n . AlZain r . n . Herqash a . n . Almoqbil et al .,“快速和敏感的方法提取plicosepalus金合欢主要多酚类化合物的测定用高效液相色谱法进行验证,”分析方法在化学杂志》上卷,2020篇文章ID 9598606, 7页,2020。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 联合国举行的美国Tabrez, b .美国伊斯兰教et al .,“秋水仙碱绑定的特征与正常和糖化白蛋白:体外和分子对接分析,“生物分子结构和动力学杂志》上,36卷,不。13日,3453 - 3462年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. m·t·拉赫曼·h·沙姆西基地,a .汗,“洞察imipenem人类血清白蛋白的绑定机制光谱和计算方法,”分子制药学,11卷,不。6,1785 - 1797年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. c·m·曼和j·l·马卡姆”的一种新方法确定的最低抑制浓度的精油,”应用微生物学杂志,卷84,不。4、538 - 544年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. n . a . Al-Shabib j·m·汗a Malik et al .,“分子洞察绑定的行为多酚(芦丁)β乳球蛋白:光谱,分子对接和MD模拟研究中,“《分子液体卷,269年,第520 - 511页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. m . f . AlAjmi m·t·拉赫曼a·侯赛因和通用汽车,而“Pharmacoinformatics方法识别polo-like激酶抑制剂从自然资源作为抗癌药物,”国际期刊的生物大分子卷,116年,第181 - 173页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. s . a .巴克“基质固相分散(MSPD)”生物化学和生物物理方法杂志》上,卷70,不。2、151 - 162年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. 我,Q2 (R1):验证分析方法:文本和方法论协调国际会议上,瑞士日内瓦,2005年。
21. m . f . Alajmi·阿拉姆·m·t·拉赫曼et al .,“种间抗癌和抗菌活动GenusSolanumand估计验证UPLC-PDA芦丁的方法,”以证据为基础的补充和替代医学ID 6040815条,卷。2018年,13页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. t·h·c·h·格罗斯,j·d·帕森斯格罗斯曼et al .,”所需的大肠杆菌DNA促旋酶活性位点残基在耦合ATP水解DNA成为超螺旋和氨基酸替换导致新生霉素抵抗,“抗菌药物和化疗卷,47号3、1037 - 1046年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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