复合特定的喜树碱的提取Nothapodytes nimmoniana和胡椒碱Piper初步使用加速溶剂萃取器

文摘

不同的温度的影响与恒压两种化学性质不同的生物碱的溶剂对萃取效率进行了研究。喜树碱(CPT)干的Nothapodytes nimmoniana(Grah)。Mabb。和胡椒碱的果实Piper初步l .提取使用加速溶剂萃取(ASE)。三个周期的特定样本提取细胞在一个给定的温度保证完整的提取。CPT和胡椒碱坚决和量化,使用一个简单而有效的UFLC-PDA(245和343海里)方法。温度提高效率的提取收益率更高数量的CPT,而温度对胡椒碱的产量的影响小。CPT是实现最高产量和胡椒碱的。因此,研究确定复合特定的CPT的提取n nimmoniana和胡椒碱p .初步使用ASE方法。目前的研究表明这种方法的使用简单、快速、准确的提取感兴趣的化合物。

1。介绍

喜树碱(CPT)一个已知的有效的抗癌活性化合物和胡椒碱经济重要的高价值的生物碱作为标记化合物(图1(一))。喜树碱原本孤立的从中国的树Camptotheca acuminata(紫树科)1]。它也报告Nothapodytes nimmoniana和其他一些物种属于被子植物分类的不相关的订单(2- - - - - -4]。Nothapodytes nimmoniana占据了重要的地位在植物由于CPT抗癌药物。巨大的全球对该生物碱的需求近年来一直受到偶然从野生的剥削。超过20%的人口下降n nimmoniana从西高止山脉区域导致分类”脆弱的“类别(5]。

胡椒碱,一种重要的生物碱,有报导说,许多野生物种和驯化栽培的水果Piper初步l .(图1 (b))[6- - - - - -8]。Piper初步也被称为“香料之王”(黑胡椒)被认为是一个重要的农业商品商务部(9]。

识别和量化的代谢物的分析技术取决于它的提取。提取可能是指从一个复杂的矩阵分析物的分离。提取效率大大地影响因素如:溶剂组成、溶剂固比、温度、时间和提取的方法(10- - - - - -12]。至今为止的数量提取方法隐含了提取CPT (13,14和胡椒碱15- - - - - -17)通过使用索格利特,连续震动,声波降解法、微波辅助提取、和许多更多。然而,大多数的方法消耗时间和溶剂和很少完全是有效的提取分析物或化合物的利益。

深入学习和理解实验验证和商业应用的优化是必不可少的过程。加速溶剂萃取(ASE)是一个新技术应用于从各种样品中提取有机化合物优化溶剂条件和减少提取时间。它加速提升温度高压提取工艺的溶剂。因此,重要的植物代谢产物及其提取方法的优化的需要。因此目前的工作意味着优化提取方法使用ASE和研究温度对萃取效率的影响的CPT和胡椒碱n nimmoniana和p .初步,分别。

2。材料和方法

2.1。化学试剂和标准

标准喜树碱和胡椒碱(高效液相色谱级)获得Sigma-Aldrich(印度)。高效液相色谱级乙腈、甲醇、乙醇、冰醋酸、水被用于分析。

2.2。收集和准备的植物材料

茎的部分n nimmoniana和水果的p .初步(N贝尔拉姆收集从代号15.6383°E 074.2784°)和北Canara (N 14.4721°E 074.5131°),卡纳塔克邦,印度西高止山脉地区。植物标本室的植物枝是验证和沉积地区医疗研究中心(RMRC),印度医学研究理事会(),Belgaum,卡纳塔克邦,印度、备查(凭证号码-n nimmoniana1313年:RMRCp .初步:RMRC 1213)。植物材料干粉末在室温和接地。粉状物料筛分是20μ不锈钢筛和进一步分析。

2.3。加速溶剂萃取(ASE)样品制备

加速溶剂萃取系统中提取进行了ASE 350 (Dionex公司,桑尼维尔,美国)配备一个溶剂控制器单元。5毫升容量的细胞用于研究。两个过滤器的底部被纤维素样细胞填充。样品细胞充满了1克干干粉末的n nimmoniana和0.1 g干水果粉p .初步分别是用于提取。三勺(~ 2.5 g)的ASE预科硅藻土(Dinoex公司,加州桑尼维尔)在细胞与植物混合粉和加载托盘。甲醇和乙醇被用于提取CPT和胡椒碱,分别。萃取溶剂的选择是基于先前的报告(13- - - - - -15]。保证完整的提取,一个特定的样品室在一个给定的温度下提取3周期。

2.4。量化的喜树碱和胡椒碱使用逆转Phase-Ultraflow液相色谱(RP-UFLC)分析

2.4.1。仪表

逆转phase-ultraflow液相色谱(RP-UFLC)分析了日本岛津公司色谱系统(型号LC-20AD)组成的一个四元泵、手动喷射器,脱气器(DGU-20A5)和双紫外吸光度二极管阵列检测器SPD-M20A。内置的LC-Solution用于数据处理软件系统。色谱分离是实现Hibar RP-select B列(LiChrospher 60, 5μ米,毫米)CPT和RP-18e LiChrospher 100 5μ米,胡椒碱的毫米)。

2.4.2。色谱条件

组成的流动相乙腈:水(40:60)CPT和甲醇:水(70:30)胡椒碱用于分离与注射量20μl . 1.0和1.4毫升min的色谱条件⁻¹流量在254和343海里为CPT和胡椒碱,分别。保留时间是8分钟观察CPT,胡椒碱10分钟。

2.4.3。计算,校准曲线,线性

喜树碱是准确称重和溶解在几滴(50μL) DMSO溶液的变暖,体积是由甲醇生产标准储备溶液毫升(0.5毫克⁻¹)。同样,1毫克毫升⁻¹原液的胡椒碱甲醇制备。股票的解决方案(CPT)和胡椒碱与各自的准备和连续稀释溶剂获得工作浓度绘制校准曲线。七种不同浓度水平的CPT(0.001、0.01、10、20、40、80年和100年μ克毫升⁻¹胡椒碱)和9(0.01、1、3、10、50、100、200、400年和600年μ克毫升⁻¹)被用于这项研究。所有的解决方案和分析物都存储在microfuge管在4°C到进一步使用。

2.4.4。系统适用性、LOD和定量限

三个复制的系统适用性测试评估标准CPT和胡椒碱在特定浓度40 - 50μ克毫升⁻¹,分别。峰地区被用来评估分析方法的重复性和分辨率和尾矿的因素。检测极限(LOD),限制信号的量化(定量限)测定:噪声的方法。信号:噪音比率为3.3和10是用于估计LOD和定量限,分别。

3所示。结果和讨论

本研究表明使用改进的,简单、快速、准确的提取方法通过使用ASE。工作进行了研究不同的温度的影响在恒压的确定两个不同但药物化学和商业上重要的化合物(CPT和胡椒碱)。这两个化合物进行了分析反向阶段列上权力平等主义的制度下实验部分中所述。

定量测定CPT和胡椒碱通过使用RP-UFLC方法和结果表示为g 100克⁻¹干重的基础上。校准曲线建立了反对他们的面积曲线获得回归方程系数的测定()0.980(数字2(一个)和2 (b))。这是用来估计CPT物种和胡椒碱含量。减少杂质矩阵和量化标准浓度的范围内,1:9稀释的提取n nimmoniana。表1代表条件ASE UFLC分析的方法和细节。最低浓度分别为0.001 (CPT)和0.01μ克毫升⁻¹(胡椒碱)校准。相对标准偏差(RSD)值分析物被发现不到2%表明本研究中使用的方法是高精度和可再生的。方法的验证是由已知数量的激增CPT和胡椒碱标准相同体积的样品提取获得恢复95 - 100%的范围内。

配置文件的保留时间最小值为CPT和最小的胡椒碱标准和样本作为最终输出(数据获得的2 (c)- - - - - -2 (f))。确保清晰,尖锐的峰值的标准化合物纯度(98%)和也降低了萃取溶剂和流动相之间的兼容性问题分析。的自动定量色谱为3周期每个生成n nimmoniana和p .初步提取物在不同的温度数据2 (e),2 (f),3(一个),3 (b))。所有样本检测以上LOD和量化定量限(表1CPT)和胡椒碱。

不断增加的内容CPT后逐步增加(10°C)温度高达80°C观察周期1,而连续周期CPT的内容(图2和图3显示下降3(一个))。CPT的含量最高n nimmoniana茎中提取周期1中观察到在海拔最高温度为80°C(数字2 (e)和3(一个))。很好理解,温度是影响萃取率的一个重要因素。因此,萃取率和温度之间的关系是很重要的在设计提取方法的植物性材料(13]。总CPT内容和周期1,2,3为0.1875 g 100 g⁻¹干重。CPT在这项研究中被发现的收益率相对高于先前的报告(3,18]。相反,一分钟的变化观察胡椒碱含量的水果p .初步在所有研究的周期使用ASE(图3 (b))。周期1每一步的温度(40、50和60°C)产生平均的胡椒碱量最高(g 100克⁻¹干重)相比,周期2 (g 100克⁻¹3(干重)和周期g 100克⁻¹干重),表明微小的温度和压力对胡椒碱的提取率的影响。胡椒碱总含量(周期1 + 2 + 3)在我们发现发现在早些时候报道的范围(19,20.]。

每个提取阶段完成所需的时间是6.5分钟包括清洗、热,和静态时间。ASE被证明是更好的选择在研究从植物性化合物的提取与温度有关的矩阵。temperature-based拔牙不仅减少了时间也很简单,快速,准确。少量的提取方法被发现有效的植物原料(0.1 g干果粉p .初步),标志着其效用在标准化和中药质量控制。此外,使用的参数,如压力、时间、溶剂的选择更合适的萃取的植物材料。本研究还提出了复合特定的提取利用ASE及其适用性获得最佳产量的复合利息减少溶剂消耗和时间。

4所示。结论

研究结果最终确认化合物提取利用ASE从复杂植物标准化矩阵是一个合适的工具或草药产品的质量控制。研究表明简单、快速、准确的提取方法提取的化合物从不同的植物材料。显著变化的方法提取的化合物被注意到。因此,这些新的改进和自动化提取方法为采用补充实验。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢印度医学研究理事会(),新德里,印度为支持。SRP和VU感谢ICMR提供赠款在开展研究。

引用

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