¹手^13.C细胞毒性3的NMR分配3S.-1,2,3,4-四氢 -β- 来自叶子的碳碱-3-羧酸菊苣

抽象的

氨基酸，3S.1,2,3,4-四氢β-3-羧酸从叶子中排序菊苣。完全分配其¹手^13.C NMR光谱数据也是基于广泛的1D和2D NMR实验的第一次进行。第一次评价该分离的化合物对HCT-8和HepG2人癌细胞系的细胞毒性，并发现中等活动。

1.介绍

菊苣L.是综合系家族的流行蔬菜，在世界各地广泛种植和消费。其受欢迎程度也归因于健康的性质，主要是由于抗氧化活性的供应[1那2]。然而，对这种植物的植物化学调查现在非常罕见，据我们所知，只有几篇论文报告了一些化合物，其中包括五个由我们的组织[3.]。正在进行的研究旨在确认生物活性化合物从该受欢迎的蔬菜，以及当时的和已知的氨基酸，3S.1,2,3,4-四氢β咔啉-3-羧酸（1），分离为第一次。通过文献调查的方式，可以了解到的NMR数据的完整任务1现在非常不足，由于溶解度差，没有实际导电1在最普遍的溶剂和引起文献的引用混乱的一个明显的状态[4.那5.]。在本文中，我们描述的完整的分配¹手^13.C NMR光谱数据1基于测定优化溶剂和广泛的1D和2D NMR实验。专注于化合物细胞毒性的调查1针对HCT-8和HepG2人类癌细胞系显示1抑制由在受试者活力适度减少所述细胞的生长。

2.结果和讨论

化合物1被隔离为无定形浅黄色粉末（meoh / h₂o）。其正离子ESI-MS光谱显示在M / Z 217.1 [M + H]的准分子离子峰⁺和239.1 [M + NA]⁺的，其分子式成立为C_12.H_12.N₂O.₂通过在m以正模式HRESI-MS实验的准分子离子峰/ Z 217.0967 [M + H]⁺。IR光谱显示出强烈吸收3284,3019,1642,1598,1452,1409和740厘米^-1，表明1,2-二取代的苯部分和不稳定氢的存在。据初步鉴定为3S.1,2,3,4-四氢β- 通过比较碳碱-3-羧酸¹在DMSO-d获得的1 H NMR光谱数据_6.与文献值[4.那5.[但有一些明显的错误或不一致是明显的，包括耦合常数和数据所有权（表1）。而获得^13.DMSO-D NMR溶剂中的C NMR光谱_6.是非常困难的，由于上述差的溶解性，化合物1然后记录内的d一维和二维NMR谱₂o + f的f_3.CCOOD，这被证明是良好的溶剂1。这¹1 H NMR光谱数据还清楚地表明1,2-二取代的苯基部分的存在，具有四个诊断信号从芳香族ABCD自旋系统在谐振7.13（1H，吨，.6 Hz，H-6），7.22（1H，T， Hz, H-7), 7.43 (1H, d, Hz, H-8), and 7.53 (1H, d, Hz, H-5), which correlated to the aromatic carbon signals at在HSQC光谱中，111.9（C-8），111.9（C-8），111.9（C-8）和118.2（C-5）。另外，五个良好的解决和特征信号4.38（1H，d，。6. Hz, H-1_一种），4.54（1H，d， Hz, H-1_B.），4.27（1小时，DD，，5.6 Hz，H-3），3.13（1H，DD，那16.。4. Hz, H-4_一种）和3.38（1H，DD，那16.。4. Hz, H-4_B.）也审查了¹H NMR谱，可根据其耦合常数和借助方便地¹H，¹H-Cozy谱，分配给一个来自孤立的亚甲基和一个ABX系统的AB旋转系统，从一个亚甲基和一个甲甲基均相关联杂交键。这三个官能团明显脱屏风，与它们相应的碳信号相关联在HSQC谱中，40.5（C-1），55.0（C-3）和21.7（C-4）分别。简单地，这三组被安排了杂交的碳原子或考虑到当氮原子¹手^13.C NMR化学位移和检查^13.C和DEPT NMR数据，其具有两种脂族甲基，一种脂族甲基，四个杂交次甲基，五被分类的杂交的第四季碳（表1）。除了上述三种脂肪族碳，上述NMR数据与苯部分，四氢乙烯和羰基相容。长期¹H，^13.从C-相关7.53至104.9，125.6，136.7，122.9和从7.43到122.9,120.0和125.6，来自7.22到111.9,136.7和118.2，来自7.13118.2,125.6,122.9和111.9，来自4.38和4.54至125.4,104.9和55.0，来自3.13和3.20到104.9,55.0,171.3和125.6 / 125.4，来自4.27到171.3,40.5,21.7和104.9成立了宪法公式1如图所示1。表中列出了NMR数据的完整分配1。

对化合物的评估1对于对两种人类癌细胞系的细胞毒性作用，使用苏尔磺胺胺B（SRB）测定测量细胞生长。与阴性对照相比，三种重复的方法的结果表达为活力的百分比。化合物1表现出中等细胞毒性对在评价HCT-8和HepG2细胞系，用HepG2细胞存活力和HCT-8细胞为80.42％和治疗48小时后80.22％，和76.14％和71.48％，72小时后，分别当使用的140的浓度 μ.g / ml。其他时间点的天动力相对较低。

3.实验

3.1。一般实验方法

在Nicolet 5700光谱仪上获得IR光谱。1D和2D NMR光谱记录在汞-400或汞-300 NMR光谱仪上。化学班次（）用四甲基硅烷（TMS）作为内标以ppm给出（0.00）。ESI-MS和HRESI-MS在Agilent 1100系列LC-MSD-陷阱-SL光谱仪测量。RP-18 (YMC-GEL, ODS-A, 12 nm, S-50 mm; YMC Co., Kyoto, Japan) were used for column chromatography. Solvents were of analytical grade and were purchased from Beijing Chemical Company (Beijing, China).

3.2。植物材料

菊苣从北京新发农副产品批发市场购买于2009年7月和副教授马琳（材料药物研究所，中国医学科学院北京协和医学院）认证。一个凭证标本保藏在新药安全评价中心，药物研究所，北京协和医学院中国医学科学院，中国。

3.3。提取分离

风干和粉碎C.苣（5.8kg）在回流条件下用95％EtOH（80L，2小时; 70L，1小时68升，1小时）在回流条件下提取三次。将合并的EtOH萃取物真空蒸发，得到深绿色的残余物（1233g，粗籽油提取物），其悬浮在80％水溶液中。Etoh。将所得悬浮液用石油醚（60-90℃，2L，1.5L，1.5L和1.5L）萃取。蒸发aq。真空中的层也产生深绿色残留物（940g，80％EtOH提取物）。将残余物重新溶解在水中，随后详细地将EtOAc分配在液体漏斗中。将其余的水溶性部分装载在填充厚厚的HP-20的柱上并用H洗脱₂O，60％EtOH和95％EtOH。在真空中蒸发60％EtOH的洗脱液，得到黑残留物（40g）。

60％乙醇级分在溶剂再溶解-BuOH并用AQ洗涤。5％Nahco._3.然后H.₂O，分别。蒸发减压下的-BuOH得到5.5g棕绿色残留物，其提交给ODS-A用MeOH-H洗脱的柱₂o降低极性（40％-100％），得到化合物1（108毫克）作为浅黄色粉末。

3.3.1。 3S.-1,2,3,4-四氢 -β-Carboline-3-羧酸（1）

淡黄色粉末。IR（KBR）（厘米^-1）：3284,3019,2849,1642,1598,1452,1409,1271,1221和740;¹手^13.C NMR光谱数据列于表1。ESI-MS（正模式）m / Z：217.1 [M + H]⁺和239.1 [M + NA]⁺;Hresi-MS（正模式）M / Z：217.0967 [M + H]⁺（计算c_12.H_12.N₂O.₂，217.0972）。

3.4。细胞毒性测定

HCT-8和HepG2细胞在含0.22％碳酸氢钠，10％胎牛血清（FBS），100U / mL青霉素的RPMI1640培养基中培养，和100 μ.克/ mL链霉素。将细胞在5％CO孵育₂- 37°C。化合物1was dissolved in phosphate-buffered saline (PBS) at a concentration of 1.4 mg/mL and was diluted to the required concentration with RPMI1640 medium immediately before use.

细胞存活率通过使用磺酰罗丹明B（SRB）测定法测量。简言之，将细胞在96孔板中接种（CE.lls/well) and routinely cultured for 24 h. Compound1被加入串联浓度（14 μ.g / ml到140 μ.G / ml），单独加入PBS以控制孔作为阴性对照，并继续孵育另外48小时。在使用TCA（0.4％M / V）固定板后，将SrB（1mg / ml）加入到每个孔中。孵育20分钟后，每个孔用酸（1％v / v）洗涤三次。然后将井分别添加到TRIS（100mmol / L）中。在515nm处，在微孔板分光光度计上记录每个孔的吸光度。

致谢

作者感谢副教授L. MA进行样品认证。作者还衷心感谢本发明医学研究所的生物活性物质和生物活性物质的功能实验室，用于为研究提供细胞和设备。

参考

1. M. S. Dupont，Z. Mondin，G. Williamson和K. R.价格，“品种，加工和储存对类黄酮糖苷含量和生菜组成”的效果，“农业和食品化学杂志，卷。48，没有。9，pp。3957-3964,2000。查看在：出版商网站|谷歌学术
2. R.Llorach，A.Martínez-sánchez，F.A.Tomás-Barberán，M.I.Gil，以及F.Ferreres，“五种莴苣品种和Escarole的多酚和抗氧化特性”的表征，“食品化学，卷。108，pp。1028-1038，2008。查看在：出版商网站|谷歌学术
3. C. J. Chen，A. J. Deng，C. Liu，R. Shi，H. L. Qin，A. P. Wang，“Hepatopotective活性菊苣L.提取物及其化学成分，”分子，卷。16，第9049-9066，2011。查看在：出版商网站|谷歌学术
4. J.P.Peng，Y。Q. Qiao，X. S. Yao，来自艾滋病大甾MON Bunge的含氮化合物。和葱属中国G. Don，“中国药用化学杂志，卷。5，p。134年，1995年。查看在：谷歌学术
5. S. Yahara，N.宇田，E.雄和E.八重，“甾体生物碱来自番茄甙（Lycopersicon esculentum），“自然产品杂志，卷。67，没有。3，pp。500-502,2004。查看在：出版商网站|谷歌学术

版权

版权所有©2012 Fu-xin Wang等。这是分布下的开放式访问文章创意公共归因许可证如果正确引用了原始工作，则允许在任何媒体中的不受限制使用，分发和再现。