暴露的血清学证据钩端螺旋体特立尼达和多巴哥的兽医学生和其他大学生

摘要

这项研究比较了西印度群岛大学(UWI)四所学校(兽医、牙科、高级护理教育和药学)的212名学生的钩端螺旋体病的血清学证据，通过检测IgG免疫球蛋白钩端螺旋体SPP。使用酶联免疫吸附试验（ELISA）和微观凝集试验（MAT）。总体而言，由ELISA测试的212名学生12名（5.7％）和31名（14.6％）分别为阳性和边界。在113名兽医学生中，11（9.7％）和19名（16.8％）分别是血清阳性和边界线，与非估计学生相比，相应的值为1（1.0％）和12（12.1％）。ELISA的乳化鼠血清血管症的血清症的频率有统计学意义（;)，兽医专业学生的比例为26.5%(113人中有30人)，而非兽医专业学生的比例为13.1%(99人中有13人)。根据MAT，钩端螺旋体病的血清阳性率在兽医专业学生和非兽医专业学生中相似，分别为7.1%(113 / 8)和7.1%(99 / 7)。在兽医学专业学生中，流行的感染血清为哥本哈根黄疸出血病，而在非兽医学专业学生中，流行的血清为澳大利亚Rachmati。成为一名兽医学生是唯一的危险因素钩端螺旋体提示兽医专业学生应认识和实施钩端螺旋体病的预防措施。

1.介绍

钩端螺旋体病是一种全球性的细菌性人畜共患疾病，尽管在发展中国家和发达国家以及温带和热带国家均有记录[1那2］．这种疾病主要以亚临床感染的形式发生，尽管已报道有许多具有非症状和体征的临床疾病病例[1-4.］．因此，它对全世界的发病率和死亡率负有责任[2那5.那6.］．

已确定啮齿动物是人类和动物感染的主要宿主钩端螺旋体这是热带地区高降雨、高湿度和普遍卫生条件差的环境中钩端螺旋体病流行率较高的原因之一，这些环境有利于啮齿类动物的繁殖[7.-9.］．主要宿主的分布和病原体感染动物(牲畜、野生动物、宠物动物等)的能力使钩端螺旋体病成为一种职业病[9.-11］．

与一般人群相比，高危人群包括家畜养殖户、动物饲养员、兽医、屠宰场工人、污水或环境卫生工人、甘蔗和稻田工人[9.那11那12］．已知人类感染是由于直接或间接接触啮齿类动物或其他含有大量活钩端螺旋体的动物的尿液，或食用受污染的食物或水[13那14］．据报道，除了职业暴露外，还有许多因素影响人体接触钩端螺旋体病的可能性。这些因素包括年龄、性别、季节和地理位置，已知会影响人类的感染率[15那16］．

人类钩端螺旋体病的诊断可以通过微生物本身的证明或通过检测感染后产生的针对病原体的抗体来实现[13那17］．该生物体可以通过生长培养基培养、感染组织的特殊染色和暗视野显微镜的使用来证实[13那18］．

有各种各样的血清学测试，可以检测IgG、IgM和IgA [19］．其中一些试验包括酶联免疫吸附试验（ELISA）[20.]及显微凝集试验(MAT) [21]在别人。MAT被认为是钩端螺旋体病血清学诊断和血清分型的“金标准”钩端螺旋体隔离(21那22］．MAT作为一种诊断性测试的优缺点在文献中有很好的记载[21-23］．ELISA易于操作、快速、灵敏度高，易于标准化，但特异性低，属特异性强，因此，与MAT不同，不能用于血清型感染钩端螺旋体[24那25］．

在特立尼达和多巴哥，有几份关于学童中发现或隔离钩端螺旋体病流行情况的报告[26，显然健康的人[27]和Piggery Farm Worker [28］．莫汉等[29]进行了一项回顾性研究，确定了钩端螺旋体病的年平均发病率，表明发病率受季节、性别和年龄的影响。在一项针对甘蔗田间工人的研究中，Adesiyun等人[30.报告钩端螺旋体病的血清流行率为0.7%。到目前为止，没有关于钩端螺旋体病在该国高等院校学生中发生的报告。

当前研究的具体目标是比较医学院兽医专业学生和非兽医专业学生钩端螺旋体病的血清学证据频率，以确定感染血清钩端螺旋体目的探讨钩端螺旋体病的危险因素。

2。材料和方法

2．1．学生人口研究

研究小组包括四个学院的学生，牙科学院(SOD)、兽医学院(SVM)、高级护理教育学院(SANE)和医学院(FMS)的药学院(SOP)。这项研究从2010年8月进行到2011年7月，每个学校的学生人数如下:SOD (160)， SVM (170)， SOP(279)和SANE(89)，一个3年的项目。

2．2.研究设计

研究设计包括对每个学校自愿参与的学生进行抽样，然后比较兽医专业学生和非兽医专业学生的血清学证据。

2．3.样本量的确定

学生人口的样本量将使用公式确定[31),那第1类误差为0.04时的精度，患病率= 11% [28]， 和估计样本容量。因为这个方程是基于无限总体的，，以适应FMS中四个学校(SOD、SVM、SANE和SOP)的698名学生群体，使用公式,在那里是在与第一个方程相同的绝对精度下估计流行率所需的人类数量。因此，本研究使用的估计样本量为:并且最小调整后的样本大小是．

2．4．调查问卷管理

每个参与者都接受了一份调查问卷，以获取信息，包括研究计划、参与计划的年份、年龄、性别、居住地点、宠物(狗、猫和啮齿动物)的所有权、与牲畜的关系、FMS之外的农业活动和其他风险因素。每个参与者被允许选择一个随机数，用来识别样本和参与者的测试结果。为了保持研究的机密性，我们获得了将研究结果传达给每位参与者的电子邮件地址。

2．5．收集的样本

来自SANE的合格的抽血师和护士协助对参与者进行血液采集。使用21号1.5英寸的针头和5ml注射器从前臂肘正中静脉或头静脉抽取约5ml血液。然后将血液放入不含抗凝剂的试管中。采集的血液在4°C下冷藏过夜，之后离心，血清收获，在−20°C下保存，待检测。这是一项血清学研究，目的是检测钩端螺旋体在使用ELISA和MAT的学生中进行研究，因此没有尝试对血液样本进行培养钩端螺旋体SPP。

2．6．免疫球蛋白测定钩端螺旋体ELISA法和MAT法

采用捕获ELISA法检测IgG(现有感染)，检测参与者事先在制造商规定的微量滴定板中暴露于钩端螺旋体病(SERION ELISA)经典的钩端螺旋体IgG/IgM, Hersteller Manufacturer Fabricant, Friedrich-Berguis-Ring 19D, 97076 Wurzburg, Germany)。按照试剂盒制造商的规定进行适当的控制。样品中IgG浓度(单位/ mL)采用检测试剂盒提供的标准进行测定。阴性:0 ~ 4.9单位/mL。那B.orderline: 5.0 to 9.9 units/mL, and positive: 10 units and higher as recommended for the test kit.

对于微观凝集试验（垫），从Koninklijk获得26个冻干抗原的血清化抗原托潘研究所/荷兰阿姆斯特丹皇家热带研究所生物医学研究实验室。所使用的国际小组包括下列血清组/血清组:澳大利亚Bratislava Jez Bratislava, Ballum Ballum Mus 127, Canicola Canicola honond Utrecht IV, grippo伤寒菌grippo伤寒菌Duyster, grippo伤寒菌Mandemakers, Hebdomadis Hebdomadis Hebdomadis, icterohaem出血菌icterohaem出血菌Copenhageni Wijnberg, Pomona Pomona proechimys 1161 U，Sejroe Hardjo Hardjoprajitno, Sejroe Saxkoebing Mus 24, Sejroe Sejroe M 84, Semaranga Patoc Patoc I, Andaman Andaman Ch 11, Australis Australis Ballico, Autumnalis Rachmati Rachmat, Bataviae Bataviae Swart, Cynopteri Cynopteri 3522 C，巴拿马巴拿马CZ 214 K, Pyrogenes Pyrogenes Salinem, Semaranga Semaranga Veldrat Sem 173，Shermani Shermani 1342 K, Autumnalis Bim, icterohaem出血Mankarso，和Tarassovi Tarassovi Perepelicin。MAT由两部分组成，定性检测血清中存在的血清群，定量检测存在的抗体滴度。在质量方面，按照世界卫生组织所描述的议定书(13)，使用了由26种血清组成的专家组。每周在Bijou瓶中传代，30℃孵育，检测密度为1-2 × 10^8.后5 - 7天。为了测定滴度(定量部分)，用任何对所使用的抗原有凝集作用的血清进行连续2倍的血清稀释。如果有2个血清具有相同的滴度，这些被认为是混合感染。这一过程是按照皇家热带研究所在钩端螺旋体病诊断实验室方法国际课程手册中描述的标准程序进行的(21)。滴定度为1:20或更高被认为是证据钩端螺旋体为明显健康的人类推荐的Spp.感染[32］．

2.7。伦理委员会对研究的批准

医学科学学院伦理委员会在开始前批准了这项研究。本研究的目的和方案已向所有参与者解释，并获得书面同意。

2.8。数据分析

使用社会科学统计软件包(SPSS) 15.0版本进行制作应急表。采用卡方分析确定人类钩端螺旋体感染的危险因素，显著性水平固定为alpha = 0.05。

3.结果

3．1.所研究学生的人口统计资料

表格1显示了来自四所学校的学生的人口统计数据，西印度群岛大学，特立尼达和多巴哥，他们自愿参加了这项研究。总的来说，共有212名学生参与了这项研究，其中包括113名兽医专业学生和99名非兽医专业学生(46名牙科专业学生、39名护理专业学生和14名药学专业学生)。根据学生感染钩端螺旋体病的特点和危险因素的数据，大部分(54.7%)被抽样调查的学生是在各自课程的二年级和三年级，年龄在25岁及以上(37.3%)，女性(73.1%)，居住在家中(53.3%)。在四所学校的参与者中，没有人(0.0%)曾被诊断患有钩端螺旋体病，69.8%的人饲养宠物(狗/猫)，其中兽医生(80.5%)的比例最高。大多数(41.0%)将动物严格作为家庭或宠物饲养;大多数(36.8%)与宠物保持较低的接触水平，兽医专业学生除外，其中大多数(46.9%)提到他们与宠物有密切接触。高频率(98.6%)的宠物最近没有被诊断出钩端螺旋体病。与牲畜接触最多(31.0%)。此外，兽医专业学生在学院以外从事养殖的频率最高(10.6%)，其中大多数是家畜养殖(9.7%)。在212名学生中，83名(39.2%)表示曾在居住处所遇到鼠患，但只有3.3%的学生将鼠患作为宠物饲养。

３．２．免疫球蛋白的检测频率钩端螺旋体通过ELISA

对113名兽医学生进行了检测，使用ELISA、IgG免疫球蛋白对钩端螺旋体非兽医专业学生为1例(1.0%)和12例(12.1%)，分别为阳性和边缘性结果，见表2．差异具有统计学意义(;）。总体而言，对IgG免疫球蛋白（阳性和边缘线）的血清阳性率的比较钩端螺旋体在兽医专业学生中，spp为26.5%(30 / 113)，差异有统计学意义(;)高于其他学校的非兽医专业学生，为13.1%(99人中有13人)。

3．3．免疫球蛋白的检测频率钩端螺旋体的垫子

免疫球蛋白的血清阳性率为钩端螺旋体兽医学专业学生和非兽医学专业学生在MAT检测中所占比例相似，分别为7.1%(113人中有8人)和7.1%(99人中有7人)，见表3.．26例血清中只有7例(26.9%)滴度在20或更高时凝集。在检测到的16个显著凝集反应中，滴度为1:20、1:40、1:80和1:320的凝集反应分别为7(43.8%)、7(43.8%)、1(6.3%)和1(6.3%)。在6例血清黄疸出血的显著凝集中，有5例(83.3%)发生在兽医专业学生中，而所有5例(100.0%)显著凝集发生在非兽医专业学生中。

3.4。ELISA与MAT结果比较

研究中使用的两种血清学检测的比较表明，所有学生的血清学证据的频率显着（;）通过ELISA更高，20.3％（212例，共212例，共212例，212个）由垫检测到的7.1％（152.152）。

3．5.血清免疫球蛋白阳性的危险因素钩端螺旋体

在危险因素的血清阳性方面，报考兽医专业是唯一具有统计学意义的因素(;)与钩端螺旋体病的血清学证据相关，且仅使用ELISA检测。值得注意的是,其他危险因素研究(年计划,年龄、性别、居住地、最近的钩端螺旋体病的诊断宠物动物或它们的主人,拥有宠物(狗、猫、和啮齿动物),啮齿动物问题/房屋周围,类的狗拥有(严格意义上的宠物,严格保护,或者两者兼而有之),和与宠物接触动物或牲畜(低,中等或高水平的农业(牲畜、水稻或甘蔗)没有显著差异(;的血清阳性钩端螺旋体种虫害感染。

4.讨论

在目前的研究中，使用IgG ELISA检测出明显健康的兽医学生的血清流行率为9.7%，与西班牙兽医学生报告的8.14%相当[33采用类似的IgG ELISA方法。然而，在那项研究中，感染率被确定为钩端螺旋体spp随着参加兽医项目的年数增加而增加，这与我们的研究发现的相反，在该项目中，不同年级的学生的血清阳性率没有显著差异。部分原因可能是，从第一年到整个项目，兽医学生都要接受技能培训和外派项目，使他们与动物有近距离接触。据报道，动物处理和接触是感染的重要因素钩端螺旋体种虫害感染(9.那11那12那33那34］．

该发现，通过使用ELISA法证实了暴露的血清学证据钩端螺旋体兽医专业学生的spp在统计上显著高于非兽医专业学生，因此并不令人惊讶。在目前的研究中，成为一名兽医学生实际上是唯一的风险因素，与暴露于钩端螺旋体SPP。

通过垫子检测到具有高特异性和低灵敏度的垫子检测的相对较低的滴度（主要是1：20和1：40）[21-23]可能是钩端螺旋体检测出低血清阳性率的原因。在表面健康的个体中，采用1:20至1:40的低滴度测定钩端螺旋体病的血清阳性率[32那33］．

具有诊断意义的是，ELISA检测到的暴露经验的血清学证据的频率显著更高(20.3%)钩端螺旋体与MAT相比，spp在所有学生中的比例为7.1%。这一发现与已发表的报告一致，其中ELISA已被证明比MAT具有更高的敏感性和较低的特异性[20.那24那25］．另一个原因可能是MAT灵敏度较低的部分原因是血清的数量和类型钩端螺旋体用于测试的嵌板中的sp . [22那35］．据报道，在血清库筛选小组中使用某一特定地理区域流行的血清库可增加MAT的敏感性[21-23］．然而，MAT相对于ELISA的一个主要优势是它能够确定感染的血清钩端螺旋体而ELISA是属特异性的。还需要指出的是，交叉反应可能在不同血清中发生，但我们也知道，个人可能暴露于多种血清钩端螺旋体因此，不一定是由于血清之间的交叉反应。

具有流行病学意义的是钩端螺旋体兽医专业学生接触的血清是哥本哈根黄疸出血菌，而非兽医专业学生接触的最常见的是南黄疸出血菌。这是相关的，因为最近使用分离和血清学技术的研究表明，血清型哥本哈根黄疸出血病在狗(临床钩端螺旋体病病例，明显健康的流浪狗和宠物狗)、野生老鼠和牲畜中最普遍[35-37］．因此很明显，在明显健康的动物中引起临床钩端螺旋体病和亚临床感染的重要血清也是最可能引起钩端螺旋体病血清阳性的原因钩端螺旋体强调钩端螺旋体病的人畜共患意义。令人感兴趣的是，在兽医学生中未检测到的南弓形虫在其他学校的非兽医学生中最常见。这一发现的意义并不明显，因为在特立尼达和多巴哥的人类临床钩端螺旋体病或亚临床感染中尚未报告血清型，但在其他国家已有记录[7.那36］．然而，值得一提的是，在目前的研究之前，所有用于MAT的血清组都不包含Rachmati血清。

关于在当前研究中发现的7种血清型，其中5种(哥本哈根黄疸出血、黄疸出血黄疸出血、Sejroe Sejroe、Ballum Ballum和Bataviae Bataviae)较早前已在该国的人类和动物感染或临床钩端螺旋体病中报告[26-28那35那38那39］．

5.结论

结论是，虽然检测血清学证据的频率暴露经验钩端螺旋体在被检测的学生中，spp的含量相对较低，ELISA检测为20.3%，MAT检测为7.1%，除了在MAT阳性样本中检测到的低滴度(大多数为20和80)外，兽医专业的学生接触到spp的风险明显较高钩端螺旋体比非兽医专业的学生多。没有任何风险因素(年龄、规划年限和性别等)对感染有任何重大影响钩端螺旋体哥本哈根黄疸出血菌是兽医学专业学生接触的主要血清，而南黄疸出血菌在非兽医学专业学生中最常见，可能具有流行病学意义。

致谢

作者感谢四所学校（SVM，SOD，SAN和SOP）的董事，他们支持这四所学校的学生协会主席，以告知其同事关于该研究的目标和方法。他们特别感谢丹尼斯以色列夫人的理智师范官，以协调四所学校协助血液收集的血腥药剂和护士的活动。Virmal Arjoonsingh提供了实验室援助。

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