文摘
大脑松果体褪黑激素(松果体)秘密和其他一些蛋白质和多肽。因此推测,骺蛋白质的抗氧化性能和可能受益于外源性褪黑激素疗法。鉴于这些蛋白质的治疗潜力,本实验进行了调查的影响水牛骺蛋白(cep,享年100岁μ克/公斤体重,i.p。)和褪黑激素(MEL, 10毫克/公斤BW, i.p)在肝和肾脏抗氧化酶的变化的成年女性Wistar鼠。水牛骺蛋白质显著()增加肝脂质过氧化(法律流程外包)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx),减少谷胱甘肽(GSH)、肾法律事务外包,过氧化氢酶(CAT)、GR、谷胱甘肽、GPx水平和控制动物。同样,梅尔治疗显著()上调肝SOD、GPx活性,而猫,GR, GPx,肾组织谷胱甘肽含量增加而SOD和法律流程外包仍不受影响。水牛骺蛋白质治疗对肝脏GPx产生更大的影响和肾猫比梅尔和谷胱甘肽水平。这些发现支持这样的结论,水牛骺蛋白质和褪黑激素激活一系列的抗氧化机制在肝和肾组织。
1。介绍
大脑松果体(松果体)是广泛参与同步的身体功能与环境(s)和作为“监管机构的监管”。众所周知,除了褪黑激素(MEL) 5 -羟色胺的合成,这个器官分泌各种蛋白质和肽(1,2]。另外松果体有丰富的肾上腺素能神经纤维,分泌活动有着很大的影响。大脑松果体,通过其生产梅尔对5 -羟色胺及其影响,影响许多神经内分泌功能(1]。然而,许多研究人员认为梅尔骨骺的唯一中介功能。最近,一些研究报道,骺蛋白质有能力调节各种生理功能在许多动物因此假定这些蛋白质有效地充当了骺激素(3- - - - - -7]。尽管这些研究,骺荷尔蒙的功能作用和蛋白质抗氧化防御系统的重要器官仍然知之甚少。重要器官的氧化损伤,尤其是肝脏和肾脏,变得非常重要在人体和动物体内抗氧化防御系统缺失或功能效率低下(8]。因为肝脏和肾脏新陈代谢高度活跃在异型生物质代谢和排泄,他们与其他器官相比,更大的负载的自由基活动,从而更容易氧化损伤(8,9]。因此,活性氧(ROS)组织损伤被发现在这些器官,更常见的是毒性损伤的后遗症,疾病,和最终的死亡的生物系统发生(10,11]。在健康动物,有一个平衡的生产各种活性氧和抗氧化防御系统(8]。已经指出,许多物种的抗氧化防御系统的器官都没有足够的能力去吸收自由基和活性氧的过度负荷,而这确实发生时增加受影响器官的氧化损伤(10- - - - - -12]。不得不面对氧化应激带来的不受控制的重要分子氧化食物和身体组织因此大多数生物体面临的重大生物挑战[13,14]。抗氧化剂治疗方法,它是基于upregulation身体的抗氧化防御系统,现在普遍采用的战略打击分子损伤在不同组织(12]。这种方法的变化,利用体内抗氧化剂代理管理,可能会提供一个重要的和廉价的替代治疗疾病与氧化应激有关。因此,本研究基于感知价值的调查几个分子的潜在好处在增强肝脏的抗氧化防御系统和肾脏。褪黑激素(N-acetyl-5-methoxytryptamine),一直被称为“松果体的主要分泌的产品,有强大的抗氧化性能15- - - - - -17]。早些时候,我们报道了水牛的抗氧化作用(Bubalus狷羚骺蛋白质(易暴食组)在氟化物和arsenic-induced氧化应激在血液、大脑、肾脏(2- - - - - -6,18- - - - - -20.]。然而,骺激素和蛋白质对肝脏和肾脏的影响抗氧化防御系统此前还没有研究。因此针对报告的发现自己和他人,我们假设松果体cep和梅尔可能提高水平的抗氧化剂防御活动(酶和非酶的)在肝脏和肾脏,因此可能是有利的对动物发生氧化应激。
2。方法
所有程序,进行动物实验动物被正式批准的机构伦理委员会(IAEC)的印度兽医研究所(IVRI)为目的的实验动物的管理和监督。
2.1。化学物质
在这项研究中使用的所有化学品从HiMedia均为分析纯,珞巴化学(印度孟买),SRL化工、印度。褪黑激素是采购从西格玛化工有限公司(圣路易斯,美国)。布法罗(Bubalus狷羚)骺蛋白质提供的神经生理学实验室,生理学和气候学,分工IVRI (Izatnagar、印度)。
2.2。实验动物
本研究进行十八岁性成熟和健康女性Wistar鼠体重130 - 142克,采购从实验动物资源IVRI的(政治)部分。老鼠检查到达任何异常或明显的疾病。老鼠被安置在聚丙烯的笼子里的光/暗周期(LD) 12 h,无菌,温度和湿度环境(设定在°C和相对湿度%,职责)。驯化后1周,他们重,随机分配到不同的组与近似等于初始组意味着身体的重量。分配后,动物是用苦味酸个人识别解决方案。所有的动物都可以免费获得这些标准实验动物饮食和水,补充每天。动物也检查每天的健康和畜牧业的条件。
2.3。实验设计
本研究的实验设计,包括各种团体、剂量、给药途径,和持续时间的治疗提出了表1。易暴食组被用作实验剂由于其安全性和实用性被证实在我们以前发表的一项研究。适当剂量的cep和梅尔·优化从经验在我们以前的工作之前和之后他们溶解在合适的车辆管理在16.00小时(6]。
2.4。样品收集
每日观察拍摄行为变化和死亡率,如果有的话,整个实验周期。实验结束时收集的样本(28天)。老鼠安乐死使用醚末端的实验。肝脏和肾脏收集,清洗,在冷冻盐水冲洗,涂抹,称重,并存储在−20°C。冰冻的肝脏和肾脏组织样本部分融化,和200毫克的样本和2毫升的冰冷的生理盐水。另一个200毫克的样本分别称重,在2毫升0.02 EDTA对谷胱甘肽的评估。器官匀浆准备使用一个IKA均质器(德国),在冰冷的条件下和收集,然后在3000转离心10分钟。此后,浮在表面的游离是收集和转移到预冷microfuge管在复制和存储−20°C以下。这些上层清液用于估计总蛋白质(器官),脂质过氧化(法律流程外包)和酶活性,过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(GR)以及non-enzymatic即减少谷胱甘肽(GSH)的抗氧化防御水平。
2.5。分析方法
不同抗氧化剂与国防有关的生化参数的估计肝和肾组织进行了使用双光束紫外可见分光光度计(UV 5704 SS、ECIL、印度)。
脂质过氧化(法律流程外包)
肾和肝组织提供法律服务外包的决心的丙二醛(MDA)的方法生产拉赫曼(21]。
减少谷胱甘肽(GSH)
谷胱甘肽的浓度在肾和肝组织评估free-SH团体估计,使用5,5-dithiobis-2-nitrobenzoic酸(DTNB)方法所描述的Sedlak和林赛(22]。
过氧化氢酶(CAT)
过氧化氢酶酶被Bergmayer估计所述活动(23),表示为纳米H2O2利用每分钟每毫克的蛋白质。
超氧化物歧化酶(SOD)
超氧化物歧化酶活动估计使用Balasubramanian Madesh和描述的方法(24)和表示为SOD单位(一个单位的草皮是(μg)所需的蛋白质抑制MTT)减少了50%。
谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)
谷胱甘肽过氧化物酶活动的方法测定屋和Valantine25]。酶活性表达为U /毫克的蛋白质,和一个单位的酶活性被定义为1纳米基质(NADPH)利用/分钟/毫克蛋白25°C。
谷胱甘肽还原酶(GR)
酶活性被化验的方法Goldberg和斯普纳26),和活动表示为纳米NADPH氧化辅酶ii /分钟/毫克的蛋白质。
蛋白质的测定
蛋白质含量在肝脏和肾脏匀浆测定和计算了洛瑞的方法等27]。
统计分析
组之间的差异被单向方差分析、统计分析和组织分离的方法之间的差异最显著差异(LSD)测试。所有数据被当作平均值±标准误差。价值观不同,被认为是重要的。一个计算机程序(SPSS 10.01, SPSS Inc .芝加哥,美国)是用于统计分析。
3所示。结果
所有的动物都是健康的,没有死亡率观察实验的整个期间。活动的肝和肾谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)和脂质过氧化水平和谷胱甘肽(GSH)的测定来评估水平的抗氧化防御雌性老鼠。cep显著增加()肝法律流程外包的控制和melatonin-treated动物(表2)。然而,没有观察到影响肝的cep和猫活动MEL-treated组。有趣的是,GPx和肝组织SOD活性显著增加(cep和MEL-administered组)。没有记录在梅尔的影响肝脏谷胱甘肽和GR水平,然而,他们的水平明显高于(BEP-treated动物的)。
同样,肾法律外包水平显著((表)在cep管理更大的动物3)。另一方面,肾猫、谷胱甘肽、GR、GPx水平显著增强在梅尔和BEP-supplemented组比对照组(表3)。然而,对猫的影响和谷胱甘肽在BEP-treated动物比那些有梅尔(表3)。在肾组织超氧化物歧化酶活性的影响在所有组。
4所示。讨论
氧化应激损伤的标记中可以找到许多疾病包括肾损害,慢性心脏疾病,肝脏疾病(28,29日]。因此,过多的自由基的形成是与许多疾病有关。许多疾病和增加毒性往往与氧化应激在不同的重要器官,具有减少特定酶的活动活动,包括过氧化氢酶、SOD、GPx, GR (15]。
我们观察到显著增加肾猫、谷胱甘肽、GR、GPx梅尔- BEP-supplemented动物。有趣的是,GPx和肝组织SOD活动也显著增加(在cep)——和MEL-administered组。然而,只有肝脏谷胱甘肽和GR水平显著提高(BEP-treated动物的)。这些药理作用相关的cep和梅尔可能的增强作用,肾和肝组织抗氧化防御活动(17- - - - - -19]。本研究结果不支持假设增加的内源性抗氧化活性反应有害/毒性作用cep的老鼠的肝脏和肾脏。以来,肝脏和肾脏保护反应任何有害的代理直接和瞬态,所以这些内源性保护/有利影响不能长时间(分别)以外,在我们的研究中。因此,本研究的结果支持cep的抗氧化性能。另外,cep不仅增加过氧化氢酶(肾脏),SOD(肝脏),酶GPx, GR还谷胱甘肽的水平。谷胱甘肽水平应该减少易暴食组是否有有害的影响。
GPx删除H2O2通过耦合减少H2O2减少氧化谷胱甘肽,谷胱甘肽。这是最重要的酶extraperoxisomal失活的H2O2,特别是在肝脏和肾脏。由于肝脏谷胱甘肽的主要来源,外源性物质在肝脏代谢,这可以大大消耗肝脏谷胱甘肽,也可能导致其他组织(谷胱甘肽耗竭30.]。在许多反应,GPx、GR、谷胱甘肽作为自由基清除分子,因此在我们的研究中发现,这些酶和非酶的抗氧化防御系统调节的动物肝脏和肾脏的氧化应激强调cep和梅尔·电位器的至关重要的抗氧化活性。褪黑素,大脑松果体分泌的产物,是一种自由基清除剂直接和间接抗氧化剂(31日]。除了直接的自由基清除活性,梅尔也提高SOD的合成,谷胱甘肽,猫,GR, GPx [32]。
在目前的研究中,结果表明,从大脑松果体cep具有抗氧化性能超过在某些情况下,梅尔的影响。易暴食组可能是由于他们的优越效果直接抗氧化效果,还因为易暴食组都牵连到梅尔生产的刺激(33]。在最近的研究中,cep梅尔的刺激生产的作用是证明(3]。这里的相关性是梅尔半衰期很短,几分钟内代谢和排泄。然而,cep的存在可能代表一个常数的刺激来源梅尔合成。这也可能是原因,某些酶相比具有更大的抗氧化效果梅尔独自行动。除了增加抗氧化酵素的活动,众所周知,褪黑激素也会增加他们的表情。这个观察表明,吲哚胺可能促进内源性抗氧化防御活动的生理作用。这些发现支持cep的假设和梅尔·调节抗氧化保护肝脏和肾脏,也表明这些药物通常是相同的效力的抗氧化活性。
5。结论
这些实验结果证明水牛骺蛋白质和褪黑素是有效的抗氧化剂,它们可能起到保护作用对肝和肾损害引起的氧化应激。研究结果表明,骺蛋白质和褪黑素可能潜在的抗氧化剂药物治疗对氧化应激的管理。
利益冲突和信息披露声明
s . r . Pandi-Perumal股东和Somnogen Inc .的总裁兼首席执行官,纽约的公司。他宣称没有利益冲突,可能会被认为影响本文的内容。所有剩余的作者宣称他们没有专利,金融专业,也没有其他任何形式的个人利益在任何产品或服务和/或公司可以解释或被认为是一个潜在的利益冲突,可能影响了本文中表达的观点。
确认
本研究支持高级研究奖学金的形式(SRF)第一作者(VKB),和印度兽医研究所提供的设施(IVRI),印度进行本研究正式承认。作者要感谢动物设施的工作人员对他们的照顾本研究中使用的科目和为他们的援助项目。