文摘
背景。年代taphylococcus球菌是食物中毒的最重要原因之一,世界上最常见的耐抗生素病原体。定期评估食品安全现状的积极的措施来减少可能的食源性致病菌的危险。因此,本研究评估细菌负荷及抗生素耐药性的状况金黄色葡萄球菌从即食生牛肉Bahir Dar城市,埃塞俄比亚。方法。这个横断面研究从2018年10月到2019年4月通过收集101生牛肉样本屠夫商店使用一个简单的随机抽样方法。隔离和微生物负载的决心金黄色葡萄球菌使用进行常规培养法和抗生素敏感性试验是由使用Kirby鲍尔磁盘Mueller-Hinton琼脂扩散法。数据分析通过使用占据软件12.0版本。结果。101生牛肉样本,55个(54.45%)呈阳性金黄色葡萄球菌意思是细菌数为3.40±0.63(日志10cfu / g)。大约13%的屠夫商店已经接受和潜在危险(以上104cfu / g)细菌负荷。高金黄色葡萄球菌耐药性是观察青霉素(92.73%),其次是头孢西丁(74.5%)、四环素(63.63%)、克林霉素(50.9%)。另一方面,对环丙沙星敏感性最高(100%),其次是庆大霉素(90.91%)和红霉素(87.27%)。多药耐药性也发现54(98%)的隔离。结论。在这项研究中高度耐药金黄色葡萄球菌是有罪的主要肉类屠宰的污染物Bahir Dar的城市。因此,适当的抗菌素使用应该用来防止和葡萄球菌的控制方法金黄色葡萄球菌在食物中毒。
1。背景
动物源食品含有丰富的营养来源,并提供多种微量营养物质对人类没有获得在植物的食物1]。肉是最营养的,最喜欢的动物源食品中检测。由于其高含水量(0.99水活动)和丰富的蛋白质,矿物质,和其他营养物质,适合微生物生长,肉是一个高度易腐食品,能引起人类感染也会导致经济损失由于腐败2,3]。
大量食物的人畜共患疾病经常发生因食用受污染的肉类和牛奶等动物源食品(4]。常见的食源性致病菌负责大部分的食源性疾病暴发单核细胞增多性李斯特氏菌,大肠杆菌O157: H7,金黄色葡萄球菌,沙门氏菌、蜡样芽胞杆菌、弧菌spp。空肠弯曲杆菌、梭状芽孢杆菌perfringens产生毒素,志贺大肠杆菌(STEC) [5]。在细菌中主要参与食源性疾病(增)金黄色葡萄球菌是食物中毒的主要原因之一在全世界造成的消耗的葡萄球菌肠毒素(6- - - - - -8]。由于不好的卫生习惯和低水平的意识,这个问题在发展中国家更糟糕。
金黄色葡萄球菌的食源性病原体污染负责不同的食品,导致食品变质和减少食品安全和保质期和通过的生产会导致食物中毒致命的肠毒素(9),但其他产肠毒素的coagulase-positive葡萄球菌等美国hyicus和美国的中间部也被牵连在葡萄球菌食物中毒10]。这是一个频繁的组成部分食品动物的皮肤菌群,因此可以预计将出现在生肉类和其他肉类产品(11]。
葡萄球菌食物中毒(SFI)常与摄入高耐热葡萄球菌肠毒素(12]。可接受的水平金黄色葡萄球菌即食食品应低于103菌落每克(cfu / g)的食物。如果细菌的数量大于104cfu / g,食物不满意和对健康有潜在危险的和/或不适合人类食用13]。摄入毫微克微克的葡萄球菌肠毒素污染的食物会导致严重的疾病从轻微皮肤感染危及生命的疾病(14]。
抗菌素耐药性是一个在全球范围内严重威胁公众健康。各种各样的抗菌药物是用来治疗金黄色葡萄球菌感染(15]。然而,antimicrobial-resistant的出现和传播金黄色葡萄球菌隔离构成全球挑战这些感染的有效治疗和控制(16- - - - - -18]。
即使有效的食品安全体系是至关重要的维持消费者信心在食品系统和提供一个良好的监管食品、国内和国际贸易的基础上有差距在埃塞俄比亚食品安全体系的法律和政策框架,食源性疾病监测、协调组织参与食品安全管理,实验室服务相关的食品危害(19]。不好的食品处理和卫生习惯,食品安全法律不足,监管系统薄弱,缺乏财政资源,以及对适当的食品处理创造有利环境传播的食源性病原微生物和食物中毒在埃塞俄比亚(20.]。广泛的生肉的习惯的形式简单的切肉条,在当地被称为“库”和肉末(基特伏)的人口是暗示食源性细菌包括的风险金黄色葡萄球菌(21,22]。此外,生牛肉可在露天埃塞俄比亚当地屠夫没有冷链过程中可以作为一个潜在来源食源性疾病(23,24]。
除了流行的金黄色葡萄球菌在肉达到40%25在肉铺Mekelle城市的埃塞俄比亚、负担和食源性疾病的公共卫生影响金黄色葡萄球菌感染是知之甚少21]。此外,有一个缺乏有关的数据金黄色葡萄球菌从即食生牛肉Bahir Dar的城市。因此,本研究集中在隔离和标识金黄色葡萄球菌,测量其大小和抗生素耐药模式从即食生牛肉提供有用的信息关于他们的抗生素耐药性葡萄球菌加载和配置文件Bahir Dar市埃塞俄比亚。
2。材料和方法
2.1。媒体和试剂
主要材料、媒体和试剂用于这项研究列出如下:冰箱(大提琴制冷机冰袋、印度),三角胸衣(三角胸衣®400循环器,英国),无菌兜包塑料袋(三角胸衣®400循环器袋、英国),蛋白胨水(美国Difco),革兰氏染色剂工具包(HiMedia、印度),紫色琼脂基(Difco,美国),甘露醇盐琼脂(英国Oxoid)、血琼脂基地(美国桶),Mueller-Hinton琼脂(HiMedia、印度),营养琼脂(英国Oxoid),兔血浆(NVI,埃塞俄比亚),H2O2(HiMedia、印度),O / F介质(HiMedia、印度)。
2.2。研究区域和研究设计
当前横断面研究从2018年10月到2019年4月在Bahir Dar城(位于亚的斯亚贝巴北北565公里)即食生牛肉零售商的屠杀。地理上,Bahir Dar位于北纬11.29°到11.38°之间和37.23°,东经37.36°。据估计,其平均海拔是海拔1810米。城市的年平均温度范围从7.1°C到29.7°C,而每年的平均温度是20.85°C (26]。
2.3。样本容量确定和抽样程序
Bahir Dar市约137授权屠夫商店操作在肉类和肉类产品,屠杀都包括在抽样程序。列表的屠夫商店都从健康中心获得。样本大小计算通过使用Thrusfield小人口抽样公式(27),共有101个零售商选择基于简单随机抽样。
2.4。数据收集
从随机选择的肉店,大约250克的即食生牛肉(Kurt)样本中收集的无菌塑料袋三角胸衣和保存在一个包含冰冰箱。立即收集到的样本送往Bahir Dar大学理工学院,食品微生物实验室、均化和匀浆被运送到了阿姆哈拉公共卫生研究所(APHI),在4小时内微生物实验室的单位,通过保持冷链进行细菌学上的分析。
2.5。细菌学的调查
分离和鉴定金黄色葡萄球菌根据[描述的方法进行9,28]。短暂,25克的生牛肉样品无菌转移到无菌兜包袋含有蛋白胨水225毫升和均质使用三角胸衣3分钟。在匀浆中,铂环量整除在血琼脂平板扩散(5%去纤维蛋白的羊血)对增长和溶血性的模式金黄色葡萄球菌和甘露醇盐琼脂(MSA)的增长金黄殖民地和孵化24至48小时37°C。铂环量的纯培养的假定的殖民地从每个样本有营养琼脂和孵化24-36h 37°C的革兰氏染色剂,进一步生化测试(过氧化氢酶、凝固酶试验和oxidation-fermentation测试)。此外,殖民地代表也接种和耗氧在37°C孵化24小时紫色琼脂基媒体(1%麦芽糖)快速发酵麦芽糖金黄色葡萄球菌导致黄色变色的介质由于酸性代谢产物的麦芽糖。未经变质处理的媒体被孵化为负控制检查不育。
革兰氏阳性菌落beta-hemolysis在血琼脂,MSA金黄颜色,过氧化氢酶和凝固酶阳性,发酵oxidation-fermentation测试,黄色紫色的变色琼脂基地中被证实金黄色葡萄球菌(9]。
2.6。枚举的金黄色葡萄球菌数
除了识别,微生物的数量金黄色葡萄球菌进行MSA利用扩散板计数方法。枚举金黄色葡萄球菌肉类样品,从原始匀浆系列稀释10倍准备和0.1毫升样本序列稀释扩散在MSA和孵化24至48小时37°C。假定的殖民地经历证实试验和金黄殖民地与过氧化氢酶和coagulase-positive隔离,MSA在血琼脂完全溶血,快速发酵麦芽糖的紫色琼脂媒体认定为基础金黄色葡萄球菌计数和cfu / g测试样品的数量是由以下公式计算29日,30.]: 在哪里c在计算板是殖民地的数量,d是计算板的稀释比例,是接种体积稀释。
2.7。抗菌药物敏感性试验
所有积极的隔离金黄色葡萄球菌受到抗生素敏感性测试通过使用Kirby鲍尔盘扩散法按美国临床实验室标准研究所(CLSI)指南Mueller-Hinton琼脂(尼古拉斯)。抗生素选择基于抗生素药物的分类与美国食品和药物管理局临床迹象显示,应考虑常规检测和报告nonfastidious生物。一个代表从每个子类抗生素抗生素剂组,常用和最可用抗生素治疗staphylococcal-related疾病在动物和人类,被选中。基于上述标准,9抗生素氯霉素(30µg)、环丙沙星(5µg)、头孢西丁(30µg)、克林霉素(2µ红霉素(15克)µg)、庆大霉素(10µ10 g)、青霉素(单位),四环素(30µ甲氧苄氨嘧啶g)和(1.25/23.75µg))被选为本研究(31日]。
敏试验,三到五well-isolated殖民地相同的形态类型选择营养琼脂板文化和转移到试管包含无菌生理盐水彻底和混合。悬浮液的密度调整至0.5麦克法兰的盐水或更多金黄色葡萄球菌殖民地。无菌拭子浸入了悬架和培养液过多被按在两侧的管,以避免overinoculation盘子。剂均匀散布于整个表面的琼脂板在三个方向抽汲。抗生素光盘是坚决琼脂表面和孵化申请24小时在37°C。直径的圆盘周围的抑制区在毫米(mm)用尺子测量和解释根据CLSI标准易感,中间或耐药(31日- - - - - -33]。这些分离株表现出三个或三个以上抗生素抗药性视为多个耐药(MDR) [9]。
2.8。数据质量保证
数据质量和研究结果的可靠性是保证遵循标准操作程序和常规使用控制细菌菌株。不育的检查准备媒体通过孵化一些随机选择板块为24 - 48小时37°C。未经变质处理的媒体被孵化为负控制检查不育。培养基的质量和测试程序进行彻底检查使用标准的美式文化(写明ATCC)的集合金黄色葡萄球菌(ATCC25923)积极控制筛选测试,确认测试,和磁盘扩散抗生素敏感性测试。大肠杆菌写明atcc - 25922作为消极的控制文化甘露醇盐琼脂。
2.9。数据管理和统计分析
原始数据和实验室研究结果编码到Microsoft Excel,出口占据软件,12.0版本,并使用描述性统计分析,如频率、比例,平均值和标准偏差(SD)。在所有分析,置信水平为95%,举行价值被认为低于5% 。
3所示。结果与讨论
3.1。隔离的金黄色葡萄球菌
在目前的调查,从101份即食生牛肉样品受到文化和生化隔离,55个(54.45%)呈阳性金黄色葡萄球菌这表明细菌可能是主要的食品污染物肉店Bahir Dar的城市。
目前的结果是高于先前发现的29.17%来自屠夫亚的斯亚贝巴的商店34];32.22%从零售房屋Jigjiga镇(35];40%的手,刀在屠夫Mekelle城市的商店25];和36.5%在Debre-Zeit即食肉类,埃塞俄比亚(36]。这些流行的差异可能反映了肉类污染水平在食品处理措施,环境卫生水平,意识与微生物污染的程度。这个概念是由Kibrom (34)表示,高水平的食品污染金黄色葡萄球菌已经与不当的员工个人卫生在食品处理和处理。
3.2。微生物负载的金黄色葡萄球菌
的枚举金黄色葡萄球菌进行MSA使用扩散板技术。最小和最大金黄色葡萄球菌计数在即食生牛肉样品Bahir Dar城市分别为2.48和5.08(日志10分别cfu / g),平均值和标准偏差为3.40±0.63(日志10cfu / g)。基于慢性疲劳综合症(2014)微生物食品指南,没有一个屠夫商店有一个很好的微生物水平(低于100 cfu / g),他们中的大多数(49%)紧随其后的是一个可以接受的水平不满意的微生物水平(38%)金黄色葡萄球菌数量(图1)。的平均数量金黄色葡萄球菌在这项研究中符合3.88的日志10cfu / g报告鲜肉Bahir Dar城市(37]。大约13%的屠夫商店有一个不可接受的和具有潜在危险的细菌负荷。如果细菌数超过上述标准鲜肉,肉是不可接受的,这表明报警信号沿着肉肉类卫生链从屠宰场屠宰店(38]。
的平均数量金黄色葡萄球菌在这项研究中低于结果(5.61±0.10日志10cfu /厘米2砧板和6.43±0.34日志10cfu /厘米2屠夫的手)从零售Jigjiga小镇的房子35]。这些细菌负荷的变化可能是由于肉类加工的差异,处理实践,沿着肉类生产和卫生标准操作程序链。
在大多数零售点,肉被放在地上,留给了怜悯的环境可以创建一个微生物病原体扩散途径。这些高细菌负荷可能影响的平均寿命肉和增加腐败的机会。
3.3。抗生素敏感性的金黄色葡萄球菌
所有的55个阳性样品金黄色葡萄球菌隔离了在体外抗生素敏感性试验尼古拉斯介质通过使用纸片扩散技术。隔离是完全容易环丙沙星(89.09%)(表庆大霉素紧随其后1)。这一发现是发现所有的同意金黄色葡萄球菌隔离来自肉类样品在亚的斯亚贝巴(100%)对环丙沙星敏感(34]。这一发现也符合先前的研究在亚的斯亚贝巴输出乳制品农场和屠宰场,97.7%的分离株对环丙沙星(9]。隔离的环丙沙星敏感性的原因可能是由于这样的事实:环丙沙星是一种相对昂贵的和新引进的抗生素和其他常见抗生素(37]。
大多数细菌分离株(92.73%)被发现耐抗生素青霉素和74.5%的耐头孢西丁隔离。本研究报告表明在和谐与95.3%的隔离是耐青霉素(9]。高电阻的青霉素和其他的原因β内酰胺抗生素可能是他们最常用的抗生素治疗感染人类和动物在埃塞俄比亚(9]。
按照CLSI的原则,头孢西丁的易感性或抗性结果可以应用于甲氧西林(31日]。在这74.5%的分离的研究金黄色葡萄球菌是耐头孢西丁认为是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的41耐头孢西丁隔离,36(87.80%)也耐青霉素。这可能是由于这一事实的阻力金黄色葡萄球菌这些药物可能归因于的存在台面式晶体管基因具有低的亲和力β内酰胺抗生素(39,40]。
目前的研究显示,大约98%的金黄色葡萄球菌隔离有高电阻两种或更多的药物由于有频繁的不合理抗菌药物使用和滥用行为(9)(图2)。
3.4。多药耐药性的金黄色葡萄球菌
从55隔离的测试金黄色葡萄球菌,46岁(83.64%)隔离显示耐多药。19隔离是对三个抗生素;同样,20和七个分离株耐抗生素,4点至5点(表2)。MDR的存在金黄色葡萄球菌隔离在这个研究领域显示可能的重大风险研究的耐药菌株在牛肉。
4所示。结论和建议
这项研究显示,牛肉(即食生肉)Bahir Dar高度污染的城市金黄色葡萄球菌和近三分之二的受污染的样品上面有细菌负荷的可接受的阈值水平。为了克服这个问题,为食品操作者提供食品安全培训和安全肉处理(维护冷链和清洁)是很重要的。所有测试的抗生素,金黄色葡萄球菌隔离是完全对环丙沙星敏感。另一方面,最高的阻力是观察到青霉素,头孢西丁紧随其后。几乎所有的隔离开发耐多药和大约一半的显示,抵抗四个或更多的类抗生素暗示MDR的广泛分布金黄色葡萄球菌从即食牛肉存在污渍。这可能对牛肉的消费者构成风险由于食物中毒的可能性和抗生素耐药性问题。因此,适当的金黄色葡萄球菌控制策略应该是设计和实现,由于葡萄球菌感染金黄色葡萄球菌最好是使用最有效的抗生素治疗如环丙沙星、庆大霉素与适当的抗生素使用。进行进一步的研究对于抗生素抗性基因和肠毒素基因金黄色葡萄球菌为宜。
数据可用性
使用的原始数据集和/或分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。
伦理批准
协议后的研究伦理审查和批准的机构审查委员会Bahir Dar大学的农业和环境科学学院、学校的动物生产和兽医。Bahir Dar大学支持信是写给APHI。然后,道德间隙从APHI和获得官方许可是收到Bahir Dar城市政府卫生局。
同意
屠杀的所有者许可被要求带上生牛肉样本完全同意解释研究的目标;他们的权利,他们的参与是完全自愿的。为了确保机密性,任何个人或屠杀识别信息不是收集和它是通过一个独特的代码。
信息披露
后提交的手稿BMC微生物学杂志》上,研究广场发布在网上的预印本形式通过分配DOI任何人阅读、分享和评论文章,使作者获得信贷和获得可见性。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
英国电信开发的研究想法,进行了主要的研究。助教和英航监督、评论和纠正研究协议,数据分析,和所有的帐面价值的过程。所有作者阅读和批准最后的手稿。
确认
由于他们的贡献这一研究中,马来西亚农业技术人员的职业和教育培训学院和Bahir Dar大学承认。实验室技术员的支持阿姆哈拉公共卫生研究所和Bahir Dar大学技术学院和肉店老板Bahir Dar城市是高度赞赏。作者要感谢BMC《微生物学和研究广场为他们考虑。本研究的基金是来自马来西亚的农业技术职业和教育培训学院和Bahir Dar大学。