文摘

伤口愈合延迟的主要原因是污染物和感染在慢性和急性创伤;出于这个原因,伤口愈合的微生物感染管理是其中最重要的组件的有效标准护理。伤口污染物最有可能来自环境和周围的皮肤损害,到目前为止,最常见的细菌分离金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌,肺炎克雷伯菌。为了抵消和控制这些污染物,标准治疗包括局部防腐剂。最常用的包括iodine-releasing代理(如聚乙烯吡咯酮碘),过氧化氢,polyhexanide。本研究旨在调查在体外抗菌活性的一种新型局部喷(Fitostimoline^®基于0.1% polyhexanide和Rigenase加上喷)^®对金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌,k .肺炎,的结合金黄色葡萄球菌和k .肺炎。的在体外抗菌活性的Fitostimoline^®+喷雾是由磁盘琼脂扩散试验评估,定量暂停测试,和定量载波测试,证明Fitostimoline^®+喷雾可以杀死99.9%的细菌。这些结果支持Fitostimoline的微生物特性^®+喷雾确认的抗菌活动polyhexanide (PHMB)。

1。介绍

伤口污染物最有可能源自环境(即。,exogenous microorganisms in the air) and/or from the surrounding skin lesion, involving elements of the normal skin microflora such as葡萄球菌epidermidis和Micrococci,或从粘膜膜(1]。

迄今为止,微生物对伤口愈合的影响已被广泛研究,即使大多数的伤口,是幼童腹壁薄弱包括需氧菌和厌氧菌、需氧病原体(例如,金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和k .肺炎)最频繁引用的主要原因延迟伤口愈合和感染(2]。

金黄色葡萄球菌最成问题的细菌被认为是创伤、手术、烧伤感染(3]。此外,金黄色葡萄球菌和k .肺炎被称为主要负责生物膜的形成,主要毒性因素的慢性感染和愈合延迟。伤口局部感染的迹象,展览或未能愈合没有临床症状的感染最初可能采用局部防腐剂。消毒的策略达到目标控制/避免细菌扩散,特别是要避免创建耐多药生物(MDROs)。

事实上,抗生素的本地应用程序限制必须避免伤口感染的风险不仅对促进耐药性也microbiostatic模式的行动,可能导致nonefficacious治疗(4]。

局部杀菌制剂最常用的包括iodine-releasing代理(如聚乙烯吡咯酮碘和cadexomer碘),chlorine-releasing解决方案(例如,达金氏溶液和次氯酸钠溶液),过氧化氢,silver-releasing代理,polyhexamethylene双胍(PHMB)和醋酸3]。

Polyhexamethylene双胍(PHMB)是合成聚合物在结构上类似于天然抗菌肽(安培数)。结构相似性AMP和PHMB表明,后者可以进入细菌膜细胞和杀死细菌以类似的方式AMP (5)通过依从性的作用机制和破坏目标细胞膜,造成钾离子和其他胞质组件泄漏,导致细菌细胞死亡(6]。

一种新颖的基于0.1% PHMB和Rigenase配方^®(Fitostimoline^®+喷雾)最近被开发,符合前面提到的问题,我们决定执行本研究目的是探讨在体外抗菌活性Fitostimoline^®+喷雾对校长负责伤口污染:微生物。葡萄球菌、铜绿假单胞菌肺炎,的结合金黄色葡萄球菌和k .肺炎。

2。材料和方法

2.1。Fitostimoline^®+喷雾

Fitostimoline^®+喷雾是皮肤使用的医疗设备中包含加压铝瓶。每个瓶子加压包含Rigenase^®PHMB 0.1%,羟乙基纤维素、羟丙基瓜尔胶hydroxypropyltrimonium氯,柠檬酸无水、乙二醇monophenyl乙醚和纯净水。推进剂是二甲醚。

2.2。磁盘琼脂扩散试验

每一个微生物(金黄色葡萄球菌写明ATCC 6538和铜绿假单胞菌写明ATCC 9027 -微生物学的;K。肺炎写明ATCC 13883 -热科学)是飞跑到TSA 90毫米板(胰蛋白酶的大豆Agar-Merck-prepared根据制造商的指示)为18 - 24 h - 35°C。随后,一个孤立的殖民地被板和悬浮在氯化钠0.9%,调整后等于0.5麦克法兰的浊度标准。这种悬架是用于种子熔融Mueller-Hinton琼脂培养基(按照制造商的指示Sigma-Aldrich-prepared)稳定在45°C(0.1毫升微生物测试暂停/ 100毫升中)。获得培养介质注入90毫米培养皿(20毫升中/盘)和固化。然后,滤纸光盘(约10毫米直径)包含测试化合物(Fitostimoline^®喷雾为负控制和过氧化氢为积极control-Fitostimoline^®+喷雾相比,两种不同的解决方案在季铵盐和其他基于聚乙烯吡咯酮碘)放置在琼脂表面。盘子是preincubated 1 h在室温下,以确保足够的扩散和最后孵化24小时- 35°C。实验运行在一式三份,抑制与口径测定和记录为均值±SD (n= 3)[7,8]。

2.2.1。磁盘琼脂扩散试验的统计分析

磁盘琼脂扩散试验结果表示为三个独立实验的平均值±标准偏差一式三份。单向方差分析(方差分析)是用于测试的计算值显著杀菌活性细菌处理0.1% polyhexanide局部喷而季铵盐(QAS)解决方案和聚乙烯吡咯酮碘(PVP-I)解决方案。

2.3。定量暂停测试

微生物悬浮液(金黄色葡萄球菌写明ATCC 6538,铜绿假单胞菌写明ATCC 9027,K。肺炎写明ATCC 13883)准备从一个孤立的殖民地在氯化钠0.9%,调整后等于0.5麦克法兰的浊度标准。的结合金黄色葡萄球菌和k .肺炎悬架是由混合等量的每一个悬架准备如上所述。

暂停测试是在室温下进行模拟医疗条件,添加0.5毫升的干扰物质(无菌胎牛serum-VWR)到4.5毫升微生物悬浮(10⁸-10年⁹CFU /毫升)之前的0.75毫升或1.00毫升Fitostimoline(两个不同剂量进行)^®+喷雾。

Fitostimoline^®+喷雾是直接添加到测试微生物悬浮。无菌中和剂(3.6 g / l磷酸二氢钾;7.2 g / l磷酸氢二钠二水合物;4.3 g / l氯化钠;1 g / l蛋白胨;80 g / l渐变;30 g / l皂苷;0.5 g / l组氨酸;3 g / l卵磷脂;5 g / l硫代硫酸钠五水化物)添加后的接触时间(15分钟和60分钟)停止PHMB效应,幸存的细菌的数量统计在琼脂板(胰蛋白酶的大豆琼脂(默克公司)按照制造商的指示准备到80年增加5 g / l渐变,0.7 g / l卵磷脂、和1 g / l组氨酸),计算和减少日志。

适当的控制,如媒体灭菌控制、生存能力增长控制,中和进行控制。

根据EN 13727 (9),一个产品必须能够实现减少5 log(=杀死99.999%的细菌)对各自的测试微生物满足欧洲标准的要求。

2.4。定量载波测试

每一个文化金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌,k .肺炎开始从冷冻管的股票包含10毫升的大豆胰蛋白酶的肉汤(默克公司)。24小时孵化后30至35°C, 1毫升的暂停被转移到9毫升新鲜大豆胰蛋白酶的肉汤培养48-54 h获得10⁸-10年⁹CFU /毫升肉汤培养和0.1毫升整除的边后卫(干扰有机土壤)添加到1.9毫升的肉汤培养(的组合金黄色葡萄球菌和k .肺炎悬架是由混合等量的每一个肉汤培养准备如上所述)。航空公司准备通过热压处理过的25.4×76.2毫米玻璃幻灯片到无菌培养皿中,2/3的纸张。一个循环测试悬挂的是分布在整个玻璃表面和干了20分钟在- 35°C,并且每个玻璃载体应该包含> 10⁵CFU /母舰。10测试运营商每个暂停测试喷(三秒一个泵)分别从远处45°角10 - 15厘米。控制航空公司处理1毫升的PBS。接触后15分钟±5秒和60分钟±5秒,每个载体20毫升的中和剂中和(3.6 g / l磷酸二氢钾;7.2 g / l磷酸氢二钠二水合物;4.3 g / l氯化钠;1 g / l蛋白胨;80 g / l渐变;30 g / l皂苷;0.5 g / l组氨酸; 3 g/l lecithin; 5 g/l sodium thiosulfate pentahydrate). Using standard surface spread techniques, the neutralized substance was plated on tryptic soy agar (prepared according to the manufacturer’s instructions by adding 5 g/l Tween 80, 0.7 g/l lecithin, and 1 g/l histidine) and incubated for 24 h at 30–35°C. The surviving microbial population on the test plates was compared to the controls to determine log reduction. The ASTM (American Society for Testing and Materials) E1153 [10,11)通过标准> 3日志₁₀减少(=杀死99.9%的细菌)。进行适当的控制。

3所示。结果

3.1。磁盘琼脂扩散试验

琼脂扩散试验标准,简单的测试,评估有用的隔离和扩散速度的敏感性的药物通过琼脂培养基。它被认为是一个定性试验调查的抗菌活性物质,或者作为小说的在这种情况下,产品。磁盘琼脂扩散试验被用来评估Fitostimoline的抗菌功效^®+喷雾相比其他两个产品抗菌消毒剂活动已经证明。H₂O₂作为一个积极的控制,Fitostimoline^®喷雾被用作负控制确认Fitostimoline的抗菌活性^®+喷雾是由于添加0.1% PHMB配方。结果总结在表1。

的作用机制qas可以概括如下。在第一阶段,QAS分子吸附于细胞壁和穿透它(12]。进一步活动假设与细胞膜的脂质和蛋白质反应,导致无序结构和泄漏的低分了组件的细胞。然后,蛋白质和核酸降解细胞内。自溶酶的释放导致细胞壁成分的溶解。这些过程的可观察到的效果是一个完整的结构组织的细胞12,13]。

PVP-I是水溶性碘载体(或iodine-releasing代理)之间,由一个复杂的碘和增溶的聚合物载体,聚乙烯吡咯烷酮(10,11]。在水溶液中,动态平衡之间发生自由碘(I2),活性杀菌剂,PVP-I-complex。作为一个小分子,迅速渗透到微生物和碘氧化关键蛋白质,核苷酸,脂肪酸,并最终导致细胞死亡(14,15]。PVP-I有着广泛的抗菌谱与活动对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌,和它的行动金黄色葡萄球菌是有据可查的16]。

根据文献数据,PVP-I和QAS有很好的敏感性金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性细菌),但同时,Fitostimoline^®+喷雾提供了一种抑菌圈直径,即使它不具有统计学意义。相反,图1表明,琼脂扩散试验抑制Fitostimoline领域^®+喷雾对k .肺炎(革兰氏阴性菌)和反对的混合物k .肺炎+金黄色葡萄球菌是显著而提供的季铵盐溶液和聚乙烯吡咯酮碘溶液(显示值计算的单向方差分析测试< 0.01 Fitostimoline^®+喷雾与每个其他评估产品)。特别有趣的是,缺乏抑菌圈直径的三个产品所示,Fitostimoline^®+喷雾、PVP-I QAS解决方案,反对铜绿假单胞菌显示磁盘琼脂扩散试验的极限,由于在琼脂磁盘不足数量的产品。

3.2。定量暂停测试

干扰物质被用来模拟有机材料出现在伤口,从而影响产品的抗菌功效。暂停大量微生物直接接触Fitostimoline的剂量^®+喷雾。表2和图2显示暂停定量测试的结果中两种不同剂量的Fitostimoline^®+喷雾进行了测试金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌肺炎的混合物金黄色葡萄球菌+k .肺炎在两个不同的接触时间,15分钟和60分钟。通过的标准性能标准成功的抗菌功效,该产品必须杀死99.999%的细菌。1.00毫升剂量的Fitostimoline^®+喷雾在接触*成功符合功效性能的标准。结果表明,只有0.75毫升剂量和铜绿假单胞菌在接触时间15分钟,产品不符合功效标准即使日志₁₀减少4.98而不是5,但60分钟后,相同的剂量,即使对于铜绿假单胞菌,能够实现> 6日志₁₀减少。这些结果证明0.75毫升Fitostimoline的抗菌功效^®+喷雾后60分钟的接触时间。

3.3。定量载波测试

运营商测试模拟实际情况比暂停测试因为微生物predried和坚持玻璃模拟实际的伤口接触时间等条件,温度,和污物。

根据流分析喷嘴的距离10 - 15厘米(0.35 g / ml)和产品密度(0.95÷1.1 g / ml),一个泵3秒类似于1.2克或1毫升的产品被认为是。

表3和图3显示结果的定量玻璃载体Fitostimoline泵3秒之一^®+喷雾测试金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌肺炎的混合物金黄色葡萄球菌+k .肺炎在两个不同的接触时间,15分钟和60分钟。通过的标准性能标准成功的抗菌功效,该产品必须杀死99.9%的细菌。后15分钟的接触时间,一些眼镜显示细菌的增长,除了铜绿假单胞菌;相反,接触时间60分钟后,Fitostimoline^®+喷雾杀了超过99.999%的细菌,达到超过3日志₁₀减少。

4所示。讨论和结论

有普遍同意,微生物负载需要保持控制皮肤损伤,以确保有效的伤口愈合(17]。

这一目标,Farmaceutici Damor Fitostimoline发展^®+喷雾,小说局部医疗设备,由于其特定的基于Rigenase配方^®,形成保护屏障,应对外部环境,创造有利条件迅速和正确re-epithelizing行动在皮肤上,而且,由于PHMB,有助于控制微环境和污染。

Rigenase^®,一个特定的专利小麦属植物vulgare提取、展品tissue-repairing活动和保湿抗氧化能力的行动18];因此,它被用于制定不同的医疗设备品牌Fitostimoline^®——加速组织修复的性质,提高表皮屏障的修复,促进脂质合成(19]。

的防腐剂polyhexamethylene双胍(也称为polyhexanide或PHMB)可以穿透细菌细胞膜和杀死细菌模拟抗菌肽(安培)由许多细胞内伤口(5,20.]。研究表明,PHMB有广泛的活动在体外和在活的有机体内临床使用,它是安全的。Polyhexanide局部准备确认至少一样有效的磺胺嘧啶银盐治疗微生物感染,支持使用PHMB治疗伤口感染或感染的风险(21]。

本研究的第一个调查发现一个新的局部喷的抗菌活性,比较其行动有两个常用的伤口防腐剂,使用磁盘琼脂扩散试验。结果显示一个类似的抗菌活性的产品即使是取决于剂量;然而,的情况k .肺炎和一个混合的金黄色葡萄球菌和k .肺炎,如图1,Fitostimoline^®+喷雾似乎比PVP-I和QAS解决方案更有效。

暂停测试是理想的定义测试Fitostimoline剂量和接触时间^®+喷雾杀生的行动。当我们认为Fitostimoline^®+喷雾应用程序表示伤口治疗,大量的细菌混合蛋白质和有机负荷(10%的边后卫,可能抑制产品的抗菌功效),和悬架被暴露在定义Fitostimoline^®+喷雾为一个特定的接触时间。中和后,幸存者的数量估计。两个不同的剂量和两个不同的接触时间测试。剂量1.00毫升(对应1在喷雾泵3秒)比剂量更有效0.75毫升已经经过接触时间15分钟。

暂停执行测试,以反映临床条件以确保1泵Fitostimoline 3秒^®+喷雾能够灭活微生物,其功效测试条件下接近现实生活,与定量运营商测试使用玻璃作为承运人的边后卫,有机土壤两次接触,15到60分钟。这项研究的结果表明,1泵Fitostimoline 3秒^®+喷雾产生抗菌活性,99.9%以上的死亡金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌肺炎的混合物金黄色葡萄球菌+k .肺炎在室温下的接触时间15分钟后根据ASTM E1153 [13]。

结果导致我们Fitostimoline的结论^®+喷雾,除了其再生活动,具有抗菌活性相关的存在PHMB配方。

数据可用性

的数据支持本研究的发现可以从相应的作者在合理的请求。

同意

同意所提供的所有研究人员参与了这项研究,他们包括在出版物中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

本文的作者感谢Vincenzo Maglione,斯特凡诺Maurelli,胭脂Migliuolo有用的支持。