文摘

目的。幽门螺旋杆菌在人类胃细菌病原体感染约50%的世界人口。未经治疗的感染会导致各种疾病导致癌症。的一些幽门螺旋杆菌菌株是无症状的,但是其中的一些导致更严重的疾病。标准的治疗协议用于治疗幽门螺旋杆菌感染是三联疗法,包括奥美拉唑作为质子泵抑制剂(PPI)和两个抗生素通常由阿莫西林和克拉霉素和甲硝唑治疗。近年来,由于抗生素耐药性的增加率,根除率有所下降。材料和方法。我们评估140患者应用到大学医院胃肠病学部门和接受在内镜活检。在这些病人中,我们分析了floroquinolone使用基因型和克拉霉素抵抗®HelicoDR(海生命科学,德国)。我们也使用实时克拉霉素耐药性的方法。结果。我们发现的数量和速度floroquinolone阻力20(25.6%)和clarithromycine抗性31 (39.7%)。实时PCR方法,我们发现clarithromycine阻力在26个(33.3%)病人。这些结果未达到统计上的显著水平。讨论和结论。我们的结果显示相似的其他的研究在我们国家举行。应该有更多的研究为根除通过我们国家的政策。

1。介绍

幽门螺旋杆菌在人类胃细菌病原体,感染了世界人口的50%左右。通常是在童年时代传播,在没有抗生素治疗的情况下,终身殖民发生(1,2]。感染幽门螺旋杆菌最初引起胃炎,如果允许存在,可以诱发一系列疾病,如消化性溃疡、萎缩性胃炎、肠上皮化生和胃癌。幽门螺旋杆菌殖民的人类胃通常发生在童年,但大多数的幽门螺旋杆菌全身的疾病发生在成年和坚持最古老的人们,而这些大多数人感染了疾病的发展幽门螺旋杆菌(> 80%)和无症状贯穿他们的生活。感染的炎症反应变化由于疾病遗传易感性和环境因素2,3]。

的基础幽门螺旋杆菌抗生素治疗。根除率低和再感染是儿童频繁。成功根除治疗方案尚未确定,尽管使用不同的治疗方案。殖民下的黏液层减少抗生素的直接影响。胃酸减少抗生素的效果,细菌容易形成抵抗抗生素;这可能是治疗失败的原因(4,5]。

根除和三重治疗一种质子泵抑制剂(PPI)或雷尼替丁铋和两个抗生素,最频繁、阿莫西林和克拉霉素通常使用(6]。三重治疗仍有争议和不同的持续时间7至14天,根据中心(4]。最常见的使用大环内酯类抗生素(克拉霉素和阿奇霉素)咪唑(灭滴灵或tinidazol),阿莫西林、四环素(6]。最开抗生素幽门螺旋杆菌作为三联疗法是克拉霉素的一部分。根据会议共识,电阻率达到20%时,不应使用抗生素。在欧洲的三期临床试验表明,当克拉霉素耐药的发生率增加幽门螺旋杆菌紧张,这两种抗生素,PPI和铋,四种治疗方法,应该是第一线治疗方法。甲硝唑可以代替使用克拉霉素由于电阻(6]。失败的幽门螺旋杆菌根除,左氧氟沙星用于第二药物,这是一群氟喹诺酮类抗生素(7]。

尽管快速发展的阻力问题正在从国家/地区,幽门螺旋杆菌不能在10 - 45%的三联疗法根除患者(4]。在发展中国家,替代抗生素治疗是测试。这些都是四个治疗,连续治疗和三重标明其他抗生素,如左氧氟沙星治疗,利福,furazolidane。四个治疗表明铋、PPI、灭滴灵、四环素(6]。抗生素耐药性的幽门螺旋杆菌世界上不是常规的,发达国家在发展中国家,低和低与处方频率一致。因为他的原因,建议敏感性测试开始前的治疗方案6]。特别是在发展中国家,如土耳其、抗生素耐药性的检测是重要的治疗的有效性(7]。

由于培养的技术难题幽门螺旋杆菌和抗菌谱,结果表明,简单和廉价的方法需要确定电阻(8]。近年来,许多分子荧光原位杂交等方法,PCR测序,实时PCR和内联杂交PCR已经开发作为替代传统方法(9]。克拉霉素抗性是由表型和基因型的方法。电阻检测突变如A2142G、A2142C A2143G A2143G, A2144G分子方法更容易和更准确的获得结果10]。这些突变被PCR-RFLP寻求使用限制性内切酶。氟喹诺酮类耐药性与gyrA基因突变在87年和91年职位和已被证明是通过分子生物学方法检测(11]。

抗生素耐药性利率因地区而异。土耳其也观察到不同的电阻率在不同的地区。我们的目标是确定抗克拉霉素和氟喹诺酮类原料药,最常用的抗生素幽门螺旋杆菌杂交方法消灭,这是一个分子与实时PCR方法和比较方法。

2。材料和方法

进行了研究与伦理批准Yeditepe大学临床研究伦理委员会的批准(决定没有:51/445)。胃活检标本的随机选择140例患者在内镜指大学医院的胃肠病学部门被安置在Nucliswab®(美国Salubris)和交付给临床微生物实验室。第一次获得的DNA DNA提取存储−20°C。胃活检标本首先被压碎,DNA使用QIAamp隔离是由DNA迷你包(试剂盒、希尔登,德国)提取设备的协议建议组织。

2.1。杂交和基因型®HelicoDR工具包(海生命科学,德国)

孤立的dna的存在幽门螺旋杆菌和氟喹诺酮类和克拉霉素抗性研究使用基因型®HelicoDR(德国海恩生命科学)工具包(图1)。

2.2。克拉霉素耐药性检测,实时PCR

为了演示克拉霉素耐药性的DNA,进行实时PCR PCR杂交试验检测点突变。的一个片段23 s rRNA基因的267个基点幽门螺旋杆菌使用HPYS乘以(5′-TATGGTACCCGCATGATATTCCCATTAGCAGT-3′)和HPYA (5′-TAAGAGCTCAGGTTAAGAGGATGCGTCAGT-C-3′)引物。放大产品检测与两个探针:传感器探头,640和3′′贴上LC-Red磷酸化(5′-GGCAAGACGGAAAGACC-3′;核苷酸2504年至2520年),它包含突变的杂化与该地区的网站,和锚探针杂交三上游基地前,3 _用荧光素标记(5′-TGTAGTGGAGGTGAAA-ATTCCTCCTACCC-3′;核苷酸2473年至2501年)。引物和探针获得Sentromer DNA技术有限公司。

PCR和杂交反应进行使用LightCycler thermocycler(罗氏诊断、纳伊苏尔塞纳河、法国)。玻璃管的毛细血管,1 6µl MgCl₂(25毫米),0,4µ正向和反向引物(eachone 20µ米),0,2µ左锚和传感器探针(eachone 20µ米),2µl由于“快速上手”项目DNA杂交探针大师(罗氏诊断)和显示3µl DNA, PCR混合物准备总量的20倍µl。放大程序如下:在95°C 10分钟(1周期),(senaturation),在95°C 0秒,60°C 10秒,在72°C 17第二(50周期),在95°C 0秒(1周期)(融化),在5°C 30秒(1周期)(冷却),进展缓慢,荧光下降0.1ºC 85°C。过程完成后,T_米点与LightCycler评估工具。

四个不同的T_米点的研究。预计,野生型菌株,A2142C, A2142G,和检测到A2143G突变株在大约61.5,58.0,53.0,53.6 (12]。

3所示。结果

这项研究包括140名活检标本取自Yeditepe大学胃肠病学部门。病人的年龄从19岁到73岁,和病人被随机选中。

gyr87和gyr91基因的点突变的检测区域进行耐氟喹诺酮类抗生素通过使用基因型®HelicoDR工具包(海生命科学,德国)。在这项研究中,78名患者被确认为阳性。在这些,14日被发现突变gyr87地区6 gyr91地区和2基因区域。总共有20例(25.6%)患者gyrA基因的突变区域,即氟喹诺酮类耐药性。点突变在A2146G A2146C, A2147G基因区域检查克拉霉素耐药性的检测使用基因型®Helico博士(德国海恩生命科学)设备。31(39.7%)的78名病人被发现有克拉霉素耐药性。38.7%的人有A2142G, 67.7%的人有A2143G突变,没有A2142C突变。耐氟喹诺酮类和克拉霉素抗生素被发现在11个(14.1%)病人。克拉霉素的耐药性是由实时PCR方法在A2142G点突变,A2142C, A2143G基因地区78患者被检测到幽门螺旋杆菌积极的杂交方法。26例(33.3%)病人被发现有克拉霉素耐药性。其中14.8% A2142G, 85.2%的人有A2143G, A2142C变异还没有检测到。比较杂交的结果和实时PCR方法和克拉霉素耐药性检测,检测到突变在24例(30.8%)患者的两种方法。比较这两个测试时未达到统计上的显著水平值> 0.05。接受,prekit比先前的研究(表更准确1)。

4所示。讨论和结论

根除的标准治疗协议幽门螺旋杆菌三联疗法。它由一个质子泵抑制剂(PPI)如奥美拉唑和两个抗生素,通常阿莫西林,克拉霉素,或者metranidazole。研究表明,这种疗法根除大约80%幽门螺旋杆菌1990年代初的。但是,后来,根除成功率低于60%。这是有关克拉霉素和metranidazole阻力的增加。氟喹诺酮类原料药,如左氧氟沙星和莫西沙星,通常作为二线治疗救援人员(11]。抗生素敏感性测试应该执行根据第五马斯特里赫特准则在2017年出版的如果第二代治疗失败(13]。

治疗失败患者的年龄、香烟使用,细菌的负担在治疗之前,细菌的基因型,和药物病人的依从性。然而,大多数的治疗失败是由于阻力的首选抗生素(7]。类似抗生素的使用在不同的疾病导致对抗生素产生抗药性。敏感性测试建议抗生素可用于增加对抗生素的耐药性。是很困难的,因为表型方法敏感性测试幽门螺旋杆菌是一个一已私欲的最佳培养条件下细菌。因为抗生素耐药性的微生物取决于点突变,更方便使用基因型的方法作为替代。因为这些方法可以应用于直接活检材料和粪便标本,获得更快的结果(这是一个重要的一步6]。

克拉霉素是最首选抗生素幽门螺旋杆菌根除,但根除率从88%下降到20%由于克拉霉素耐药性。不过,克拉霉素仍然是世界上第一个治疗方案(7,11]。克拉霉素阻力位料在不同地区以不同的速率。欧洲的研究表明,克拉霉素耐药性已从1998年的9%增加到2008年的17.6%。在日本,电阻率,在2000年是7%,2006年为27.7% (14]。根据研究在法国,克拉霉素的耐药性从1997年的14.3%增加到2014年的22.2%。根据5马斯特里赫特准则,当克拉霉素的耐药性增加到超过20%,二线治疗应该从治疗应用通过移除克拉霉素(15]。克拉霉素抵抗在土耳其是在16.4%和48.2%之间。克拉霉素被发现40.5%的阻力在2008年由Sezgin等人在梅尔辛(16]。在研究Cukurova地区早在2011年,克拉霉素被发现7.7%的阻力与蓝et al。17在2013年[],36.7%7在安卡拉,Macin等人发现,30.1%在2015年(18]。

在我们的研究中,克拉霉素抗性被发现39.7%的基因型®HelicoDR(德国海恩生命科学)装备和33.3%的实时PCR方法。这些结果表明熟悉的平均电阻率与其他研究发现在土耳其。

基因型®HelicoDR(德国海恩生命科学)装备作为杂交设备;Cambau et al .(2006 - 2009)在法国进行了研究比较克拉霉素和氟喹诺酮类电阻率与麦克风(电性能测试)方法。在这项研究中,敏感性和特异性率94克拉霉素阻力试验的98%和87年98.5%左氧氟沙星阻力试验,分别为(11]。

左氧氟沙星对氟喹诺酮类的活动幽门螺旋杆菌是很重要的。它被用作辅助药物的失败幽门螺旋杆菌根除(19]。然而,左氧氟沙星阻力的研究是少的数量20.]。根据一项研究,根除率是80.8%与克拉霉素当使用左氧氟沙星(96%以上19]。在这项研究由Caliskan et al .,左氧氟沙星的电阻率是29.5%7]。Cağdaş等人发现左氧氟沙星电阻率为18.2% (21]。在巴西,马丁斯和他的同事们发现,11.1% (22]。在巴基斯坦,左氧氟沙星电阻率是62.3%,这项研究由Rajper et al。23]。在这项研究中,我们使用相同的方法,进行氟喹诺酮类耐药性的速率被发现是25.6%。这个速度通常是相关的和在土耳其耐氟喹诺酮类(表2)。

全世界电阻率增加。出于这个原因,磁化率测试之前应该进行治疗,但分子的首选方法是获得更快和更准确的结果幽门螺旋杆菌感染。分子方法也昂贵,似乎很难用常规的基础上。欧洲幽门螺杆菌和微生物群工作组(EHMSG)也在土耳其,幽门螺旋杆菌胃肠病协会工作组支持更和更大的研究这些细菌。等指导马斯特里赫特V /佛罗伦萨EHMSG共识报告包含最近的信息幽门螺旋杆菌。更新,特别是对于根除,应该有更多的研究在这个领域。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

关于这篇文章没有利益冲突。