国际微生物学杂志

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国际微生物学杂志/2020年/文章

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体积 2020年 |文章的ID 8816111 | https://doi.org/10.1155/2020/8816111

Abebe Bizuye, Lashitew Gedamu Christine Bii,以Gatebe,娜奥米·麦纳, 分子识别的放线菌物种合成抗菌银纳米粒子”,国际微生物学杂志, 卷。2020年, 文章的ID8816111, 17 页面, 2020年 https://doi.org/10.1155/2020/8816111

分子识别的放线菌物种合成抗菌银纳米粒子

学术编辑器:Diriba斗牛红布
收到了 2020年8月18日
修改后的 2020年10月17日
接受 2020年11月16日
发表 2020年11月24日

文摘

传染病引起的抗药性细菌导致人类增加相当大的发病率和死亡率在全球范围内。这需要搜索未发现的潜在放线菌分离栖息地的有效生物活性代谢产物和合成metabolite-mediated抗菌银纳米粒子(AgNPs)。本研究的主要目的是确定放线菌分离锡卡废料堆土产生生物活性代谢物合成抗菌AgNPs。的合成metabolite-mediated AgNP证实视觉检测和紫外可见分光光度计,而官能团参与AgNP合成被确定使用红外光谱分光光度计。的抗菌活性metabolite-mediated AgNPs扩散试验进行了测试。放线菌分离鉴定参与合成的抗菌AgNPs 16 s rRNA基因序列分析的基础上完成的。黑暗视觉检测表明,鲑鱼和淡金色的颜色变化是观察到由于KDT32 AgNPs的形成和KGT32代谢物,分别。证实了合成一个特征紫外光谱峰值为415.5 nm为KGT32-AgNP KDT32-AgNP和416海里。红外光谱显示,哦,C = C和s官能团参与KDT32-AgNP的合成,而哦,C = C,碳氢键参与KGT32-AgNP的形成。抑菌圈结果表明KDT32-AgNP显示22.0±1.4毫米和19.0±1.4毫米大肠杆菌伤寒沙门氏菌,而KGT32-AgNP显示21.5±0.7毫米和17.0±0.0毫米,分别。KDT32 KGT32隔离标识为属链霉菌属及其16 s rRNA基因序列存入数据库基因库和MH301089 MH301090加入数字,分别。由于合成AgNPs的杀菌活性,KDT32和KGT32隔离可用于生物医学应用。

1。介绍

细菌是一种常见的传染病病原体可以通过抗生素治疗所产生的次生代谢物生产微生物。然而,细菌病原体收购阻力通过误用和滥用抗菌药物的化学物质。获得性耐药,抗菌通过染色体基因突变或可能发生水平基因转移通过传导、结合和转换(1]。这些减少抗菌的条目和改变抗菌药物的抗菌目标和代谢失活(1]。这些人类的发病率和死亡率增加2)对临床有着相当大的影响和全球经济问题3,4]。

大肠杆菌,沙门氏菌spp。志贺氏杆菌spp。,弧菌种虫害经常发生耐药革兰氏阴性细菌在东非地区(5]。耐阿莫西林、功效、四环素、萘啶酸、头孢曲松钠、环丙沙星、氧氟沙星已经报道了大肠杆菌隔离(6]。沙门氏菌种虫害显示阻力对氟喹诺酮类原料药、头孢曲松钠、环丙沙星和阿奇霉素7]。此外,大多数志贺氏杆菌种虫害隔绝的孩子在医院里显示耐四环素和功效8),这表明需要有效的抗菌药物。

随着对大部分抗菌药物耐药病原体,纳米吸引了注意力(9]。吸附,生物体内积累、生物矿化和biodetoxification微生物性质让它们潜在的纳米工厂(10]。细菌,微生物的主要群体,是潜在的生物活性代谢物合成抗菌AgNPs[来源11]。先前的报道表明,放线菌能产生具有生物活性的化合物,能够减少盐AgNPs(银12]。他们是不同组的生物活性化合物的来源能够合成抗菌AgNPs [13- - - - - -16]。特别是,AgNPs的合成生物活性代谢物链霉菌属种虫害显示抗菌活性大肠杆菌伤寒杆菌(17- - - - - -20.]。

埃塞俄比亚和肯尼亚土壤放线菌分离产生生物活性代谢物显示抗菌活性大肠杆菌,伤寒杆菌和鲍氏(21- - - - - -25]。然而,使用生物活性代谢产物的合成抗菌AgNP地位由放线菌产生的孤立从东非地区是有限的。废料堆网站在这一地区的土壤是未开发的领域之一。这些网站可能包含不同类型的营养素(碳源、氮源、矿物质和金属银等),这样可以找到各种生物活性代谢物产生潜在的放线菌。此外,抗菌的概率代谢物生产放线菌bioreduction涉及的金属,如银高。本研究的主要目的是确定放射菌类孤立隔绝锡卡废料堆土(肯尼亚中部),生产生物活性代谢产物的合成抗菌AgNPs。

2。材料和方法

2.1。测试细菌病原体

大肠杆菌,伤寒沙门氏菌,志贺氏杆菌鲍氏是人类细菌病原体用于执行在体外抗菌感受性测试。他们是临床分离株来自亚特兰大疾病(肯尼亚医学研究所,真菌学实验室)。

2.2。生物活性代谢产物的制备

KDT32和KGT32孤立隔绝复合土样来自Kiganjo废物垃圾场在锡卡,肯尼亚中部地区,被用于生物活性代谢物为本研究做准备。获得选择性分离和筛选KDT32和KGT32以前描述(22]。

代谢物准备从隔离是根据Składanowski et al。26]。浮在表面的游离(二级生物活性代谢物)是由离心5000 rpm 25分钟,过滤了0.22µ米孔隙大小的滤纸7-day-old文化。

2.3。银纳米粒子的合成、视觉检测和紫外可见光谱分析

AgNPs的合成做了根据Składanowski et al。26]。代谢物的混合物(1:1)解决方案和10毫米硝酸银溶液制备硝酸银溶液的硝酸银溶液(10毫米或1.6987 g AgNO3/1 L无菌蒸馏水)七天,孵化出了28°C。

颜色变化和反应溶液吸收强度的测量在每个反应天间隔评估通过视觉观察和使用6800双光束紫外可见分光光度计(英国Jenway),分别。紫外可见分光光度计是用来证实紫外光谱特征峰的存在在400到500纳米之间。AgNPs合成的类型由KDT32代谢物和KGT32隔离被表示为KDT32-AgNP KGT32-AgNP,分别。

2.4。红外光谱用于AgNPs合成生物分子的光谱分析

红外光谱分析的样品制备metabolite-mediated AgNPs是根据Abd-Elnaby et al。(2016)17]。0.22合成AgNPs过滤后使用µ米孔隙大小滤纸在5000转离心25分钟紧随其后。丸是用无菌蒸馏水洗净之后,离心,上层的丢弃。此步骤重复了三次删除从metabolite-mediated纳米颗粒飘散的代谢物。

球被放在溴化钾(KBr)光盘和分析使用红外光谱分光光度计(力量α模型、德国)透光率模式的范围4000 - 400厘米−1波数在4厘米−1解决方案(27]。红外光谱谱的结果只代谢物和metabolite-mediated AgNPs记录的比较带形状,带位置,带强度的变化。

2.5。测试AgNPs的抗菌活性

合成AgNPs(丸)和代谢物冻干粉使用冷冻干燥机。的抗菌活性metabolite-mediated AgNPs被扩散分析评估(10]。病原体(大肠杆菌,伤寒杆菌,鲍氏血清)是生长在穆勒辛顿琼脂板上。殖民地被悬浮在5毫升无菌水的试管和调整到0.5麦克法兰(浊度标准28]。悬浮液是穆勒辛顿平皿上擦洗。股票的解决方案(2毫克/毫升)是从AgNO准备的3,KGT32-AgNPs KDT32-AgNPs和代谢物KDT32 KGT32。链霉素(0.1毫克/毫升)和水作为一个积极的和消极的控制,分别。从每个解决方案,80年µl是添加到每个好,盘子在37°C孵化18小时确定抑菌圈。

2.6。特征识别的隔离

殖民地和细胞形态、过氧化氢酶试验、pH值,和盐浓度耐量试验是根据先前的报道(29日]。KDT32和KGT32基因组DNA的提取和纯化QIAamp迷你工具根据制造商的指示30.]。放大16 s rRNA基因从基因组DNA KDT32 KGT32隔离是通过使用243 f (5′-GGATGAGCCCGCGGCCTA-3′)和A3R (5′-CCAGCCCCACCTTCGAC-3′)引物(如前所述31日]。的质量和完整性放大基因产物经凝胶电泳根据陈et al。32]。基因产品被送到Macrogen (1105 az荷兰阿姆斯特丹)和排序根据制造商的指示。

获得序列的质量检查,修剪,准备使用BioEdit软件和大型7共识序列。共识16 s rRNA来自当地分离株基因序列提交基因库来加入基因库号码(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/Sequin/)使用片工具/程序从NCBI web服务器(33]。

序列相似性搜索共识是通过NCBI (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)[32)和EzTaxon-e (http://eztaxon-e.ezbiocloud.net/)[34)数据库得到最接近参考序列。从EzTaxon-e获得最接近参考序列数据库用于系统发育分析使用大型7软件包。多个序列分析为参考序列和序列从当地隔离是通过使用CLUSTAL W (32]。从这些字符矩阵和距离矩阵生成的最大似然(ML)和neighbor-joining (NJ)树结构,分别。邻居加入,ML算法从大型7软件包被用来构建系统发育树。树拓扑(分支模式)被引导验证值计算到1000年重新采样复制(32]。

2.7。数据分析

抑菌圈的平均值±标准偏差值的比较进行了用单向方差分析排名图基的多个范围测试与描述性分析SPSS版本20。的差异进行了测试 < 0.05(95%概率水平),所有统计值 < 0.05在统计上显著不同。序列相似性KDT32 KGT32序列与参考序列的描述使用百分比。隔离的分类学地位相比,最近的参考序列推断出了建筑的性格和距离矩阵的基础上,系统发育树和验证通过引导价值。

2.8。道德的考虑

进行了抗菌活性试验在体外对细菌的人类病原体和亚特兰大。这些不需要任何特定的和严格的许可。

3所示。结果

3.1。放射菌类Metabolite-Mediated抗菌银纳米粒子的合成及表征
3.1.1。视觉检测和分析,紫外可见光谱Metabolite-Mediated AgNPs

视觉和分光光度计检测证实KDT32和KGT32代谢物都成功地合成了AgNPs(数字1- - - - - -3)。KDT32-AgNPs的形成和KGT32-AgNPs观察颜色变化从稻草到黑暗的鲑鱼(图1(一))和稻草淡金色的杆(图1 (b)),分别。

KDT32-AgNP和KGT32-AgNP代表银纳米颗粒由KDT32代谢物(由KDT32隔离)和KGT32代谢物(由KGT32隔离),分别。

从数据观察23,没有证据的特征吸收峰扫描范围400 - 500 nm的反应溶液的混合和控制(和AgNO代谢物的解决方案3解决方案)(图23)。然而,KDT32-AgNO的反应的解决方案3和KGT32-AgNO3表现出一个明确的激励或特征峰后5天反应(数字23)。

KDT32-AgNP逐步的形成增加了吸收强度从1.3872到1.6925随着反应时间的增加从5到7天,分别为(图2)。观察一个清晰的特征峰的形成和集中在411.5和415.5 nm,分别(图2)。

KGT32-AgNPs形成也显示增加吸收强度从1.1331到1.3665,下降到1.0114,反应时间从5增加(图6 - 7天3)。最大的谱峰的位置也显示与未成年人转移中心413.5 nm,分别为416海里,至416.5纳米(图3)。

3.1.2。使用红外光谱用于AgNPs合成生物分子的识别

红外光谱结果表明,KDT32代谢产物表现出强劲和介质吸收带在不同波数(3774.79,3386.91,2090.27,1638.98,1396.67,和461.42厘米−1)(图4)。媒介和锋利的乐队在3774.79厘米−1和强大的宽带在3386.91厘米−1o - h键发出的。介质带在2090.27厘米−1和强烈的乐队在1638.98厘米−1代表nc(异硫氰酸酯)伸展和C = C(烯烃)延伸,分别。介质带在1396.67厘米−1和强烈的乐队在461.42厘米−1分别代表有机硫酸延伸和段s。

KDT32-AgNPs结果显示改变的红外光谱谱带位置、强度和形状的光谱相比KDT32代谢物(图4)。这表明,官能团参与KDT32-AgNP的形成。红外光谱光谱KDT32-AgNPs显示一个强大和宽带在3391.31厘米−1分配给的伸缩振动哦。此外,强大的和尖锐的乐队也观察到1640.85(拉伸的C = C -)和445.93厘米−1(s)的拉伸。带位置的转移从3386.91到3391.31厘米−1,1638.98 - 1640.85厘米−1,461.42 - 445.93厘米−1可能表明AgNPs生物分子的绑定(图4)。这些乐队的转变表明,-哦,C = C, s KDT32代谢物的官能团参与KDT32-AgNPs的合成。

KGT32代谢产物的红外光谱显示,有四个强大的乐队(3117.76,2074.04,1603.98,和743.82厘米−1)和一个中等乐队(1392.90厘米−1形成(图)5)。这些波数分配的乐队OH-NCS或(异硫氰酸盐),C = C,碳氢键,计划弯曲,分别和s。此外,红外光谱谱KGT32-AgNPs表示,有三个强大的乐队观察到3408.99,1639.15,451.60厘米−1显示转变带的位置、形状和强度(图5)。将乐队的位置从3117.76到3408.99厘米−1,1603.98 - 1639.15厘米−1,743.82 - 451.6厘米−1表明,哦,C = C,碳氢键官能团参与Ag)的减少+和KGT32-AgNPs的限制。

3.1.3。抗菌活性评价Metabolite-Mediated AgNPs

的抑菌圈KDT32-AgNP KGT32-AgNPs以及相应的粗提取物表现出抗菌活性大肠杆菌伤寒杆菌(图6)。

的抑菌圈KDT32-AgNPs(19.0±1.4毫米)伤寒杆菌的抗菌活性高于KDT32原油提取(15.0±0.0毫米)(表吗1)。同样,KGT32-AgNP(17.0±0.0毫米)显示略好抗菌活性伤寒杆菌相比,原油提取KGT32(15.5±0.7毫米)和AgNO3(表(15.5±0.7海里)1)。


生物活性 抑菌圈(mm)对选定的致病菌
大肠杆菌 伤寒杆菌 鲍氏血清

KDT32 19.0±1.4b 15.5±0.7c 0±0.0c
KGT32 20.5±0.7b 15.0±0.0c 0±0.0c
KDT32-AgNPs 22.0±1.4b 19.0±1.4b 0±0.0c
KGT32-AgNPs 21.5±0.7b 17.0±0.0公元前 0±0.0c
AgNO3 20.5±0.7b 15.5±0.7c 11.0±0.0b
STP 29.0±1.4一个 25.5±0.7一个 25.5±0.7一个
消极的控制 0±0.0c 0±0.0d 0±0.0c

STP(链霉素或积极的控制),无菌水(负控制)和0(无活动观察)。值意味着±SD。的值没有共享一个共同的上标字母(一个>b>c>d)在同一列是明显不同的 < 0.05。
3.2。隔离KDT32和KGT32的识别
3.2.1之上。表型特征的隔离KDT32 KGT32

KDT32和KGT32菌落的颜色是黄色和白色的光,分别(图7和表2)。殖民地的形状和纹理的隔离是圆形和努力,分别。当地分离株革兰氏阳性细菌和丝状细胞形状和产生过氧化氢酶酶(图7和表2)。


特征 KDT32 KGT32

殖民地 颜色 淡黄色 白色的
形状(形式) 圆形 圆形
纹理 很难挖 很难挖
革兰氏染色反应 积极的 积极的
细胞形状 丝状 丝状
过氧化氢酶试验 积极的 积极的
增长的pH值范围 6 - 12 5 - 12
增长盐范围 0 - 7% 0 - 9%

KDT32和KGT32隔离增长pH值范围6 - 12和5 - 12,分别和他们也增长0 - 7%和0 - 9%氯化钠的浓度,分别(表2)。

3.2.2。放大16 s rRNA基因产物的分析

凝胶的结果证实,放大产品的乐队KDT32和KGT32 bp大小(图1000年和2000年之间8)。

3.2.3。序列分析鉴定KDT32 KGT32隔离

GC (Guanine-Cytosine)内容KDT32和KGT32序列是58.32%和59.6%,分别为(表3)。NCBI-BLASTn相似性搜索显示,有多个热门的成员链霉菌属孤立的物种。第一个头条显示KDT32序列的序列相似性链霉菌属sp。MBE174 (AB873097.1)(图9)。KDT32序列相似性和覆盖范围链霉菌属sp。MBE174显示分别为99%和100%(表3)。KDT32序列的两两比对结果显示几乎一致的基础的基础链霉菌属sp。MBE174主题之间的序列核苷酸位置(坐标)417年和1401年(图10)。然而,有一个缺口1378核苷酸位置观察到链霉菌属sp MBE174序列和T核苷酸是961年在核苷酸位置KDT32序列(图10)。


隔离 加入数量 长度(bp) GC 含量(%) 最近的比赛 加入数量 身份 查询覆盖率(%) E价值

KDT32 MH301089 986年 58.32 链霉菌属sp。MBE174 AB873097.1 99% (985/986) One hundred. 0.00
KGT32 MH301090 948年 59.6 链霉菌属sp.应变SP4-AB2 MH013316.1 99% (946/948) One hundred. 0.00

“孤立”的代码是我们的应变与锡卡浪费阻尼土”长度(bp) ”的总大小是16 s rRNA从分离获得的基因序列;“GC 内容”的比例是鸟嘌呤与胞嘧啶碱基对序列的总隔离:明星( )表明,结果证实EzTaxon-e和NCBI-BLASTn数据库;最接近的匹配”是最相似的物种从数据库隔离;加入“数字”是16 s rRNA基因序列ID的最相似的物种;“身份是16 s rRNA基因序列的相似性的隔离和壁橱里匹配物种序列;“查询报道”的比值序列从我们隔离对齐到最接近的物种从数据库中获得。

链霉菌属sp.应变SP4-AB2 (MH013316.1)是第一个最高最接近的物种KGT32隔离(图11)。KGT32序列是与28 - 975核苷酸链霉菌属sp.应变SP4-AB2序列(图12)。KGT32序列相似性和覆盖范围链霉菌属sp.应变SP4-AB2序列分别为99%(946/948)和100%,分别。对齐的统计数据显示,有946个核苷酸的948个(图保持一致12)。因此,有两个核苷酸不匹配两个序列(表之间的(2/948)3和图12)。首先观察到的是一个不匹配GKGT32序列的位置159和186的位置链霉菌属sp.应变SP4-AB2序列,而第二个不匹配是在866 KGT32序列的位置G在893的位置链霉菌属sp.应变SP4-AB2序列(图12)。

EzTaxon-e服务器搜索结果证实,30岁链霉菌属物种显示99.19% - -99.8%的序列相似性KDT32隔离(图13)。链霉菌属lavenduligriseus应变NRRL isp - 5487是第一个顶部接近KDT32触及99.8%,显示序列相似性序列(表4)。在这种情况下,985/986的英国石油公司KDT32的序列是在403年和1388年之间的顺序保持一致美国lavenduligriseus应变NRRL isp - 5487。KDT32的数量之间的不匹配的核苷酸序列美国lavenduligriseus应变NRRL isp(表2 - 5487个基点4)。


隔离 完整性(%) 第一个最高达到分类单元 第一个最高达到应变T 加入数量 相似度(%) Diff / nt总 最高达到分类

KDT32 68年 链霉菌属lavenduligriseus NRRL isp - 5487T JOBD01000085 99.8 2/985 细菌D
放线菌P
放线菌CStreptomycetalesO
链霉菌科F
链霉菌属G

KGT32 65.5 链霉菌属albidoflavus ATCC25422 & DSM40455T Z76676 99.79 2/847 细菌D
放线菌P
放线菌C
StreptomycetalesO
链霉菌科F
链霉菌属G
链霉菌属koyangensis VK-A60T AY079156 99.79 2/947
链霉菌属hydrogenans NBRC 13475T AB184868 99.79 2/947
链霉菌属daghestanicus NRRL b - 5418T DQ442497 99.79 2/946
链霉菌属violascens ISP 5183T AY999737 99.79 2/945

“完整性”的比例是我们的序列全长序列的长度;“高级分类单元”是第一个衣橱物种数据库中;“第一大应变T“是第一个衣橱应变类型;“入世”的ID是衣橱物种数据库中;“相似”是序列相似性壁橱里物种和我们的隔离;“不同/总核苷酸”之间的不匹配的碱基对壁橱物种数量和隔离的总数相比序列;“分类”的分类层次结构isolate-based 16 s rRNA基因序列从域(细菌)属(链霉菌属){D =域,P =门,C =类,O =订单,F =家庭,G =属}

同样,30链霉菌属物种从EzTaxon-e获得数据库显示,99.26% -99.79%序列相似性KGT32隔离(图检索9)。四株显示99.79%的序列相似性KGT32序列。第一个最顶级最接近的物种KGT32序列的顺序链霉菌属albidoflavus应变DSM40455(表4)。,947/948的英国石油(bp)的序列KGT32是符合264 - 1211 bp的序列范围美国albidoflavus应变DSM40455。KGT32和之间的数量不匹配的核苷酸美国albidoflavus应变DSM40455是2/947(表4)。因此,隔离KDT32 KGT32属于链霉菌属物种和沉积在基因库数据库MH301089和MH301090基因库加入数字,分别。

3.2.4。分子系统发育分析KDT32和KGT32隔离

KDT32和KGT32序列的顺序从60岁链霉菌属类型菌株从EzTaxon-e检索数据库进行了分析使用NJ和ML算法看到当地分离株(图的分类位置13)。结果树显示,当地的隔离在不同分类位置(图中被发现13)。它还证实,当地分离株显示不同的进化枝链霉菌属物种从EzTaxon-e检索数据库。

新泽西和ML树分析的结果证实了KDT32隔离形成一个单元进化枝链霉菌属nodosus写明ATCC 14899株(CP009313;图13)。此外,KDT32和序列美国nodosus写明ATCC 14899显示,99.79%应变序列相似(表4)。另一方面,KGT32形成了一个独特的进化枝链霉菌属fabaeT66 (KM229360)和链霉菌属cinerochromogenesNBRC13822 (AB184507)。KGT32序列序列相似性与显示,99.68%和99.58%美国fabaeT66 (KM229360)和美国cinerochromogenes分别为NBRC13822 (AB184507)(图13)。因此,这些确认当地分离株产生生物活性代谢物能够抗菌银纳米粒子的合成是属分组链霉菌属物种。

4所示。讨论

视觉检测的研究显示,KDT32 metabolite-AgNO3和KGT32 metabolite-AgNO3反应溶液显示黑色鲑鱼和淡金色杆颜色变化,分别。这可能表明bioreduction Ag)+和形态学指标检测AgNPs的合成。的合成AgNPs滤液从游离链霉菌属rocheiMHM13 AgNO处理3显示淡黄色颜色改变(17]。在其他的研究中,AgNPs代谢物的合成链霉菌属sp。LK3 [35),S。parvulusSSNP11 [19),链霉菌属sp。NH21 [26),而链霉菌属SS2 sp。(36显示一个深棕色的颜色变化。这些颜色变化由于可见光的吸收和银表面等离子体共振的影响。颜色变化的差异可能是由于不同类型的生物分子参与bioreduction Ag)+AgNPs和限制。这些显然表明KDT32和KGT32代谢物有潜力减少Ag)+形成了AgNPs。

吸收强度的结果显示,最大的光谱峰值集中在415.5和416 nm KDT32-AgNP KGT32-AgNPs,分别。先前的研究显示,典型的AgNPs显示最大紫外吸收光谱的峰值在400年和500纳米之间,这是一个可靠的标准指示AgNPs的形成。银纳米粒子合成的代谢产物链霉菌属rocheiMHM13显示特征峰在410纳米17]。银纳米粒子合成的代谢产物链霉菌属SS2 sp。(36),链霉菌属sp。LK3 [35]显示特征峰在420海里。另一项研究表明,紫外可见光谱AgNPs合成的代谢产物链霉菌属sp。NH21观察在402和424海里26]。

官能团参与合成的纳米颗粒被确定通过观察红外光谱的变化,乐队的位置,形状,和强度相比,AgNPs代谢物的光谱带。乐队的位置变化从3386.91到3391.31厘米−1,1638.98 - 1640.85厘米−1,461.42 - 445.93厘米−1o - h键发出表明,C = C, s KDT32代谢物的主要官能团参与KDT32-AgNPs的合成。同样,带位置的转变从3117.76到3408.99厘米−1,1603.98 - 1639.15厘米−1,743.82 - 451.6厘米−1揭示了地,C = C,碳氢键从KGT32代谢物生物分子参与KGT32-AgNPs的合成。这乐队峰转变改变代谢物和代谢物由AgNPs生物分子的存在表明,参与Ag)的减少+AgNPs和限制。报道,抗菌化合物活性基团,如氨基和羟基减少Ag)+和帽子AgNPs18]。另一项研究表明,活性官能团地(3417厘米−1)[35)是参与减少Ag)+和抗菌AgNPs的限制。同样的,早些时候的研究报道,-哦(3384厘米−1)是一个功能组用来减少Ag)+和限制AgNPs [37]。这些显然表明KDT32 KGT32隔离和代谢物的来源有潜在官能团减少Ag)+和限制AgNPs。

生物测定研究KDT32-AgNP KGT32-AgNP显示,抗菌活性大肠杆菌伤寒杆菌。KDT32-AgNP反对的抑菌圈大肠杆菌伤寒杆菌是22.0±1.4毫米和19.0±1.4毫米,分别。同样,KGT32-AgNP透露的抑菌圈21.5±0.7毫米和17.0±0.0毫米大肠杆菌伤寒杆菌,分别。然而,目前的研究表明,没有观察到对抗菌活性鲍氏血清和一个类似报告的结果是Chauhan et al。18]。先前的报告显示,AgNP合成链霉菌属rocheiMHM13代谢物显示16毫米和18毫米抑菌圈大肠杆菌伤寒杆菌分别为(17]。在另一项研究[36),AgNP合成的代谢产物链霉菌属SS2 sp。显示18.25±1.5毫米抑菌圈大肠杆菌。银纳米粒子合成了美国parvulusSSNP11代谢物显示26毫米抑菌圈伤寒杆菌(19]。这些显然表明KDT32和KGT32代谢物介导的合成抗菌AgNPs与潜在的生物,可用于生物医学应用。

目前的研究表明,KDT32和KGT32分离株革兰氏阳性,有丝状细胞形状,和生产过氧化氢酶酶增长6 - 12和5 - pH值0 - 7%和0 - 9%氯化钠的浓度,分别。这是与研究抗菌代谢物生产协议链霉菌属物种从土壤分离显示增长4和12 pH值和0 - 7%盐浓度(38,39]。

NCBI-BLASTn搜索结果表明KDT32分离序列显示,99%序列相似性的序列链霉菌属MBE174 sp。的生物医学和制药应用链霉菌属sp。MBE174是未知的。此外,基于EzTaxon-e数据库搜索结果,KDT32隔离的顺序显示,99.8%序列相似性年代lavenduligriseus应变NRRL isp - 5487产生多烯大环内酯类(pentenomycine II, pentenomycine三世和narangomycine) (40]。

同样,KGT32隔离显示99%相似的序列链霉菌属sp.应变SP4-AB2 (MH013316.1)医疗和工业角色但尚未确定。EzTaxon-e相似性搜索表明KGT32分离序列显示,99.79%相似美国albidoflavus应变DSM40455,美国koyangensis应变VK-A60,美国hydrogenans应变NBRC 13475,美国daghestanicus应变NRRL b - 5418,美国violascens5183株ISP。这些微生物在生产不同的抗菌化合物如paulomycin paulomycin B (41),4-phenyl-3-butenoic酸(42),放线菌素D (43],缬氨霉素(44),分别。与当地分离株KDT32 KGT32,这些参考文献搜索的作用链霉菌属物种、合成并没有被报道。

种系发生树由KDT32 KGT32,从EzTaxon-e数据库检索和参考序列显示的分类地位KDT32和KGT32隔离形成不同的演化支属的成员链霉菌属。新泽西和ML树推断KDT32隔离形成一个单元进化枝美国nodosus写明ATCC 14899株序列相似度99.7%。链霉菌属nodosus在抗真菌抗生素的生产(多烯大环内脂类抗菌素,两性霉素B) (45)和其他生物活性化合物(多酮类化合物、多肽、含铁细胞和萜烯)(46]。另一方面,KGT32隔离形成了不同的进化枝美国fabae应变T66和美国cinerochromogenes应变NBRC13822。链霉菌属fabae而闻名的生产抗菌和抗真菌抗生素47),美国cinerochromogenes生产cineromycin B在antiadipocyte分化的作用[48]。然而,这些参考的作用链霉菌属物种、合成是未知的。因此,不仅KDT32和KGT32隔离产生抗菌代谢物也代谢物能够合成抗菌AgNPs。

5。结论

生物活性代谢物从KDT32 KGT32隔离合成抗菌AgNP (KDT32-AgNP和KGT32-AgNP)大肠杆菌伤寒杆菌但不反对鲍氏血清。由于其合成AgNPs的杀菌活性,因此,KDT32和KGT32代谢物可用于抗菌活性在不同的生物医学应用。KDT32和KGT32隔离产生生物活性代谢物合成抗菌AgNPs被确定为链霉菌属物种。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

本研究工作是由非洲联盟委员会(ADF CNM / BD / WP / 2013/68)和日本国际合作机构(JICA) CNM(00025),和作者还要感谢学院。作者也感激PAUISTI分子和生物技术实验室,KIRDI,亚特兰大,JKUAT化学实验室工作人员允许实验室设施用于这项研究工作。第一作者也承认贡德尔大学给了他支持材料用于本研究。

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