文摘
进行横断面研究在小、中、大型奶牛场Holeta区隔离,标识,及药敏的状况大肠杆菌O157: H7原料奶的奶牛。共有210个泌乳奶牛被选为原料奶样品,和19%(40/210)被认为是积极的大肠杆菌而5.2%(11/210)被证实大肠杆菌O157: H7积极使用大肠杆菌O157乳胶试验。因此,所有大肠杆菌非常容易环丙沙星(100%)、庆大霉素(100%)、(100%)、土霉素和四环素(63.63%)。此外,阻力的72.73%,54.54%,54.54%,和45.45%开发头孢西丁,Sulphamethoxazole,邻氯青霉素和链霉素。因素如平价、年龄、身体条件、群体大小、牛奶产量,乳房卫生,和乳腺病变显示统计学意义( )协会的发生大肠杆菌在奶牛感染。总之,在这项研究中,患病率越高大肠杆菌O157: H7及其药敏资料对公众的健康警报,农场主人和创造意识和社区的建议。
1。介绍
牛奶和奶制品是被全球数十亿人日常和有价值的营养因素,如蛋白质、脂质、矿物质和维生素(1,2]。因此,重要的是要确保牛奶和乳制品的微生物质量(3]。食源性疾病是一个重要的公共卫生挑战;特别是发展中国家在很大程度上影响由于时局不好的食品处理和卫生习惯,食品安全法律不足,监管系统薄弱,缺乏财政资源4,5]。食源性疾病是由细菌引起的包括致病性大肠杆菌,沙门氏菌,弯曲杆菌,李斯特菌,鼠疫,志贺氏杆菌,肠杆菌属,而大肠杆菌和沙门氏菌物种记录为食源性疾病和食物中毒的主要原因6,7]。
大肠杆菌O157: H7是最重要的细菌性病原体引起危及生命的感染如出血性结肠炎(HC),腹痛、腹泻带血、溶血性尿毒症综合征和肾功能衰竭特别是人类在全球范围内(8,9]。牛奶及其他乳制品主要是污染大肠杆菌O157: H7在直接接触粪便由于处理系统不佳,导致肠道或extraintestinal疾病(10,11]。的高患病率大肠杆菌O157: H7的乳制品可能是由于不当挤奶卫生,可怜的房子卫生,缺乏postmilking奶头浸渍和练习的牛奶接触劳动使用润滑剂,和没有挤奶不同年龄的顺序。此外,它的出现是在奶牛场没有明显的农场治疗(12]。
志贺产毒大肠杆菌(STEC),也称为verotoxin生产大肠杆菌这些菌株大肠杆菌至少产生一个强大的细胞毒素类成员称为志贺毒素(13,14]。众多零星的感染和志贺产毒引起的暴发大肠杆菌O157: H7 (STECO157)已报告在美国和世界其他地方。大多数STEC O157食源性感染;许多人与牛来源有关。STEC O157首次与1982年爆发的严重腹泻带血和通常被称为一个“最近出现了“人类病原体15]。肠出血性大肠杆菌(肠出血性大肠杆菌)菌株是维罗(志贺毒素)的亚型(发行或Stx)第大肠杆菌(VTEC或STEC) (3,16]。
在埃塞俄比亚,食用生的(未经高温消毒的牛奶很传统,和受污染的牛奶和奶制品是最常见的传播途径大肠杆菌O157: H7从动物传给人类。尽管这种疾病所致大肠杆菌非常重要的国家和伟大的公共卫生问题,大肠杆菌O157: H7已收到很少考虑在许多先前的公共卫生研究。大多数以前的研究在有限的领域和传播不能代表的发生率大肠杆菌O157: H7在不同管理和生态环境。因此,本研究进行隔离并标识的药敏模式大肠杆菌O157: H7从原料奶的奶牛和Holeta奶牛场。
2。材料和方法
2.1。研究区域
这项研究是在选定的奶牛场进行Holeta镇从2018年12月到2019年6月。Holeta位于埃塞俄比亚中部Oromia国家地区国家,西昭和区,从亚的斯亚贝巴29公里的距离。它的天文位置纬度/经度:9°00′N和38°30′E经度和海拔2400米的高度。它有一个经验的双峰雨季降雨模式,主要发生在6月和9月之间,从三月到五月短雨季。平均年降雨量为1144毫米(17]。
2.2。研究动物
研究动物在选择泌乳奶牛的农场和村庄Holeta小镇。抽样单位是个体泌乳奶牛在农场正在研究。哺乳期本地(原住民)瘤牛、荷斯坦黑白花奶牛和荷斯坦黑白花奶牛交叉与当地瘤牛品种在小,中型和大型奶牛场Holeta城镇人口和环境研究基于他们的管理系统和所有者的意愿。
2.3。研究设计和样本大小
Holeta区横断面研究。乳制品持有人名册是获得有关的身体,和农场被归类为小,中型和大型的基于奶牛的数量,和农场和家庭选择简单随机抽样从列表中同时保持比例尽可能接近对方。选中所有泌乳奶牛农场被包括在研究和总共有210头牛从十六个奶牛场选择采样一个简单随机抽样方法。
2.4。研究方法
2.4.1。数据收集方法
开发了一个问卷调查,研究目标和所有相关的信息被记录。母牛关卡和收集的数据包括地址和相关因素,包括奶牛时代,平价,品种,存在病变乳房或乳头的皮肤和挤奶实践,牛的主人洗手和乳房前后挤奶,洗手和乳房挤奶前,干挤奶前乳房,和只在挤奶前洗手;挤奶的类型和类型的地板是通过观察和访谈获得不同的农场服务员和老板。动物的年龄决定从出生记录和牙齿特征和分类作为一个年轻的成年人(3到6年),成年人(> 6到9年),旧的(> 10)。平价是分为几个(1 - 3小腿),中等(3 - 6小腿),和许多(6及以上小牛)。
2.4.2。牛奶样本收集和培养
共收集210份新鲜牛奶样本在消毒容器(瓶)和基于临时标签ID给一头牛,保存在一个热水瓶的冰箱,运送到亚的斯亚贝巴大学兽医微生物学实验室文化的牛奶样品的分离和鉴定大肠杆菌O157: H7。考试后5小时内的牛奶样品进行收集。所有牛奶样本处理细菌,不同生化测试是根据程序执行受雇于奎因et al。18]。
2.4.3。细菌的分离和鉴定
的分离和鉴定大肠杆菌O157: H7是使用技术执行推荐的奎因et al。18]。
(1)培养。无菌循环被浸入牛奶样本解冻,飞跑到MacConkey琼脂板的微分媒体的识别大肠杆菌在37°C和孵化24小时。再假定精选典型和非典型殖民地亚文化在选择性培养基上伊红美蓝(EMB)琼脂和孵化24小时37°C。形态典型的殖民地产生金属光泽(19),在同等条件下获得纯粹的殖民地大肠杆菌。接下来的24小时孵化后,well-isolated殖民地被选中和亚文化进一步在营养琼脂(NA)用于生化确认。
(2)生化确认大肠杆菌。对于初级和二级生化测试,纯文化的单个菌落琼脂MacConkey转移到营养琼脂板。测试如氧化酶、过氧化氢酶、吲哚、甲基红、Voges-Proskauer (VP)和柠檬酸(IMViC)测试进行确认的存在大肠杆菌在测试样品。殖民地的阳性色氨酸利用率(吲哚试验)(红圈),积极对甲基红,柠檬酸为阴性利用率(绿色斜)和阴性Voges-Proskauer (VP)测试被认为是大肠杆菌积极的。(18]。此外,菌落的革兰氏染色法是无菌玻璃滑如Cheesbrough所述20.]。隔离的假定大肠杆菌上所有生化测试讲究的山梨糖醇MacConkey琼脂为进一步测试乳胶凝集试验。
(3)由大肠杆菌O157乳胶凝集试验筛选试验。乳胶凝集试验采用使用乳胶的筛查工具大肠杆菌O157: H7。Sorbitol-negative(清晰)殖民地表现出形态典型的殖民地大肠杆菌O157: H7头孢克肟每板选镀和传播在亚碲酸盐山梨糖醇MacConkey (CT-SMAC)。孵化24小时之后,一个新的单一的殖民地nonsorbitol发酵罐的山梨糖醇MacConkey琼脂是选择并使用一个受乳胶凝集大肠杆菌O157乳胶工具包。隔离的假定大肠杆菌O157: H7的乳胶凝集试验在营养琼脂培养(NA)进行药敏检测。
2.4.4。抗菌药物敏感性试验
抗生素的敏感性测试大肠杆菌O157: H7隔离进行根据美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS) [21)方法使用Kirby-Bauer磁盘Muller-Hinton琼脂扩散试验。磁盘琼脂扩散法被用来测试常见致病菌快速增长,公认的好工作大肠杆菌O157: H7。可以获得可靠的结果与磁盘扩散测试,使用一个标准化的方法和区域直径测量与最低抑制浓度(MIC),和抑菌圈测量和解释为易感,中间,和基于该标准的抗抑菌圈由临床和实验室标准协会(CLSI) [22]。
纯粹的殖民地在营养琼脂被线圈和转移到管包含5毫升的盐水和乳化。肉汤培养孵化在37°C为4个小时,直到它达到了0.5麦克法兰浊度标准。无菌棉拭子浸入悬挂,和细菌擦洗均匀的表面Muller-Hinton琼脂板在一个无菌安全内阁。板块进行室温15分钟允许干燥。抗生素光盘用已知浓度的抗菌素,在37°C和盘子孵化18 - 24小时。11个不同家庭使用的抗生素(英国Oxoid)趋势的基础上使用这些抗生素不同研究区域(表的农场1)。
2.4.5。数据管理和统计分析
收集的数据被输入到Microsoft Office Excel 2016电子表格和分析使用占据版本13。描述性统计是用来总结生成的数据,和的患病率大肠杆菌O157: H7相关的特定风险因素(群大小,类型的农场,乳腺病变,牛奶产量、类型的地板上,平价,挤奶类型、体况评分,年龄,农场卫生,和乳房卫生)被确定为影响奶牛的比例的总样本。这些特定变量的协会的患病率大肠杆菌O157: H7计算使用卡方(X2)测试。此外,抗生素疗效决定通过比较每种药物的抑制区与标准。一个统计上显著的变量之间的联系被认为是存在的值< 0.05。
3所示。结果
3.1。分离和鉴定大肠杆菌O157: H7
大肠杆菌隔离种植在MacConkey琼脂,伊红美蓝(EMB)琼脂,山梨糖醇MacConkey琼脂被确定基于不同特征生化测试(18]。过氧化氢酶,西蒙的柠檬酸琼脂糖发酵三糖铁琼脂,吲哚生产、Voges-Proskauer,甲基红试验进行。上述媒体的隔离测试通过三糖铁琼脂(TSI)斜面培养法刺法,经过48小时的潜伏期在37°C,黄偏黄色的屁股,出现气泡,而且没有黑色沉淀屁股观察表明大肠杆菌。柠檬酸执行西蒙的测试中,没有观察到的颜色从绿色变成蓝色,甲基红试验,观察酸生产的红色象征,吲哚试验,红圈顶部的文化观察汤,和执行Voges-Proskauer测试中,没有观察到粉红色的颜色变化。
血清学测试也受雇于使用乳胶凝集试验筛选大肠杆菌O157: H7,然后,从40大肠杆菌正样本,十一隔离凝集的测试和作为大肠杆菌O157: H7。最后,210原料奶的奶牛样本检验的存在大肠杆菌O157: H7的详细细菌学和血清学检查,结果表明,总体患病率大肠杆菌为19%,其中5.2%是吗大肠杆菌O157: H7。
3.2。与发生相关的危险因素大肠杆菌O157: H7
在这项研究中,11个因素被认为是潜在的风险因素的发生大肠杆菌O157: H7的研究领域。这些群体大小、类型的农场,乳腺病变,牛奶产量、类型的地板上,平价,挤奶类型、体况评分,年龄、农场卫生,和乳房卫生。
在目前的研究中,年龄是考虑,普遍存在的大肠杆菌O157: H7测量不同年龄组的泌乳奶牛。患病率最高(82.5%)被发现在3 - 6岁的泌乳奶牛,紧随其后的是牛的6 - 9岁(12.5%),和流行率最低的是记录在牛的年龄小于或等于9岁。平价也被认为是作为研究的主要因素,和更高的患病率(87.5%)被记录在生1 - 3牛犊牛,紧随其后的是牛,生下4 - 6小牛(12.5%),最低的患病率在奶牛生大于6小牛(表2)。
在最近的研究中,挤奶实践洗涤和干燥等乳房患病率最高的也有一个重要的角色大肠杆菌O157: H7。有更多的可能性发生在奶牛乳房卫生不良(92.5%)相比,那些经常洗牛(7.5%)。大肠杆菌O157: H7患病率也明显高于牛身体条件较差(55%)比牛中等(40%)和良好的身体条件(5%)。的影响在当前流行的乳腺病变大肠杆菌O157: H7也是研究,结果显示,50%的奶牛有感染乳房被发现感染这种细菌。群大小的发生也起到了至关重要的作用大肠杆菌O157: H7的研究区域,患病率也明显高于在农场有超过42群大小(50%)比农场10-42群大小(37.5%)和小于10群大小(12.5%)(表2)。
显示在表2、群体大小、年龄、类型的农场,乳房或乳头病变类型的地板上,平价,挤奶类型、体况评分,农场卫生,和发现乳房卫生统计学意义值小于0.05。
共11个大肠杆菌O157: H7隔离进行了11个可用抗生素纸片扩散法。从这些隔离,所有很容易环丙沙星(100%)、庆大霉素(100%),和氧四环素(100%)和低对四环素(63.635%),万古霉素(27.27%)、氯霉素(27.27%)、链霉素(9.09%)和甲氧苄氨嘧啶(9.09%)。然而,观察不同比例的抗头孢西丁(72.73%)、Sulphamethoxazole(54.54%)、氯唑西林(54.54%),和链霉素(45.45%)(表3)。
4所示。讨论
本研究进行了评估的患病率大肠杆菌O157: H7从原料奶的奶牛和确定的抗菌药物敏感性大肠杆菌O157: H7西Shewa Holeta及周边地区的区域,Oromia地区埃塞俄比亚的状态。相关的潜在风险因素的发生大肠杆菌O157: H7是探索和贡献大肠杆菌O157: H7 milk-borne病原体一样重要的说明使用乳胶凝集试验使用anti-O157和H7血清。
210生奶样本收集直接从乳房,19%(40/210)的原料奶样品被污染大肠杆菌菌株5.2%(11/210)的隔离是积极的大肠杆菌O157: H7。这一发现的大肠杆菌O157: H7高于Klie et al。23)(3.9%)在德国,Disasa et al。24在Asossa) (2.9%), Allerberger et al。25在奥地利)(3%)。然而,目前发现的结果是低于Bedasa et al。26]在Bishoftu (12%),Mekuria和伊恩27)(10.4%)统治,碱液et al。28在马来西亚(18.75%),Abunna et al。29日]在Asella (8.9%)。
根据该报告的Ranjbar et al。30.在伊朗,患病率大肠杆菌菌株在传统鲜奶和乳制品样品是30.16%。报告Ombarak et al。31日在埃及还显示,普遍的)大肠杆菌菌株在不同类型的乳制品21 - 77%,都高于我们的发现。的总体发病率大肠杆菌菌株在原料奶的样本研究在瑞士32)、伊朗(33)、意大利(34,埃及35)、土耳其(36),中国(37)和西班牙(38)介于1%和27%之间的可比性与我们的流行率。
有一些可能的解释的高发病率大肠杆菌和大肠杆菌O157: H7原料奶的奶牛在我们的研究中。起初,埃塞俄比亚农民特别是小农还用他们的手和传统挤奶设备程序增加传播的危险细菌进入牛奶和乳制品(29日,39,40]。第二,缺乏维护生奶样品在温度低于4°C促进细菌的生存和增殖24]。第三,疾病的发生、不卫生的方式的动物,和众议院可能造成环境污染的牛奶与粪便和受感染的动物粪便41]。致病病原的传播的感染员工挤奶大厅和农场也是另一个潜在的危险因素(30.]。
中潜在的风险因素考虑,年龄、平价、身体条件、乳房卫生、群体大小和乳腺病变发现统计上显著的影响 )。各种牲畜感染的患病率一般群体大小的增加而增加。除此之外,这表明社区的缺乏知识关于畜牧业和大尺寸会影响动物的健康。年龄还发现的发生有关大肠杆菌动物感染,这是更高的老年(≥9)比年轻的人。这可能与动物的免疫系统的防御代理的藏污纳垢之所。本研究的发现也评估的平价倾向大肠杆菌感染(42]。
在这项研究中,普遍存在的大肠杆菌O157: H7是高牛与脏比奶牛乳房的清洁乳房。肮脏的乳房造成有利条件的乘法传染性病原体和环境。乳房卫生也发现显著的发生率大肠杆菌感染。的其他重要因素的发生大肠杆菌本研究感染动物的身体条件。可怜的身体条件是主要的危险因素增加大肠杆菌O157: H7流行,这个因素仍具有统计学意义( )。这可能是与动物的减少国防地位有关。几个因素可能导致身体条件差包括营养不良、寄生虫感染和老年加上生殖压力(2,12,29日]。
耐药性细菌构成全球关注的一个日益严重的问题。抗生素耐药性的发展在细菌等大肠杆菌提出了一个重要的公共卫生问题。治疗的有效性和控制传染病的能力在动物和人类身上可能会严重阻碍因为细菌在环境中很容易传播。相对较高的菌株对常用抗菌药物的许多人类和动物感染的治疗协议(43]。食品污染与耐药性细菌也可以对公众健康的主要威胁,抗生素耐药性的因素可以被转移到其他致病细菌,可能损害严重细菌感染的治疗。抗菌素耐药性的流行期间食源性病原体之间增加了近几十年(44]。
在目前的研究中,所有的11个隔离非常容易受到氧四环素,环丙沙星,庆大霉素,其次是相对较低的对四环素、万古霉素、甲氧苄氨嘧啶。另一方面,目前的研究显示,分离都是高度耐头孢西丁,Sulphamethoxazole,邻氯青霉素,链霉素的比例为72.73%,54.54%,54.54%,和45.45%,分别。本研究的结果是几乎比得上Bedasa等的工作。26]。Momtaz et al。3)报道,抵抗四环素(86.88%)和链霉素(54.91%)是最常报道的抗生素抗发现STEC菌株的腹泻的病人比较与当前的发现。
根据Ranjbar et al。30.在伊朗),大肠杆菌株(6.72%)在医院普遍食物样本而志贺产毒大肠杆菌(STEC)菌株对四环素耐药。与我们的发现、庆大霉素、环丙沙星耐STEC被发现。另一方面,Stewardson et al。45)报道,Extended-Spectrum-Beta-lactamase-producing-Enterobacteriaceae-producing大肠杆菌(ESBL-PE)是最常见的食物样本中发现(44.77%),和ESBL-PE菌株对庆大霉素、环丙沙星敏感。同样,发现Mahanti et al。46]在印度28)显示高患病率的电阻由产志贺毒素大肠杆菌对庆大霉素看到,康等人在韩国(30.)还表明,高患病率的抵抗四环素和链霉素是由产志贺毒素大肠杆菌检测,和卡斯蒂略等人在墨西哥47)也显示高患病率的阻力由产志贺毒素大肠杆菌对甲氧苄氨嘧啶和磺胺甲恶唑。单一药物的阻力的变化可能是由于耐药基因编码的表达与新兴的病原体和隔离的重现方面对不同农业生态学(48]。这可能是由于不适当的使用抗生素治疗疾病或不合理使用抗菌素治疗和预防性治疗(49]。
5。结论
在目前的研究中,大肠杆菌O157: H7的主要污染物是Holeta原料奶的奶牛。在研究区,因素如年龄、平价、身体条件、群体大小、乳房卫生,和病变导致微生物污染的牛奶。检测大肠杆菌的牛奶是公共卫生关注由于其人畜共患的潜力。所有测试分离株对环丙沙星、庆大霉素和氧四环素而隔离是耐头孢西丁、邻氯青霉素、四环素、万古霉素、氯霉素、链霉素、Sulphamethoxazole和甲氧苄氨嘧啶。总之,创造意识到奶农和所有利益相关者在不同层次上对牛奶处理实践应减少废品率变质的牛奶,因为牛奶milk-borne病原体造成污染的牛奶。建议兽医/扩展服务提供牲畜的农民在适当的畜牧业和人畜共患动物疾病的控制。大多数人类疾病是由病原体引起的动物和动物产品,如牛奶和奶制品。然而,污染作为源之一大肠杆菌O157: H7需要预防措施在任何时候在食品生产链。此外,不同的流行病学因素相互作用大肠杆菌发生应经常学习。此外,应该有常规的抗生素敏感性测试大肠杆菌O157: H7选择有效的抗生素,也有助于减少对常用抗生素的耐药性发展问题。
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的利益冲突
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