埃塞俄比亚亚的斯亚贝巴Yekatit 12医院医学院儿科患者分离的尿细菌性病原体流行率和抗菌素敏感性

摘要

出身背景尿路感染（UTI）被认为是儿科患者中最常见的细菌感染。客观的．这项研究的目的是确定儿科患者尿路感染的患病率，确定导致感染的尿路细菌病原体，并研究细菌分离株的抗生素敏感性模式。材料和方法．本研究于2014年1月至4月设计并实施。从384名年龄小于或等于15岁的儿童患者中获得清洁的中段尿液标本，并装在无菌通用瓶中。从每位患者收集的尿液使用容量为0.001 ml的校准接种环接种到cle和血琼脂平板上。接种板37°C有氧倒立培养24-48小时。细菌分离物通过革兰氏染色和一系列标准常规生化试验进行鉴定和特征分析。采用柯比-鲍尔纸片扩散法进行药敏试验。频率分布表被用来描述这些发现。后勤回归也被用来估计粗比值比(COR)与对不同变量的积极响应的95%置信区间(CI)，和小于0.05的值被认为具有统计学意义。后果。在这项研究中，共有384名年龄小于或等于15岁的患者（199名男性和185名女性）被纳入研究。在这些患者中，61名（15.9%）有明显的菌尿。在185名女性中，36名（19.5%）培养阳性，25名（12.6%）培养阳性在199名男性中，有明显的菌尿，3岁以下的受试者人数最多，该年龄组获得的阳性培养最多，占35名（57.4%）从61株阳性培养物中分离鉴定出6个属的细菌，并对其进行了鉴定大肠杆菌，克雷伯氏菌，葡萄球菌，普罗透斯，不动杆菌和大肠杆菌肠球菌28例（49.5%）中分离到病毒，其次是病毒克雷伯氏菌sp . 17例(27.9%);葡萄球菌5例（8.2%）患者感染了spp(金黄色葡萄球菌1例为凝固酶阴性葡萄球菌，4例为凝固酶阴性葡萄球菌），肠球菌7例（11.5%），普罗透斯spp 3例(4.9%)不动杆菌在1例（1.6%）的细菌分离物中，大肠杆菌被发现是最常见的病原体，其次是克雷伯氏菌spp。此外,大肠杆菌和克雷伯氏菌spp.是女性患者中最常见的病原体，分别占71.4%和64.7%，大肠杆菌和克雷伯氏菌spp对11种抗生素中的任何一种都不100%敏感。不动杆菌对庆大霉素(GN)、甲氧苄啶-磺胺甲恶唑(SXM)和阿格门汀(AMP)三种抗生素的耐药率为100%。但对环丙沙星(CIP)、头孢呋辛(CXM)、诺氟沙星(NOR)和头孢他啶(CAZ)均100%敏感。相反,普罗透斯除对呋喃妥因外，其余药物均100%敏感。种肠球菌对氯霉素(C)耐药率为71.4%，对SXM和红霉素均耐药率为85.7%。金黄色葡萄球菌对几乎所有的药物都100%敏感，而凝固酶阴性葡萄球菌不像其他葡萄球菌那么敏感金黄色葡萄球菌．73.7%的分离菌株对两种或两种以上药物有多药耐药。结论。本研究确定了儿童患者尿路感染的患病率，并首次在国内强调了与UTI相关的主要细菌性尿路病原体。此外，细菌性病原体种类及其频率与通常报告的模式一致，包括大肠杆菌是泌尿系感染病例中最常见的微生物，其次是克雷伯氏菌大多数分离的细菌具有多药耐药，因此建议使用适当的抗菌素，以降低多药耐药微生物发生的风险，避免抗生素无效。这种情况表明，抗生素的选择应该基于对当地细菌的流行和抗生素的敏感性的知识，而不是经验治疗。本研究表明，环丙沙星(CIP)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、头孢呋辛(CXM)、克林霉素(DA)、头孢曲松(CRO)分别是本研究区域治疗革兰氏阴性和革兰氏阳性尿路细菌病原体的最佳抗生素。

1.背景

尿路感染(UTIs)是儿童常见和重要的临床问题，可导致全身性疾病和短期肾损伤，可发生反复感染、肾瘢痕、高血压和终末期肾功能障碍[1]。这是一个严重的健康问题，据估计，全世界每年约有600万名UTI患者到门诊部就诊，约有30万人在病房接受治疗[2]UTI也是儿科常见和重要的临床问题，因为复发性UTI可能导致肾瘢痕、高血压和终末期肾功能不全[3.].UTI发生在3%至5%的女孩和1%的男孩的童年时期，第一次发病发生在女孩5岁时，在婴儿期和厕所训练期间达到高峰，而男孩在出生后的第一年，尤其是在未受割礼的人中，UTI很常见[4]UTI主要由细菌引起，尽管病毒、真菌和寄生虫也可引起尿路感染。在细菌中，革兰氏阴性菌最常从患有肺炎的儿童的尿液样本中分离出来大肠杆菌（大肠杆菌)占感染个案的70%至90% [5]．克雷伯氏菌物种,奇异变形杆菌，铜绿假单胞菌，不动杆菌和沙雷氏菌属是其他从儿科患者中分离出来的革兰氏阴性菌。然而，只有10%的病例是由革兰氏阳性细菌引起的，包括肠球菌，葡萄球菌和链球菌agalactiae［6]．

近年来，抗生素的广泛使用导致全世界泌尿系病原体中抗生素耐药性的发生率不断增加，在世界范围内，泌尿系病原体中抗生素耐药性的出现日益增多[7].在发展中国家，80%以上引起尿路感染的细菌菌株现在对甲氧苄啶或甲氧苄啶磺胺甲恶唑耐药[8]．

尿路感染（UTI）是发展中国家临床医生遇到的最常见的细菌感染之一，是导致重大发病率和死亡率的原因[9]．来自非洲大陆的几项研究调查了常见泌尿系统病原体的概况及其对常用抗菌药物的敏感性模式，以指导经验疗法的选择。这些研究报告了耐药革兰氏阴性杆菌的出现，特别是产生esbl的分离株[10- - - - - -12]．

然而，据我们所知，还没有关于埃塞俄比亚儿童患者尿路病原体谱及其药敏模式的研究发表。

因此，开展这项研究的目的是调查在埃塞俄比亚亚的斯亚贝巴Yekatit 12教学医院小于或大于15年的儿童患者中泌尿系统病原体耐药性的患病率和模式。

2.材料和方法

2．1．研究区域

这项研究是在亚的斯亚贝巴中心的Yekatit医院医学院进行的。Yekatit 12教学医院是亚的斯亚贝巴市卫生局下属的医院之一，该医院一直在为城市社区和埃塞俄比亚不同地区州的其他转诊病例提供常规医疗服务。它是亚的斯亚贝巴的一个三级转诊和教学医院，为来自周边地区和附近地区的大批人提供住院和门诊治疗。该教学医院由手术室、重症监护病房、儿科(床位12张)、13个病房(床位327张)和门诊部组成。

2．2.研究设计与期限

这是一项横断面研究，旨在分离、表征儿科患者的泌尿病原体，并确定分离物的耐药性模式。该研究于2014年1月至4月进行前瞻性研究。

2．3.人口的来源

所有在Yekatit 12医院医学院就读的年龄不超过15岁的儿童患者都是人口来源。

２.４.研究人群

所有被送往实验室进行尿液分析的小于或等于15岁的儿童患者均纳入研究。

2．5．纳入和排除标准

小于或等于15岁的尿检患儿被纳入研究，服用抗生素的患儿和未经书面同意的患儿母亲/监护人被排除在外。

2.6。样本量测定与取样技术

由于埃塞俄比亚尚无小儿细菌性尿路感染的相关资料，因此采用单人群比例50%来确定样本量，精度(d)为0.05。收集每个患儿的尿液标本。在提供尿液样本之前，向研究参与者的父母或监护人提供适当的指导，清洁捕获中游尿液样本，并在收集后立即将样本带到微生物实验室进行进一步处理。入院患儿使用无菌塑料袋，每15分钟检查一次塑料袋内尿液标本。因此，在无菌螺旋盖宽口容器中收集每个病人大约10ml的尿液标本，容器上标有独特的样本编号、日期和收集时间。它们立即被送到细菌学实验室进行处理。

根据临床实验室标准研究所（CLSI，前身为NCCLS）关于Mueller-Hinton琼脂（Oxoid，Basingstoke，Hampshire，England）的指南，采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验[13])。简单地说，将4到5个菌落接种到5ml大豆酪蛋白消化肉汤(oxingstoke, Hampshire, England)中，并在37°C下培养12小时。孵育过夜后，在0.5 ml相同的肉汤培养基中制备生长悬浮液，并将浊度调整至与0.5 McFarland标准相匹配，获得约为1 × 10的菌种数⁶每毫升菌落形成单位(CFU)。然后，将无菌拭子浸入这种悬浮液中，将多余的接种物压在试管两侧去除。拭子涂抹于Mueller-Hinton琼脂平板(Oxoid, Basingstoke, Hampshire, England)中心，均匀涂抹于培养基上。将各分离物接种于Mueller-Hinton琼脂15分钟后放置抗生素盘，37℃孵育24小时。用滑动金属卡尺测量圆盘周围的抑制区直径。解释标准为CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute)指南。采用青霉素(10u)、奥格门汀(30μ甲氧苄氨嘧啶g), (1.25/23.75μg)、克林霉素(30μg)、庆大霉素(30μg） ，环丙沙星（5 μg） ，红霉素（15 μg） ，氯霉素（30 μg） ，头孢呋辛（30 μg） ，头孢噻吩（10 μg)、头孢他啶(30μg） 头孢噻肟（30） μg） ，头孢曲松（10 μg)、新青二(1μ呋喃妥英(30克)μG)、萘啶二酸(30μG)、诺氟沙星(30μg).所有抗生素片均购自英国Oxoid有限公司。

2.7.质量控制和保证

通过在实验室工作的整个过程中实施质量控制措施，保证了研究结果的可靠性。使用前检查染色试剂、培养基和抗生素盘的正常保质期。所有培养板和抗生素盘制备后保存在建议的冷藏温度(2-8℃)。参考菌株金黄色葡萄球菌ATCC 25923，大肠杆菌ATCC 25922，以及铜绿假单胞菌以ATCC 27853为对照。总的来说，所有的实验室程序都是在推荐的标准实验室程序的基础上进行的，严格遵循Yekatit 12医院医学院微生物实验室标准操作程序(sop)中包含的分析前、分析和分析后质量保证阶段。

2.8。数据分析

数据被清理，输入，并使用SPSS，版本17进行分析。对大多数研究变量进行描述性统计，并使用频率分布表来描述研究结果。后勤回归也被用来估计粗比值比(COR)与对不同变量的积极响应的95%置信区间(CI)，和当寻找因变量和自变量之间的关联时，小于0.05的值被认为具有统计学意义。

3.结果

3.1.患者的社会人口学特征

收集年龄小于或等于15岁的儿童患者384例(男199例，女185例)尿液样本。在这些患者中，61例(15.9%)有明显的菌尿。185例女性患者中36例(19.5%)为阳性，199例男性患者中25例(12.6%)为显著菌尿，女性患者比男性患者受影响更大。如图所示1，研究对象中年龄在3岁以下的人数最多，在61个阳性培养物中，3岁以下的阳性培养物最多，占35个(57.4%)(表)1）.

从61株阳性培养物中分离鉴定出6属细菌，其中6属细菌为阴性大肠杆菌，克雷伯氏菌，葡萄球菌，普罗透斯，不动杆菌和肠球菌；大肠杆菌从28例（49.5%）中分离到，其次是克雷伯氏菌17例(27.9%);葡萄球菌sp . 5例(8.2%)，金黄色葡萄球菌其中1例为凝固酶阴性葡萄球菌，4例为凝固酶阴性葡萄球菌，肠球菌7例（11.5%），普罗透斯来自3例（4.9%）和不动杆菌1例（1.6%）。在细菌分离物中，大肠杆菌被发现是最常见的病原体，其次是克雷伯氏菌．此外,大肠杆菌和克雷伯氏菌女性患者中最常见的病原体分别占71.4%和64.7%（表1）2）.

UTI与包皮环切的分离率显示，178名行包皮环切的男性研究对象中，培养阳性10.1%(18/178)，而总共21名未行包皮环切的研究对象中，培养阳性33.3%(7/21)。环切显著相关(COR, 95% CI: 0.225 (0.080-0.630)，)合并尿路感染(表3.）.

3．2.抗生素敏感性测试

细菌分离株的药敏情况见表4和5．大肠杆菌和克雷伯氏菌spp对11种抗生素中的任何一种都不100%敏感。一方面，不动杆菌细菌对庆大霉素、甲氧苄胺甲恶唑、阿格门汀等3种抗生素100%耐药，对环丙沙星、头孢呋辛、诺氟沙星、头孢他啶100%敏感。另一方面，普罗透斯除呋喃妥因外，所有药物均100%敏感4）.

此外，还观察到在肠球菌植物属肠球菌对氯霉素的耐药率为71.4%，对甲氧苄啶磺胺甲恶唑和红霉素的耐药率为85.7%（表1）5）.如表所示5，金黄色葡萄球菌对几乎所有的药物都100%敏感，而凝固酶阴性葡萄球菌则不如其他药物敏感金黄色葡萄球菌。

在革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中，分别有11/12（91.7%）和34/49（69.4%）对两种或两种以上药物存在多药耐药性（MDR）（见表）6和7）.两组的MDR总患病率为45/61(73.7%)。

4.讨论

本研究的目的是确定尿路感染的患病率，评估与尿路感染有关的细菌制剂，并确定尿路细菌病原体的药敏谱。本研究共纳入研究对象384人，其中男性199人(51.8%)，女性185人(48.2%)。研究对象的年龄在0 - 15岁之间。

在参与本研究的384名受试者（185名女性和199名男性，年龄介于0岁和15岁之间）中，只有61名（15.8%）的尿液样本具有明显的菌尿。本研究的结果与尼日利亚报告的结果相似[14)、伊朗(15]，以及埃及[16]其中UTI的患病率分别为11.96%、16.2%和15.05%。然而，与费城报告的结果相比，本研究获得的结果（15.8%）似乎更高[17),美国(6]，印度[18]，以及尼日利亚[19]．报告的患病率分别为3.3%、7.0%、4%和3.0%。相反，本研究获得的UTI患病率远低于Olowu(1996)报道的28.1%。

本研究显示女性尿路感染的发生率高于男性。在185名女性中，36人(36/185;19.5%的人认为文化是积极的，25人(25/199;199例男性患者中有明显菌尿的占12.6%，提示女性患者比男性患者受感染多。此外，研究对象中年龄在3岁以下的患者最多。文化阳性研究对象中，3岁以下占57.4%。我们在这方面的结果与尼日利亚报告的结果相当[14]。女性泌尿道感染的发病率较高，可能是由于尿道较短以及生殖器官靠近肛门所致。UTI发生在3%至5%的女孩和1%的男孩的童年时期，第一次发病发生在女孩5岁时，在婴儿期和厕所训练期间达到高峰，而在男孩一岁时，尤其是在未接受割礼的人中，UTI很常见，因为在这个年龄段，他们很容易接触到病原体[15，18]．

从本研究中分离出61株细菌。他们是大肠杆菌，克雷伯氏菌spp。普罗透斯spp。肠球菌spp。不动杆菌spp．，金黄色葡萄球菌，凝固酶阴性葡萄球菌。其中,大肠杆菌28例(45.9%)，其次为克雷伯氏菌spp．从17例（27.9%）中，肠球菌SPP 7例(11.5%)，凝固酶阴性葡萄球菌4例(6.6%)，普罗透斯来自3例（4.9%）和金黄色葡萄球菌1例(1.6%)。本研究获得的细菌分离菌株的模式和频率与不同国家的不同研究结果具有可比性。例如，在伊朗进行的一项研究[15]结果表明，在细菌分离物中，40%的细菌占大肠杆菌，接着是克雷伯氏菌spp．凝固酶阴性葡萄球菌（12.3%），肠球菌spp．(8.7%),假单胞菌spp。(6.7%)金黄色葡萄球菌(3.6%)。在尼日利亚进行的一项研究[14]报告了36个细菌分离株，其中，大肠杆菌是主要的微生物，占52.77%的UTI病例，其次是克雷伯氏菌最高人民检察院(25%),，奇异变形杆菌(13.89%),粪链球菌（5.56%）及铜绿假单胞菌(2.78%)。同样，在埃及进行的一项研究[16]表明，在他们研究中分离出的所有细菌中，大肠杆菌和克雷伯氏菌spp．为最常见的分离菌，分别占58.1%和41.9%。本研究与不同地区的研究具有可比性[20，24，26]．

在费城进行的一项研究[17]表明未割礼是UTI的危险因素之一；美国的一项研究[6]这项研究还表明，割包皮的男性患者（2.4%）的UTI患病率低于未割包皮的男性患者（20.1%）。这项研究还表明割包皮的男性患者（10.1%）比未割包皮的男性患者（33.3%）更不易感染细菌病原体。

本研究中测试的革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的药物敏感性情况是可变的。例如，大肠杆菌和克雷伯氏菌spp对11种抗生素中的任何一种都不100%敏感。然而，电阻的百分比克雷伯氏菌与美国相比要高得多大肠杆菌百分之八十八克雷伯氏菌对头孢噻肟、头孢他啶、甲氧苄啶磺胺甲恶唑和头孢呋辛耐药大肠杆菌和克雷伯氏菌在本研究中获得的spp与Ilorin的发现相似[20].然而大肠杆菌这项研究的结果与坦桑尼亚报告的结果强烈矛盾[21]．一方面，不动杆菌spp.对四种抗生素100%耐药：庆大霉素、甲氧苄啶磺胺甲恶唑、奥美汀和萘啶酸，对环丙沙星、头孢呋辛、诺氟沙星、头孢噻肟、氯霉素和头孢他啶100%敏感。目前关于这些分离病原体的发现与伊朗的发现强烈矛盾[15].另一方面，普罗透斯除呋喃妥因外，该菌对所有药物均100%敏感。此外，在该菌中观察到高度耐药肠球菌spp。肠球菌青霉素敏感率为100%，氯霉素耐药率为71.4%，红霉素耐药率为85.7%。同样的,金黄色葡萄球菌对几乎所有的药物都100%敏感，而凝固酶阴性葡萄球菌不像其他葡萄球菌那么敏感金黄色葡萄球菌。该研究还表明，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌对两种或两种以上药物均具有多药耐药性（MDR），两组的总患病率均为45/61（73.7%）。这一发现也得到了不同地区不同研究结果的支持[27- - - - - -30.]．最后，作为一个限制，埃塞俄比亚缺乏类似的比较研究，以及缺少一些生化试剂和抗生素圆盘，可能会影响对分离株完整情况的评价。由于实验室设施有限，对细菌分离株，特别是多药耐药菌株进行血清分型和基因分型是不可能的。

5.结论和建议

这项研究确定了儿童患者尿路感染的患病率，并首次在国内强调了UTI中涉及的主要细菌性尿路病原体。此外，细菌性病原体种类及其频率与通常报告的模式一致，包括大肠杆菌是泌尿系感染病例中最常见的微生物，其次是克雷伯氏菌大多数细菌分离物具有多药耐药性，因此建议应使用适当的抗菌素，以降低多药耐药性有机体发展的风险，并避免抗生素无效。应在儿科实施广泛的UTI筛查计划，以了解确切的预防率目的了解泌尿系致病菌对常用抗生素的耐药率。

最后，作者建议，尿路致病菌的治疗表明，抗生素的选择应该基于对当地细菌的流行和抗生素敏感性的了解，而不是经验治疗。本研究表明，环丙沙星(CIP)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、头孢呋辛(CXM)、克林霉素(DA)和头孢曲松(CRO)分别是本研究区域相对较好的治疗革兰氏阴性和革兰氏阳性尿路细菌病原体的抗生素。

缩写

AST：	药物敏感试验
芭:	血琼脂
克莱德：	胱氨酸乳糖电解质缺乏
置信区间:	置信区间
欺骗：	Coagulase-negative葡萄球菌
CLSI:	临床实验室标准协会
DMLT：	医学检验技术学系
ESBL：	扩展频谱β内酰胺酶
起亚：	Kligler铁琼脂
IRB:	机构审查委员会
密西根州立大学:	中游尿液样本
NCCLS:	全国临床实验室标准委员会
门诊部：	门诊部
质量控制:	质量控制
标准作业程序：	标准作业程序
最高人民法院：	物种
SPSS:	社会科学统计软件包
泌尿道感染:	尿路感染
美国:	美利坚合众国
人:	世界卫生组织。

数据可用性

用于支持本研究结果的数据不能在公开可用的数据存储系统中共享，因为该国没有这样的数据存储系统。然而，作者可以根据要求提供这些数据。

伦理批准

亚的斯亚贝巴大学健康科学学院医学实验室科学系的机构审查委员会(IRB)对该研究进行了伦理审查和批准。亚的斯亚贝巴卫生局也通过了道德审查。随后，卫生局写了一封通知医院的信，并获得了叶卡蒂特12医院的许可。

同意

在收集资料前，获得患儿母亲/监护人的知情书面同意。被调查者有权拒绝参加研究，也可以在研究期间的任何时候退出。所有从研究对象获得的信息都被编码以保密。当参与者被发现尿液培养呈阳性时，他们会被医院临床医生告知并接受适当的治疗。

的利益冲突

作者声明他们没有利益冲突。

作者的贡献

YMD构思并设计了研究方案，收集数据，进行分析和解释数据。所有作者都对手稿进行了批判性审查和批准。

致谢

作者想感谢亚的斯亚贝巴大学医学实验室科学学院创造和促进了这项研究工作机会。作者对研究参与者的自愿和参与表示衷心的感谢。最后，作者还感谢在数据收集、准备和实验室检查活动中帮助他们的医院工作人员。

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