文摘
客观的。旨在形成物种的临床研究假丝酵母分离和检测biofilm-forming能力和抗真菌耐药性。方法。所有的假丝酵母种虫害从喜欢的不同临床样本中分离出脓,尿液、血液和体液包括在这项研究。生物膜生产微量滴定板测试的方法。抗真菌敏感性研究了磁盘扩散法。病人的人口统计信息,比如年龄、性别、和临床信息收集。存在的其他风险因素如糖尿病、抗生素使用的历史,和任何尿路的设备也被记录下来。结果。在90假丝酵母孤立的物种,最主要的物种被发现白念珠菌(45.5%)紧随其后c . tropicalis(28.88%),c . krusei(20%),c . glabrata(3.33%)和c . parapsilosis(2.22%)。假丝酵母种虫害是隔绝尿(43%),BAL /痰(18.88%)、阴道拭子高(8.88%),吸技巧(7.77%)、血液和伤口拭子(6.66%)、脓(3.33%)、胆汁吸入(2.22%),和深层组织(1.11%)。更多的女性比男性受到影响,和51岁到60岁的年龄组是更易受念珠菌病。更多的白念珠菌隔离产生生物膜紧随其后c . parapsilosis,c . tropicalis,c . krusei。然而,c . glabrata在我们的研究中没有发现生物膜生产。所有假丝酵母隔离两性霉素b . 100%敏感伏立康唑是下一个有效的药物敏感性为81.11%。24.44%的菌株对氟康唑耐药。结论。物种形成的假丝酵母隔离,形成生物膜的能力,检测和监测抗真菌敏感性测试对于适当的治疗是必要的。
1。介绍
最近的研究技术的进步使研究人员研究细菌和真菌在自然环境中,和95%以上的细菌存在于自然生物膜(1]。假丝酵母物种被发现在健康个体和正常菌群导致机会性感染的死亡率高,尤其是在免疫力低下的个人(2]。假丝酵母种虫害引起系统性疾病的第四医院在现代医院血流感染的主要原因。最具挑战性的临床问题是非率的增加白色念珠菌隔离和快速发展的阻力假丝酵母物种(3]。
白色念珠菌中是最普遍吗假丝酵母spp。导致表面和系统性感染。其他致病假丝酵母物种包括c . tropicalis,c . glabrata,C。parapsilosis,c . krusei占25%,8%,7%,和4%的念珠菌病,分别4]。念珠菌病的发病机理取决于毒性等因素的表达生殖管形成粘连,表型转换,生物膜的形成和水解酶的生产5]。
大多数的疾病所致假丝酵母种虫害是由于生物膜的形成。生物膜的微生物是嵌入在一个细胞外基质(ECM),形成一个复杂的三维结构在生物和非生物表面6]。生物膜的形成可能发生在粘膜表面和塑料表面的内在的设备。生物膜基因抗真菌剂包括两性霉素B (AMB)和氟康唑(流感)。生物膜的形成取决于不同假丝酵母spp。7]。最常见的致病效应引起的白色念珠菌和在较小程度上假丝酵母spp。8]。
假丝酵母显示抗唑由于总体和长期使用它(9]。念珠菌病会反复发作。一些卫生保健提供者给予抗真菌药物在一个长期的基础上,但这可能导致耐药念珠菌病,更难以治疗。因此,早期的识别假丝酵母种虫害和监控他们的抗真菌敏感性帮助治疗。因为很少有生物膜的形成和耐药性的研究报道来自印度、目前的研究进行隔离假丝酵母物种从各种临床标本,检测生物膜的形成,并研究其抗真菌易感模式。
2。材料和方法
2.1。研究人群
假丝酵母物种(n= 90)与临床样本像血液、尿液、体液,脓,收到的微生物,Kasturba医学院(KMC),芒格洛尔,后被包括在研究获得伦理制度伦理委员会的批准。属假丝酵母被确定通过菌落形态、革兰氏染色法和其他标准的生化反应10]。所有的媒体和研究中使用的化学品采购从Hi-Media实验室pvt Ltd .,孟买,印度。
2.2。数据收集
病人的人口统计信息,比如年龄、性别、和临床信息收集。存在的其他风险因素如糖尿病、抗生素使用的历史,和任何尿路的设备也从医院信息系统记录。
2.3。抗真菌敏感性测试
真菌对常规使用药物如两性霉素B(100辆)、氟康唑(25μg)和伏立康唑(1μg)是由磁盘扩散法,用Mueller-Hinton琼脂补充0.5毫克/毫升亚甲蓝。琼脂板注射悬浮酵母细胞的浊度调整到0.5麦克法兰标准(106CFU /毫升)的方式是目前用于测试抗菌药物。抗真菌磁盘放置在接种盘子和孵化24 - 48小时的27°C。带抑制的直径测量。结果解释按照CLSI指南(11,12]。
2.4。生物膜由微量滴定板生产方法(MTP)
生物膜的形成进行无菌96 -微量滴定板。每个隔离的殖民地接种成管状包含两个毫升的脑心浸液肉汤在37°C (BHIB)和孵化24小时。所有的肉汤文化被稀释的比例1:使用新鲜BHIB 20, 200μl是放置在37°C到微量滴定板和孵化24小时。完成后孵化,微量滴定板被清空,用蒸馏水冲洗三次,然后倒吸干。当时满200μl 1%的结晶紫和孵化15分钟。孵化后,微型板块与蒸馏水冲洗三次。200μl乙醇:丙酮混合物(80:20 w / v)添加到每个好,在450海里使用ELISA读者,阅读和OD记录。无菌BHIB没有微生物作为消极的控制。截止值是由算术平均的OD井包含无菌BHIB和通过添加一个+ 2的标准偏差。样品与OD高于截止值被认为是积极的,而与光密度低于截止被认为是负的(13]。
3所示。结果
在目前的研究中,90年假丝酵母种虫害隔绝不同临床样本,其中包括白念珠菌(45.5%)紧随其后c . tropicalis(28.88%),c . krusei(20%),c . glabrata(3.33%)和c . parapsilosis(2.22%)。他们受到抗真菌敏感性测试和生物膜的形成。结果概括为频率表,和百分比。统计分析是由使用统计软件包SPSS V.16.0。比例和协会的计算是通过描述性研究测试和未配对的学生的t以及。
表1显示不同的假丝酵母种虫害孤立从临床标本。在目前的研究中,41岁假丝酵母种虫害是来自男性和49岁女性如表所示2。
临床历史得到的医疗记录。其中,25例有糖尿病,九是乳胶,21有泌尿道感染的症状和体征,四是癌症患者,8是孕妇,14与慢性肾脏疾病,17和呼吸道感染,有心脏病。
的41白色念珠菌21岁的分离株(51.2%),也有利于生物膜的生产。
在总49非白色念珠菌,28(57.14%)分离是生物膜生产商(表3)。
各种抗真菌敏感性测试假丝酵母物种显示隔离都容易受到两性霉素b .抗真菌敏感性的结果不同假丝酵母种虫害表所示4。
4所示。讨论
假丝酵母种虫害是发现是共生的,中断的标准需要宿主防御作为病原体。有增加数量的免疫功能不全的患者,年龄,接受抗菌和侵略性的癌症化疗,或进行侵入性手术和器官移植,念珠菌病已成为一个令人担忧的机会性疾病(14]。
目前的研究表明显著变化的分布假丝酵母在不同的临床样本spp。最主要的物种被发现白念珠菌(45.5%),紧随其后的是c . tropicalis(28.88%),c . krusei(20%),c . glabrata(3.33%)和c . parapsilosis分别为(2.22%)。我们的研究结果与之前报道的数据由Sajjan et al。15]。Zarei-Mahmoudabadi等人,Chakrabarti et al .,然而,报道流行率较低(39%和25%)白念珠菌(16,17]。
在目前的研究中,最高的复苏假丝酵母种虫害是尿(43%),其次是BAL /痰(18.88%)、阴道拭子高(8.88%),中央线/ ET /口腔吸入技巧(7.77%)、血液和伤口拭子(6.66%)、脓(3.33%)、胆汁吸入(2.22%),和皮肤深层组织和取消(1.11%),分别为。然而,这项研究由Saijan et al。(2014)显示最高的复苏假丝酵母spp从高阴道拭子(15]。这可能是因为,在我们的研究中,我们处理的尿液样本数量多于高阴道拭子。
在目前的研究中,发现念珠菌病可发生在任何年龄和性别。最年轻的一岁大的婴儿,在最古老的88年。根据Emeribe调查等。18和宫等。19]假丝酵母感染被发现的最大年龄组的意向。在我们的研究中,最大的隔离假丝酵母spp被发现在51岁到60岁的年龄组。老年人的敏感性更高假丝酵母感染可能是由于身体免疫力低下,衰老,诱发糖尿病、恶性肿瘤等因素。更受到影响的女性数量比男性的发病率49(54%)和41个(45%),分别,这是类似于前面所做的研究工作者。隔离假丝酵母种虫害在雌性约为61.2%,而男性只有38% (15]。在目前的研究中,分布的假丝酵母种虫害的男性和女性被发现是相似的。
在我们的研究中最常见的诱发因素之一是糖尿病占病例总数的28%,其次是患者有症状的尿路感染(24%)、妊娠(8.8%),和乳胶慢性肾脏疾病(15.5%),分别为。然而,Arora等人证实静脉插管(63%),其次是长期使用抗生素(35%)和免疫抑制(23%)是最常见的危险因素在他们的研究(20.]。风险因素从地理区域可能会有所不同,也可能是由于基础条件和饮食习惯/免疫力的病人的研究。
生物膜是普遍的、复杂的、相互依存的社区surface-associated微生物胞外多糖封闭在一个矩阵发生在任何表面上,包括医疗设备(21]。的致病性假丝酵母物种与形成生物膜的能力,是一个重要的毒性行列式在念珠菌病(14]。目前的研究表明生物膜生产非中为57.14%白念珠菌种虫害和39.02%之间白念珠菌。这个结果几乎是类似报道Kumar et al。22]。
在非白色念珠菌种虫害研究生物膜的生产在目前的研究中,100%的c . parapsilosis生物膜的形成,紧随其后c . tropicalis(61.53%)和C。krusei(55.55%)。然而,库恩等人发现白念珠菌生产定量比其他生物膜假丝酵母物种(23]。这种差异可能是由于使用不同的方法对生物膜生产有机硅弹性体和四唑进行量化。然而,在目前的研究中,结晶紫染色的微量滴定板的方法是使用。c . glabrata在我们的研究没有显示生物膜的生产。卡方检验显示一个无意义的生产者和nonproducers生物膜的数量的变化。
中监测抗真菌耐药性是至关重要的假丝酵母年代pecies因为它给新兴威胁的新耐药菌株的线索帮助治疗经验。在90假丝酵母隔离测试,都容易受到两性霉素B在我们的研究报告的结果相似Arora et al。24]。因此,假丝酵母菌株分离我们的研究领域尚未对两性霉素B有了抗性。
75.55%的菌株对氟康唑敏感,24.44%是耐药。在nonsusceptible假丝酵母spp。40.90%的人白念珠菌,有36.36%的人c . tropicalis而22.72%的人c . krusei。18.88%的假丝酵母种虫害对伏立康唑,其中17.64%的人c . krusei而41.17%的人白念珠菌和c . tropicalis。然而,Yenisehirli等人报道34%和14%氟康唑和伏立康唑在电阻率白念珠菌分别为(25]。Jayalaksmi等。电阻率为34.3%氟康唑在105年出版假丝酵母隔离从不同的临床标本中恢复过来26]。佩尔蒂埃等人进行的一项研究显示,42 295假丝酵母隔离是显示敏感性降低氟康唑(27]。我们耐氟康唑和伏立康唑与早期的研究一致。氟康唑和伏立康唑的敏感性降低的可能性,可能是由于广泛和长期使用抗真菌的研究对象之一。没有生物膜形成和抗真菌敏感性之间的统计相关性()。
5。结论
假丝酵母感染取决于病人的基本条件。抗真菌耐药性是新兴的假丝酵母隔离。然而,之间没有相关性candidal中生物膜的形成和抗真菌耐药性菌株。
数据可用性
使用的实验数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
伦理批准
该研究机构伦理委员会批准Kasturba医学院,芒格洛尔,卡纳塔克邦。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
作者感谢院长,部门负责人和微生物学部门的所有员工,Kasturba医学院,芒格洛尔,他们的支持和鼓励开展这项研究。