文摘
噬菌体,从环境和专门针对肉牛中恢复过来大肠杆菌O157: H7,检查他们的生理和形态特征。孤立的噬菌体的细菌裂解和宿主范围程度对55分离的决心大肠杆菌O157: H7。形态学的噬菌体是透射电子显微镜下检查。噬菌体生长参数,特别是吸附率上升时期,潜伏期和破裂的大小也决定。孤立的噬菌体的稳定性测试在酸性和碱性pH值,在高温下,在冷藏。总共有7个噬菌体分离显示溶菌性活动对50 55隔离的大肠杆菌O157: H7。基于形态学,噬菌体分为Myoviridae或Siphoviridae家庭。噬菌体有上升段19至40分钟,短潜伏期12到30分钟,和一个大爆发规模(89 - 631病毒粒子/感染细胞),表明高溶解性活动。噬菌体保持稳定24小时的pH值(1 - 11)和温度范围宽(-°C)和90 d的冷藏。噬菌体的特征,不同的宿主范围大肠杆菌O157: H7,可以帮助有效的生物防除策略发展的病原体在食品工业中。
1。介绍
大肠杆菌O157: H7是一种重要的食源性病原体共餐者生活在瘤胃的牛、绵羊和山羊等动物食品(1- - - - - -5]。此外,鹿、马、狗和鸟也可以是暂时性的港这个病原体(4,6- - - - - -8]。直接或间接接触动物或动物粪便大肠杆菌O157: H7可能调解其转移到水和食品,导致人类感染上消费。在一个典型的在美国(美国),大肠杆菌O157: H7引起食源性疾病,估计有63000 2100人住院,20人死亡,2.71亿美元的经济负担9,10]。病原体感染的高级阶段包括出血性结肠炎,可能进展为溶血性尿毒症综合征。严重的并发症的特点是肾功能衰竭,溶血性贫血,血小板减少,这可能是致命的(11- - - - - -13]。一些高风险食品大宗商品与这些疾病相关的包括牛肉和肉类产品,新鲜农产品、未经高温消毒的苹果汁,乳制品(13- - - - - -28]。
减少大肠杆菌O157: H7在收获前的加工水平可能发挥重要作用在防止病原体的介绍进入食物链。各种方法,如饮食和益生菌疗法,接种疫苗和抗生素,反对大肠杆菌O157: H7已经评估控制其患病率在食用动物3,10,29日]。然而,开拓殖民地以前受感染动物,相同或不同的菌株大肠杆菌O157: H7,限制了这些策略的有效性3,30.]。同样,在处理水平,各种控制措施如有机酸、氯或其他抗菌药物已用于控制耐洗大肠杆菌O157: H7坚持食品(31日- - - - - -34]。然而,这些干预措施仍然不足,明显的持续的食源性疾病暴发和食品召回事件与此相关病原体。因此,重要的是开发有效的替代控制大肠杆菌O157: H7的食物和畜牧业。
有针对性的使用噬菌体大肠杆菌O157: H7能减少这个问题。噬菌体是无处不在的,自然丰富的病毒,入侵并杀死特定的细菌。他们被认为是胃肠道(GI)共生的微生物,从各种来源孤立35,36]。近一个世纪前,d 'Herelle [37)对人类病原体了噬菌体的功效。然而,最近,由于耐药微生物的出现,久违的噬菌体疗法已经恢复了对使用对食源性病原体。下在体外条件下,毒性噬菌体显示潜在的选择性消除大肠杆菌O157: H7 (38,39]。此外,在羊的研究表明,肠道殖民大肠杆菌O157: H7是可以预防的口服O157: H7-infecting噬菌体(39]。噬菌体的效果对大肠杆菌O157: H7也被记录在不同的食物,比如哈密瓜、菠菜、生菜、西红柿,花椰菜,和牛肉40- - - - - -42]。在一项由O 'Flynn et al。43),鸡尾酒大肠杆菌O157: H7-specific噬菌体表面完全减少病原体计数牛肉牛排。此外,研究表明,噬菌体可以有效地消除大肠杆菌O157: H7等各种食品加工表面生物膜的不锈钢和高密度聚乙烯(42,44]。尽管研究已经证明phage-based技术控制的潜力大肠杆菌O157: H7,很少有人了解的形态、生理、和特点的特定的噬菌体。同时,选择有效的噬菌体为食品和动物行业应用还需要了解在不同压力条件下生存。本研究旨在分离大肠杆菌O157: H7-specific噬菌体肉牛操作和确定其physiomorphological特征,包括生存在不同pH值、高温、和冷藏条件。
2。材料和方法
2.1。细菌培养
隔离的噬菌体进行了使用宿主菌株,大肠杆菌O157: H7写明ATCC 43895(表1)。使用55分离噬菌体的宿主范围确定大肠杆菌O157: H7隔离(表1)。两个分离株临床菌株(写明ATCC 43888)写明ATCC 43895,其余是野生型(WT)隔离,从我们的实验室文化检索收集,最初从牛的粪便分离或牛肉农场环境(45]。每一个实验之前,一夜之间的文化大肠杆菌O157: H7分离制备大豆胰蛋白酶的肉汤(TSB;Bacto™、BD、火花、MD)和静态孵化在37°C 18 h。
2.2。噬菌体分离
在一段两年,水( )和牛的粪便( )从肉牛收集的样本操作在俄克拉荷马州,在夏天,用于隔离特定噬菌体大肠杆菌O157: H7 (45]。水(10毫升)和粪便(10 g)样本丰富在25毫升双重力量NZ-amine酪蛋白水解物酵母提取物氯化钠硫酸镁(NZCYM;零售物价指数公司(IL)肉汤18 h在37°C,连同10毫升的宿主细菌培养(大肠杆菌O157: H7写明ATCC 43895)。孵化后,2毫升悬挂在12000转离心10分钟去除细胞碎片和粪便。上层清液过滤使用0.45µ注射器过滤器(EMD微孔Millex™、Carrigtwohill爱尔兰)和镀滤液NZCYM琼脂(费舍尔科学,NJ)通过双层琼脂法,所描述的Sambrook et al。46]。噬菌体的存在证实了斑块形成琼脂板和噬菌体进一步集中描述的方法通过钱德拉et al。47]。简单地说,一夜文化(100µL)大肠杆菌O157: H7是悬浮在熔融(0.75%)NZCYM琼脂和倒到NZCYM琼脂板允许巩固2 - 5分钟。板当时还夹杂着噬菌体,水平和垂直的线,使用无菌白金圈和孵化为18 - 20 h在37°C。孵化后,5毫升SM缓冲区(10毫米Tris-HCl, pH值7.5;100毫米氯化钠;10毫米MgSO4;费舍尔科学,NJ)涌上沿行琼脂板洗提任何斑块。包含斑块的琼脂当时刮无菌白金圈释放噬菌体和洗脱离心机在12000 rpm,持续15分钟。得到的上层清液过滤使用0.22µ注射器过滤器,0.1%氯仿(费舍尔科学,NJ)添加到使噬菌体working-stock解决方案被储存在4°C到进一步使用。斑块大小(毫米)的个人噬菌体决心通过执行空斑实验(48使用游标卡尺),通过测量其直径(Fisherbrand™起源于™数字卡钳,NJ)。
一个实验之前,噬菌体滴度测定(表2),空斑形成单位(PFU)毫升−1通过连续稀释噬菌体working-stock在磷酸缓冲盐(PBS;pH值7.4;氯化钠,费舍尔科学,新泽西;氯化钾、磷酸氢钠和磷酸氢二钠,Sigma-Aldrich,密苏里州)和通过执行空斑实验(48]。
2.3。噬菌体宿主范围
所有噬菌体的宿主范围测试55大肠杆菌O157: H7隔离(表1),使用spot-on-lawn试验(48]。一夜之间文化(100µL)的细菌分离熔融(0.75%)加入5毫升NZCYM琼脂覆盖到NZCYM琼脂板。10毫升的噬菌体的解决方案(~ 108空斑形成单位毫升−1)被发现在每一个细菌的琼脂板。板块在37°C孵化18 h和检查细菌草坪上清晰的区域,确定各自的噬菌体的宿主范围。细菌敏感性细菌溶菌作用建立了噬菌体的噬菌体的地点存放。基于细菌的草坪上的清晰程度,斑点的分化成三类:(+ + +),浑浊的(+ +)、(-)(表或没有反应1和图1)。
2.4。噬菌体形态
噬菌体形态决定使用透射电子显微镜。样品被暂停准备通宵文化(100µL)大肠杆菌O157: H7 5毫升(0.75%)NZCYM琼脂液倒新鲜NZCYM琼脂板上。噬菌体的股票(上图)准备在SM连续稀释缓冲补充1 M钙(SM-Ca;费舍尔科学,NJ)。10µL每个稀释被发现在细菌的琼脂板(上图)准备和孵化在37°C 18 h。孵化后,噬菌体筛选了在10µL SM-Ca通过仔细上下吸量(7 - 10倍)到蹼。每个样本筛选了噬菌体与2%磷钨酸负染色(Emsdiasum,哈特菲尔德,PA)碳涂层网格(Emsdiasum,哈特菲尔德,PA)和检查下透射电子显微镜(TEM;JEOL jem - 2100 - tem)。形态(形状),衣壳直径(nm),和尾巴长度(nm)的噬菌体是由电子显微图的放大50000倍(俄克拉荷马的技术和研究园,俄克拉荷马州立大学静,OK)。
2.5。噬菌体在酸性和碱性pH值稳定,在高温下,在冷藏
孤立的噬菌体稳定性测试与广泛的pH值(1 - 11)和温度(80−90°C)范围来确定他们的生存在酸性,碱性,高温,冷藏条件。所有的噬菌体进行了稳定性研究噬菌体人口约108空斑形成单位毫升−1(表2)。
稳定性研究对酸性和碱性条件下进行描述的方法,妞妞et al。49]。短暂,噬菌体是悬浮在PBS调整与1 M氢氧化钠或盐酸(费舍尔科学、新泽西),产生1 - 11的pH值范围,和孵化37°C,以确定他们的生存,2、4、6、12、24小时。
的热稳定性(50每个噬菌体(100),工作的µL)于900年暂停了µL PBS和悬挂孵化在40岁,60岁,70和90°C 60分钟干浴(费舍尔科学、IA)。噬菌体在每个温度是决定人口每十分钟在60分钟的孵化。
冷藏稳定(50),1毫升原液每个孤立的噬菌体被储存在4日−20日−80°C和取样(0,1,30、60、90 d。幸存的噬菌体的数量为每个研究由连续稀释样品在PBS和NZCYM琼脂电镀,使用双层琼脂法。
2.6。噬菌体吸附和一步生长动力学
噬菌体吸附试验(51确定执行时间由噬菌体吸附到宿主细菌表面。崛起期和潜伏期,连同他们的大小,确定通过一步生长动力学研究。一夜之间文化(1毫升)的主机大肠杆菌O157: H7 (109CFU毫升−1在12000 rpm)离心机2分钟。丢弃浮层后,颗粒在900年resuspendedµL PBS和100µ(10 L phage-stock的解决方案8空斑形成单位毫升−1)添加到悬架实现0.1感染复数(MOI)。这个bacteria-phage悬架是用于吸附和一步生长动力学研究。
在噬菌体吸附研究中,bacteria-phage悬挂孵化在37°C 80分钟。后一个初始样本在0分钟,100年µL整除采样每20分钟增加到900µL PBS和离心法在12000转2分钟。上层清液包含unadsorbed噬菌体是0.2过滤µ过滤和镀使用双层琼脂法。unadsorbed噬菌体的百分比,在每一个20分钟的间隔,计算空斑形成单位的比例毫升−1在上层清液初始PFU毫升−10分钟。吸附噬菌体的百分比是由减去的百分比从100年unadsorbed噬菌体。
一步生长实验,bacteria-phage悬挂在37°C孵化10分钟让噬菌体吸附到细菌细胞(52]。孵化后,悬挂在13000转离心1分钟和上层清液受到空斑实验来确定unadsorbed噬菌体的效价。颗粒含有感染细菌细胞立即resuspended 10毫升prewarmed TSB (37°C),后一个初始样本(100μL)在0分钟,孵化出了37°C 60分钟。100年获得一步生长曲线μL样本收集每5分钟,连续稀释,镀NZCYM琼脂用双层琼脂法。期和潜伏期,以及每个噬菌体的释放量,计算一步生长曲线拟合到一个4-parameter s形模型(53)如下: ,在那里日志phage-density (PFU毫升−1)时间(最小值),是最初的日志phage-density 0时刻(分钟),上升时间(分钟)日志密度(PFU毫升−1每个被感染细胞的病毒粒子,是最大指数噬菌体增长率(最小值−1)。破裂的大小(PFU细胞−1)和潜伏期(min)计算和 ,分别。的潜伏期结束之间的时间间隔定义为吸附和第一破裂(即的开始。,持续期),最小的增加噬菌体效价(54,55]。上升时间(潜伏期)被确认为时间而感染细菌细胞细胞溶解,在噬菌体效价显著增加(54]。破裂的大小定义为噬菌体从外观获得最高产量的第一个噬菌体的后代,直到完成细菌细胞溶菌作用[48,56]。
2.7。统计分析
所有的实验都重复三次,三个复制得到的平均值。幸存的噬菌体种群,在每一个研究中,获得被转换为日志10空斑形成单位毫升−1。执行统计分析来确定pH值和高温对噬菌体的影响生存。数据进行分析来确定方差分析(方差分析)使用邓肯的多个测试范围(JMP v。12软件;本月SAS,卡里,数控、美国)。估计结果之间有着显著的不同 。
3所示。结果
3.1。隔离和噬菌体的宿主范围的决心
从127年环境样品测试,七个噬菌体,特定于大肠杆菌O157: H7, P-7孤立和指定为p - 1。孤立的噬菌体形成中型(ca。直径0.3 - -0.5毫米)明确斑块的草坪上宿主细菌(表2)。
孤立的噬菌体的宿主范围确定对55大肠杆菌O157: H7隔离(写明ATCC和WT)。所有的孤立的噬菌体形成清晰(+ + +)斑点的草坪上49 (89%)大肠杆菌O157: H7隔离,表明强溶解性活动和宿主范围很广(表1)。然而,噬菌体P-6没有溶解分离RF4 JF4,和噬菌体P-3 P-4不溶解分离JF4。所有七个噬菌体形成浑浊(+ +)点隔离TE1和没有反应(-)对WT隔离EF2 RF6, RF7, SW3和TW3(表1)。
3.2。噬菌体形态
电子显微图显示,噬菌体p - 1, p 2和5有一个二十面体头部(约89 nm直径)和短尾巴收缩(ca。115海里)基板和几个尾巴纤维(图2(一个))。整体形态表明,这些噬菌体T4-like噬菌体,属于Myoviridae Caudovirales秩序的家庭。噬菌体P-3、P-4 P-6, P-7有六角头(大约89 nm直径)与灵活的尾巴太长(ca 198海里),没有可见的衣领或终端旋钮(图2 (b))。他们被确认为Siphoviridae家庭Caudovirales秩序的噬菌体。
(一)
(b)
3.3。噬菌体在酸性和碱性pH值稳定,在高温下,在冷藏
所有的孤立的噬菌体进行测试对pH值范围宽(1 - 11),经过一段24 h,以确定其在酸性和碱性条件下稳定(数字3(一个)和3 (b))。酸性pH值范围(1 - 5),噬菌体展示最稳定pH值5,以最小的损失可行性PFU毫升(0.1 - -1.7日志−1)2 h后孵化。的七个噬菌体测试,三(p 2、5和P-6)幸存下来在pH值1的24 h,人口4.4 - -5.9日志PFU毫升−1(图3(一个)),而P-3幸存在pH值1对1 h。所有的噬菌体幸存下来的pH值2的24 h,有限的活动丧失PFU毫升(0.2 - -3.7日志−1孵化(图)后1 h3(一个))。在所有的噬菌体,P-3最稳定的pH值2,无显著( PFU毫升)丧失生存能力(0.9日志−1)24 h后孵化。所有的噬菌体幸存在pH值7和9没有显著( 生存能力(0.1 - -1.9)损失日志PFU毫升−1经过24小时的潜伏期(图3 (b))。噬菌体也稳定在pH值11长达12 h和降低最小(0.8 - -2.3日志PFU毫升−1在孵化(图24 h后滴度3 (b))。在所有七个噬菌体,P-7是最稳定的pH值11轻微的减少人口的空斑形成单位(0.4 - -1.6毫升−1)24小时期间。
(一)噬菌体在酸性pH稳定性(1、2、5)超过24小时。数据表示为平均数±标准差为三个独立的实验。数据分析的显著性水平
(b)噬菌体在碱性pH稳定性(7、9、11)超过24小时。数据表示为平均数±标准差为三个独立的实验。数据分析的显著性水平
热稳定性研究的结果显示所有测试噬菌体在未来保持稳定°C温度范围和没有失去生存能力60分钟后各自的孵化温度(数据4(一)和4 (b))。噬菌体生存能力显著( )在70年和90年的高温影响°C(数字4 (c)和4 (d))。在70°C,噬菌体的数量5和P-7减少日志PFU 2.5和3.3毫升−110分钟后,分别孵化。噬菌体P-3、P-4 P-6显示在6.4和7.3之间人口减少日志PFU毫升−1,而噬菌体p - 1和p 2 10分钟后显示没有生存能力。所有其他的噬菌体失去生存能力孵化20分钟后在70°C(图4 (c))。在90°C, 10分钟后未发现可行的噬菌体孵化(图4 (d))。
(一)热稳定性的噬菌体在40°C为60分钟。数据被表示为平均数±标准差为三个独立的实验。数据分析的显著性水平
(b)热稳定性的噬菌体60°C为60分钟。数据被表示为平均数±标准差为三个独立的实验。数据分析的显著性水平
(c)热稳定性的噬菌体为60分钟70°C。数据被表示为平均数±标准差为三个独立的实验。数据分析的显著性水平
(d)热稳定性的噬菌体为60分钟90°C。数据被表示为平均数±标准差为三个独立的实验。数据分析的显著性水平
噬菌体也进行冷藏稳定性测试,发现在制冷温度更稳定(4°C)比在冻结温度下(20到−−80°C)的90 d(数字5(一个),5 (b),5 (c))。在4°C,最小的减少噬菌体种群PFU毫升(0.1 - -2.3日志−1)是观察到的90 d。噬菌体P-6和P-7是最稳定的,小空斑形成单位毫升(0.6日志−1)滴度损失在90天的存储(图5(一个))。−20°C,所有的噬菌体都稳定在第一天略微减少PFU毫升(0.6 - -2.1日志−1人口(图)5 (b))。噬菌体P-3、P-4 P-6保持浓度在90天的时间。另一个噬菌体显示减少人口PFU毫升(4.0 - -6.3日志−1),但维持他们的生存能力在90 d(图5 (b))。噬菌体p - 1, p 2和5显示更好的生存在−−80°C比20°C。所有其他的噬菌体显示人口减少(在2.0和5.1之间日志PFU毫升−1(图)后90天的存储5 (c))。相比其他的噬菌体,P-6是最稳定的冷藏温度略微下降(0.6 - -2.0日志PFU毫升−1人口)后90天的存储。
(一)噬菌体生存在4°C / 90 d。数据被表示为平均数±标准差为三个独立的实验
(b)噬菌体生存−20°C / 90 d。数据被表示为平均数±标准差为三个独立的实验
(c)噬菌体生存90−80°c / d。数据被表示为平均数±标准差为三个独立的实验
3.4。噬菌体吸附和一步生长动力学
噬菌体增长特性测定一步生长动力学和噬菌体吸附率。从吸附研究的结果显示,噬菌体,花了20分钟大约41%的初始种群,80分钟,大约55%的初始种群,吸附到宿主细胞表面(图6)。的七个噬菌体,P-4吸附速率最快仅需20分钟,52%的人口被吸附到宿主细胞表面。另一方面,P-3显示最大吸附率(60%人口吸附)后80分钟的孵化。
噬菌体的一步生长动力学,实验观察到在一段60分钟,如图7。噬菌体生长参数计算使用先前描述的方程。一位代表,预测一步生长曲线噬菌体p - 1图所示8。结果显示,噬菌体属于Siphoviridae家庭(P-3, P-4、P-6 P-7)于短潜伏期12日至23日最小。另一方面,Myoviridae噬菌体(p 2 p - 1, 5)稍微长一点的潜伏期约20 - 30分钟。上升时期是19岁和40分钟之间爆发的大小是89年至631年病毒粒子/所有的噬菌体感染细胞。
4所示。讨论
几项研究已经证明了噬菌体对食源性病原体的功效;然而,有限的信息可以在他们的一般特征和生理机能。同时,噬菌体在不同压力条件下的稳定性,如酸性和碱性pH值,高温、冷藏,没有被很好地研究。态度噬菌体应用在食品工业或行业要求他们保持稳定在酸性,碱性,高或低的温度条件。例如,食用动物的生产加以实践,比如高温处理的动物饲料,酸性或碱性环境中动物的消化道,或在农场使用的抗菌素的水平,可能影响噬菌体在应用程序的可行性。类似的挑战存在于食品加工水平,比如高温处理,发酵,高压处理。此外,使用multiple-hurdle控制策略是越来越受欢迎,在噬菌体裂解活性高可能与商业结合使用消毒液,这将要求他们与消毒液是稳定和活跃在音乐会。因此重要的是要确定稳定的噬菌体在不利条件下选择高效的噬菌体的态度在食品工业中的应用和产业。在目前的研究中,噬菌体的physiomorphological特点,从肉牛分离环境,其稳定性在pH值和温度范围宽以及它们的生长和溶解性能测定来识别和选择有效的噬菌体大肠杆菌O157: H7。
所有的分离噬菌体显示高溶解性对50孤立的活动大肠杆菌O157: H7,包括WT隔离(表1),这表明他们有一个广泛的宿主范围。研究表明,特定于一个噬菌体大肠杆菌O157: H7应变也可以感染其他O157: H7菌株(39,57,58]。在莱雅等人的研究。39O157: H7,噬菌体AR1细胞溶解所有测试菌株,而在另一项研究[59),噬菌体CEV1感染17的测试19株大肠杆菌O157: H7。从目前的研究结果类似于这些研究,揭示出孤立的噬菌体对范围广泛的毒性大肠杆菌O157: H7特异性高的隔离目标。
噬菌体在当前的研究中也稳定在pH值范围宽(1 - 11)噬菌体在其他研究相比49,60]。妞妞et al。49)透露,在pH值3的效价大肠杆菌AKFV33 O157: H7噬菌体,下降了1.9日志PFU mL−1后15分钟和2 h后检测不到。在最近的研究中,3 7噬菌体幸存下来的pH值1,当所有噬菌体幸存在pH值2和5后24 h,以最小的可行性。噬菌体有可能获得不可逆的突变在低pH值(61年- - - - - -63年),这就可以解释的生存噬菌体在低pH值在当前研究中。斯特拉克等。61年]显示噬菌体之间的线性关系在低pH值变异率和孵化,这表明噬菌体可以获得突变酸性的环境中生存下来。噬菌体在当前的研究中也稳定在碱性pH值(7 - 11),没有损失pH值7和9在pH值和最小损失效价11。在作者早期的研究的,孤立的噬菌体在水中被发现是稳定的(pH值7)一段30 d(未发表的数据)。减少噬菌体浓度在pH值11可能是由于衣壳蛋白的分离,由于高浓度的氢和羟基离子溶液中(64年]。孤立的噬菌体的能力生存极端pH值条件可以利用在许多应用在食品和畜牧业。生存在低pH值可以用来控制食源性病原体殖民在动物消化道(pH值1 - 5),通过口服57,65年,66年]。它也可以用作生物防除在酸性食物,如果汁、发酵产品,和泡菜。此外,他们的生存能力碱性pH值可以利用在multiple-hurdle方法在处理设施或食物表面(67年,68年]。
研究表明,高温灭活噬菌体由于核酸和蛋白质变性(50,69年]。山木et al。50)观察到Myoviridae噬菌体彻底失去了噬菌体活动(3.5毫升微升的日志−1)60分钟的孵化后60°C。然而,在当前的研究中,没有观察到显著减少噬菌体活动60°C 60分钟。另外,五个噬菌体(P-3 P-4, 5、P-6和P-7)还存活在70°C 10分钟。不同的噬菌体菌株不同热处理(70年),这就可以解释的差异在这两项研究的结果。此外,山木et al。50利用噬菌体感染摩根氏菌属morganii非常敏感,而高温(71年),因此可能对高温敏感。此外,一些噬菌体可以开发耐热性由于突变或强大的蛋白质相互作用[72年高温),解释了噬菌体的生存在当前的研究中。
噬菌体在冷藏和冷冻温度下生存能力决心确保他们生存在存储或装运。所有的噬菌体分离维持他们的生存能力超过90 d的贮藏期和−−20日80°C。先前的研究已经显示尾随噬菌体对制冷温度和可以保持生存能力在4°C(10 - 12多年73年,74年]。在最近的研究中,噬菌体在4°C幸存下来很好,活动以最小的损失在90天的存储。然而,相比于4°C,噬菌体不稳定在20和80−−°C和显示减少人口90天后存储。−相比20°C,噬菌体p 2和5显示更好的生存在−80°C,而其他噬菌体显示类似的生存趋势在存储温度。损失噬菌体浓度在20到−−80°C 90天的存储可能是由于冰晶的形成在冻结温度下(75年,76年]。要长期储存,建议维护噬菌体−80°C (74年),这可能对噬菌体p 2和5在当前的研究中。
噬菌体感染细菌细胞的有效性是衡量使用噬菌体生长动力学和吸附率。孤立的噬菌体有长期上升(19-40 min)和短潜伏期(夫人分钟)有一个很大的释放量(89 - 631每感染细胞的病毒粒子),表明他们后代产量很高。破裂的平均尺寸的检测噬菌体是329噬菌体感染细胞,这要比典型的空斑形成单位50 - 100细胞−1对于许多Myoviridae和Siphoviridae噬菌体(77年,78年]。P-7,此外,Siphoviridae噬菌体裂解量最多的631病毒感染细胞,远远大于其他Siphoviridae噬菌体(77年,79年]。潜伏期和上升时期的特点噬菌体是类似的其他Myoviridae和Siphoviridae噬菌体(40,78年- - - - - -81年]。噬菌体与短潜伏期和大比其他噬菌体裂解大小可能选择性优势由于高溶解性活动(78年]。这些特征孤立的噬菌体可以适用于控制策略的传播和生存发展大肠杆菌O157: H7的食物链。然而,这种方法的一个担忧是phage-resistant细菌的出现,特别是应用噬菌体在动物或农场。使用噬菌体鸡尾酒与新的或不同的噬菌体定期更新可能会解决这个问题,通过维持细菌宿主选择性压力(43,82年]。
5。结论
这项研究提供了一个更好地了解七噬菌体感染动力学的目标大肠杆菌在不同的压力条件下O157,他们的生存能力。这些信息将承受能力确定phage-based干预措施的应用。噬菌体分离在这个研究显示广泛的宿主特异性大肠杆菌O157: H7隔离和高溶解性活动,pH值和热稳定性,因此可以用作生物防治剂在食品行业。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
本研究支持的技术和业务发展计划在俄克拉何马州立大学。作者要感谢Joyjit萨哈,丽莎惠氏,布伦特约翰逊的技术支持。