比较尿的性能结核分枝杆菌抗原鸡尾酒(ESAT6 CFP10和MPT64)肺结核患者的文化和显微镜

文摘

肺结核(TB)是一个主要的全球卫生问题,是全球十大死亡原因之一。我们的研究旨在评估尿的性能结核分枝杆菌(Mtb)抗原的鸡尾酒(ESAT6、CFP10和MPT64)相比,文化和显微镜。这种描述性的横断面研究哈桑博士Sadikin总医院,万隆,从2014年1月至2016年10月。141包括肺结核患者。痰液样本检查为抗酸的细菌(锌染色)和分枝杆菌培养(LJ);结核分枝杆菌的抗原鸡尾酒在尿样检查。积极性的结核病检测的三种方法是如下:空军基地52/141(36.9%),结核分枝杆菌文化50/141(35.5%),尿抗原鸡尾酒95/141 (67.4%)。敏感性,特异性,PPV和NPV的结核分枝杆菌尿抗原鸡尾酒是68.2%,33%,31.6%,和69.6%,分别。结合这两种方法的有效性与文化作为黄金标准产生了敏感性,特异性,PPV,和NPV为90%,28.6%,40.9%,和83.8%,分别。结核分枝杆菌结合尿抗原鸡尾酒与空军基地作为一个筛选试验给出了灵敏度好,虽然特异性降低。结核分枝杆菌尿抗原鸡尾酒可以用作肺结核的筛检试验。

1。介绍

结核病是一个主要的全球卫生问题。它会导致健康不良在每年数以百万计的人们,是全世界十大死因之一(1]。最近,据估计,每年约有100万新结核病例在印尼,这比之前估计的两倍(2]。

在2015年,只有610万人获得结核病治疗质量和430万人错过了;因此更好的诊断将填补这个空缺。肺结核的诊断主要基于痰涂片镜检和/或分枝杆菌培养(3]。微观调查使用抗酸的细菌(AFB)染色是主要的实验室工具分枝杆菌物种,这是廉价、快速、特定的(4]。的困难分枝杆菌种检测如下:(1)痰显微镜的敏感性是20 - 60%;这个测试具有较高的特异性,但其他分枝杆菌结核分枝杆菌也可能染色酸(5];(2)文化技术需要2 - 3周的结果,和文化的积极性取决于数量的可行的细菌。因此,它可能会导致延迟提供确诊肺结核(6]。最近,新的诊断工具分枝杆菌检测已经出版,例如,全血干扰素(IFN -γ)发布化验(干扰素释放)和实时聚合酶链反应(PCR) GeneXpert为基础。新诊断工具似乎不适合常规临床使用,尤其是对贫困的资源设置,大部分的结核病例发生。此外,这些新工具需要复杂的实验室设置,设备和训练有素的人员(7- - - - - -10]。

分枝杆菌分泌抗原(ESAT6 CFP10和MPT64)给一个机会结核病诊断策略的一部分。抗原是由基因编码区域的差异1 (RD1)和以RD2 [11,12]。10 kDa文化滤液蛋白(CFP10)和6 kDa早期分泌目标抗原(ESAT-6)是两种低分子量蛋白质分泌Rv3874和Rv3875基因编码,分别。这些基因位于RD1结核分枝杆菌的基因组,但都没有牛分枝杆菌卡介苗(BCG)疫苗株(13]。因此,CFP10 ESAT-6分枝杆菌毒力和发病机制发挥重要作用[14,15]。肺结核28 kDa抗原MPT64,也称为蛋白质Rv1980c,位于以RD2的结核分枝杆菌基因组。这种蛋白质分泌通过积极成长结核分枝杆菌菌株。先前的研究已经证明,MPT64抗原只存在可行的和积极的细胞分裂结核分枝杆菌(16]。

Mtb特定抗原的检测一直是一个重要的辅助诊断手段在结核病的诊断。目前,结核分枝杆菌分泌特定抗原(ESAT6、CFP10和MPT64)一直在评估他们的血清学诊断的潜力。先前的研究描述为肺结核immunodiagnostic测试基于使用脑脊液和痰结核分枝杆菌的检测抗原样品(3,17,18]。高度敏感和特定的测试,提高阳性诊断率。此外,几个研究小组报道,多个抗原的结合可以提高肺结核的诊断(3,10,19- - - - - -22]。

尿是一种理想的临床标本,因为它是大量分泌和收集过程不需要侵入性的方法。通常情况下,肾脏排泄尿抗原分子量较低(< 67 kDa)或transrenal DNA不超过100个基点。然而,只有少数研究结核分枝杆菌的鸡尾酒的性能评估抗原ESAT-6, CFP-10,从尿和mpt - 64样本。预计直接排泄抗原的检测尿液中结核分枝杆菌可能成为潜在的候选诊断工具当传统文化仍为负值或不可靠的23,24]。本研究的目的是评估性能的结核分枝杆菌尿抗原鸡尾酒(ESAT6, CFP10和MPT64)肺结核科目。

2。材料和方法

2.1。研究人群

这项研究是2014年1月至2016年10月进行的哈桑博士Sadikin总医院,印尼的万隆在西爪哇省三级转诊医院。在结核病门诊病人筛选。入选标准是原因不明的患者排痰性咳嗽持续2 - 3周以上,伴有全身症状,如发热、盗汗,和减肥,根据国际标准的肺结核(开阔),和胸部x线摄影的肺结核25]。

2.2。样本采集

本研究需要连续三次痰样本和中段尿,收集每个病人的结核病治疗开始之前。痰和中段尿液收集到一个干净的无菌容器中。男性和女性参与者给予说明适当的样本收集的研究人员。

2.3。实验室程序

从每个痰标本直接涂片准备染色剂的微观调查使用空军基地Ziehl Neelsen(锌)技术(圣Reagensia公司,雅加达,印度尼西亚)和解释根据标准的指导方针。剩下的痰标本被标准N-acetyl-L-cysteine -净化(支持)氢氧化钠法和离心浓缩为300015分钟。集中痰是用于文化。≥1提供的那些标本,痰标本混合之前去污过程。Lowenstein-Jensen (LJ)琼脂(Biomerieux s,马西l 'Etoile,法国)和结核病Ag MPT64 (SD诊断、韩国)的快速检测结核分枝杆菌进行识别。观察结核文化进行每周3到8周。LJ琼脂被认为是积极的,如果分枝杆菌增长超过一个集落形成单位(CFU)。三个实验室工作人员参加能力验证之前登记的临床标本。

2.4。结核分枝杆菌尿抗原鸡尾酒

Mtb抗原鸡尾酒在尿液中检测到使用结核抗原鸡尾酒快速免疫色谱法测试(ICT) (Jei丹尼尔生物技术公司,台湾)。一百年μL样品缓冲被带进100年样本收集盒和添加μL的尿液沉积物。那时混合通过滴管,然后站在30 - 60秒30分钟。四滴(60 uL)被应用于卡的“S”区域进行测试。测试结果是读30分钟后。结果被认为是积极的,如果不同的粉红颜色的乐队出现在控制区域和测试区域。它被认为是负的,如果只有一个粉红颜色的乐队出现在控制区域没有明显的乐队在测试区域。试验结果被认为是无效的在没有粉色颜色的乐队在这两个地区,表明程序错误和/或测试试剂恶化。

2.5。数据分析

空军基地污点和Mtb抗原鸡尾酒结果收集并制作成表格,并对分枝杆菌培养结果作为金标准。敏感性,特异性,阳性预测值(PPV)以及阴性预测值(NPV)提出了染色的空军基地,Mtb抗原的鸡尾酒,两者的结合。数据分析使用统计软件。这项研究的结果提出了如图和表数量和百分比图。

2.6。道德

本研究由医学院伦理委员会批准,意大利Padjadjaran,哈桑博士Sadikin总医院(493号/ UN6.C1.3.2 / KEPK / PN / 2014)。从所有参与者获得书面知情同意。

3所示。结果

从2014年1月至2016年10月,218名参与者。其中,77名参与者被排除在外,因为他们未能给同意或尿液标本。141年的研究参与者的平均年龄35(23-47)年;91人(64.5%)是男性。大多数的参与者正常体重指数(53.1%)(表1)。结核分枝杆菌尿的积极性抗原鸡尾酒是67.4%(95/141),大于分枝杆菌培养和空军基地(图1)。结核分枝杆菌痰空军基地的组合与尿涂片对分枝杆菌抗原鸡尾酒文化黄金标准给了灵敏度和NPV高达90%和83.8%,分别为(表2)。对于空军基地涂阴例,结核分枝杆菌的尿抗原鸡尾酒可以增加43.1%的积极性,而分枝杆菌培养(图1)。

4所示。讨论

微观调查痰结核诊断仍然是最常用的方法。尽管微观调查是最快的诊断方法,灵敏度相对较低的性能。一个积极的结果,样品必须包含超过10.000杆菌每毫升(5]。这是显示在我们的研究中对分枝杆菌培养、染色性能的空军基地高达敏感性为67%,特异性为45.4%。最近,Mtb特定抗原的检测一直是一个重要的诊断结核病的诊断。分枝杆菌分泌抗原(ESAT6 CFP10和MPT64)一直在评估他们的血清学诊断的潜力。我们的研究是第一个研究评估结核分枝杆菌抗原分泌特定抗原的存在(ESAT6、CFP10和MPT64)尿液。我们将演示性能之间的微观调查和Mtb抗原鸡尾酒,与分枝杆菌文化结核病患者(表中作为一个黄金标准2)。我们的发现表明,结核分枝杆菌的结合抗原鸡尾酒帮助检测肺结核。这一发现与先前的类似研究,描述了immunodiagnostic测试基于检测结核病结核分枝杆菌抗原和高灵敏度声称可以提高肺结核阳性诊断率(3,10,19- - - - - -22,26,27]。

在这项研究中,我们发现假阳性和假阴性的Mtb抗原鸡尾酒(表2),测试作为单独的测试或组合测试,对分枝杆菌文化。某些方面有助于结核分枝杆菌假阳性的大量抗原鸡尾酒。首先,分枝杆菌培养仍然是肺结核的诊断参考标准方法。文化需求的存在10 - 100毫升的细菌样本获得的文化敏感性81.5%,特异性98.4% (5]。这表明文化积极的数量取决于杆菌毫升的样品。第二,一个积极的文化影响的可行性结核分枝杆菌,没有良好的标本处理或长运输的痰样本可能导致死亡的细菌,不能生长在媒体文化。第三,大量研究表明ESAT6和CFP 10与巨噬细胞和pneumocytes细胞溶菌作用。他们也建议ESAT6可以引起孔隙形成巨噬细胞和树突细胞的细胞膜,导致细胞内的传播,独立于细菌负荷(15,28]。因此,这些可以发现尿液中尽管分泌抗原结核分枝杆菌还在巨噬细胞。类似于肺结核lipoarabinomannan (LAM),我们观察Mtb抗原鸡尾酒的假阴性可能影响变量浓度的尿样29日]。

在研究过程中,我们也观察到空军基地涂阴病人。病人贡献了63.1%的参与者之一,与积极的分枝杆菌27%的文化。结核分枝杆菌通过添加尿抗原鸡尾酒,我们的研究表明,额外的性能从这个测试筛选,这可能增加病例检出率高达43.1%。这一发现证明了结核分枝杆菌尿抗原的敏感性和NPV性能鸡尾酒。

这项研究的局限是不同层次的教育的主题。这可能会影响理解如何收集适当的痰和中段尿,尽管研究人员教所有的科目。这可能影响痰检查和尿结核抗原鸡尾酒的结果。我们研究的另一个局限性是只使用痰文化作为黄金标准。自从获得成功的痰培养需要数量的细菌,这种限制的差距可以改善通过pcr GeneXpert,金本位,可能提供一个更好的估计结核分枝杆菌特异性的空军基地和抗原鸡尾酒测试(30.]。

总之,我们的研究表明结核分枝杆菌尿抗原鸡尾酒的附加价值来提高肺结核诊断尤其是外围卫生设置。需要进一步的研究来获得更好的特异性评估,和学习算法相结合临床、实验室和放射学结果应开发和测试有更好的管理和治疗结核病。

的利益冲突

没有潜在的利益冲突与本文相关的报道。

作者的贡献

戴维·Kartika Turbawaty, Adhi几场Sugianli, Ida Parwati贡献同样这项工作。所有作者同样导致了分析和编写的研究报告和批准最后的手稿。

确认

这项研究是由意大利Padjadjaran通过补助金为Ida Parwati教授学术领导批准。作者要感谢赫尔曼Kosasih从INA-RESPOND写作帮助和建议。他们非常感激的病人参与了这项研究。

引用

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版权

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