文摘
阐明高口服剂量的生态效应halotolerant(耐盐)indigenous-gut其他共生的细菌在生命的早期,我们进行了文化研究量化肠道的作用乳杆菌牛来源的菌株(与非凡的有氧增长能力和抑制活动大肠杆菌O157: H7和F5)对临床健康和肠道乳酸杆菌/大肠杆菌群在初生牛犊。在一个双盲placebo-randomized试验12 colostrum-fed小腿,连续出生在一个农场,是美联储l .杆菌在12小时内从出生在低(CFU /天)或高浓度()或安慰剂(抓起h, 5 d;10 d后续)。我们开发了一个2.5% NaCl-selective文化战略促进的枚举l .杆菌-strain-B80,测试了384个样本(> 1152文化)。l .杆菌-B80-like殖民地被发现在一个大比例的小牛(58%)甚至在他们的第一个24小时的生活表明流行存在应变的农场。对比研究在人为乳酸菌LGG或喂食出了名的高,但是短暂的,殖民,我们发现l .杆菌殖民统治稳定的粪便脱落日志10·g−1(无论剂量,)。高剂量显著降低其他粪便乳酸菌(如乳酸杆菌,),稍微减少体重增加小腿后治疗。第一次halotolerant应变l .杆菌抑制活动对人类病原体有能力抑制其他乳酸杆菌在活的有机体内不改变其物种丰度,导致transintestinal易位,或诱导临床疾病。未来的选择基于halotolerance益生菌可能扩大治疗产品的适用性。
1。介绍
益生菌在市场上广泛使用,高剂量轶事推荐。然而,对于大多数益生菌,实际存在剂量依赖的相关性对肠道健康的影响和其他肠道细菌基本上仍不确定,尤其是关于gut-indigenous菌株。虽然没有共识”高剂量对微生物美联储意味着什么产品,世界卫生组织和联合国粮食及农业组织益生菌定义为“活微生物管理时足够带来一个健康的好处在主机”(1]。这种定义强调nonspecified的相关性高的“量”,因为有益的结果在早期研究了只有当使用高剂量的益生菌(2]。
序列的方法评估肠道16 s rDNA微生物显示巨大的希望和在消化疾病研究已经变得越来越普遍3]。然而,他们没有概括社区组成简单的培养模拟社区(4]。伟大的变化在16 s rDNA微生物研究主要是引入的可变性与目标基因和相关地区序列,测序平台,用更少的DNA提取方法的影响(4- - - - - -7]。此外,16 s rDNA微生物分析不能区分死和活细菌和次优的敏感性,也就是说,高通量测序的极限低丰富的细菌检测识别和量化微生物在应变级别(8]。
阐明高口服剂量的特定的生态效应gut-indigenous菌株在其他共生体在生命的早期,我们进行了一次初步培养研究量化一个有氧健身的效果(耐氧的厌氧菌与显著的最佳生长在室内空气)gut-indigenous乳杆菌应变(我们以前隔绝小腿最强力的抑制活性大肠杆菌O157: H7和F5和生存能力的酸性条件和胆汁盐浓度高;参见[9])肠道乳酸杆菌和大肠杆菌对临床健康和新生儿粪便和肠道粘膜的配方奶喂养的小腿,鉴于mucosa-associated微生物群的临床意义(10]。
为乳酸菌的作用的理解(实验室,也就是说,乳酸菌,双歧杆菌肠球菌和片球菌属spp)在动物卫生和食品安全,我们以前牛> 100实验室分离特征,发现从一个潜在的治疗角度来看两种极端的概要文件类型:致病的一个抑制大肠杆菌和一个鼓舞人心的9]。百分之十的实验室分离显著抑制大肠杆菌菌株负责小腿严重的疾病和人类(O157: H7类型F5和),而另一个隔离的10%提升(倍)体外生长9,11]。在抑制病毒,calf-derived应变l .杆菌(隔离B80,此处”Lplant-B80”)最优属性适合临床前动物存在剂量依赖的相关性研究。压力有极好的有氧生长和耐酸性,菌落形态不同的和经常被孤立的小肠粘膜的小牛(9]。因为大肠杆菌O157: H7是人类的严重食源性病原体广泛存在于牛行业(11),重要的是识别机制来防止殖民和supershedding动物,特别是治疗/预防机制可能与饮食管理。
在天然植物的居民,l .杆菌是商业的最有前途的生物治疗微生物在人类,因为他们有强烈的免疫调节特性12),可以添加到植物性饮食。有助于理解gut-indigenous细菌在动物的剂量反应,这个盲安慰剂对照随机试验的目的是确定安全与定量gut-derived低收入和高剂量的影响l .杆菌Lplant-B80其他肠道实验室和大肠杆菌群当口服新生儿colostrum-fed健康的小牛。
2。材料和方法
2.1。动物和畜牧业
健康新生儿黑白花牛黑白花奶牛雄性小牛(12到24小时,美联储> 4 L新鲜的初乳在6 h出生)包含在这个临床前研究的动物保健委员会的批准下圭尔夫大学。这项研究是在冬天进行和使用动物起源于相同的实验农场l .杆菌应变最初分离(9]。防止集群和研究异质性,增加动物连续登记他们出生(前两周出生;1 - 2 /周)。可用的动物被随机分配到三组到达的研究设施(预先分配选票“帽子”策略),在研究开始前(安慰剂和低收入和高剂量的Lplant-B80),导致三个随机不均匀军团(、5、4)。没有最新的动物来自同一个农场的临床前试验。小腿被保存在个人笔。干草和水(随意),和床上用品(木屑),每日更换或尽量减少接触微生物回收。
2.2。培养液
Lplant-B80喂养动物(体重平均每组:安慰剂,44.0,高剂量,44.8,低剂量,45.2公斤,)作为冻干颗粒包含或每天CFU(低收入和高剂量),三在球盲方法赋值后,跟踪和统计分析。安慰剂丸准备0.5 g的类似于冷冻脱脂奶粉Lplant-B80丸。所有球都溶解在新鲜的全脂牛奶来自内部管理挤奶荷斯坦奶牛(),没有接受抗生素治疗> 60天,一天一次在早上5天。动物监测额外的10天。适当的体重增益分析,牛奶体积美联储每天与10%的动物体重公斤,分为两个喂奶(q12h)。BSL2-practices实施防止交叉污染和感染传染性病原体的初生牛犊。奶瓶清洗,消毒10分钟水10%次氯酸钠,与无菌水冲洗30分钟内使用。
2.3。的制备乳杆菌球盲法试验
准备Lplant-B80冻干丸,德曼的50毫升,Rogosa以及强烈的(夫人)肉汤(Oxoid)接种24小时的殖民地Lplant-B80和孵化24小时37°C,接种到1 l汤夫人。细菌被离心后24 h (4400×g, 15分钟,4°C)和磷酸缓冲盐水洗1 x。冷冻干燥,6%右旋糖酐和0.9%的氯化钠溶液(Gentran 70®)被用来resuspend细菌(1:1 w / v)。悬浮液(整除2.5毫升4 mL玻璃试管)被冻结在−80°C在冻干前24小时−50°C。结果冻干颗粒存储与橡胶密封的管帽−80°C和中使用3周的准备。生活的浓度Lplant-B80在随机颗粒中得到证实。文化从剩下的牛奶的奶瓶在摄入确认可行性。一组包含球的密封管的了在室温(23°C;湿度70%)和监测细菌生存在6、12,48个月。
2.4。后续和样品
每天进行身体检查所有动物内科专家。前体重决定吃天1和2监测新生儿健康和水化状态和在6和15天来评估体重增加。直肠温度、意愿和态度进行评估。新鲜粪便样本收集的数字触诊,直接从直肠前和接种后1 - 3天,5 - 7,9,11,13,15 ()。动物安乐死在15天来确定持久系统性细菌易位通过收集胃肠道粘膜标本(瘤胃ventral-caudal囊、幽门、回肠、盲肠的顶端,小结肠,和回盲肠的淋巴结)的枚举l .杆菌总实验室,粪大肠杆菌群,粘膜相关的微生物群的重要性正日益在我们理解肠道炎症(13- - - - - -15]。所有样品都是储存在−80°C和加工在一起喂养的最后审判。
2.5。总无氧乳酸细菌和有氧大肠杆菌群
立即收集后,粪便变均匀,加权,整除(5 - 10 g)存储和冷冻干燥。调整为变量的粪便含水量新生儿动物,所有细菌枚举分析调整CFU·gr干物质和规范化−1干燥的粪便。2粪便的含水量决心通过冷冻干燥整除每采样一天。枚举的粪便进行了实验室和大肠杆菌群spread-plate连续稀释法和10倍。夫人琼脂用于枚举的实验室(厌氧,48 h, 37°C)和大肠杆菌群MacConkey琼脂(有氧,24 h, 37°C)。
2.6。隔离复苏的协议Lplant-B80
我们先前报道,Lplant-B80生长在汤夫人与盐酸调整pH值4,这是耗氧能够生长在NaCl-MRS琼脂(9]。我们结合这两个强大的属性优化的隔离与分化Lplant-B80-like殖民地从其他实验室在粪便/肠样品。而rifampicin-resistant subclone我们准备这个研究(二十24 h-incubation段落与不断增加的抗生素浓度),测试表明没有必要选择抗生素。进行了优化实验和盐酸氯化钠与粪便飙升Lplant-B80。的检测极限实验接种粪便CFU / g。我们也验证了该方法的一致的选择性能力在与其他20个随机coculture实验室隔离代表的光谱实验室集合,以前来自相同的农场和时间框架(9]。Lplant(即-B80殖民地有别于其他实验室。,yellowish, 4-5 mm round flat colonies, Gram-positive short rods) after aerobic incubation on 2.5% NaCl-MRS agar at 37°C for 3–5 days.
2.7。定量和定性检测Lplant-B80
为定量(CFU估计)在粪便,连续稀释10倍准备使用pH4-MRS肉汤,耗氧孵化在37°C 2 h(最佳时间没有影响Lplant在验证实验-B80 cfu),镀和传播(100μL)有氧孵化到-nacl-mrs 2.5%琼脂在37°C三天。定性的浓缩(存在/没有)的Lplant-B80,接种pH4-MRS培养基配方孵化了额外的24小时;然后,10μL的肉汤-nacl-mrs琼脂飞跑到2.5%。
组织的检测Lplant-B80在粘膜表面是基于定性的一式三份分析(存在/没有)用肉汤。总之,清除肠道的内容后轻轻pressure-flushing PBS的表面通过50毫升注射器/ 18 G针,粘膜无菌解剖进行有氧浓缩在5毫升pH4-MRS汤作为粪便的描述。淋巴结是培养后纵向切割片1 - 2毫米,0.5厘米。每一批样品有三个热压处理过的肠道标本兼任测试-控制。Lplant-B80-like殖民地枚举有氧孵化,5天后纯化-nacl-mrs亚文化在2.5%琼脂,生化特性测试,确认一个子集桑格16 s rRNA基因的测序分析。
2.8。快速微型生化代码进行初步确认
验证隔离协议和快速的初步确认Lplant-B80-like殖民地在临床前试验,细菌生化资料进行随机的Lplant-B80-like隔离和其他恢复使用4小时孵化实验室小型洗液水晶厌氧ID系统(正欲;245010),29日测试可能的酶反应和报告整体再现性为99.1% (96.2 - -100%)16]。29日反应的产生模式转换为数字档案数字用作标识存储在一个桶的基础数据库,使用比较方法和相似性的百分比/概率对最好的打击。这个系统的目的是识别110种临床相关的厌氧菌,包括乳酸杆菌l .嗜酸的l .干酪乳杆菌l . catenaforme酵母,l . jensenii l . johnsonii和喂食(16]。在这项研究中与非隔离Lplant-B80-like形态、革兰氏染色剂或产生意想不到的洗液概要文件,进一步测试50(15%的隔离)使用API ch使小型化生化测试(bioMerieux)进一步限定表型轮廓概率和16 s rRNA测序物种水平确认作为首选分子方法(17,18]。
2.9。16 s rRNA系统发育分析
16 s rRNA基因的部分序列进行选择隔离使用引物(BSF8/20-F, AGA GTT TGA太极拳TGG CTC AG);BSR534/18-R, ATT ACC GCG GCT GCT GGC)放大变量地区V1-V3(500个基点)19)以下原则实验室(20.]。装配序列比较序列的口头管理隔离Lplant-B80,以前的特点(9]。16 s rRNA基因序列在NCBI Blastn数据集。neighbour-joining方法引导共识树推断从500年创建复制使用MEGA5 [21]。进化距离计算使用p——远程方法和使用1日,2日,3日密码子和非编码位置,删除了模棱两可的立场对于每一对序列(21]。
2.10。统计分析
单向方差分析与多个曲线下面积的以及比较重大值被用来分析治疗的效果在粪便含水量和CFU号码。双向方差分析重复措施是用来确定治疗和效果以及多个意味着如果比较合适价值是重要的。的复苏治疗的效果Lplant-B80分析比较全面的日志10CFU每组平均天的积极的文化。使用SAS软件(SAS研究所有限公司,卡里,NC) (SAS, 1996)。非参数方法时使用的假设并没有达到自己所描述的(22,23]。卡方检验是用来比较的比例。
3所示。结果
3.1。的可行性Lplant在冻干丸-B80期间存储
细菌计数在冰冻Lplant-B80丸确认预定剂量的管理和文化丸储存在室温下几个月显示,CFU下降的速度1 - 2日志10单位在6 - 12个月的存储。48个月后,高剂量颗粒测试10 CFU / 100毫克的颗粒。这同时和前瞻性分析表明l .杆菌生存的准备和存储。
3.2。口服没有疾病的临床症状
口服的l .杆菌应变Lplant-B80小牛导致没有肠道或系统性疾病的临床症状。虽然水样粪便(和腹泻)通常在初生牛犊,没有观察到的差异的累积数目的天拉肚子在研究过程中,或粪便含水量在停药后三个治疗组Lplant-B80 (6 - 15 d,方差分析,)。身体体重在组织管理中是相似的Lplant-B80;然而,它倾向于在动物低后高剂量(M-W随访期间,6 - 15天,;图1)。
(一)
(b)
3.3。快速生化资料的初步确认Lplant-B80
114年测试后纯单身Lplant-B80-like细菌隔离,从粪便和冻干Lplant-B80丸,两个独特的快速(4小时)生化洗液概要文件被识别和用于初步生化确认美联储Lplant-B80压力。参照24 h殖民地l .杆菌隔离球喂小牛(孵化平原和NaCl-MRS琼脂2.5%,数字2(一个)和2 (b))取得BBL-ID代码011066-3-062 L-methionine特点是积极的反应,L-phenylalanine, L-leucine,丙氨酸,L-isoleucine, pnp型β-D-galactoside pnp型-β-D-glucoside pnp型-α-D-glucoside p-n-p-N-acetyl-glucosaminide 4μ-β-D-cellobiopyranoside、呋喃糖和吡喃糖。相比l .嗜酸的参考应变写明atcc - 314,我们的新发展l .杆菌隔离是否定的赖氨酸、精氨酸、组氨酸L-serine, pnp -α-D-galactoside。因为识别Lplant-B80被检查促进殖民地后3 - 5天的孵化NaCl-MRS琼脂2.5%,逾岁这样的殖民地也进行了测试。的兴趣,产生了桶概要文件是略有不同(011046-3-000);因此,测试候选人的殖民地总是对新鲜的24 h亚文化Lplant-B80怀疑隔离。进一步测试的15%Lplant-B80嫌疑人隔离与API CH和16 s RNA分析证实经济复苏Lplant-B80隔离整个长度的研究和辅助识别的独特的菌落形态Lplant-B80文化琼脂(数据隔离2(一个)和2 (b))。
(一)
(b)
(c)
3.4。复苏的Lplant-B80从粪便和肠道粘膜
本研究涉及的微生物分析120份粪便样本和72年肠道粘膜/淋巴组织,使用直接和富集培养的方法这里发达,使的恢复Lplant-B80-like隔离并测试其政府对大肠杆菌和乳酸杆菌数量的影响(样品测试> 1152琼脂板)。使用直接选择性电镀和桶/形态标准,l .杆菌类似Lplant-B80恢复两个12新生小牛之前的管理Lplant-B80 < 24小时的动物年龄和从27%(30样品)的粪便样品中的初老期的安慰剂组(15天)。Lplant-B80-like细菌恢复35%的样本Lplant-B80对待动物。使用浓缩肉汤启用回收率增加2倍Lplant-B80在所有组(47 - 50%;图2 (c))。Lplant-B80-like在治疗最常见的动物管理期间;然而,菌落的数量l .杆菌类似Lplant-B80出乎意料的阳性样本中类似的跨组织和随着时间的推移,(日志10/ g,方差分析,;图3(一个))。在调整后的回归分析,有轻微不重要的抑制性影响大肠杆菌群的高剂量组(图3 (b))。总乳酸菌,口服剂量的高Lplant-B80显著降低粪便实验室,直到研究结束的(低剂量组和安慰剂组相比,方差分析,曲线下的地区,和0.01;图3 (b))。
(一)
(b)
乳杆菌Lplant-B80(根据菌落形态和100%的相似性洗液)被证实使用single-colony PCR和桑格16 s rRNA基因的测序。Phylogenomic 16 s rRNA基因数据的分析对各种隔离在图4说明Lplant-B80恢复肠道粘膜的三个动物:两个低收入和高剂量回肠的小腿和盲肠的一个大剂量的小腿,表明这一点l .杆菌(Lplant-B80-like)菌株可能流行的农场和适应初生牛犊的肠道。没有其他组织产生Lplant-B80。总的来说,使用的应变是非同寻常的发现与粘膜表面(4.2%,3 72肠道和淋巴组织)相比,其普遍存在在粪便(50%,卡方检验,)。其他pH-resistant实验室,增加耗氧与选择性-nacl-mrs琼脂2.5%来自粪便协议包括在内片球菌属acidilactici,粪肠球菌,肠球菌hiriae,唾液l .。其他实验室发现肠道粘膜的选择性培养基l . pentosus,l .嗜酸的,唾液l .(图4);然而,没有一个人有大黄色变色殖民地的特点Lplant-B80在本研究中使用的琼脂(图2 (b))。
4所示。讨论
尽管数十年的观察,需要给予大剂量的益生菌产生积极健康的影响(24),所知甚少的剂量反应效果host-indigenous乳酸杆菌在肠道健康。我们评估了安全性和剂量依赖性殖民calf-derived属性和抑制作用l .杆菌应变在immune-competent B80 colostrum-fed初生牛犊,使用文化殖民的黄金标准测试的可培养的微生物在这个时间序列重复实验分析。在这种情况下,设计一个选择性协议基于生理盐水(检测极限,103Lplant-B80接种粪便)和快速微型生物化学,我们发现(我)l .杆菌自然发生新生儿刚出生的牛犊高患病率(50%),(2)这个吗Lplant-B80应变假定有一个自然的持久性农场,因为天然隔离与原始菌株分离一年前从小腿的国际执法学院(9),(3),在高剂量管理实验安全与适当的母源性免疫的被动转移,小牛(iv),高剂量减少大量的总可耕种的乳酸杆菌粪便的小牛,总共生的大肠杆菌数量没有减少,尽管报道抑制对致病性的影响大肠杆菌F5和O157: H7 (9]。
缺乏证据的区域肠系膜淋巴结表明肠道易位l .杆菌应变B80包含在肠道健康的小牛。这些实验观测相结合的优秀的有氧自然增长和halotolerant微生物(能够茁壮成长在2.5%氯化钠)资产支持最近说明生物技术的优势Halobacteria作为潜在饲料补充剂,特别是l .杆菌已知物种茁壮成长在植物和植物的发酵饮食25]。
乳酸菌政府减少了粪便肠杆菌科和厌氧球菌在小牛26,27];然而,先前的报告仅限于经常描述主要的影响l .嗜酸的或乳酸杆菌混合物以最小的信息在其他可耕种的粪便实验室(28),或者只大肠杆菌抑制可见当使用全脂牛奶饮食(29日]。我们的研究文件的抑制作用,高剂量的一个土著乳酸菌物种已经在其他肠道实验室,与人为喂食和动物l . pentosus在其他动物物种(学习30.,31日),更高的粪便数量(“殖民峰值”)是观察在口服(补充),脱落的大小l .杆菌应变保持不变在我们的研究表明没有肠道的生长Lplant-B80在研究过程中。
尽管观测到稳定的脱落Lplant-B80,高剂量显著减少了其他肠道实验室。这些结果似乎自相矛盾l .杆菌因为其他人已经报道其他乳酸杆菌的变化总肠道粪便的实验室计数小牛(28,32]。极大的兴趣,最近,政府l .杆菌应变WCFS1(耐preculture氯化钠)酸奶生产过程中也导致其他乳酸杆菌的抑制作用,特别l . delbrueckii无性系种群。bulgaricus(33),作者不能属性具体原因。与高剂量的减少其他实验室Lplant-B80在我们培养的研究不太可能由于生态竞争的排斥或位移仅二次生长Lplant-B80因为它脱落在治疗组相似,尽管当地排斥是可能的(34]。更有可能是抑制作用通过生产plantaricins(细菌素。,antimicrobial peptide targeted against Gram-positive bacteria, including lactobacilli, and Gram-negative bacteria like沙门氏菌种虫害和大肠杆菌)[35,36),但这仍然是一个假设需要进一步测试了体内。越来越有证据表明免疫介导的调制可以发生在协会与特定病原体通过调制的免疫细胞和细胞因子受体或细胞壁成分的剂量依赖性的存在。代谢调节机制与肠道微生物群也是可行的37,38]。调制的实验室通过社区使用宏基因组成分的变化正在调查中。
乳杆菌菌株越来越有前途的潜在益生菌如耐氧的菌株,可以包括在球状的或发酵饲料添加剂33,39]。承诺作用的益生菌调节动物肠道健康,控制人畜共患病原菌,和身体获得效率需要深入了解益生菌的影响在其他实验室。虽然这项研究可能表明,这种细菌可以导致统计管理减少经济增长效率与高剂量在很短的时间内,用谨慎的态度来解释这些发现很重要。需要更长时间和更大的临床试验来验证这一观点自补偿生长在新生儿是可能的,最小化的相关性这潜在的长期副作用。
乳酸杆菌通常被认为是有益的,但在不同的情况下(不是由于微生物膳食添加剂的管理),粪便的净减少乳酸杆菌已被报道在其他动物物种和人类由于强调因素,这些被认为带有添加剂的负面健康影响的风险(40]。猴子,早期母体分离作为压力源因素导致肠道感染风险增加空肠弯曲杆菌和弗氏志贺菌和减少了粪便乳酸杆菌的数量41,42]。实验和临床利益,产前声学压力造成在妊娠导致新生儿猴子猴子有减少粪便乳酸杆菌在出生后数周(42]。在老鼠身上发现类似的结果根据压力测试。减少粪便乳酸杆菌被强调诱导小鼠使用常数摇晃他们的住房笼,一夜之间由物理约束在有限空间,社会压力或冲突,或住房老鼠没有床上用品材料。水限制,尽管认为压力,并不总是复制这样的小鼠粪便乳酸杆菌减少(43- - - - - -45]。压力也减少tissue-associated实验小鼠的结肠中乳酸杆菌(46]表明stress-mediated免疫调节可能有害的互动共生的主机与乳酸杆菌。在人类中,研究大学生在期末考试周的凳子的乳酸杆菌减少而粪便浓度这学期的第一周47]。尽管唾液皮质醇表明压力与乳酸杆菌减少考试时期,值得注意,饮食也异常发生在期末考试,可以独立调节肠道微生物群,可能减少粪便乳酸杆菌的浓度。
Stressor-induced免疫调节是似是而非的一部分gut-axis假设连接主机健康肠道微生物群,减少乳酸杆菌和双歧杆菌在上述场景。然而,在目前的研究中,每日初生牛犊的临床检查和评估的食欲,动物行为和态度的牛奶喂养和环境表明,压力或抑郁不太可能导致乳酸杆菌减少我们的报告。最接近之间唯一的区别在治疗组(高与低剂量Lplant-B80)是1000倍l .杆菌cfu,可能已经被动物作为强调的因素。动物的处理程序也盲目的治疗规范,它也不太可能偏见存在的形式管理/ husbandry-induced压力只有在高剂量组的小腿。实验,小鼠强调更有可能增加对大肠杆菌肠道感染(例如,枸橼酸杆菌属rodentium)[48通过管理],可以恢复这种乳酸菌(49]。在我们的研究中,减少可耕种的大剂量乳酸杆菌Lplant-B80集团并没有导致粪大肠杆菌群的负荷增加或初生牛犊肠道疾病的迹象,表明以前观察到的压力之间的联系,增加感染的风险,减少粪便乳酸杆菌并不完全适用于我们的发现。
在一系列研究验证所需的商业益生菌,这份报告代表了第一个体内安全性和殖民blinded-placebo研究这一毒株在小腿上。意识到技术上的困难和限制的16 s微生物物种形成中的可培养的细菌乳酸菌属,我们的结果被认为是最佳的识别和评估的影响可耕种的Lplant-B80-like细菌新生儿动物,由single-colony 16 s rDNA Sanger测序的基因。本研究提供了初步的统计证据,显著减少粪便实验室的小腿在高剂量组(评估使用有效的重复测量统计方法)的浓度无关l .杆菌-B80像粪便中的细菌。
总之,我们的研究结果表明,高剂量的halotolerant gut-indigenousl .杆菌-B80减少可耕种的乳酸杆菌在初生牛犊不增加其物种丰度和没有施加过度的迹象临床疾病或地区肠系膜淋巴结细菌易位。我们的研究结果并不支持假设总是减少乳酸杆菌与大肠杆菌增殖和肠道感染或疾病的风险。机械的研究使用常规和无菌主机,辅助用荧光染色体报告探针,为特定的端点健康结果和临床试验是必要的,以确定的影响减少实验室卫生和使用高剂量的潜在价值和halotolerance标准选择适合未来商业的益生菌菌株。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
作者想表达诚挚的感谢加布里埃尔环球统计建议,技术援助乔伊斯卢梭,安大略农业部和食品的财政支持。亚历山大Rodriguez-Palacios收到作为一个助理教授克罗恩氏和结肠炎基金会的慷慨支持美国通过职业发展奖。