文摘

背景。拒绝面临的主要缺点是肾移植操作。复杂的和重叠的因素,主要与免疫系统有关,负责这个拒绝。升高血清水平的sCD30经常被记录作为肾移植排斥反应的指标,而BV病毒被认为是最严重的后果之一,免疫抑制治疗的肾移植受者(RTRs)。的目标是。本研究旨在确定协会BK病毒负荷水平血清的sCD30 RTRs患有肾病。患者和方法。共有50 RTRs肾病和30年龄看似健康的人参与了这个研究。从每个参与者获得的血清样本。实时PCR用于量化BK病毒负荷RTRs血清,而ELISA技术来估计sCD30的血清水平。结果。百分之二十二的RTRs探测BKV意味着病毒载量为1.094E+ 06±2.291E+ 06。RTRs显示更高的平均血清sCD30水平(比控件(U /毫升)U /毫升)有显著差异。BK病毒负荷水平显著正相关,血清中的sCD30 RTRs组。结论。这些结果表明,血清水平的sCD30 BK病毒血症的可以作为一个指标,和相应的免疫抑制机制应调整。

1。介绍

肾移植现在被认为是最合适的选择治疗大多数病人患有终末期肾病(ESRD)。然而,拒绝(急性或慢性)仍然是最挑战面临这一策略的成功。为了克服这些挑战,免疫抑制药物已成功应用但不是没有不利影响。影响了黄金机会主义者多瘤病毒等微生物体内发挥掩盖不利的行动(1]。平衡使用免疫抑制药物可能是RTRs后续的一个至关重要的因素。然而,即使有高的预防措施在使用免疫抑制,很大一部分患者在十年内发展进步的肾脏功能障碍,肾功能衰竭(2]。因此,预测肾拒绝意义之前在这些情况下。

120 - kda CD30分子跨膜糖蛋白,属于肿瘤坏死因子受体(TNF-R)超级家庭缺乏死域(3]。这个分子在健康组织的表达仅限于休息B和T淋巴细胞(4,5),在较少的程度上激活单核细胞和嗜酸性粒细胞6]。Upregulation CD30发生在激活淋巴细胞,以应对不同的刺激。已经提出了CD30许多生理功能。在这些功能的激活c-Jun n端激酶(物)和核因子κb细胞(NF -κB),生产活性氧(ROS) (7- - - - - -9]。此外,这种分子被发现有一个costimulatory功能激活的淋巴细胞特别是Th2细胞,促进细胞因子的生产函数以及增殖、分化、和生存的T细胞(10,11]。

后膜CD30分子的表达,它是proteolytically裂解产生88 kda可溶性分子的体液(12]。因此,血清水平的sCD30可以用作细胞表达CD30定量指标。人们已经发现,血清水平的sCD30与同种异体移植物排斥事件的早期发作发生率较高(13),而高浓度的sCD30在血透患者的血清从许多研究报道14,15]。

BK病毒nonenveloped,多瘤病毒家族的双链DNA病毒,主要影响免疫功能不全的患者。BKV可能导致肾病的肾移植受者接受免疫抑制治疗,导致肾脏功能障碍,可能贪污损失(16]。

大约15%的RTRs有这种病毒在缺乏一个有效的策略17]。原发感染后,BK病毒建立延迟阶段尿路上皮细胞和肾小管上皮细胞。本研究旨在探讨BK病毒协会的负载的血清水平sCD30 RTRs。这种相关性可以使用临床为基础调整剂量的免疫抑制药物。

2。材料和方法

2.1。研究人群

共有50 RTRs组织病理学确诊肾病(基于慢性移植肾间质纤维化和肾小管萎缩)出席肾脏疾病和移植的中心在医学巴格达城市/ 2014年3月至2015年2月期间参与了这个研究。平均posttransplantation期为16.134个月(少于12个月29患者和12个月或更多在21个病人)。获得了每个参与者的同意书包括的信息时代,性,和移植的日期。排除标准是移植肾功能延迟恢复、先前的同种异体移植物,感染的历史事件在移植后第一个月。其他30个人(19男性和11个女性,平均年龄47.68岁)被招募为健康对照组。有人从这群人有自身免疫性疾病史或移植物移植排斥。3毫升静脉血收集从每个患者在一个平面管血清分离。

2.2。免疫测定

酶联免疫吸附试验(诊断自动化有限公司、美国)被用来估计血清水平的sCD30使用商用设备(英杰公司/美国)制造商的指示。简单地说,150年μL(蒸馏水(DW)添加到标准和空白的井,在140年μL (DW添加到样本井。样本(10μL)添加到指定的井,在室温下,微型板块孵化为3小时,然后洗了三次。一百年μL(三甲衬底的解决方案是添加到每一个微型板块又孵化,在室温下放置15分钟停止时解决方案(100μL)被添加到每个。吸光度是阅读与分光光度计450海里。

2.3。估计BK病毒血清中负载

从400年病毒DNA提取μL血清使用准备工具包(ExiPrep病毒DNA / RNA工具包、Bioneer、韩国)根据制造商的指示。病毒载量测定使用AccuPower®BKV定量PCR工具包,Bioneer,韩国,检测和量化的四个基因型BKV在人类血清DNA定量150 - 10的范围⁷拷贝/毫升。区域内BKV小t抗原基因,编码的衣壳蛋白(VP1、VP2、VP3)和agnoprotein,使用Exicycler放大™96年thermocycler (Bioneer、韩国)。内部积极控制(IPC)是用来检查是否抑制PCR的样品,并确定核酸的扩增在每个。

Nontemplate控制被用来确定样品是否受污染的样品预处理过程中,核酸提取和PCR准备。Taqman探针与家人和TAMRA荧光团和冷却器,分别采用PCR检测的产品。实时数据收集在放大周期的第二步。

一个标准曲线(图1)是使用五个创建量化BKV DNA控制从1×10³拷贝/毫升1×10⁷拷贝/毫升。热协议包括最初在95°C变性10分钟紧随其后50周期为30秒95°C的变性、退火和合成54°C 90秒,与最终控股阶段25°C 1小时。

2.4。统计分析

社会科学统计软件包版本16.0(美国芝加哥)是用来分析数据。值表示为平均值±标准偏差(SD)。独立样本以及被用来比较意味着sCD30 RTRs之间的血清水平和控制,而二元相关测试是用来检查sCD30 BKV加载和血清水平之间的相关性。优势比为不同风险因素计算使用逻辑回归测试。重要的是可接受的水平值≤0.05。

3所示。结果

这个研究包括了50 RTRs确诊肾病和30个人健康对照组。表1显示了nephropathic患者的人口统计学和临床特征。

33个RTRs的年龄不到40年的时间,只有4个(12.12%)呈阳性BKV相比7(41.11%)的17个RTRs≥40岁有显著差异(或= 5.075,95% CI = 1.223 - -21.065)(表2)。确切的四分之一(25%)的男性RTRs阳性BKV相比,14.28%的女性。然而,不同的是不重要的(或= 0.5,95% CI -2.673 = 0.094)。RTRs的PTP小于12个月显示更高比例的BK病毒血症(27.58%)比那些PTP 12个月或更长时间,但不同的是不重要的(或= 0.348,95% CI = 0.101 - -1.90)(表2)。

3.1。BKV负载

50 RTRs入学,11例(22%)显示与病毒载量检测BK病毒血症,范围从6.12E+ 04至7.81E+ 06,意味着= 1.098E+ 06±2.291E+ 06,而对照组没有阳性BK病毒血症(表3)。

3.2。血清水平的sCD30

肾移植受者表现出较高水平的sCD30范围从2.252 U /毫升97.144 U /毫升,意味着=U /毫升,比控制范围从0.291 U /毫升18.242 U /毫升,意味着=.304 U /毫升,有高度显著性差异(,)(图2)。

3.3。相关性BKV RTRs sCD30的加载和血清水平

所有血清样本BKV阳性血清sCD30水平超出了正常的限制(20 U /毫升)。相关测试显示阳性日志之间的显著相关性BKV sCD30加载和血清水平(,)(图3)。

4所示。讨论

BK病毒负荷量化的血液是一个有用的工具不仅对BKV肾病的诊断还对监控反应治疗。当这个量化与血清水平的sDC30估计有关,它可以提供有价值的信息来决定如何处理病人的免疫抑制机制,给出和代表一个可能的移植排斥的预后因素。

唯一重要的危险因素BKV在本研究病人的年龄。事实上,这是不公平的,排除其他因素出现无意义的或许是由于样品的相对体积小。总之,很好的证明,老年人是一个风险因素BKV [17]。逻辑来解释这种受损的免疫反应在老的年龄。老化对免疫系统的影响非常广泛,涉及到减少的速率幼稚T细胞和B细胞。此外,老化影响的成分和质量成熟淋巴细胞(18]。

本研究的结果显示,22%的BKV RTRs是积极的。这个结果不同意的Al-Obaidi et al。19)检测到BK病毒血症在伊拉克RTRs只有12.1%。这种差异可以归因于工具包用于量化的分析灵敏度的病毒DNA 800拷贝/毫升与对我们的装备150拷贝/毫升。此外,目标基因也会影响结果。设备使用在我们的研究目标小t抗原基因,而使用的工具包Al-Obaidi等人的目标大t抗原(19]。然而,高达31%的BK病毒血症是记录在一个队列研究的希腊RTRs患者(16]。一般来说,样本的变化类型,DNA提取技术,引物和探针序列,BKV菌株DNA用于创建标准曲线都可以影响量化结果,介绍临床显著差异(20.]。值得一提的是,本构评价病毒血症并不在上述研究和开展我们的。因此BKV负载可能不能反映实际的病毒血症在整个肾移植。

没有共识的切断病毒载量BKV可以被认为是临床的重要性,尽管一项回顾性研究表明,BK病毒负荷> 4日志拷贝/毫升与发现BKV活检(21]。然而,在任何数量的血液检测BKV组件(血浆或血清)的实时PCR和具体很敏感。敏感性和特异性在这种情况下是100%和90%,分别为(22]。这是因为,为了使血液中的病毒被激活和复制,它已经复制,可能造成一些损伤肾脏的肾小管上皮细胞在潜伏状态(23]。因此,使用定量PCR试剂盒可以检测相对较低病毒载量为筛选测试至关重要。

在许多情况下,病毒感染可以导致sCD30海拔。例如,Fattovich et al。24]表明,血清sCD30水平都有提高,但在大多数哈佛商学院Ag-positive慢性肝炎患者,而Haque et al。25)发现,这种增加是与eb病毒(EBV)感染有关。因此,它不是发现高水平的不合理sCD30与BKV有关。但这种情况意味着困境,因为我们的病人应该是在免疫抑制和整体免疫细胞(包括轴承CD30)降低。

为了解释这个矛盾,我们必须记住,免疫抑制斜移植耐受的平衡有利于促进监管(Foxp3 +、CD4 + CD25 +) T细胞的同时抑制细胞毒性T的效应细胞(26]。因此,CD30-bearing细胞的数量将不会受此影响治疗。另一方面,病毒感染可引起活化的免疫细胞,尤其是CD8 + T淋巴细胞。这激活不一定是与这些细胞数量的增加有关。相反,将会有一个刺激的蛋白水解乳沟CD30紧随其后sCD30的释放到血液中。虽然这个分裂的机制还不清楚,金属蛋白酶酶可能有作用。BK病毒负荷之间的正相关和血清水平的sCD30支持这一假说。因此,似乎sCD30不一定是免疫应答的强度的指标,因为乳沟CD30可以诱导即使有固定数量的免疫细胞的存在。

血清水平升高的sCD30 RTRs记录在许多先前的研究和被用作移植排斥的不良预后因素(27,28),因为它表明细胞和/或肱骨武器对同种异体移植物的免疫系统。这样的活动是伴随着CD30-bearing细胞的绝对数量的增加。然后,这个标志的乳沟什么原因导致sCD30的血清水平的增加。

这项研究的一个限制是,BKV负载和sCD30水平只能评价一次由于技术和资金困难。预计BKV负载发生波动的时间受到宿主免疫状态的影响。另一方面,sCD30水平不仅反映了对病毒激活免疫,但也反映了alloreactive细胞的激活。因此,执行连续测量sCD30和BKV负载可以给更好的评价sCD30作为明智的生物标志物与肾病RTRs BKV感染。

积极然而,本研究的结果表明,与海拔BKV associates sCD30的血清水平,这个标记可以作为指标不仅对移植排斥的风险而且BKV可能复制的。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突的存在。

确认

作者感谢所有工作人员病毒学/ Al-Kadhimiya医院寻求帮助的患者样本集合和医学研究单位,医学院AL-Nahrain大学为所有支持在工作期间,他们感谢卡西姆博士Sharhan批评和技术援助。