紫花苜蓿精油的化学组成及抑菌活性万寿菊minuta(菊科)抗植物病原细菌

摘要

本研究的目的是确定植物精油(EOs)的化学成分和抑菌活性万寿菊minuta对三种植物致病细菌假单胞菌savastanoipv。phaseolicola，黄axonopodispv。phaseoli,黄axonopodispv。manihotis．在改良的cleenger -type装置上采用水蒸气蒸馏法提取精油，用圆盘扩散法评价精油的抑菌活性。采用气相色谱-质谱联用(GC/MS)对EOs的化学结构进行分析。鉴定出20个化合物，占挥发油总量的96%，其中单萜和倍半萜分别占70%和30%。香精油T. Minuta.对试验病原菌具有良好的抑菌活性假单胞菌savastanoipv。phaseolicola抑制区直径分别为41.83和44.83 mm．EOs对试验细菌的最小抑制浓度和最小杀菌浓度在24-48范围内 mg/mL和95-190 这些发现为药物的使用提供了科学依据T. Minuta.精油作为一种植物源农药用于植物病原细菌的管理。

1.介绍

在过去几十年里，农业技术的进步和病虫害管理的改进大大提高了全球粮食生产力。然而，尽管如此，植物病原体造成的农业损失仍然是世界许多地区实现粮食安全的一个重要制约因素。据估计，由于植物病原体造成的收获前和收获后作物损失占全球产量的10-16% [1，2］.虽然植物致病菌对粮食安全的威胁比植物致病菌造成的威胁要小，但细菌性植物病害的经济影响不可低估[3.］.

尽管据估计，细菌种类的数量从数万种到数十亿种不等，但已知其中只有大约100种是植物病原体[3.，4］.然而，植物病原菌在农业中造成了巨大的损失，因为大多数具有农业重要性的植物都易受至少一种细菌疾病的影响，而且，对一些作物来说，细菌疾病大多是造成产量损失的主要原因[5］.许多植物致病菌在其生活史策略、寄主范围和寄主病原互作方面表现出巨大的多样性，这使得它们对作物损失的影响非常显著[6］.单一的细菌物种可以负责数百种不同的植物疾病。例如，大约350种不同的植物疾病是由属内的物种引起的、黄［7]。最重要的革兰氏阴性细菌属为农杆菌属、欧文氏菌属、假单胞菌,和、黄。四属的所有成员都是单细胞的，大小约为2.0 × 0.7的非孢子形成棒μ革兰氏阳性植物病原细菌主要有4个属，即节细菌属，Clavibacter，Curtobacterium,和红球菌属,这些都是有氧运动[8］.

由于杀菌剂供应有限等因素，控制植物细菌性疾病仍然是一项重大挑战[9]及微生物对现有化学除害剂产生耐药性[10］.此外，常用于管理许多细菌植物疾病的基于铜的农药近年来，由于它们的毒性，这使得它们对人类，动物和环境产生了极大的健康风险[9，11］.因此，寻找和开发新的、环境友好的合成杀菌剂来管理植物致病菌的方法正在继续，这是极其重要的。目前，除了其他自然来源，植物是寻找新的抗菌剂的起点，或作为新的、更有效的化合物的模板，许多基于植物的抗菌剂已经成功测试和商业化[12，13］.

在寻求合成抗菌素替代品的过程中，引起研究人员浓厚兴趣的植物产品主要有植物的次级代谢产物，如精油[14，15］.精油(EOs)也被称为挥发油或芳香油，是从各种芳香植物部分获得的芳香油液体。它们并非所有植物都能产生，但它们的出现仅限于60个科的2000多个植物品种。特别富含精油的植物科包括菊科、桃金娘科、松科、姜科、伞形科、唇形科、菊科、芸香科和禾萁科[16］.精油主要是萜类特别是单萜类和倍半萜类及其含氧衍生物如醇类、醛类、酯类、醚类、酮类、酚类和氧化物的复杂混合物[10，15］.据估计，植物精油中有超过1000种单萜和3000种倍半萜结构[17]香精油形成于分泌细胞的原生质中，通过蒸汽蒸馏等不同方法从整个植物或植物部分（如花、芽、种子、叶、嫩枝、树皮、果实和根）中分离[16］.

近年来，植物精油及其成分对多种植物致病菌的抑菌作用得到了广泛的研究。例如，Vasinauskiene等人[13]发现七种精油对植物病原菌的抑菌活性不同程度:Erwinia carotovora无性系种群．胡萝卜，实验，假单胞菌marginalispv。边缘，P．两pv。两，丁香pv。两，P．两pv。番茄,芽孢杆菌在另一项研究中，香精油牛至属植物acutidens()配伍及化学成分Ietsw。牛至属植物rotundifolium木香。,牛至属植物vulgare结果表明，L.对25株植物病原菌均有较好的抑菌效果，抑菌圈直径在8 ~ 48 mm [18］.三种EOs的抗菌活性归因于其含有香芹酚和百里香酚等酚类成分。另一项研究调查了18种植物精油的抑菌活性根癌土壤杆菌和Erwinia carotovoravar。胡萝卜［10］．报告了测试精油的显着抗菌活性E. Carotovora.var。胡萝卜更容易受油的影响农。本研究的目的是确定水蒸气蒸馏油的化学组成T. Minuta.和油对植物致病细菌的抗菌活性：假单胞菌savastanoi光伏．phaseolicola，黄axonopodis光伏．phaseoli,和黄axonopodispv。manihotis．

2.材料和方法

2．1．植物材料的收集及精油的提取

植物的地上部分(叶、花和茎)T. Minuta.从Maseno地区（0°0'21.43'，34°36'6.23''e和1524个Masl）Kenya，在开花阶段收集。使用改进的裂隙型装置中的蒸汽蒸馏法提取精油[19］.将植物材料切成小块(≈10厘米长)，称重后将大约4公斤的材料装入蒸馏罐，作为蒸汽蒸馏装置的一部分。将植物材料进行蒸汽蒸馏，加热约40分钟后开始收集精油，直到不再获得精油。蒸馏过程完成后，将挥发油从纯溶胶的顶部去除，在无水硫酸钠(Na₂所以₄).使用Whatman滤纸（1号）过滤油，收集到密封玻璃瓶中，并储存在−20°C，直到他们需要化学分析和抗菌生物测定的时候。收集的植物材料的一个子样本被送到肯尼亚内罗毕大学生物科学学院的标本馆，以进一步鉴定和鉴定一个植物分类学家。一张凭证样本（MMG2015／01）。被保存在内罗毕大学标本馆。

2．2．植物致病菌菌株

在这项研究中，三种经济上重要的细菌植物病原体被用作测试病原体，它们是从内罗毕大学植物病理学实验室的培养收集中心获得的。假单胞菌savastanoi光伏．phaseolicola和黄axonopodis光伏．phaseoli从芸豆(菜豆l .),而黄axonopodis光伏．manihotis已经从木薯中分离出来(木薯耐根据病原体的培养、形态和生化特征，确认病原体的身份。

2．3.试验病原菌的提取及细菌接种剂的制备

在营养琼脂(NA)平板上传代培养，获得在−20℃保持的每个测试细菌的培养基。从NA板中选择3个形态相同的纯菌落，无菌循环转移到含10 mL Mueller-Hinton肉汤(MHB)的试管中。培养管37℃孵育24小时，获得新鲜培养物。以麦克法兰标准作为参考，将细菌悬浮液的浊度调整在要求的范围内。将0.05 mL 1%氯化钡脱水液与9.95 mL 1%硫酸混合，制得0.5麦克法兰当量浊度标准品。将0.85 g NaCl溶于100 mL蒸馏水中，在121℃、15 psi压力下高压灭菌15分钟，在无菌盐水溶液中制备菌悬液。生物测定用菌悬液的浊度调整为0.5麦克法兰标准，相当于1.5 × 10⁸CFU /毫升。

2.4.抗菌活性的评估万寿菊minuta精油

抗菌活性的T. Minuta.根据Souza等人的描述，采用纸片扩散法(也称为Kirby-Bauer抗菌敏感性试验)进行精油的研究[20.］.将过夜培养制备的200微升菌悬液调整至0.5麦克法兰标准光密度，用无菌l形玻璃棒均匀涂布于含有MHA的培养皿(直径9cm)上。无菌Whatman滤纸圆盘(直径1.6 mm)，每个圆盘浸渍10μL未稀释原油T. Minuta.精油在无菌生物安全柜。然后用无菌钳将圆盘无菌放置在接种培养板的中心。阴性对照为二甲基亚砜(DMSO)，阳性对照为广谱杀菌剂Enrich BM®(免疫调节剂2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇)，用于防治晕枯病、青枯病和斑病等细菌性疾病。4℃冷藏2小时，使精油扩散到琼脂培养基中，37℃倒置孵育48小时。试验分三次进行，在24小时和48小时后测定抑菌带。

单个细菌对精油的敏感性以毫米(mm)表示:对≤8 mm的总区直径不敏感(−);对直径在8至14毫米之间的产品敏感(+);非常灵敏(++)的区域直径之间的15和19毫米;(+++)对≥20mm的区域直径非常敏感[21，22］.生物分析是在生物安全柜中进行的，并按照临床和实验室标准协会(CLSI)(前国家临床实验室标准委员会)的协议进行。

2．5．不同浓度的抑菌活性万寿菊minuta精油

的活动T. Minuta.根据Clara等人所描述的程序，使用圆盘扩散法评估七种浓度水平的精油[23经过一些修改。200微升的细菌接种(大约10⁸ CFU/mL) was uniformly spread on Muller-Hinton Agar (MHA) Petri plates. Serial dilutions ofT. Minuta.用二甲基亚砜制备香精油。将精油稀释至50%、25%、12.5%、6.25%、3.13%、1.56%和0.78%的几何倍数。无菌Whatman滤纸盘(直径1.6 mm)浸渍10μL不同浓度的精油，无菌放置在接种培养板的中心。将培养皿置于4°C的冰箱中2小时，以使精油扩散到琼脂中。然后将培养板在28℃下培养48小时。除了评估不同浓度精油对试验细菌的活性外，还进行了三次试验；该生物测定还用于估计EOs对病原体的最小抑制浓度（MIC）[23］.

2.6。最低抑菌浓度和最低杀菌浓度的评估

卡布里安和Osi所描述的试管稀释法[24的最小抑菌浓度(mic)和最小杀菌浓度(MBCs)。12个无菌螺旋盖猎鹰管(15 mL)编号1 - 11，最后一个编号13。一毫升Muller-Hinton肉汤被引入试管2到11。一毫升T. Minuta.将精油移液到1号和2号试管中，盖上盖子并旋转5秒;从2号试管中抽出1毫升，转移到3号试管中;在盖上试管并通过旋转内容物进行混合后，从试管3中抽出1毫升的内容物转移到试管4中，重复这个过程，直到从试管9中取出1.0毫升添加到试管10中。50微升标准细菌接种(大约10⁸然后将CFU/mL)引入试管1 - 11和试管13。向13号试管中加入0.5 mL标准杀菌剂，根据制造商的说明制备富集BM。精油入管前加入Tween 20(0.05%)以提高精油的溶解度。然后将试管在37°C孵育48小时。

孵育后，通过观察任何浑浊度来检查试管的生长情况。据报告，精油浓度最低(稀释度最高)且未见明显生长或浊度的试管是精油对测试细菌的最低抑制浓度[25］.摇匀试管中的内容物，每试管中0.01 mL的内容物在Mueller-Hinton琼脂板上划线传代。平板在37°C孵育24小时，然后观察任何菌落的生长。最低杀菌浓度确定为精油的最高稀释度(最低浓度)，在此浓度下，在MHA平板上继代培养后没有发生生长[25］.

2.7。气相色谱-质谱联用分析万寿菊minuta精油

采用气相色谱(GC) -质谱(MS)联用技术建立了EOs的化学组成。三次重复(每次从不同的提取批次中提取)，每次1毫克T. Minuta.精油分别称量，用1ml二氯甲烷稀释成原液。从原溶液，进一步稀释如下:100μ用HP- 7890a (Agilent Technologies, Wilmington, USA) GC连接HP 5975 C (Agilent Technologies, Wilmington, USA) ms进行分析。气相色谱设备安装HP- 5ms毛细管柱;30 m × 0.25 mm内径;和0.25μm薄膜厚度，以5%苯基甲基硅作为固定相(J&W Scientific, Folsom, USA)。操作条件为:载气为氦气，流速1.2 mL/min，恒流模式;离了注入模式;烘箱温度(35°C 5分钟至280°C, 10°C/min 10.5分钟，运行时间为50分钟);和注射体积(1μ根据保留指数(RI)(参照同系列正构烷烃C . L .)对挥发油的成分进行鉴定₅- c₃₁）基于van den dool和kratz提出的准线性方程来计算[26]对于温度编程的保留指标。通过将它们的MS碎片模式与MS MS片段化模式进行比较，进一步验证了精油组分的鉴定，其中包含在质谱库数据库（NIST05A和ADAMS MS HP，USA）中报告的那些。使用纯化合物的剂量峰面积的校准曲线（1,8- Cineole，99％，吉列姆，吉尔明，英国）的校准曲线进行定量测定，每个单独组分的相对量表示为百分比峰面积相对于总峰面积。

2.8。数据分析

使用Genstat版本15的Proc Anova程序分析数据，并且在使用5％的概率水平下使用Fisher受保护的LSD比较的意义差异。精油对测试细菌的生长抑制作用表示为平均抑制区直径（mm）的平均值±标准误差。进行线性回归分析以确定不同浓度的精油与其总体抗菌活性之间的相关性评估为抑制区的直径。通过绘制抵抗平均抑制区直径（mm）来获得标准剂量响应曲线。

3.结果与讨论

3．1.产率，物理和化学特性万寿菊minuta精油

植物地上部精油的平均产率为0.0594% w/wT. Minuta.。获得的EOs产量远远高于从肯尼亚其他地区的同一植物物种的先前研究中获得的产量[27，28，但低于在伊朗进行的两项研究得出的结果[29，30.］.万寿菊minuta获得的精油密度较小，不溶于水。然而，EOs在乙醇、二甲基亚砜和二氯甲烷中均可溶于1:1 (v/v)。这些油呈淡黄橙色，有类似柑橘和松节油的气味。油在室温下为液态(°C)，并保持这种状态，即使在−20°C存储。然而，当将精油与本研究中使用的所有稀释水平的DMSO混合后，精油在−20°C保存时被冻结。精油的密度为0.76 g/mL。

3．2.抗菌活性的万寿菊minuta精油

体外研究表明，这种抗生素具有很强的抗菌活性万寿菊minuta精油对三种植物病原细菌，即假单胞菌savastanoi光伏．phaseolicola，黄axonopodis光伏．phaseoli,和黄axonopodispv。manihotis(图1）.

经24和48小时培养后，粗精油对三种细菌分离株的活性均在极敏感范畴内(抑制带直径大于20 mm)1）.粗EOs的抑菌活性最高沙瓦斯坦尼光伏．phaseolicola平均抑制带为41.8 mmx axonopodis光伏．phaseoli和x axonopodispv。manihotis，在培养24小时后，油产生了26.8 mm的抑制区。抗菌活性的T. Minuta.文献中已经报道了EOs，大多数研究都是针对人类病原菌进行的[31，32］.植物精油抑菌活性的研究T. Minuta.和其他植物物种普遍透露，与革兰氏阴性细菌相比，革兰氏阳性细菌更容易受到EO的影响[31- - - - - -33］.目前研究中使用的三种细菌均为革兰氏阴性;因此，这种性质的比较是不可行的。

EOs上的活动x axonopodispv。phaseoli和沙瓦斯坦尼pv。phaseolicola显著高于()，与24小时后的记录相比。然而，没有显著差异(的抑菌活性x axonopodispv。phaseoli和沙瓦斯坦尼pv。phaseolicola在两个孵化机制中标准杀菌剂富集BM作为阳性对照，其抑菌活性最高x axonopodispv。manihotis在24和48小时后，平均抑制带分别为35.2和37.0 mm(图2）.一般来说,沙瓦斯坦尼pv。phaseolicola和x axonopodispv。manihotis对挥发油的敏感性分别为最高和最低。

3．3.不同浓度的抑菌活性万寿菊minuta精油

对测试细菌的EOS浓度依赖性抑制活性。因此，随着精油的浓度增加，油对试验细菌的活性增加了（表2）.然而，不同浓度精油产生的抑制区因细菌种类而异。细菌对香精油的剂量依赖性反应T. Minuta.已于[31，32］.其他生物活动T. Minuta.例如驱蚊[27，34]、抗氧化及抗炎作用[30.，蚜虫活性[35]，以及化感作用[36都被证明以浓度依赖的方式发生。

3．4．精油对细菌生长的剂量-反应效应

剂量-反应模型显示出显著的相关性(的浓度之间T. Minuta.精油和三种测试细菌的平均抑制区(图3.）.相关系数值如下:, 0.94,；, 0.91,；和, 0.84,对于x axonopodispv。phaseoli，沙瓦斯坦尼pv。phaseolicola,x axonopodispv。manihotis,分别。结果表明，在不同浓度下，缓蚀带直径的变化分别为94、91和84%x axonopodispv。phaseoli，沙瓦斯坦尼pv。phaseolicola,x axonopodispv。manihotis，分别用精油浓度的变化来解释。此前已有报道称，精油的抗菌活性和大多数生物活性取决于其浓度[31，32］.观察到的EOS的浓度依赖性抗菌活性归因于EOS中存在的活性原理的浓度变化。该观点得到了几项研究，这些研究报告了从精油中分离的各种纯化合物的剂量依赖性生物活性[37，38］.因此，EOs的浓度增加，油中的活性成分也随之增加，因此在这种情况下，油的活性增加，表现为更大的抑制带。

3．5．最低抑菌浓度和最低杀菌浓度

最小抑制浓度（MICS）和最小杀菌浓度（MBC）T. Minuta.三种试验菌对精油的作用见表3.．最低抑菌浓度为24 ~ 48 mg/mLx axonopodispv。phaseoli和沙瓦斯坦尼pv。phaseolicola最低为24 mg/mLx axonopodispv。manihotis具有最高值（48 使用圆盘扩散法获得的估计MIC值分别为12、24和48 毫克/毫升沙瓦斯坦尼pv。phaseolicola，黄axonopodispv。phaseoli,x axonopodispv。manihotis的最低杀菌浓度T. Minuta.精油对3种供试菌的作用范围为95 ~ 190 mg/mL。黄axonopodispv。phaseoli和沙瓦斯坦尼pv。phaseolicolaMBCs最低(95 mg/mL)x axonopodispv。manihotis最高(190 mg/mL)。使用圆盘扩散法和试管稀释法获得的MIC值的差异表明，比较使用不同方法获得的抗菌药物敏感性结果存在困难，特别是在最低抑菌浓度方面[39，40］.在本研究中，精油在琼脂和肉汤培养基中的溶解度、扩散和蒸发速率的差异可能是造成两种方法观察到的差异的一些因素。

3.6。植物精油的化学组成万寿菊minuta

20种化合物对应于总油脂的96％T. Minuta.被确定(图4和5）.精油主要由碳氢化合物萜类、单萜类(70%)和倍半萜类(30%)的混合物组成。其中含量最高的化合物为(E)-万年青酮、二氢万年青酮和阿鲁cimene，含量最低的化合物为硅藻土-6-烯。综上所述，单萜类化合物(30%)、含氧单萜类化合物(25%)和3种未知单萜类化合物(15%)的含量相对较高，而倍半萜类化合物(25%)、非含氧倍半萜类化合物和1种未知倍半萜类化合物(1%)的含量较高。

单萜和倍半萜在EOs中的优势T. Minuta.目前的研究与早期的研究一致。一个研究T. Minuta.来自肯尼亚三个地区的EOs，即Kasarani(内罗毕县)、Bungoma (Bungoma县)和Bondo (Siaya县)，发现单萜和倍半萜碳氢化合物的比例分别为3:7、2:8和4:6 [27］.这些发现也与关于EOS的化学成分的许多早期定性研究相媲美T. Minuta.已确定二氢塔吉酮、塔吉酮、罗勒烯、柠檬烯和罗勒烯酮为植物中最丰富的成分T. Minuta.精油。在一个这样的研究中[41]，四种单萜成分-柠檬烯，β-ocimene，二氢tagone和tagone被发现占70%以上T. Minuta.精油。二氢白藜芦醇酮已被引用为最丰富的成分之一T. Minuta.从许多国家(如肯尼亚)采集的植物中提取的油[28，42]伊朗[32],赞比亚[43)，以及英国[44分别占总石油的16.7、33.9、30.0和34.3%。

4.结论

天然抗菌剂的开发是减少与合成化学农药相关的负面影响的重要一步，这些负面影响包括缓慢的生物降解、农产品中的有毒残留物、目标微生物的耐药性发展以及对环境、人类和动物的普遍有害影响。本研究的目的是研究提取的精油的抑菌活性T. Minuta.抗三种植物致病菌。体外研究表明，精油对所有测试细菌具有显着的抗菌活性，即，假单胞菌savastanoipv。菜豆黄单胞菌pv。phaseoli,黄axonopodispv。manihotis因此，这项研究证实了T. Minuta.精油及其潜力用作化学杀菌剂的廉价，安全和有效的替代品。然而，为了实现这一目标，应在现场条件下验证eos潜在使用EOS的细菌植物疾病。

相互竞争的利益

作者声明本论文的发表不存在利益冲突。

致谢

第一作者感谢坦桑尼亚莫希姆温吉天主教大学提供的硕士奖学金、世界科学家联合会(WFS)提供的在肯尼亚内罗毕国际昆虫生理与生态中心(ICIPE)进行为期一年的研究实习的支持。国家科学技术与创新委员会(NACOSTI)资助。NACOSTI /恢复/ ST&I / 7 / MSc / 025。

参考文献

1. S. Chakraborty和A. C. Newton，《气候变化、植物疾病和粮食安全:概述》，植物病理学，第60卷，第2期1, pp. 2-14, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术
2. J. Fletcher, C. Bender, B. Budowle et al，“植物病原体鉴定:能力，需求和建议”微生物学与分子生物学评论，第70卷，第2期，第450-4712006页。视图:出版商的网站|谷歌学术
3. g . n .阿植物病理学，爱思唯尔学术出版社，美国加利福尼亚州圣地亚哥，第5版，2005年。
4. P. D. Schloss和J. Handelsman，《微生物普查现状》，微生物学与分子生物学评论第68卷第2期4、2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术
5. s . r . Mishra细菌植物病害，发现出版社，新德里，印度，2003年。
6. J. J. Burdon和J. Silk，“植物病原真菌的多样性来源和模式”，植物病理学，第87卷，第2期7，第664-669页，1997。视图:出版商的网站|谷歌学术
7. F. lens, M. De Cleene, j.g。秋千和J.德利，“属的宿主范围、黄”,植物的审查，第50卷，第5期。3、1984年。视图:出版商的网站|谷歌学术
8. j·f·布朗和h·j·奥格尔，植物病原与植物病害，罗克维尔，阿米代尔，澳大利亚，1997。
9. B. Kokoskova, D. Pouvova，和R. Pavela，“植物精油的功效杏仁Erwinia amylovora，丁香假单胞菌pv。两以及宿主植物上或体内的相关腐生细菌，”植物病理学杂志第93卷第5期1，页133-139,2011。视图:谷歌学术
10. 巴达维(m.e.i. Badawy)和阿卜杜勒加列(s.a.m. Abdelgaleil)，“从埃及植物中分离出的精油对植物病原细菌和真菌的成分和抗菌活性”，工业作物和产品， vol. 52, pp. 776-782, 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术
11. G. al-Samarrai，H. Singh和M. Syarhabil，“评估环保植物（天然植物提取物）作为合成杀菌剂的替代品”农业和环境医学年鉴第19卷第2期4, pp. 673-676, 2012。视图:谷歌学术
12. N. Raja，《植物:生态友好生物杀虫剂的来源》，生物肥料和生物农药杂志，第5卷，第5期。1，第222条，2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术
13. M. Vasinauskiene, J. Radusiene, I. Zitikaite，和E. surviene，“芳香和药用植物精油对植物病原细菌生长的抑菌活性，”农学研究，第4卷，第437-440页，2006年。视图:谷歌学术
14. A.Gormez、S.Bozari、D.Yanmis、M.Gulluce、F.Sahin和G.Agar，“两种唇形科植物精油对植物病原细菌的化学成分和抗菌活性，”波兰微生物学杂志，卷。64，不。2，pp。121-127,2015。视图:谷歌学术
15. I.H.N.Bassolé和H.R.Juliani，“组合精油及其抗菌性能，”分子，第十七卷，第二期4, pp. 3989-4006, 2012。视图:出版商的网站|谷歌学术
16. S. D.Kocië-tanackov和G.R.Imić，“精油抗真菌活性，在食物归食品真菌生长和食品中的霉菌毒素生物合成中的精油活性”微生物病原体及其防治策略:科学、技术和教育，A.Méndez Vilas编，第838-849页，Formatex研究中心，巴达霍兹，西班牙，2013年。视图:谷歌学术
17. Y. A. H. Osman, E. M. Yaseen, M. M. Farag，《一些精油混合物的抗菌作用》，应用科学研究杂志，第5卷，第9期，第1265-12762009页。视图:谷歌学术
18. F. Dadasoglu, T. Aydin, R. Kotan等，“三种提取物和精油的抗菌活性牛至属植物抗植物病原细菌的物种及其作为种子消毒剂的潜在用途“植物病理学杂志第93卷第5期2，页271-282,2011。视图:谷歌学术
19. 《挥发油测定仪器》，J. F. Clevenger， <挥发油测定仪器>美国药物协会杂志，第十七卷，第二期4，第345-349页，1928。视图:出版商的网站|谷歌学术
20. E. L. Souza, E. O. Lima, K. R. Freire, and C. P. Sousa，“某些精油和植物化学物质对从食物中分离出来的各种霉菌生长的抑制作用”，巴西生物和技术档案，卷。48，没有。2，pp。245-250,2005。视图:出版商的网站|谷歌学术
21. N. Celikel和G. Kavas，《某些精油对某些病原微生物的抗菌特性》，捷克食品科学杂志第26卷第2期3，页174-181,2008。视图:谷歌学术
22. A. J. Babu, A. R. Sundari, J. Indumathi, R. V. N. Srujan, M. Sravanthi，“香料精油的抑菌活性和最低抑菌浓度的研究”，动物世界，第4卷，第4期。7, pp. 311 - 316,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术
23. C.Clara，J.C.Matasyoh，I. N.Wagara和J. Nakuvuma，“抗真菌活动Monathotaxis littoralis从玉米中分离的抗真菌毒素真菌的精油，“美国应用化学杂志， vol. 1, no. 14, pp. 54-60, 2013。视图:谷歌学术
24. A.B.Caburian和M.O.Osi，“胡椒叶精油抗菌活性的表征和评估，”国际科学研究杂志，第2卷，第2期1，页2-13,2010。视图:谷歌学术
25. E. A. Quinto和M. G. Santos，《微生物学》植物筛选指南：植物化学和生物学格瓦拉，页67-87,UST出版社，菲律宾马尼拉，2005。视图:谷歌学术
26. H. van Den Dool和P. D. Kratz，“保留指数系统的推广，包括线性温度程序气液分配色谱，”色谱学报A， 1963年，第11卷，第463-471页。视图:出版商的网站|谷歌学术
27. o . b . Makang,肯尼亚不同产地万叶菊精油对阑尾褐耳蜱的驱避作用及成分分析[M.S.论文)肯尼亚肯雅塔大学，内罗毕，肯尼亚，2012。
28. W. Wanzala和S. B. Ogoma，“来自肯尼亚西部埃尔冈山南坡的万日菊精油的化学成分和防蚊性”，植物精油杂志，第16卷，第5期。2, pp. 216-232, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术
29. M. H. Meshkatalsadat, J. Safaei-Ghomi, S. Moharramipour，和M. Nasseri， "挥发性成分的化学表征万寿菊minutaL.纳米秤注射仪在伊朗西南耕种，“纳米材料与生物结构文摘杂志，第5卷，第5期。1，页101-106,2010。视图:谷歌学术
30. P. Karimian, G. Kavoosi，和Z. Amirghofran，“万古菌精油在活化巨噬细胞中的抗氧化和抗炎作用”，亚太热带生物医学杂志，第4卷，第4期。3, pp. 219-227, 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术
31. Muyima, S. Nziweni，和L. V. Mabinya，“抗菌和抗氧化活性万寿菊minuta，Lippia是和可南非东开普省的精油，“植物精油杂志，第7卷，第5期1，页68-78,2004。视图:出版商的网站|谷歌学术
32. M. T. Shirazi, H. Gholami, G. Kavoosi, V. Rowshan, and A. Tafsiry， "化学成分，抗氧化，抗菌和细胞毒性活性万寿菊minuta和罗勒属basilicum精油”,食品科学与营养，第2卷，第2期2, pp. 146-155, 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术
33. D. Trombetta, F. Castelli, M. G. Sarpietro等，“三种单萜抗菌作用的机制”，抗菌药物和化疗，第49卷，第49期。6、2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术
34. i.t.f. Macedo, l.m.b.d. Oliveira, a.l.f. Camurça-Vasconcelos等，"体外的影响芫荽，万寿菊，天竺葵和马樱丹属卡马拉香精油Haemonchus contortus”,巴西兽医寄生虫学回顾第22卷第2期4, pp. 463-469, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术
35. M.Işık和G.Görür，“七种精油对卷心菜蚜虫的杀蚜活性，甘蓝蚜l .(半翅类:蚜科),“城市昆虫学和动物学，第4卷，第4期。2, pp. 424-431, 2009。视图:谷歌学术
36. “植物精油和分离化合物的作用Pimpinella物种NF -κB:抗炎治疗的靶点。植物疗法的研究第21卷第2期8，pp。741-745,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术
37. J. Tangjitjaroenkun, W. Chavasiri, S. Thunyaharn，和C. Yompakdee，“从水果中提取的精油的杀菌效果和时间研究花椒属植物limonella关于耐多药细菌，”精油研究杂志，第24卷，第2期4, pp. 363 - 370,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术
38. P.Hili、C.S.Evans和R.G.Veness，“精油的抗菌作用：二甲基亚砜对肉桂油活性的影响，”应用微生物学书信，第24卷，第2期4，第269-275页，1997。视图:出版商的网站|谷歌学术
39. K. I. Suhr和P. V. Nielsen，“通过两种不同的应用技术评价精油对黑麦面包腐菌的抑菌活性”，应用微生物学杂志，第94卷，第94期4，第665-674页，2003。视图:出版商的网站|谷歌学术
40. K. Arora, D. R. Batish, P. H. Singh和R. K. Kohli，“野生万金花精油的化感作用潜力(万寿菊minutaL.）对抗一些侵袭性杂草，“环境与农业科学杂志，第3卷，第56-60页，2015。视图:谷歌学术
41. M. V. Garcia, J. Matias, J. C. Barros, D. P. de Lima, R. D. S. Lopes, R. Andreotti， "化学鉴定万寿菊minuta林氏挥发油及其对蜱虫的杀螨作用巴西兽医寄生虫学回顾第21卷第2期4, pp. 405-411, 2012。视图:出版商的网站|谷歌学术
42. w·Wanzala在肯尼亚西部管理棕色耳蜱的民族植物学[博士论文]，瓦赫宁根大学，荷兰瓦赫宁根，2009。
43. E. H. Chisowa, D. R. Hall, and D. I. Farman， "香精油的化学成分万寿菊minuta从赞比亚l .,”精油研究杂志，第10卷，第2期，第183-184页，1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术
44. 参议院，纳波利塔诺，m.a. - h。穆罕默德，P. J. C. Harris, P. N. S. Mnkeni, J. Henderson，“抗菌活性万寿菊minuta（菊科）具有不同化学成分的精油，“香精香料杂志第19卷第2期6，pp。574-578,2004。视图:出版商的网站|谷歌学术

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