抽象性
后台.脑膜炎是一种严重的传染病,发病率和死亡率高埃及流行性疾病主要由streftcoccus肺炎,涅塞里亚明吉迪斯并冒冒冒.某些环境记录细菌脑膜炎主要取决于正脑膜素文化结果或CSF正上拉分解测试,忽略前抗菌摄取的重要作用,产生负文化分解测试结果和lex分解测试结果这项研究旨在利用分子技术诊断文化负式CSF样本中的细菌脑膜炎材料方法.由实时聚合酶链反射(实时PCR)检测细菌脑膜炎疑似案例的40个阴性CSF样本lytA,BexA并Ctr基因专用streftcoccus肺炎,冒冒冒并涅塞里亚明吉迪斯..结果.正实时PCR结果streftcoccus肺炎在36个负文化CSF样本中检测到(90%),而无正结果冒冒冒或涅塞里亚明吉迪斯检测到四样本(10%)所有测试生物实时PCR阴性结论.分子技术实时PCR可为诊断型脑膜炎案例比例提供宝贵的附加值,特别是在文化负值率高的情况下。
开工导 言
细菌脑膜炎是严重传染病之一,与高发病率和高死亡率相关一号..约10%至20%的幸存者发展失能神经复元2授权即时诊断、处理和预防脑膜炎发生率在发展中国家通常高居不下,社会经济地位差3实为埃及报告的地方性4..streftcoccus肺炎,涅塞里亚明吉迪斯并冒冒冒类型b占世界记录的大多数社区获取细菌脑膜炎案例2-6..然而,过去十年间,在不同地理区域发现病因物剂分布和病人年龄组的流行病学变化,原因是使用共生多机疫苗实施不同的免疫策略[一号,3,7,8..
诊断细菌脑膜炎有不同方法,脑膜流体文化仍被视为“黄金标准”[九九,10..某些环境文化技巧缺乏敏感度,并加法,转机时间的劣势直到结果提供九九,11-13..gram染色CSF样本可提供快速初步诊断工具,60-90%的病人与CSF样本中细菌浓度相关九九..然而,CSFGram染色敏感度在不同微生物中差别很大3..某些研究还报告直接抗原检测检测低敏感度lax插件测试,特别是预处理的抗生素患者14-16..
并提议分子方法填补这些空白,即快速精确方法,特别是在文化逆境中[6,10,17-19号..
这项研究旨在诊断细菌脑膜炎涅塞里亚明吉迪斯,streftcoccus肺炎并冒冒冒类型b/csv样本实时PCR辅助
二叉材料方法
这项研究于2014年12月至2015年3月期间完成,经埃及开罗AinShams大学医学院道德委员会批准,并符合1975年《赫尔辛基宣言》道德准则
研究由40个从成年病人取回的CSF样本组成,AbbseyaFever医院收治,提供临床图片和异常CSF细胞和化学结果显示细菌脑膜炎
诊断性标准包括发烧、头痛、呕吐、照片恐惧症和可刺激性(阳性刺激症的症状)以及脖子僵化性、Kernig信号、Brudzinski信号、感知度改变、抓获和焦点神经信号(明性刺激症信号)[4..
细菌脑膜炎诊断实验室标准包括:葡萄浓度小于40mg/l;蛋白浓度大于50mg/dl;白细胞计数大于100bell3和中子机百分数超过50%20码..
采集的CSF样本在10,000分制10分时离心检查,并检测超导体是否有WBCs异常、蛋白质异常和葡萄糖异常十微licers向绵羊血液agar和colotagar注射,其余部分在-70摄氏度上引用并存储夜间孵化37摄氏度C5摄氏5%的agar板后观察到细菌生长2空气中21号..
阴性培养结果患者数据记录,存储的CSF样本由实时PCR进一步检验
2.1.实时PCR
2.1.1.细菌脱氧核糖核酸提取
细菌脱氧核糖核酸样本由QIAGEN脱氧核糖核酸小包(QIAGEN Inc.,加利福尼亚州)辅助提取,并按厂商净化脱氧核糖核酸协议提取隐式脱氧核糖核酸存储在-20摄氏度直至进一步处理
2.1.2.SYBR绿色I实时PCR
三次运行相继执行以分别检测每个生物上头Ctr基因类涅塞里亚明吉迪斯,BexA基因类冒冒冒并lytA基因类streftcoccus肺炎[九九被具体物种目标使用素数序列列表一号.组合每次运行包括5华府L样本脱氧核糖核酸12.5华府2xQuantiTectSYBR绿色PCR主组合2hotStartaq脱氧核糖核酸聚合物华府求素量L和无损水华府L.脱氧核糖核酸使用Steps One实时PCR系统(应用生物系统)放大,使用以下温度程序:95摄氏度初始热启动Taq激活15分数;95摄氏度初始衰减15秒;95摄氏度40分复发30秒;50摄氏度退火30秒;72摄氏度扩展32分30秒,随后熔化曲线阶段95摄氏度和60摄氏度[C22号..放大数据用工具软件分析(StepOne软件v2.3),用熔化曲线图分析样本一号)阳性控制线段和负控法由PCR级水组成,而不是目标脱氧核糖核酸
(a)
(b)
2.2.统计分析
量化变量显示为均值和SD,分组间差异使用非偏差比较 测试分类变量显示为数和百分数离散偏连续数据显示为中位数,使用Mann-Whitney测试比较组间差异统计程序使用SPSS版本15对Windows实施(SPSS公司、芝加哥IL公司、USA)。
3级结果
本研究对40个文化阴性CSF样本展开,取自27个(67.5%)男性和13个(32.5%)女性患者年龄介于19至56岁之间(平均值++SD= )表表列病人人口数据以及CSF样本生物化学和细胞学结果2.
CSF化学显示82.5%样本中的蛋白质水平提高(>50 mg/dl),87.5%样本中的葡萄糖水平下降(<40 mg/dl)。白血细胞计数>1.000细胞/mm357.5%样本中发现,42.5%样本显示WBC计数为100至1.000细胞/mm3.72.5%样本中发现主要中子级CSF
三十六样本(90%)正数streftcoccus肺炎实时PCR处理涅塞里亚明吉迪斯并冒冒冒样本中未检测到(0 %)。四种样本(10%)对所有三种生物均为负值(表二)3)
CSF化学样本和CSF正向和负实时PCR结果样本之间没有统计重大差分(表4)
4级讨论
快速精度实验室诊断仍然是最终诊断细菌脑膜炎的关键步骤,具体说明处理方式,并当显示时采取预防措施密切接触传统文化方法,尽管金标准诊断技术本身无法依赖,但在某些情况下,由于结果提供延迟和全世界多次报告的相对有限敏感度[12,13,23号和条件 事前抗菌法已经接受埃及先前报告的培养负样本百分比高24码,25码..之所以产生这些结果,是因为大多数病人都得到了抗菌剂,甚至在临床评价前随同Csf采样偶发延迟一起很容易作为场外药购入基于上述原因,本研究使用分子法(实时PCR)改进文化负净化CSF样本中细菌脑膜炎诊断
人口数据分析显示,他们主要是男性(67.5%对12.5%对女性)。多数案例属于中值组别(平均值=38.3)调查结果与Fouad等[4并证实男性受细菌脑膜炎影响比雌性更大(61%对39%重播),尽管该疾病分布在所有年龄组中,最晚发病率低(新生儿60岁以上)。
实时PCR研究阳性streftcoccus肺炎36个文化阴性CSF样本中(90%),而无正结果冒冒冒或涅塞里亚明吉迪斯检测到研究中病人的年龄组可能促成了这些结果,因为成年人中细菌脑膜炎的主要致因物streftcoccus肺炎并涅塞里亚明吉迪斯[一号,26,27号..streftcoccus肺炎发现这是美国和欧洲细菌脑膜炎最常见的病理学学,占美国总病例的61%一号,3,28码和大多数人体免疫缺损病毒流行的非洲国家29,30码..脑膜炎在非洲撒哈拉以南很常见(脑膜炎带),但大多表现为流行病和暴发31号..Afifi等人在埃及进行实验室监控研究[32码PCR使用净化反文化CSF样本取自符合细菌脑膜炎案例定义标准的病人streftcoccus肺炎并报告为细菌脑膜炎最常见的病理学
Fouad等[4并记录streftcoccus肺炎最常隔离(52%)细菌引起脑膜炎我们的调查结果和上文提到的埃及研究之间的协议合并Shaban和Siam的推算三十三内核脑膜炎目前是埃及脑膜炎主因, 因为它的发生率持续上升而牺牲脑膜炎,
王等[7并识别五例细菌脑膜炎(9%)按CSF文化计算,25例(45%)实时PCR实时PCR比文化诊断细菌脑膜炎敏感多得多, 特别是在他们的研究中, 68%的病人都接受过前抗菌处理 他们的CSF样本产生负文化效果Wu等人也得出类似结论[九九和Sacchi等[19号实时PCR提高细菌脑膜炎诊断收成,
Bruwer等人表示[34号CSF文化记录显示只有1/10发展中国家前抗生素治疗病人呈阳性相同结果由Afifi等人发现[32码低培养阳性CSF样本(8%)32码..文化效果低可归结为埃及抗菌药免处方分发
本研究面临受调查的CSF样本数目相对较少的限制,以及缺乏对成人脑膜炎其他较不常见细菌学学测试(例如B组)strevtococcus,Listeria单细胞原)这可能为负结果(10%)提供解释
根据我们的调查结果,我们的结论是,分子技术诊断细菌脑膜炎的用法在报告排除该疾病前,应先考虑有负文化结果的疑似案例
竞技兴趣
作者声明他们没有竞技兴趣
感知感知
作者感谢AbbseyaFever医院微生物实验室的医生支持向这些医生提供CSF样本并列入这项工作中。