文摘
背景。在埃塞俄比亚,关于分布和所知甚少在体外抗真菌酵母易感性的状况。目标。本研究采取确定光谱和在体外抗真菌易感模式从艾滋病毒感染患者分离的酵母菌的OPC。方法。口腔咽拭子从口腔病变的研究对象被接种到Sabouraud葡萄糖琼脂。酵母被确定通过使用传统的测试程序和酵母抗真菌药物的敏感性是由磁盘扩散试验方法评价。结果。一百五十五酵母分离回收其中91隔离来自病人并不在HAART, 64人在高效抗逆转录病毒疗法的病人。白念珠菌经常是最孤立的物种紧随其后的是吗c . glabrata c . tropicalis c . krusei c .酸乳酒隐球菌laurentii,和红酵母物种。无论酵母分离和识别,5.8%,5.8%,12.3%,8.4%,0.6%,和1.3%的隔离是对两性霉素B、克霉唑、氟康唑、酮康唑、咪康唑、制霉菌素,分别。结论。酵母殖民抵抗率69.2%和31%六抗真菌药物记录。这些突出需要全国的流行病学研究OPC和抗真菌药物的耐药性。
1。介绍
人类的口腔是居住着许多不同种类的微生物的组成、代谢活动,致病性受到内部和外部因素的影响(1,2]。在真菌、酵母属假丝酵母被认为构成大多数真菌物种存在于口腔。假丝酵母的主要原因是物种通常分为口咽黏膜与皮肤的感染,食管和酵母菌病。口咽念珠菌病(OPC)是最常见的黏膜与皮肤的念珠菌病在全球艾滋病毒阳性患者(1,3,4),发生在超过95%的艾滋病患者(1,5]。高病毒载量、低CD4 + T淋巴细胞计数,和疾病进展有罪的最大的危险因素的发展OPC (4- - - - - -6]。尽管OPC感染是由许多不同种类的酵母属假丝酵母,白念珠菌仍是最主要的报道全球物种(7]。
机会性真菌感染抗真菌剂已经越来越多的记录,有人担心它们的频率可能会继续增加。穆勒et al。8和Pelletier et al。9)表明,抗真菌药物耐药性的出现艾滋病毒/艾滋病患者OPC是常见的。增加使用抗真菌药物来治疗真菌感染,发生在职业病人已经有罪为主要因素的出现耐药酵母分离,未能回复合适剂量的抗真菌治疗的标准时间(10,明显转向非白假丝酵母物种相对电阻唑抗真菌剂和相关耐火材料和复发性感染(11,12]。
虽然采用高活性抗逆转录病毒疗法(HAART)极大地减少机会性感染的发生率[13- - - - - -15在艾滋病病毒试验呈阳性的人收到了抗真菌药物,OPC谱的转变假丝酵母物种仍是最常见的HIV相关的口腔病变(16发展中国家的]包括埃塞俄比亚。出现非白假丝酵母物种作为黏膜与皮肤的念珠菌病的病原微生物的耐药性和发展白念珠菌当前可用的抗真菌原则启动了进一步研究致病真菌的分离和鉴定抗真菌的物种和确定。在埃塞俄比亚,真菌和文化在体外药敏模式酵母不定期执行。因此,关于分布和所知甚少在体外抗真菌敏感性的酵母分离与OPC艾滋病毒感染的患者。为此,确定物种分布的酵母分离从埃塞俄比亚艾滋病毒感染的患者和没有鸡尾酒疗法和评估他们的药敏资料抗真菌药物是优先级最高的国家之一。
2。材料和方法
2.1。研究区域、时间和研究对象
本研究单个机构Zewditu纪念医院进行的横断面研究,亚的斯亚贝巴,埃塞俄比亚,在十飞蛾(2013年9月到2014年6月)。医院是专门管理中心城市的艾滋病毒/艾滋病病人和门诊和住院服务运行。医院的艾滋病诊所由一个集成的咨询和检测中心除了CD4 + T细胞检测实验室和艺术药店。连续二百二十四艾滋病毒感染患者OPC, 112在鸡尾酒疗法和112不低于鸡尾酒疗法,当他们被称为医院被吸收了艾滋病毒自愿咨询和检测(VCT)中心和/或门诊部门(门诊部当)和/或其他健康机构。入选标准是之前积极诊断艾滋病毒,将参与这项研究,诊断为OPC在诊所访问的一个适当的投诉,也没有历史的抗真菌治疗前两周内。
2.2。样本收集和运输
进入研究时,执行的每个病人是口试,然后从口腔口咽拭子被病变,口腔粘膜,和背表面的舌头和口腔的地板每项研究课题与无菌人造丝涂布棒拭子。所有样本接种到脑心浸液肉汤(英国贝辛斯托克Oxoid)补充与氯霉素(50 mg / L)。管接种脑心浸液之后被运送到医疗实验室的微生物实验室的科学,健康科学学院,第35 - 37和亚的斯亚贝巴大学,孵化°C 18到24小时。
2.3。接种和孵化
然后脑心浸液肉汤是亚文化到Sabouraud葡萄糖琼脂(SDA)补充与氯霉素(英国贝辛斯托克Oxoid)和耗氧孵化48小时。板没有reincubated进一步增长48小时后24小时。
2.4。识别
酵母被确定采用传统的生化和同化试验程序(17),使用CHROMagar假丝酵母培养基(Becton Dickinson)按照生产指令,芽管形成人类血清和生产blastoconidia,假菌丝,厚垣孢子在玉米粉琼脂(英国贝辛斯托克Oxoid)。
2.5。对酵母的抗真菌的分离测定
的在体外抗真菌敏感性对酵母的分离模式6抗真菌剂、氟康唑、酮康唑、咪康唑、两性霉素B、克霉唑、制霉菌素(美国罗克维尔市USP)是由琼脂扩散过程根据抗真菌磁盘的力量Rosco Diagnostica公司(Neosensitabs、丹麦)18]。所有抗真菌药物被埃塞俄比亚慷慨地提供标准粉食品医药和医疗管理和控制机构(EFMHACA)。
2.6。浸渍的抗生素检测磁盘
股票的解决方案是由标准的每种药物粉末溶解特定溶剂(DMSO溶液、水和乙醇),之后他们浸渍到6毫米的空白抗生素检测磁盘(西格玛奥德里奇,德国)以下的效能:克霉唑10μ25克/磁盘,氟康唑μ10 g /磁盘,酮康唑μ10 g /磁盘,咪康唑μ10 g /磁盘、两性霉素Bμ50 g /磁盘,制霉菌素μg /根据抗真菌磁盘的力量Rosco Diagnostica公司(Neosensitabs、丹麦)。
2.7。剂制备
酵母接种物被暂停五殖民地的准备每个隔离从24小时老纯培养无菌生理盐水和悬浮液被调整到0.5麦克法兰的浊度标准获得1×1065×106细胞每毫升。酵母悬浮液被飞跑到穆勒辛顿琼脂(英国贝辛斯托克Oxoid)与2%葡萄糖和0.5补充μg / mL亚甲蓝(GMB)。干抗生素检测磁盘与抗真菌剂浸渍如上所述被用酵母放在穆勒辛顿琼脂播种后隔离板干在环境温度为15分钟。直径抑制区是由一个金属卡尺测量24和48 h后的孵化35°C。滤纸磁盘浸泡在溶剂不杀真菌剂分别放在培养板作为控制。标准菌株的白念珠菌写明ATCC 10231被用于质量控制。标准抗真菌药物敏感性和耐药性的确定根据区直径解释为真菌Rosco Diagnostica公司(Neosensitabs、丹麦)如表所示1。
2.8。统计分析
在MS Excel数据捕获和分析使用SPSS版本20(美国芝加哥IBM)。分类综述了变量的比例和百分比。比较组之间的比例是由卡方检验和显著水平集。
2.9。道德的间隙
伦理性考量和义务都适时地解决和研究部门研究批准后,伦理审查委员会(DRERC)部门的医学实验室科学,健康科学学院,亚的斯亚贝巴大学和亚的斯亚贝巴市卫生局。通知书面同意之前从参与者获得数据收集。被申请人是有权拒绝参加研究,在研究期间随时撤回。从研究对象获得的所有信息被编码保持秘密地。当参与者被发现为真菌病原体是积极的,他们被告知医院的临床医生,接受适当的治疗。填写及签署同意形式是由家庭成员和/或成年监护人参与者18岁以下的年。
3所示。结果
3.1。病人的特点
在目前的研究中,共有224份临床样本收集与OPC HIV-sero-positive个人其中155(69.2%)来自女性病人和69个(30.8%)的男性患者。研究对象的年龄范围从3到78年的平均年龄34.5岁。在研究参与者中,112(50%)在HAART其中76(49%)是女性和男性36 (52.2%)。关于人口病人特点给出了表细节2。
3.2。分布的酵母分离
共有224名研究对象,155酵母隔离恢复殖民患病率69.2%,其中105(67.7%)的女性患者和50例(33.3%)来自男性患者(表3)。性别隔离率之间的差异没有统计学意义((或= 0.750,95% CI, 0.414 - -1.36) ()]。
一百五十五(155)酵母隔离恢复艾滋病患者OPC,九十一(91)隔离来自患者没有在鸡尾酒疗法和64隔离来自患者在HAART(表4)。不同酵母分离率在高效抗逆转录病毒疗法之间的患者和那些没有在高效抗逆转录病毒疗法是统计学意义(或= 2.433,95% CI = 1.596 - -4.240) ()]。物种分布如表所示4显示,白念珠菌经常是最孤立的物种总数的会计106(68.4%)酵母分离紧随其后的是吗c . glabrata24 (15.5%),c . tropicalis,17例(11.0%),c . krusei4 (2.6%)c酸乳酒2 (1.3%)。c . laurentii1 (0.65%),红酵母属物种,1例(0.65%),是唯一非孤立假丝酵母物种从这些病人。16(16)患者感染和混合白念珠菌出现在所有的混合感染。白念珠菌出现在七个病人c . glabrata在五个病人c . tropicalis c . krusei c酸乳酒,c . laurentii和红酵母属物种出现一次白念珠菌。
3.3。在体外易感性的隔离
酵母隔离六个抗真菌药物的敏感性是总结表5。可以从表中显示,占总数的83.9%(130/155)酵母分离容易,中间10.3%(16/155),5.8%(9/155)和对两性霉素b .一百四十八(95.5%),16(10.3%)和9(5.8%)的酵母分离容易,中间,和抗克霉唑分别。酵母分离更耐氟康唑抗19(12.3),而123(79.4%)和13(8.4%)是敏感和中间,分别。一百三十四(86.5%),8(5.2%)和13(8.4%)的酵母分离容易,中间,对酮康唑。更有中间值和抗酵母记录对咪康唑21(13.5%)和1(0.6%)被中间值和对药物耐药,年代:敏感;我:中间;R:耐药;问:两性霉素B;Clo:克霉唑;流感:氟康唑; Keto: ketoconazole; Mic: miconazole; NY: nystatin, while 133 (85.8%) were being susceptible to the drug. More yeast isolates were susceptible to nystatin in which 150 (96.8) were being susceptible, while 3 (1.9%) and 2 (1.3%) were intermediate and resistant to the drug, respectively. Nystatin was the most effective drug againstc . tropicalis和c . krusei没有两种药物的耐药菌株被观察到。制霉菌素也表现出最大的活动白念珠菌没有发现耐药菌株;总的来说,只有一个106白念珠菌隔离(0.9%)被发现是中间,而105(99.1%)容易这个代理。制霉菌素也相对活跃的药物c . glabrata22(91.6%)的24隔离对药物敏感。在本研究的三个主要的隔离,c . tropicalis是不太敏感的两性霉素B(53.0%),而的敏感性白念珠菌和c glabrata该药物是92.4%和87.5%,分别。氟康唑是相对最有效的药物白念珠菌,c . glabrata和c . tropicalis本研究的主要的隔离。的敏感性白念珠菌,c . glabrata,c . tropicalis毒品是89.6%、79.2%和58.8%,分别。所有的隔离酸乳酒和c . krusei容易酮康唑,但的敏感性白念珠菌,c . glabrata,c . tropicalis对药物为89.6%、83.3和58.8%,分别。的敏感性白念珠菌,c . glabrata,c . tropicalis克霉唑为99.1%,87.5%,和882%,分别。唑抗真菌制剂,更多的中间100%的菌株对咪康唑生产c . krusei和c酸乳酒,35.5%的c . tropicalis,20.8%的c . glabrata,和3.8%白念珠菌的中间的药物。
4所示。讨论
对概要文件和在体外口服抗真菌易感模式酵母与OPC埃塞俄比亚艾滋病毒感染的患者。我们的发现白念珠菌作为主要的物种(早些时候符合相似6,19- - - - - -25和最近的26,27国际研究。我们的发现白念珠菌作为主要的物种也符合相似研究本地贡德尔,埃塞俄比亚西南部[28),但有一些显著的不同物种的谱系,对酵母的分离比例。例如,在我们的研究中获得的文化积极率(69.2%)比文化积极率相对较低(82.3%)在贡德尔研究报道。回收率的差异不同种类的酵母菌也观察到在这两个研究。的回收率白念珠菌在我们的研究是106年(68.4%),24例(15.5%)c . glabrata,17例(11%)c . tropicalis4 (2.6%)C。krusei,2例(1.3%)c酸乳酒。在贡德尔进行的研究中,不同种类的酵母菌的回收率高,139 (78.5)白念珠菌40 (22.5%)c . glabrata,17例(14.1%)c . tropicalis,10 (5.6)c . krusei,分别。同样的,他们的研究显然不能分离酸乳酒,laurentii,红酵母属物种,使2.6%的酵母隔离在我们的研究中。c酸乳酒和其他酵母所孤立的口腔酵母菌的其他作品(6,19]。差距在光谱物种之间的隔离率不同的酵母和百分比两项研究可能产生的差异研究对象参加这两项研究以来的一半我们的研究对象是在鸡尾酒疗法。显著降低口腔念珠菌病的发病率在接受HAART治疗的病人中被报道,许多早期的研究(14,15,29日]。
尽管许多研究的流行程度不同假丝酵母物种已经导致了普遍的共识白念珠菌是最常见的孤立的物种在患者的口腔感染艾滋病毒,已经被越来越多的非复苏的趋势白假丝酵母物种。这是本研究中明显的隔离非白假丝酵母物种是30.8%。相比之下,非的恢复率较小白假丝酵母15%的物种在坦桑尼亚(6),19%在埃塞俄比亚28),22%在德克萨斯州30.),16.5%在墨西哥(19已报告。同样,相对较高的回收率55%和50%的非白假丝酵母物种在类似的研究已报告在尼日利亚(27)和巴西(20.),分别。
总共有155例孤立从224年获得标本10个月期间。临床标本收集7.1%(16/224)产生多个酵母(混合文化)物种的白念珠菌是孤立的混合文化。4(1.5%)和40(18.6%)混合感染是由类似的研究报道在坦桑尼亚(8)和埃塞俄比亚(28),分别。百分之十五(15%)和29%的混合感染假丝酵母物种在艾滋病患者也报道鲍姆加特纳et al。31日)和Schoofs et al。32),分别。我们发现关于混合文化的流行可能反映了从单个到多个假丝酵母物种隔离,负责流行病学OPC的转变。最主要的物种一起孤立白念珠菌在本研究c . glabrata(43.8%)。这一发现的重要性c . glabrata可能会取代白念珠菌氟康唑的选择压力下,导致感染耐火材料当前基于氟康唑治疗在埃塞俄比亚。像其他非洲国家,目前的指导方针的埃塞俄比亚卫生部(卫生部)念珠菌病的管理包括作为首选药物氟康唑和酮康唑、咪康唑软膏作为替代抗真菌制剂(33,34]。
在这项研究中,发生的OPC non-HAART组高于鸡尾酒疗法组。一百五十五(155)酵母隔离恢复艾滋病患者OPC,九十一(91)隔离来自患者没有在鸡尾酒疗法和64隔离在HAART治疗的病人。来自其他国家的这一发现与先前的报道是一致的。Ceballos-Salobrena et al。14),在他们的研究中,154名患者HAART至少6个月,公布了OPC的发病率减少30%。Ramirez-Amador et al。15在墨西哥),12年的前瞻性研究,观察OPC的发病率减少一半的定义研究时期。
在目前的研究中,女性患者的数量的参与者(155年69.2%)大于男性参与者(69年30.8%)。两性研究参与者的数量的显著差异可能是由于这样的事实:女性患者比男性更容易受到艾滋病病毒感染的病人。
机会性真菌感染抗真菌剂越来越记录和他们的频率可能会继续增加35]。这种现象似乎很大程度上是由于广泛使用的抗真菌药物治疗真菌感染,通常发生在严重的职业和/或危重病人。假丝酵母spp。新型隐球菌,曲霉属真菌种虫害的真菌主要负责这些侵入性感染(36]。而抗真菌耐药性的描述都是这些真菌,阻力之一假丝酵母是到目前为止最重要的问题37]。这是明显的目前的研究中,31%(48/155)酵母分离被发现是对一个或多个抗真菌药物测试。这个结果相当与早期的研究在埃塞俄比亚(28从非洲]但相对高于相似的研究6,21和世界上的其他国家38]。48酵母分离的对一个或多个药物有耐药性超过64.6%(31/48)的非隔离白假丝酵母这可能反映了内在易感性的一些非少白假丝酵母物种等抗真菌药物氟康唑(39)的反射和/或不当使用抗真菌的研究领域。两性霉素B传统上用于局部格式,尽管它可能是管理系统治疗全身性感染的住院病人。我们的结果在体外磁化率的假丝酵母物种多烯抗真菌制剂(两性霉素B、制霉菌素)是符合报告之前20.)和显示,假丝酵母隔离恢复的研究对这些多烯抗真菌药物高度敏感。155酵母分离,只有2(1.3%)和9(5.8%)隔离是抗制霉菌素和两性霉素B,分别。这些结果将支持的有效性局部两性霉素B、制霉菌素治疗浅表念珠菌病。反复OPC和重复和/或长期暴露的患者抗真菌治疗诱导酵母唑抗真菌药物的敏感性降低8,9]。选择压力引起的抗真菌剂和唑累积剂量由于接触几道菜短期或长期抑制的治疗患者的OPC是不道德的原因诱导酵母唑抗真菌药物的敏感性降低9,10]。同样,开发OPC对唑类敏感性降低的风险与更大的持续时间有关的艾滋病毒感染和严重的免疫抑制10]。隔离的酵母对唑类抗真菌药物在当下研究可以解释基于上述风险因素。不管酵母身份,19(12.3%)、13(8.4%)、4(2.6%)分离株对氟康唑耐药,酮康唑、克霉唑,分别。氟康唑也最活跃的药物白念珠菌这是最常见的孤立的酵母。虽然氟康唑已被广泛用于治疗粘膜念珠菌病由于其低毒性和易于管理本地(28),许多国际研究报告耐氟康唑假丝酵母菌株分离HIV感染患者OPC (40- - - - - -42]。虽然我们没有更高的酵母隔离电阻的原因如上所示,氟康唑在当下研究药物的可访问性是免费的鸡尾酒疗法的扩大自2005年以来的国家,经常使用药物的药物选择的设置可能是负责任的。Magaldi et al。43报道称,9.8%白念珠菌隔离患者没有以前的治疗对氟康唑耐药后增加到44.7%使用这种药物进行治疗。这些数据表明,氟康唑的继续使用可能导致临床治疗失败与敏感性降低显著相关,氟康唑与其他唑类。一般来说,我们的研究表明,多烯抗真菌(两性霉素B、制霉菌素)比唑抗真菌剂更活跃。因此,建议使用这些药物作为二线治疗粘膜念珠菌病是抗菌素治疗对氟康唑耐药或在其他的研究报道(12]。只有一个隔离的155发现酵母分离抗咪康唑,但隔离的21例(13.5%)被发现是中间代理,为什么更多的隔离剂被发现是中间是不清楚,因此进一步的研究建议。
5。结论
这项研究表明,虽然白念珠菌经常是最孤立的物种从艾滋病患者在鸡尾酒疗法,而不是在HAART,混合文化的高患病率在这项研究可能反映了改变从单个到多个假丝酵母物种隔离,负责流行病学OPC的转变。感染假丝酵母几乎是内生;因此,物种的识别和相应的抗真菌药物敏感性模式可以帮助管理这些感染。作为显示在这项研究中,如氟康唑唑药物的耐药性,使用最频繁的抗真菌,可能暗示常规真菌文化的必要性在体外药敏模式酵母的医疗中心为了更有效地管理上述患者侵袭性念珠菌病。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。