文摘
背景。引入核酸测试(NAT)已经帮助减少窗口期捐款,导致增加血液供应的安全。NAT的优点结合病毒基因组的直接和高度sequence-specific检测。我们分析的性能更新Procleix Ultrio精英(PUE)和Procleix Ultrio化验(PUA)筛选病毒标记在我们捐助的人口。材料和方法。10015年捐赠样本筛选的常规分析和两个版本NAT。NAT收益率受到病毒载量检测评估和其他血清学标记。结果。共有21个NAT收益率被检测到;三是积极的NAT系统,而18只样品被PUE活性。NAT收益包括18乙肝病毒和丙肝病毒产量,其中17 HBV收益率神秘感染和1窗口期(WP)感染。3丙肝病毒收益率WP感染。没有发现hiv - 1 / hiv - 2收益率。结论。高效的目标捕获化学在新TMA显著提高灵敏度分析版本。NAT优于血清学免疫测定病毒标志物的筛查;和高效的目标捕获系统更新TMA化验、即PUE系统,大大提高灵敏度的早期版本。
1。介绍
输血比以往任何时候都更安全的捐赠者通过不断改善招聘、细致的筛选,对捐献的血液测试化验与越来越敏感,和适当的临床使用的血液(1]。在分子水平上的技术进步创科实业领域的筛查输血医学大大减少通过输血传播疾病的潜在风险。
核酸检测(NAT)是一种新技术,介绍了领域的输血医学分子病毒感染的诊断和描述。NAT结合的优势直接和高度sequence-specific检测病毒基因组(DNA或RNA)的分析灵敏度高几个数量级的比抗原/抗体/抗原抗体检测技术或病毒隔离方法。窗口期的平均持续时间在免疫检测无法检测anti-HIV-1 / anti-HIV-2 anti-HCV, HBsAg, 16之间的估计,70年,和hiv - 1的45天,丙肝病毒和乙肝病毒,分别与NAT明显下降(2]。引入NAT筛查献血者的缩短这个“窗口期”,因此大大增加的安全血液供应(2]。
的患病率乙肝病毒、丙肝病毒和艾滋病毒在发达国家如澳大利亚是非常低的7.55,5.34,和0.31 100000 -供体人口,分别为(3]。相比之下,印度这样的发展中国家仍有乙肝病毒患病率高,丙肝病毒,和艾滋病毒在1.8 - -4%,0.4 - -1.09%和0.2 - -1% [4- - - - - -9]。高患病率加上血液筛检继续阻止血液供应不足的国家。核酸测试与常规血清学预计将增加在印度这样的国家血液安全创科实业发病率高(10]。
新一代个人donor-nucleic酸测试(ID-NAT)基于transcription-mediated放大(TMA)测定的原理,即Procleix Ultrio化验(PUA)(以前,凯龙星/ Gen-Probe维尔/圣地亚哥、钙、美国;现在由Grifols诊断解决方案销售,Inc .), FDA在2006年首次批准程晓江筛查献血者的同步检测的hiv - 1 RNA和丙肝病毒RNA和后来延长检测献血者的乙肝病毒。制造商改进这个版本和引入Ultrio +分析声称增强敏感性和自动化(底格里斯河平台上)。
最近,Procleix Ultrio精英(PUE)系统(此前,凯龙星/ Gen-Probe维尔/圣地亚哥、钙、美国;现在由Grifols诊断解决方案销售,Inc .)推出的额外能力检测hiv - 2满足区域需要在各种印度这样的发展中国家。PUE是多路复用NAT试验用来检测hiv - 1 / hiv - 2,乙肝病毒和丙肝病毒在体外定性全自动豹乐器。
我们评估的PUE全自动Procleix豹系统和比较结果与常规的血清学和PUA早些时候。
2。材料和方法
2.1。研究网站
这项研究是由主要的血库,全印度医学科学研究所,新德里,从2014年1月至2014年10月共10个月的时期。
2.2。捐赠的人口
共有10015例程在我们的血库献血病毒筛查标记主要来自替代献血者或家庭献血者。管理捐赠史问卷(DHQ)和所有捐助者的精心筛选献血前由一个训练有素的医生是用来排除那些高的风险暴露,从而增加创科实业的机会。
2.3。血清学检测
献血的单位都是利用抗原抗体结合筛选通过ELISA试验(4代包),即Genscreen超HIV Ag-Ab (BIO-RAD),检测HIV - 1和HIV - 2抗原化验(第三代包),即Hepanostika HBsAg超(Biomerieux),乙型肝炎病毒的检测和抗体检测(第三代包),即Hepanostika丙肝病毒超,丙肝病毒感染的检测。
2.4。NAT
ID-NAT是并行执行的所有相应的捐赠样品使用PUE(自动豹平台)和PUA(半自动的平台)的定性检测丙肝病毒的基因组序列,乙肝病毒,hiv - 1和hiv - 2(只在PUE的情况下而不是在PUA)。综述了TMA的原则Assal et al。15]。NAT算法(图1)为印度ID-NAT开发用户描述的是采用类似Grabarczyk et al。16]。
2.5。补充检测
NAT收益率样本测试anti-HIV-1 / anti-HIV-2 anti-HCV, HBsAg的替代,更敏感的化学发光免疫测定(ChLIA)(师+ i1000 SR,雅培,雅培公园,美国)在一个认可的实验室,以验证通过ELISA筛选结果。为了检测任何隐匿性HBV感染的存在(OBI),补充测试anti-HBc, anti-HBs, anti-HBe是由ChLIA(师+ i1000 SR,雅培,雅培公园,,美国)。欧比HBV DNA的存在在血液或组织中没有检测到HBsAg,有或没有的存在anti-HBc抗体或anti-HBs抗体,与preseroconversion窗口期(17]。病毒载量的NAT收益率样本也决定用实时定量PCR。
3所示。结果
总共有213(2.13%)捐款()被发现是活性的病毒标记测试通过血清学或NAT (PUA和PUE)。整体流行病毒标记是1.44%的乙肝病毒,0.4%的丙肝病毒,艾滋病毒0.25%,5例(0.05%)合并感染(表1)。整合血清学和NAT活性研究结果发现在153/213(71.8%)的活性捐款。
39例(18.3%)被发现是血清学反应,在重复实验中被发现与最初的血清学结果相一致,因此被贴上“潜在seroyields”(反复seroreactive和NAT -)。其中包括5反应样本HBsAg, anti-HCV 22, 12 anti-HIV-1 / anti-HIV-2。
21(9.9%)样品被发现是最初反应只有ID-NAT (PUA和/或PUE)。部门协议后,所有的初始活性样品被发现是多次反应(RR)≥1主要试点管和/或等离子体包当进一步测试一式三份。歧视性的化验歧视所有RR样品(歧视NAT收益率)除了一个被发现的歧视性不反应的(医嘱,即nondiscriminated NAT收益率)(表2)。
NAT的收益率情况下,三是积极的PUA和PUE化验和18只反应了PUE(15乙肝病毒和丙肝病毒的收益率)。17 HBV收益率神秘感染和1窗口期(WP收益率)感染。3丙肝病毒的收益率都是窗口期感染。补充测试的结果和定量病毒载量的收益率样品中描述表2。整个NAT收益率被发现1 477年和特异性NAT收益率1 668年乙型肝炎病毒被发现,1 10015年丙肝病毒,和1 2003年合并感染。
值得注意的是,PUE化验检测2乙肝病毒的情况下逃脱了PUA但HBsAg活性的检测(PUA)小姐。PUE也贴上5样品合并感染(2 HIV-HBV 3 HCV-HBV)被确定为monoinfections老PUA以及血清学。三个2乙肝病毒和丙肝病毒标记为在PUE coyields。
4所示。讨论
引入改进的ID-NAT和血清学测试pathogen-specific捐献者体液免疫反应导致安全血液供应(18]。在印度的背景下,尽管NAT不是强制,许多血液中心已经开始NAT作为一个额外的安全层更好的输血服务(19]。Makroo et al .,在他们的第一个印度的多中心研究,评估ID-NAT,发现一个NAT产量的1 2622年捐款和涉及常规NAT随着血清学测试将会显著提高血液安全在印度(10]。研究以前在我们机构的早期版本的化验报告产量1:610年和628年1:这是高于先前的研究[20.,21]。
的特异性NAT收益率PUE是1 668年乙肝病毒,1 10015年丙肝病毒,和1 2003年合并感染。然而,特异性NAT收益率为被发现1只3338年乙肝病毒。因此,PUE系统显然是更有效的乙肝病毒和丙肝病毒的检测。Tsoi等人筛选517072年和399326年连续捐款为乙肝病毒ID-NAT使用Ultrio和Ultrio +化验,分别报道增强检测乙肝病毒后引入Ultrio +试验更敏感(22]。Vermeulen等人报告了类似的结果在他们的研究在南非捐赠者人口(23]。NAT更高收益率在我们的研究表明病毒基因组的有效检测与新PUE系统由于其高效的目标捕获化学和更好的敏感性检测某些HBV基因型(特别是基因型D在印度最流行的)(16,24]。
9的21 NAT收益率情况下,病毒载量不能量化。这可能是由于少量的目标现在和抽样可变性符合泊松分布和试验的敏感性的差异有很大变化检测极限(LOD)不同的菌株和基因型。我们评估的能力ID-NAT发现隐匿性HBV感染的定性评估anti-HBc抗体对NAT产量情况。结合NAT收益率的18乙肝病毒的情况下,我们发现隐匿性HBV感染和1窗口期捐赠17逃脱血清学的检测。Doda等人也报道乙肝病毒NAT收益率18 OBI 12例和6 WP (WP收益率)捐款25]。
我们发现一个WP乙型肝炎病毒感染和3 WP丙肝病毒感染(表2)。乙肝病毒检测与分析而只有PUE丙肝病毒感染检测。结果符合制造商规定的索赔新PUE增强了能力目标捕获和增加LOD PUA相比。
奥比是一个不同的组与乙型肝炎病毒有关的条件,低水平的循环HBV DNA,虽然传染性的捐助者是一个熟知的事实,这是不切实际的实现常规anti-HBc筛查限制OBI传播的流行anti-HBc > 10% (17]。游戏等人回顾了乙肝病毒筛查策略和建议,结合anti-HBc效价测量以及乙肝病毒NAT将导致日本最佳血液安全(乙型肝炎病毒高流行区)(26]。来自台湾的一项研究表明,在乙肝病毒流行地区NAT结合HBsAg的引入将提供额外的安全输血而不影响捐赠者池(27]。Makroo等人在研究中测量anti-HBc献血者也发现了类似的现象28]。作为供体的8 - 18%的人口在印度anti-HBc反应,这对创科实业筛选标记将必然导致消耗大量的捐赠者,引起收缩的有效捐赠池(29日]。我们的研究表明,对于盛行的乙肝病毒的流行地区,包含常规血清学NAT是一个更好的选择比,同样的,如果不是更多,有效引入普遍anti-HBc筛查。
定量PCR未能量化丙肝病毒的病毒载量NAT产生样本,即感染丙肝病毒WP(表2)。未能量化病毒载量可能是由于低水平的病毒血症检测的限制和不同的技术。尽管PUE和PUA可比丙肝病毒检测的限制,我们无法找到任何可能的解释为什么PUA错过这些NAT收益率(表3)。
hiv - 1和hiv - 2在印度共存,HIV-1C是最常见的亚型报道(30.]。hiv - 2例在一般和献血人口也被报道大多来自印度的西部和南部地区。创科实业的威胁并不是静态的,是不断发展的,检测hiv - 2可能严重影响血液供应(31日]。虽然之间有大的主要病毒(hiv - 1 / hiv - 2)类型,它不足以依靠一个hiv - 1的具体分析来检测所有例hiv - 2 (32]。较新的PUE化验了hiv - 2检测没有出现在以前的版本。在写这篇论文,没有输血传播hiv - 2例被发现和记录在我们中心在北印度或其他地方。然而,这只是一个时间问题,这种情况下出现(33]。
捐赠跟踪和回顾研究中最重要的步骤验证捐赠者的创科实业反应或收件人34]。不像大多数的发达国家,印度haemovigilance程序和donor-vigilance仍在初级阶段。日常捐赠随访是不可能的因为大多数捐助者不出现在输血设备在接收通知的创科实业状态(21]。因此,很难确定血清转化在大多数捐助者和输血的接受者。加强筛查与现代测试技术整合和严格的捐赠者选择的唯一选择是发展中国家提高血液安全。
5。限制
首先,确认测试执行和捐助者被通知不仅是重复的基础上活性筛选结果。其次,供后续并不在我们的设施,因为活性捐助者被称为本部门咨询,确认测试和管理。(不幸的是,结果和数据的活性捐赠者从输血机构转诊后没有与我们同在。)此外,我们的研究人口组成的主要替代献血者可能并不能反映情况自愿nonremunerated献血人口。
6。结论
我们的研究显示,PUE增强灵敏度(NAT的收益率来衡量)相比,为乙肝病毒和丙肝病毒。的收益率例乙肝病毒以来,引入PUE ID-NAT筛查在印度将减少乙肝病毒的传播。完全自动化,减少工作空间和基础设施需求与增加额外的优点是灵敏度和hiv - 2检测的新系统。
利益冲突
阿布先生Kumar孔雀王朝是Hemogenomics分公司的员工,公司在印度市场PROCLEIX体系。
作者的贡献
构思、设计和解释是由拉胡尔Chaurasia博士。起草的纸是由Diptiranjan溃败博士和Shamsuz扎曼博士。采集的数据是由阿布先生Kumar孔雀王朝。重要的修订和最终批准的纸是由Kabita Chatterjee博士和下摆钱德拉Pandey。