大量的抗菌活动药用植物提取物和Hydrolates抗生素耐药性逆转人类病原体及其潜力

文摘

微生物感染至今仍然是一个祸害人类由于缺乏一些疫苗感染,出现耐药表型,复兴之间的感染他人。不断追求新颖的治疗方法仍然是必要的。我们(我)提取的影响评估/ hydrolates一些药用植物病原微生物和(2)评估潜在的抑制最活跃的结合抗生素。提取E03最高(25毫米)佩带天珠。提取E05和E06积极反对所有微生物测试。中等收入国家和MBCs的甲醇提取物范围从16.667×10³μ2 g / mLμg / mL和hydrolates从0.028到333333 ppm。特别是对提取E30最高的活动美国saprophyticus6 ppm (MIC)大肠杆菌17 ppm (MIC)。结合传统的抗生素被证明尤其是E30克服阻力。分析提取了生物碱的存在,类黄酮、三萜、类固醇、酚类、皂甙。这些结果证明这些植物的使用传统医学和补充汤的做法/混合物与传统抗生素。Nauclea pobeguinii (E30)、最活跃和协同这些提取物,和一些hydrolates与抗菌活性需要进一步探索发展的新型抗菌素。

1。介绍

的民谣中的记述都概念广泛的药用植物科学已经证明,后者导致了药物疗法对抗各种传染病的发展阻碍人类生活和活动。虽然植物自然无可置否的水库anti-infectious代理,寻求科学的验证和开发新的药物或治疗组合从未知的植物用于传统药典由于复苏的问题仍然非常必要的抵抗,负担能力和效果。抗菌药物,特别是抗生素耐药性对公众健康是一个挑战,尽管各种抗生素的存在(1]。主要由不受监管造成的使用抗菌素和恶劣的卫生条件,它严重影响人类生活的方方面面2]。虽然免疫通过疫苗导致了一些微生物的控制和根除感染(3绝大多数仅仅依靠化疗,不断受到耐药表型的出现。这些耐药表型的患病率增加尤其是与多个抗性负责大部分的治疗这些疾病中遇到的困难。细菌和真菌感染占最大一部分感染中发现的卫生服务。细菌感染时仅占90%的感染、真菌感染呈上升趋势发展中国家因为机会合并感染和艾滋病毒和其他医疗操作(4]。

植物提取物和精油被广泛探讨治疗活动对大多数微生物感染(5]。但几乎很少已经对抗菌素的hydrolates(从蒸汽蒸馏获得的药用和芳香植物)。约80%的世界人口依靠植物提取药物的初级卫生和发展中国家有35亿人依赖于开发药用植物和草药产品在他们的医疗保健需求6]。尽管这种传统医学的方法,在大多数情况下,被科学验证的安全性和有效性,各种原因占其连续大规模应用,无论传统医学的存在。这些草药产品,虽然治疗,一直伴随着严重的疾病和器官衰竭(7]。因此他们对安全性和有效性评价仍然是一个重要的挑战。本研究旨在表明许多粗提取物的抗菌活性和hydrolates药用植物在民间医学(表使用1)和评估他们的潜力在协同与传统抗生素的微生物产生了抵抗力。使用混合物/汤结合抗生素微生物发展抵抗治疗微生物感染日益成为受欢迎的和更有效的传统药典。Hydrolates被用于传统医学治疗各种疾病和一些与蚊虫杀灭幼虫的相关活动8,9]。他们的抗菌活性并没有很好地开发尽管他们已报告中包含许多生物活性亲水化合物酚类、醇类和萜烯可以使潜在的抗菌候选人。


s / n	植物的名字/家庭	传统的用法

	Aframomum danielli(姜科)	Aframomum danielli使用种子提取物对炎症和驱虫的疾病,如防腐剂(42]。

	Aframomumkayserianum(姜科)	用于治疗各种疾病和癌症43]。

	Aframomum melegueta(姜科)	Aframomum melegueta种子是用于治疗各种疾病在其他麻疹、麻风病、驱虫的疾病、痛经、支气管肺的疾病,女性不育,偏头痛,和性衰弱43,44]。

	Aframomum sulcatum(姜科)	Aframomum sulcatum种子是用于治疗男性不育,发烧,和虫疾病(31日]。

	含羞带(Mimosaceae)	用于治疗血液疾病,支气管炎,哮喘,毒蛇咬伤,痔、瘙痒45]。

	Aucoumea klaineana(橄榄科)	树皮用来对付咳嗽、胸痛、脓肿、痢疾;树脂用于皮肤、头发和指甲护理(46,47]。

	Baillonella toxisperma(山榄科)	树皮用于治疗梅毒、肾脏疼痛、贫血、女性不孕,性无能,肠道蠕虫、糖尿病、背痛和脚泻药(48,49]。

	Canarium schweinfurthii(橄榄科)	水果、茎、树皮用于治疗咳嗽,veneral疾病,和渗出液;用作抗氧化剂(50]。

	肉桂(樟科)	用于癌症和糖尿病(51]。

	黄anisata(芸香料)	用来对付肠道紊乱、口腔念珠菌病和皮肤的真菌感染,在癫痫和抗惊厥的,在高血压、抗疟药,治疗各种微生物和病毒感染(52,53]。

	Cupressus leylandii(柏科)	用于筛查或对冲。

	Cymbopogon winterianus(禾本科)	作为抗菌、抗真菌、antiyeast杀虫,杀虫剂制剂(54]。

	Echinops竹(菊科)	用于治疗癌症(55]。

	尤金尼亚caryophyllus(桃金娘科)	用于治疗各种疾病,包括脓肿、扁桃体炎、结核、流感、肝炎、霍乱、疟疾、和分娩困难56]。

	Fagara leprieuri(芸香料)	作为抗癌剂。

	Fagara xanthoxyloides(芸香料)	用于治疗炎症、腹部疼痛、溃疡、牙痛,和发烧57]。

	Kigelia africana(紫葳科)	树皮和果实用于治疗艾滋病毒和各种机会性疾病、腹泻、阳萎、痔、疟疾、糖尿病和生殖器瘙痒(27,28]。

	Mitracarpus痂(茜草科)	用于治疗头痛、闭经、麻风病和皮肤和肝脏疾病(24]。

	Myrianthus arboreus(桑科)	用于治疗黄疸、痢疾、腹泻、呕吐、发烧、心脏疾病和痛经(58]。

	Nauclea pobeguinii(茜草科)	用于治疗疟疾和防止流产。

	Pamplemousse pepin(芸香料)	作为天然抗生素和抗真菌剂。

	Pentadiplandra brazzeana(Pentadiplandraceae)	用作防腐剂在治疗伤口,镇痛治疗龋齿和风湿病,壮阳药(59]。

	Piper capense(胡椒科)	p . capense用于治疗veneral疾病,瘫痪,不孕,心脏和肾脏疾病和性兴奋剂在别人(60]。

	Piper guineense(胡椒科)	p . guineense叶子是开胃酒,驱风剂,eupeptic也用于治疗咳嗽、支气管炎、肠道疾病,风湿病(61年]。

	Piper初步(胡椒科)	Piper初步用于缓解疼痛、发冷、流感、发烧、肌肉疼痛和皮肤疾病,哮喘、肥胖、和腹泻(62年]。

	Scleria striatinus(莎草科)	使用针对眼部感染。

	Tetrapleura tetraptera(豆科)	用于治疗癫痫、抽搐、疟疾、发烧、和纤维肌瘤(63年]。

	Xylopia aethiopica(番荔枝科)	用于治疗支气管炎,痢疾,炎症,咳嗽,和产后疼痛23]。

2。材料和方法

2.1。植物材料的收集和识别

药用植物和植物部分(表1)用于本研究收集2007年至2011年间从北面土地之间的中心和滨海地区)(喀麦隆。标本被确定在喀麦隆雅温得国家植物标本,喀麦隆。

2.2。原油提取和Hydrolates做准备

新鲜植物材料在室温和风干粉碎成粉末和提取是由浸渍己烷的粉末在6升了两天。该滤液蒸发干燥使用旋转式真空蒸发器压力降低。集中浸渍在6升的甲醇(甲醇)。集中从后者获得原油提取后过滤/蒸发被储存在4°C。Hydrolates是通过分离后的水从精油蒸汽蒸馏过程中提取精油。

2.3。处理测试物质和细胞

每个提取制备溶解250毫克5毫升的10% (v / v)水二甲亚砜(DMSO)给一个分析50毫克/毫升的浓度。美国庆大霉素和制霉菌素(从σ)担任积极控制和使用浓度为0.2 mg / mL,分别对细菌和真菌。这些控件的股票的解决方案是由溶解10毫克在5毫升的10% (v / v) DMSO溶液。Hydrolates没有resuspended在DMSO因为他们的水自然。临床分离株六致病菌(大肠杆菌、肺炎杆菌、伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、葡萄球菌epidermidis,和葡萄球菌saprophyticus)和两种真菌(毛癣菌属石和白色念珠菌标准协议(后),获得使用选择性的媒体10,11从区域医院附件在喀麦隆的西南地区,布埃亚。隔离被确定的增长能力选择媒体,通过革兰氏染色反应,其形态和各种不同的生化反应(12]。

2.4。敏测试和决心的麦克风和MBC

孔盖扩散和汤采用方法被用作描述(13)评估提取物的抗菌药物敏感性和hydrolates,分别通过测量直径的抑制区和确定最小抑制/杀菌浓度(麦克风和MBCs)。简单,执行统一的孔盖扩散法由传播细菌悬架(约100μL,对应于Mc Farland标准2)Mueller-Hinton琼脂板上紧随其后的是6毫米直径的井的创建标签的位置与120年细菌草坪和各自填井μL(对应于50毫克/毫升的准备提取)的测试样本。只提取E01-E14(集中提取;表2用这种方法)进行了测试。积极控制井含有庆大霉素和制霉菌素,分别对细菌和真菌物种而10% DMSO作为消极的控制在这两种情况下。盘子在37°C孵化24小时和抑制测量区域。提取显示非常重要的活动与孔盖一起进一步化验hydrolates测定他们的麦克风和MBCs使用96 - microtitre板块如前所述[14]。50毫升5%葡萄糖和1%的苯酚red-supplemented营养肉汤用移液器吸取到复制每个microtitre板井50紧随其后μL(16.667毫克/毫升DMSO-diluted样本或333333 ppm hydrolate准备如上所述测试井的独一无二的进入第一。50井被稀释的连续传输μL从第一到下一个,直到十一。50μL从十一丢弃。积极的控制井同样的待遇。负控制井(12日)没有样品。50μL测试生物体的悬架被添加到每个在37°C和盘子被孵化24小时和视觉观察的增长是基于酚红指示剂的颜色变化从红色到黄色描述微生物的生长产生的酸性废物。的浓度以及包含最低的样品浓度,防止可见增长或颜色的变化被认为是麦克风。进一步确定麦克风和确定MBC, 10μL与麦克风的内容和前面两个用于接种的固体琼脂板上。24小时后孵化至少37°C的增长被认为是MBC的MBC好和相应的浓度。


代码	植物物种	提取或hydrolate

E01	Xylopia aethiopica	甲醇水果提取
E02	Mitracarpus痂	甲醇全植物提取
E03	Aframomum danielli	甲醇籽萃取物
E04	肉桂	甲醇根提取物
E05	含羞带	甲醇树皮中提取
E06	Baillonella toxisperma	甲醇树皮中提取
E07	Fagara leprieuri	甲醇水果提取
E08	Kigelia africana	茎的甲醇提取
E09	Tetrapleura tetraptera	甲醇水果提取
E10汽油	Xylopia aethiopica	茎的甲醇提取
E11	Aucoumea klaineana(奥古曼)	乙醇树脂提取
E12汽油	Pamplemousse pepin	甲醇籽萃取物
E13	Myrianthus arboreus	甲醇根提取物
E14灯头	黄anisata	己烷叶提取
E15	Scleria striatinus	甲醇根提取物
E16天	Canarium schweinfurtii	树胶脂hydrolate
E17	Aframomum sulcatum	种子hydrolate
E18	Aframomum melegueta	种子hydrolate
E19	Fagara xanthoxyloides	水果hydrolate
E20	Scleria striatinus	己烷根提取物
E21	Piper初步	水果hydrolate
E22	Pentadiplandra brazzeana	根hydrolate
E23	Echinops竹	根hydrolate
E24	Cupressus leylandii	叶hydrolate
E25	尤金尼亚caryophyllus	水果hydrolate
E26	Cymbopogon winterianus	叶hydrolate
E27	Aframomum kayserianum	种子hydrolate
E28	Piper guineense	水果hydrolate
E29	Piper capense	水果hydrolate
E30	Nauclea pobeguinii	甲醇根提取物

表2

植物提取物或hydrolates代码:提取被用电吹风准备新鲜植物原料,粉碎成粉末,并通过浸渍提取粉末在己烷,紧随其后的是过滤和蒸发。集中在甲醇浸软,过滤,蒸发和由此产生的集中原油提取编码如图所示,储存在4°C到所需的使用。Hydrolates是通过分离后的水从精油蒸汽蒸馏过程中提取精油。

敏试验也进行描述(15)来识别细菌物种对选定4常用商业抗生素(阿莫西林、氨苄西林、头孢曲松、诺氟沙星),以评估潜在的最活跃的提取物逆转的抗生素耐药性。0.5 Mc Farland标准(1.5 2×10⁸CFU /毫升)的每个细菌制备和用于接种Mueller-Hinton琼脂板的表面。商业敏感性光盘吸收了各种抗生素后被放置在琼脂表面允许板站在室温下30分钟(预扩散时间)板当时在37°C孵化24小时。抑制区测量。为了确定耐药细菌培养,中间,或对抗生素敏感,其抑制区与区直径解读图表的国家临床实验室标准委员会(16]。确定这些商业的中等收入国家抗生素(阿莫西林、氨苄西林、头孢曲松、诺氟沙星;所有从药店获得),20μ克/毫升的10% DMSO和中等收入国家中的每个准备决定以类似方式如上所述。

2.5。确定潜在的最活跃的提取抗生素耐药性逆转

中等收入国家最活跃的提取物的准备与传统抗生素。细菌被培养在井96 - microtitre盘子的提取,提取+抗生素和抗生素。汤采用孵化后然后执行如上所述,板块在37°C的中等收入国家24小时提取/抗生素,抗生素和单独提取被确定。抗生素之间的协同作用和提取或逆转耐药性据说发生结合的麦克风是否低于单独的药物和提取。对抗发生在中等收入国家的组合提取和药物未能抑制细菌的生长(17,18]。

2.6。植物化学的研究

各种提取物还分析了各种植物化学的测试,通过薄层色谱法(TLC),以评估他们的化学成分。(描述的植物化学的筛选是本质上19,20.]。正相硅胶GF预镀TLC板被用来分析化合物活性天然植物提取物中如前所述[21]。

2.7。统计分析

直径的抑制区提取作为平均值±标准偏差。

3所示。结果

3.1。粗提取物的抗菌活性

总共14粗提取物,E01 E14灯头(表26),筛选对细菌和真菌生物测试的空穴扩散的方法。的绝对的直径值区抑制()佩带天珠不同,从0到25毫米(表3)。的甲醇提取物Mitracarpus痂(E02),尤其是那些的含羞带(E05)和Baillonella toxisperma(E06)活性对所有的临床分离株微生物病原体检测。最高获得佩带天珠Aframomum danielli(E03)(25毫米)大肠杆菌并且它也是活跃的反对美国saprophyticus(11毫米)较小或没有活动与其他菌株。大肠杆菌站在最易受感染菌株,被所有14提取。提取E11和E14灯头(分别地。、乙醇提取的Aucoumea klaineana树脂和己烷提取的黄anisata叶)只有积极反对大肠杆菌。提取E07 (Fagara leprieuri)和E10 (Xylopia aethiopica)也只有积极反对大肠杆菌和非常少白念珠菌虽然水果提取E09(甲醇提取的Tetrapleura tetraptera)是对所有的菌株包括不活跃大肠杆菌。其他提取不活跃,不活跃或适度活跃(表3)。


代码	白念珠菌	美国saprophyticus	美国epidermidis	伤寒杆菌	金黄色葡萄球菌	k .肺炎	大肠杆菌

E01	9	- - - - - -	- - - - - -	4	- - - - - -	- - - - - -	19
E02	5	7	5	4	7	4	9
E03	6	11	1	4	1	- - - - - -	25
E04	4	4	2	1	3	- - - - - -	14
E05	8	8	11	9	8	9	7
E06	14	14	13	9	12	9	9
E07	4	1	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	14
E08	4	9	1	9	6	5	11
E09	3	3	3	2	1	4	4
E10汽油	4	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	16
E11	- - - - - -	1	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	9
E12汽油	9	12	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	12
E13	- - - - - -	5	4	5	- - - - - -	1	9
E14灯头	- - - - - -	1	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	12
+细胞毒性t淋巴细胞	17	17	14	12	17	25	25
−ctl	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -

值意味着重复化验的标准偏差(±1)。- =零抑制观察区。+ Ctl =积极控制(庆大霉素对细菌和制霉菌素白念珠菌);−Ctl = -控制(50% v / v DMSO)。

3.2。抑制/最小杀菌浓度(麦克风/ MBCs)的活性提取物

17提取物的最低抑制浓度(MIC)和13 hydrolates测定各种测试生物体包括临床真菌隔离Tricophyton石。中等收入国家范围从2μ克/毫升16.667毫克/毫升和333333 ppm 6 ppm,分别对原油提取和hydrolates和液体提取物。的麦克风和MBCs总结了提取和hydrolates /液体提取表4和5,分别。麦克风< 100μg / mL被认为是显著的。提取E02 E03,敏感性和E15有类似的趋势与真菌物种而E01 E11, E18-E19, E21-E27没有显示任何活动对两种真菌(表4和5)。尽管真菌表现出类似的趋势,t .石不容易提取E16天白念珠菌(麦克风= 12346 ppm)(图1)。对几乎所有的活性提取物,中等收入国家t .石相对较低。提取E30整体麦克风对最低t .石(MIC = 457 ppm)。提取E30最低麦克风(最活跃的)对革兰氏阳性细菌。葡萄球菌saprophyticus是最敏感的革兰氏阳性细菌相比金黄色葡萄球菌和美国epidermidis(图2)。大肠杆菌是最敏感的革兰氏阴性细菌(图3)。虽然k .肺炎和伤寒杆菌有类似的易感性与几个提取物(E05 E08, E10、E13和E30),伤寒杆菌更容易受到影响k .肺炎(图3)。提取E29和E30最活跃的提取物对革兰氏阴性细菌提取物E11和E18只有积极反对大肠杆菌。提取E16天是唯一提取并没有显示出活动大肠杆菌(最易感的形式)k .肺炎(图3)。总的来说,提取E10最低麦克风与革兰氏阴性细菌物种。一些麦克风井显示增长抑制还显示细菌生长在固体营养琼脂。没有记录的MBC井测试浓度范围内只显示活动样本抑菌。


代码	毛癣菌属石		白色念珠菌		美国saprophyticus		金黄色葡萄球菌		美国epidermidis		大肠杆菌		肺炎克雷伯菌		伤寒沙门氏菌
代码	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC

E01	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	3	2	2	1	1	- - - - - -	3	2	- - - - - -	- - - - - -	2	1
E02	4	3	4	3	4	3	3	3	1	- - - - - -	6	5	1	- - - - - -	2	1
E03	3	2	3	2	3	2	2	1	1	- - - - - -	2	1	1	- - - - - -	2	1
E04	3	2	2	1	3	2	2	1	1	- - - - - -	4	3	- - - - - -	- - - - - -	3	2
E05	6	5	2	1	6	5	4	3	3	2	6	5	3	2	3	2
E06	5	4	3	2	3	2	5	4	2	1	7	6	4	3	3	2
E07	3	2	2	1	6	5	7	6	3	2	4	3	1	- - - - - -	2	1
E08	3	2	2	1	5	4	3	2	2	1	5	4	2	1	2	1
E09	2	1	1	- - - - - -	3	2	2	1	1	- - - - - -	3	2	1	- - - - - -	2	1
E10汽油	2	1	2	1	4	3	2	1	2	1	6	5	1	- - - - - -	1	- - - - - -
E11	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	3	2	1	- - - - - -	2	1	3	2	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
E12汽油	3	2	4	3	4	3	2	1	2	1	4	3	1	- - - - - -	3	2
E13	4	3	2	1	5	4	3	2	2	1	6	5	3	2	2	1
E14灯头	1	- - - - - -	2	1	3	2	2	1	1	- - - - - -	4	3	1	- - - - - -	2	1

麦克风和MBCs到最近的整数:1 = 1667µg / mL;2 = 556µg / mL;3 = 185µg / mL;4 = 62µg / mL;5 = 21µg / mL;6 = 7µg / mL;7 = 2µ克/毫升。- =没有结果。


代码	Tricophyton石		白色念珠菌		葡萄球菌saprophyticus		金黄色葡萄球菌		美国epidermidis		大肠杆菌		肺炎克雷伯菌		伤寒沙门氏菌
代码	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC	麦克风	MBC

E15	4	3	4	3	7	6	4	3	3	2	7	6	1	- - - - - -	5	4
E16天	- - - - - -		4	3	2	1	2	1	3	2	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	1	- - - - - -
E17	5	4	4	3	6	5	6	5	3	2	7	6	4	3	3	2
E18	- - - - - -		- - - - - -		2	1	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	3	2	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
E19	- - - - - -		- - - - - -		1	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	3	2	- - - - - -	- - - - - -	4	3
E20	5	4	4	3	6	5	2	1	3	2	5	4	1	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
E21	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
E22	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
E23	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
E24	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
E25	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
E26	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
E27	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
E28	2	1	6	5	2	1	2	1	1	- - - - - -	3	2	1	- - - - - -	5	4
E29	3	3	2	1	6	5	3	2	2	1	7	6	4	3	5	4
E30	7	7	4	3	11	10	5	4	4	3	10	9	4	3	4	3

1 = 333333 ppm, 2 = 111111 ppm, 3 = 37037 ppm, 4 = 12346 ppm, 5 = 4115 ppm, 6 = 1372 ppm, 7 = 457 ppm, 8 = 152 ppm, 9 = 51 ppm, 10 = 17 ppm,和11 = 6 ppm;- =没有结果。麦克风和MBCs到最近的整数。

图2

提取物对革兰氏阳性细菌hydrolates麦克风:葡萄球菌saprophyticus,金黄色葡萄球菌,和葡萄球菌epidermidis。E30是最活跃的提取物对革兰氏阳性细菌。外墙面= E01-E30。麦克:1 = 1667μg / mL, 2 = 556μg / mL, 3 = 185μg / mL, 4 = 62μg / mL, 5 = 21μg / mL, 6 = 7μg / mL, 7 = 2μg / mL, - =没有结果。

3.3。抗生素的增强作用

3.3.1。敏试验

敏试验进行了4抗生素(头孢曲松(CRO),阿莫西林(AMX),氨苄青霉素(AMP),和诺氟沙星(也))对上述6细菌物种。的抗生素佩带天珠盘对细菌物种被解释为耐药(R)、中级(我),或敏感(S)使用区直径解读图表的NCCLS(2003)(表6)。葡萄球菌epidermidis,金黄色葡萄球菌,伤寒杆菌是耐阴极射线示波器、AMX和音箱k .肺炎AMP和AMX耐药。大肠杆菌和美国saprophyticus分别为抵抗也和AMX。


抗生素	抑制区直径(毫米)佩带天珠
	细菌
	美国epidermidis	金黄色葡萄球菌	美国saprophyticus	大肠杆菌	k .肺炎	伤寒杆菌

头孢曲松钠	22(右)	25(我)	38 (S)	25(年代)	24 (S)	20.
阿莫西林	6(右)	6(右)	6(右)	30 (S)	6(右)	6(我)
氨苄青霉素	6(右)	6(右)	17 (S)	30 (S)	6(右)	6(右)
诺氟沙星	32 (S)	30 (S)	36 (S)	10(右)	31日(S)	30 (S)

R =耐药;我=中间;S =敏感。美国epidermidis耐头孢曲松(CRO),阿莫西林(AMX)和氨苄青霉素(AMP);金黄色葡萄球菌耐阴极射线示波器、AMX AMP;美国saprophyticus耐AMX;大肠杆菌对诺氟沙星(也);k .肺炎耐AMX AMP;伤寒杆菌耐阴极射线示波器、AMX和安保。

3.3.2。麦克风的抗生素

20毫克的抗生素被用来评估他们的麦克风对细菌耐药。麦克风范围从2.2μ1.13×10 g / mL⁻⁴μ克/毫升(表7)。


抗生素	细菌
抗生素	美国epidermidis	金黄色葡萄球菌	美国saprophyticus	大肠杆菌	k .肺炎	伤寒杆菌

头孢曲松钠	11	11	ND	ND	ND	7
阿莫西林	3	4	11	ND	3	2
氨苄青霉素	3	3	ND	ND	3	3
诺氟沙星	ND	ND	ND	11	ND	ND

2 = 2.2μg / mL, 3 = 0.74μg / mL, 4 = 0.25μg / mL, 7 = 0.0091μg / mL, 11 = 1.13×10⁻⁴μg / mL, ND =不确定。

3.3.3。Extract-Antibiotic合作

四个最好的活性提取物(E05, E06、E17 E30;表4和5)被选来评估其潜在逆转抗生素耐药性。抗生素之间的协同作用和提取或逆转耐药性据说发生在麦克风组合不到麦克风的毒品,分别提取。对抗据说发生在中等收入国家的组合提取和药物未能抑制细菌的生长(表8)。几乎所有的提取和hydrolates选择行为与至少一个协同抗生素对至少一个测试的生物。与金黄色葡萄球菌,提取E30(甲醇根提取的Nauclea pobeguinii)与CRO协同行动,AMP和AMX而提取E05(甲醇树皮中提取的含羞带)和E17(种子hydrolateAframomum sulcatum)与AMP和阴极射线示波器,协同行动。树皮提取E06(甲醇提取的Baillonella toxisperma)与阴极射线示波器和音箱有协同效应美国epidermidis。与美国saprophyticus,所有的提取与AMX而有对抗性的影响大肠杆菌,E17和E30协同作用也没有。同时,当提取用来对付肺炎克雷伯菌结合AMP、AMX E05, E06,并与AMP E17显示没有影响和AMX是对立的,而E30与AMP和AMX协同。此外,当这些提取测试结合阴极射线示波器,AMP、AMX攻击。epidermidis,E06逆转CRO的阻力和AMP与AMP E30协同行动。当使用相同的提取结合阴极射线示波器,AMP、AMX反对伤寒杆菌,E17 E30与AMX协同行动和阴极射线示波器,分别。两个革兰氏阳性测试生物体金黄色葡萄球菌和美国epidermidis,E30与AMP协同起来。Nauclea pobeguinii(E30)与至少一个协同行动的所有测试的抗生素生物除外葡萄球菌saprophyticus。电阻由于美国saprophyticus无法逆转的任何活跃的提取或hydrolate。甲醇根提取物的Nauclea pobeguinii(E30),最活跃的提取物对细菌和真菌,和至少一个协同效应对不同菌株的耐药抗生素。


测试生物	提取	测试	麦克风	组合的结果

金黄色葡萄球菌	含羞带(E05)	E05	1
		E05 + CRO	1	没有影响
		阴极射线示波器	1
		E05 +音箱	2	合作
		AMP	1
		E05 + AMX	1	没有影响
		AMX	1
	Baillonella toxisperma(E06)	E06	1
		E06 + CRO	1	没有影响
		E06 +音箱	1	没有影响
		E06 + AMX	1	没有影响
	Aframomum sulcatum(E17)	E17	1
		E17 + CRO	7	合作
		E17 +音箱	1	没有影响
		E17 + AMX	1	没有影响
	Nauclea pobeguinii(E30)	E30	1
		E30 + CRO	11	合作
		E30 +音箱	6	合作
		E30 + AMX	3	合作

美国saprophyticus	E05	E05	1
		E05 + AMX	- - - - - -	对抗
		AMX	1
	E06	E06	1
	E06	E06 + AMX	- - - - - -	对抗
	E17	E17	1
	E17	E17 + AMX	- - - - - -	对抗
	E30	E30	1
	E30	E30 + AMX	- - - - - -	对抗

大肠杆菌	E05	E05	1
		E05 +也不	- - - - - -	对抗
		也不	1
	E06	E06	1
	E06	E06 +也不	- - - - - -	对抗
	E17	E17	1
	E17	E17 +也不	2	合作
	E30	E30	1
	E30	E30 +也不	8	合作

k .肺炎	E05	E05	1
		E05 +音箱	1	没有影响
		AMP	1
		E05 + AMX	- - - - - -	对抗
		AMX	1
	E06	EO6	1
		E06 +音箱	1	没有影响
		E06 + AMX	- - - - - -	对抗
	E17	E17	1
		E17 +音箱	1	没有影响
		E17 + AMX	- - - - - -	对抗
	E30	E30	1
		E30 +音箱	2	合作
		E30 + AMX	2	合作

美国epidermidis	E05	E05	1
		E05 + CRO	1	没有影响
		阴极射线示波器	1
		E05 +音箱	1	没有影响
		AMP	1
		E05 + AMX	1	没有影响
		AMX	1
	E06	E06	1
		E06 + CRO	2	合作
		E06 +音箱	2	合作
		E06 + AMX	1	没有影响
	E17	E17	1
		E17 + CRO	- - - - - -	对抗
		E17 +音箱	- - - - - -	对抗
		E17 + AMX	1	没有影响
	E30	E30	1
		E30 + CRO	- - - - - -	对抗
		E30 +音箱	3	合作
		E30 + AMX	- - - - - -	对抗

伤寒杆菌	E05	E05	1
		E05 + CRO	1	没有影响
		阴极射线示波器	1
		E05 +音箱	1	没有影响
		AMP	1
		E05 + AMX	1	没有影响
		AMX	1
	E06	E06	1
		E06 + CRO	1	没有影响
		E06 +音箱	- - - - - -	对抗
		E06 + AMX	- - - - - -	对抗
	E17	E17	1
		E17 + CRO	1	没有影响
		E17 +音箱	1	没有影响
		E17 + AMX	2	合作
	E30	E30	1
		E30 + CRO	4	合作
		E30 +音箱	1	没有影响
		E30 + AMX	1	没有影响

1 =在一个浓度(MIC的抗生素,单独提取,或提取和抗生素);2 = 1/3麦克风;3 = 1/9麦克风;4 = 1/27麦克风;7 = 1/243麦克风;8 = 1/1944麦克风;11 =麦克风×3⁻¹⁰。

3.4。植物化学的分析和薄层色谱

各种选择的植物化学的分析提取使用植物化学测试表明,甲醇提取的含羞带树皮(E05) hydrolateAframomum sulcatum种子(E17),甲醇提取的Nauclea pobeguinii根(E30),甲醇提取的Baillonella toxisperma树皮(E06)都含有生物碱、E05 E06,和E17除了含有三萜,类黄酮苷。E05 E06也含有酚类和皂甙。E17还含有类固醇而E30仅含有生物碱和类固醇(表9)。薄层色谱法(TLC)分析显示的hydrolateAframomum sulcatum种子(E17)最多的成分。E17也最多的木质素后喷洒硫酸的薄层色谱板。使用Dragendorff试剂来检测生物碱的存在,这是确认所有4提取含有生物碱。最后,查看薄层色谱紫外线照射下产生蓝色荧光显示木酚素的存在,异黄酮,类黄酮和暗黄色斑点表明黄酮类化合物的存在。


化学成分	E05	E06	E17	E30

Alcaloids	+	+	+ + +	+ + +
酚类	+	+ + +	- - - - - -	- - - - - -
三萜烯	+	+ +	+ + +	- - - - - -
类固醇	- - - - - -	- - - - - -	+ +	+ + +
香豆素	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
类黄酮	+	+ + +	+	- - - - - -
皂苷	+ +	+ + +	- - - - - -	- - - - - -
配糖体	+	+	+	- - - - - -

+ + +:丰富;+ +:平均;+:痕迹;-:缺席。

4所示。讨论

缺乏一些微生物感染和疫苗的出现和广泛发生耐药表型尤其是多药耐药性使真菌和细菌疾病还是一个主要的健康问题。植物在民间传统医学治疗基石微生物感染和他们也构成传统抗生素的来源。生物测定指导纯化合物的分离和隔离与抗菌活动有时导致活动减少或损失可能是因为一些化合物协同行动。这导致越来越需要规范和优化植物提取物治疗微生物感染的新方法。本研究旨在表明抗菌活性的原油从药用植物中提取和hydrolates用于民间医药和评估他们的潜力在协同与传统抗生素对微生物耐药性。

十四天然植物提取物被空穴扩散法筛选给直径带抑制()佩带天珠从0到25毫米。的甲醇提取物Xylopia aethiopica水果(E01)提出了一个重要的活动大肠杆菌(> 10毫米)佩带天珠和疲软的活动伤寒杆菌(1 < <佩带天珠4毫米)根据标准分类(22]。在尼日利亚获得了类似的结果23]。Mitracarpus痂全植物甲醇提取物(E02)显示适度的活动白念珠菌和六个细菌菌株进行测试。这是符合研究在马里24甲醇提取活动反对)白念珠菌,E。大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎。甲醇提取的Aframomum danielli种子(E03)最高活动(= 25)佩带天珠大肠杆菌这是类似于之前获得的结果(25]。的甲醇提取物含羞带树皮(E05)和Baillonella toxisperma树皮(E06)是最活跃的,他们表现出活动对7微生物测试介于中等佩带天珠和非常活跃。相似的价值观得到E05的种子和叶提取物(26),但没有研究我们所知已经证明其树皮提取物的抗菌性质。同样,没有抗菌活性E06迄今为止报道。甲醇干树皮中提取的Kigelia africana(E07)和甲醇水果提取的Tetrapleura tetraptera(E08)显示弱到中度活动对所有的生物测试这种方法,和谐与E07先前获得的结果(27]。E07的结果证实了其用法在喀麦隆民间医药治疗各种疾病,包括艾滋病机会性感染和腹泻(28)、生殖器瘙痒,阳痿,桩(29日)、疟疾和糖尿病(27]。甲醇提取的Tetrapleura tetraptera水果(E09),Xylopia aethiopica干树皮(E10汽油),Aucoumea klaineana树脂(E11),Pamplemousse pepin种子(E12汽油),Myrianthus arboreus根(E13)和己烷提取的黄anisata(E14灯头)没有显示出活动除外)大肠杆菌,这是最敏感的生物,所有提取表现活跃。

14原油提取三种液体提取物和13 hydrolates被汤采用试验测试来评估他们的最小抑制浓度8测试生物体,6临床细菌物种,临床真菌物种(表24和5)。十四原油提取固体形式(E01-E014)已经测试的空穴扩散方法虽然3液体提取物(甲醇提取的Scleria striatinus根(E15汽油),己烷提取的Scleria striatinus根(E20)和甲醇提取的Nauclea pobeguinii根(E30))和13 hydrolates (E16-E19 E21-E29,表2)并不是空穴扩散方法进行测试。的提取没有显示活动的空穴扩散法(E10, E09 E12汽油、E13和E14灯头)展示活动的肉汤采用的方法。虽然这是很矛盾的,它表明很多因素影响这些方法(30.]。

的hydrolatesAframomum melegueta种子(E18),Fagara zanthoxyloides水果(E19),Piper初步水果(E21),Pentadiplandra brazzeana根(E22),Echinops竹根(E23),Cupressus leylandii叶子(E24),尤金尼亚caryophyllus水果(E25),Cymbopogon winterianus树叶(E26),Aframomum kayserianum种子(E27)没有显示出活动(E21-E27)或只有适度活跃(E18 E19)只有一到三个测试生物体。种子hydrolateAframomum sulcatum(E17)、水果hydrolatePiper guineense(E28)和Piper capense(E29)和根甲醇提取的Nauclea pobeguinii(E30)已与所有的测试活动的有机体。尽管E17的种子已经被用于治疗男性生育能力和相关的一些细菌感染在喀麦隆(31日抗菌活性尚未报道。乙醇和水的叶子中提取的Piper guineense(E28)曾被证明是积极的反对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌而甲醇(32)和己烷水果和根中提取的Piper capense(E29)来演示活动大肠杆菌,k .肺炎和白念珠菌(33]。Hydrolates E16天E17、E28 E29相对活跃在几乎所有的微生物,这是第一次的抗菌活性Hydrolates这些植物物种被证明。的叶子Nauclea pobeguinii用于治疗疟疾在刚果民主共和国(34)的干树皮用于预防先兆流产在山谷上Nyong在喀麦隆(35]。(之前antiplasmodial活动报道34]。然而,没有抗菌活性的报道。在这项研究中甲醇的根中提取的Nauclea pobeguinii显示最高的活动美国saprophyticus紧随其后的是美国epidermidis。这是最活跃的提取有最低的麦克风和展示活动对所有测试生物体从6到12346 ppm。

提取的含羞带(E05),Baillonella toxisperma(E06),Nauclea pobeguinii(E30)和hydrolateAframomum sulcatum(E17),选择活动的基础上,调查他们潜在的行动与抗生素的微生物协同发展阻力。的电阻状态临床细菌物种显示所有细菌物种对至少一个的四个抗生素(头孢曲松(CRO),阿莫西林(AMX),氨苄青霉素(AMP),和诺氟沙星(也))用于本研究。葡萄球菌epidermidis,金黄色葡萄球菌,伤寒杆菌是耐阴极射线示波器、AMX和音箱k .肺炎AMP和AMX耐药。大肠杆菌和美国saprophyticus分别为抵抗也和AMX。预计这些抗生素的抵抗,因为他们是相对便宜,因此容易被人倾向于滥用将导致电阻作为早些时候描述(36]。E05只与AMP对协同行动金黄色葡萄球菌。4提取,显示最倾向于加强商业抗生素耐药。E30是抗生素的协同至少有一个为所有测试生物除外美国saprophyticus。类似的结果已经报道了很多不同的植物37,38]。这表明,提取可能包含化合物对病原菌有不同模式的行动,这样结合耐抗生素时,他们加强抗生素的作用从而降低麦克风。E30因此最好的提取证明增效能力。本研究的结果表明,并发管理传统抗生素的提取与任何可能不一定引起对立之前认为[39]。在正统的医学,植物可能会受到一些化学过程之前,其活性成分提取,精制,并且可以进行消费,而在传统医学,植物是生吃,熟,或注入水或本地酒,或准备食物40]。因此它可能是重要的标准化活动提取和管理它们单独或与传统抗生素在已知的剂量,已初步形成了阻力。在传统医学、植物历史悠久的使用在治疗许多传染病。这意味着安全的混合物从这些植物在一定程度上是不可避免的。因此急性毒性是必要的但不是非常重要对于大多数的这些植物的药用历史悠久在民间医学使用。

存在的生物碱、三萜、甾醇类、单宁、苷三种原油提取和花卉水可能占重要的抗菌活性表现出这些植物对微生物测试(41]。植物化学的分析显示的甲醇提取物的根源Nauclea pobeguinii只包含生物碱和类固醇和高浓度。这可能也占非常高的活动。薄层色谱法(TLC)概要文件清楚地表明,hydrolate的种子Aframomum sulcatum (E17)有更多的化学成分。这可以从其制备过程的角度来解释。花卉水通过蒸汽蒸馏得到的植物感兴趣的一部分。精油的植物和其他挥发性物质的蒸汽上升。蒸馏装置的蒸汽被冷却下来。冷却冷凝包含水和精油提取,后者漂浮在上面,可以作为hydrolate脱脂。因此hydrolate包含水溶性材料已从植物中提取,包括植物汁本身,这就解释了其高化学多样性。Hydrolates大多以他们的角色在化妆品而不是治疗药物。

5。结论

这项研究导致了界定的植物提取物,尤其是hydrolates广谱抗菌活动证明它们的用法在民间医学治疗各种疾病的微生物的起源。这些活性提取物化学成分如生物碱、黄酮类、单宁、苷、三萜、甾醇类、木脂素类,负责他们的强大的抗菌性能。的hydrolateAframomum sulcatum的粗提取物含羞带,Baillonella toxisperma特别是Nauclea pobeguinii提取了合作与一些传统抗生素的微生物耐药性也证明当前的趋势在传统药典补充汤/混合物用抗生素不管是否对抗生素的抵抗了。这三种提取物(尤其是Nauclea pobeguinii、最活跃和协同)和hydrolate是值得进一步研究的孤立纯化合物抗菌药物开发。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是支持的国际科学基金会(IFS批准号F / 4286 - 2)朱尔斯克莱门特n Assob以及喀麦隆的RMA的高等教育Dieudonne Lemuh Njimoh和朱尔斯克莱门特n . Assob。

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国际微生物学杂志