文摘

志贺毒素的产生大肠杆菌(STEC),沙门氏菌spp。,鼠疫物种调查在人类、动物和食物在圣·路易斯·,阿根廷。共453个样本被文化和PCR分析。所有菌株的抗菌药物敏感性研究,同一物种的基因组分离株之间的关系是由但是脉冲场凝胶电泳的出现,和潜在的毒性y enterocolitica菌株进行了分析。鼠疫物种显示更高的患病率(9/453,2.0%、95% CI, 0.7 -3.3%)比STEC (4/453, 0.9%、95% CI, 0 - 1.8%)沙门氏菌spp。(3/453, 0.7%、95% CI, 0 - 1.5%)。y enterocolitica和y媒介物被孤立的死鸡(6/80,7.5%、95% CI, 1.5 -13.5%)和猪皮肤和骨头(3/10,30%、95% CI, 0 - 65%)。STEC应变是恢复人类粪便(1/70,1.4%、95% CI, 0 - 4.2%)和STECstx1 / stx2基因被发现在牛大便(3/129,2.3%、95% CI, 0 - 5.0%)。年代。从人类粪便沙门氏菌感染是孤立(1/70,1.4%、95% CI, 0 - 4.2%),而一个年代。新港和两个年代。Gaminara菌株恢复从一个野猪(1/3,33%、95% CI, 0 - 99%)。这些enteropathogens的患病率和特征的知识在我们的地区允许公共卫生服务采取足够的预防措施。

1。介绍

产志贺毒素的检测和表征大肠杆菌(STEC),沙门氏菌spp。,鼠疫enterocolitica菌株在人类患者,动物水库,用于人类食用的动物源食品与公共卫生有关。这些生物通过被污染的饮用水和食物传播,会引起肠道和extraintestinal临床表现在人类1,2]。STEC与出血性结肠炎和溶血性尿毒症综合征(HUS);其致病性归因于毒力因子,可以有效的促进人类胃肠道的殖民和随后发布的志贺毒素(3]。阿根廷的溶血性尿毒综合征发生率最高,大肠杆菌O157: H7为主要病因的代理(4]。先前的研究在我国一直关注STEC的患病率在牛和副产品供人类食用4]。

沙门氏菌种虫害进入食物链,从而引发散发病例或人类沙门氏菌病暴发(5]。引发的食源性疾病暴发沙门氏菌血清型是罕见的;然而,年代。巴拿马,年代。新港,年代。圣地亚哥。年代。肠炎,年代。蒙得维的亚,年代。Anatum,年代。沙门氏菌感染菌株被分离的来源多样化的起源(6]。

猪是最重要的y enterocolitica运营商。通常携带致病菌株72 kb毒力质粒(pYV)轴承y艾达,yops,virF基因和染色体毒性标记等苦恼,yst,myfA,发票基因(7]。毒性标记的评估有助于正确地建立的致病潜力y enterocolitica隔离。自y enterocolitica不定期调查临床实验室的阿根廷,一个系统的流行病学研究的y enterocolitica在环境、水库、食物、和人类仍悬而未决。

有助于知识的患病率和分配这些enteropathogens病人,可能有的动物水库,和食品的地区,本研究的目的是检测STEC(我),沙门氏菌spp。,y enterocolitica在人类和动物的粪便和食物用于人类食用的动物源,(ii)的致病潜力进行评估y enterocolitica通过表型和分子毒性标记菌株,(iii)所有菌株的药敏测试,及(iv)确定每个物种的遗传分离株之间的关系通过子类型化使用脉冲场凝胶电泳(但是脉冲场凝胶电泳的出现)。此外,项总大肠菌进行样品的食物。

2。材料和方法

2.1。菌株

y enterocoliticaO: 9 W1024 pYV⁺(比利时)y enterocoliticapYV MCH700 B4 O: 3⁺(加拿大)y enterocolitica29 c-43 B4 O: 3 pYV⁺(挪威),y enterocoliticaB2 O: 9 pYV⁺(阿根廷)被用作积极控制表型毒性分析,评估遗传毒性标记的PCR和DNA样本的比较,但是脉冲场凝胶电泳的出现。大肠杆菌O157: H7 EDL933琼- /βglu - /超高频+ /运算单元+,生物型C,生产商Stx1 Stx2,采用PCR针对STEC积极控制stx1 / stx2基因和沙门氏菌Braenderup H9812作为分子标记但是脉冲场凝胶电泳的出现。y enterocoliticaB1A O: 5 CLO229和y enterocolitica30 CLO225 B1A O: 6日,当地菌株与香肠,利用积极的控制ystB基因PCR (8]。这些菌株被保持在4°C trypticase大豆琼脂偏(TSA,默克,达姆施塔特,德国)。确定文化纯洁,分解动作在Mac Conkey琼脂(MC,默克公司),山梨糖醇Mac Conkey琼脂(SMAC,默克公司)、沙门氏菌和志贺氏杆菌琼脂(SS,默克公司)y enterocolitica,大肠杆菌O157: H7,年代。分别Braenderup每个实验之前了。盘子在25°C孵化48 hy enterocolitica和24小时37°C大肠杆菌O157: H7和年代。Braenderup。

2.2。样品

共453个样本从人类和动物来源在圣·路易斯·城市和即将到来的农村地区,分析了阿根廷,期间2008年6月- 2011年11月。其中包括70个人类粪便样本从小肠结肠炎患者症状参加当地临床实验室;167份粪便样品从饲养场牛()、放牧牛()、猪(),绵羊的()、山羊(),马类();和216个样本用于人类食用的动物源如死鸡()、猪皮肤和骨头()、山羊奶酪(),新鲜香肠“香肠”(),6个样品三个野猪,舌头(),扁桃体()。动物粪便样本随机收集地区牛市场和农场后立即排便。野猪狩猎产品样品从我们的地区。样品用于人类食用动物源性食品的购买五在San Luis城市零售市场。所有样品都是用个人无菌塑料袋包装和储存在4°C 6 h在处理之前。

2.3。调查总大肠杆菌群

总大肠杆菌群的调查样本用于人类食用的动物源,除了扁桃体和野猪的舌头。小数的稀释样品准备在0.1%蛋白胨水pH值7.2 (PW,默克公司);一毫升每个稀释被播种在violet-lactose-neutral red-bile琼脂(VLRB,默克公司)和孵化24小时37°C。项特征殖民地进行和结果表示为日志₁₀CFU / g。

2.4。调查志贺产毒大肠杆菌(STEC),沙门氏菌spp。,y enterocolitica

2.4.1。STEC

25克样品均质在三角胸衣(IUL咀嚼者,德国)90年代和孵化225毫升的EC肉汤(默克公司)为24小时37°C。避免假阴性PCR结果所产生的有机化合物和背景的干扰微生物区系存在于样品,stx1 / stx2PCR没有立即执行。相反,EC浓缩样品条纹在SMAC孵化24小时在37°C (9]。每个板显示初始裸奔汇合的增长区域细菌集群和单个菌落在最后裸奔区域细菌被孤立。然后,DNA提取汇合的筛查stx1 / stx2基因聚合酶链反应(9];如果放大,五个山梨糖醇nonfermenting和5发酵殖民地被随机选择从SMAC盘子和他们的DNA聚合酶链反应针对单独测试stx1和stx2基因。当积极的结果观察、革兰氏染色法和生物型的殖民地。山梨糖醇nonfermenting大肠杆菌殖民地的挑战对O157抗血清(国家传染病研究所Diseases-INEI ANLIS——“博士。卡洛斯·g·Malbran”布宜诺斯艾利斯,阿根廷)幻灯片凝集试验。

2.4.2。沙门氏菌spp。

这种微生物调查根据美国FDA细菌学的分析手册(http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm2006949.htm2008年5月,访问)。25克的每一个均质样品浓缩在225毫升的乳糖肉汤(磅,默克公司)为24小时37°C;然后,1 mL磅整除转移到两个管包含9个毫升连四硫酸盐肉汤(默克公司)和两个管9毫升Rappaport-Vassiliadis肉汤(默克公司)。一个管选择性肉汤在37°C孵化24 h和另一个是孵化24小时的42°C。分解动作完成在SS琼脂(默克公司)为24小时37°C和怀疑乳糖nonfermenting殖民地被革兰氏染色法和生化检查化验。血清学分型进行肠道菌在国家参考中心,INEI-ANLIS,布宜诺斯艾利斯,阿根廷。

2.4.3。y enterocolitica

这个物种被浓缩在25克的均质样品在225毫升的磷酸缓冲盐pH值7.6添加1%的山梨糖醇,0.15%胆汁盐和孵化21天在4°C。分解动作进行了MC为48 h琼脂25°C和假定鼠疫殖民地被革兰氏染色检查,确定通过生化检测(http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm072633.htm,2008年5月)被访问。最后描述生物型和血清型大肠Carniel博士是由国家参考中心鼠疫巴斯德研究所,巴黎,法国。

2.5。PCR针对STECstx1和stx2基因

DNA提取是由沸腾的方法(9]。每个应变悬浮在一个包含150年的埃普多夫管μL TE 1 x缓冲区(10毫米三(西格玛奥德里奇,圣路易斯,密苏里州,美国),1毫米EDTA(σ),pH值8.0)添加1% Triton-X100 (Parafarm,布宜诺斯艾利斯,阿根廷)。悬浮液煮15分钟,在10000转离心5分钟(σ离心模型3 k30,德国)。每个浮层包含DNA被转移到其他管使用前和储存在−20°C。一个25μL卷包含1 x的PCR结合PCR缓冲,MgCl核苷酸0.1毫米、1.5毫米₂2 pmol/μL (stx1向前引物(5′-GAAGAGTCCGTGGGATTACG-3′和反向5′-AGCGATGCAGCTATTAATAA-3′) 130个基点的扩增子,0.4 pmol/μL (stx2向前引物(5′-TTAACCACACCCCACCGGGCAGT-3′和反向5′-GCTCTGGATGCATCTCTGGT-3′) 346个基点的扩增子,0.02 U /μL Taq DNA聚合酶(或含Biologicos,基尔梅斯,阿根廷),2μL DNA模板,超纯水制备。骑自行车在94°C条件由最初的变性5分钟紧随其后30 94°C的周期30年代,30年代58°C, 72°C 30年代和72°C的最终扩展3分钟(9]。PCR是在Techne tc - 512热循环(Techne Inc ., Duxford,英国)。PCR产品在2%琼脂糖凝胶电泳(或含Biologicos)添加GelRed酸凝胶染色(美国CA Biotium, Hayward), 1.5μL原液/ 40μL凝胶,在80 V 40分钟,可视化的紫外线透照器(美国UVP高地,CA)。相比较而言,100 - bp DNA梯(或含Biologicos)使用。

2.6。但是脉冲场凝胶电泳的出现

DNA制备是根据Ribot et al。10]。每个菌株被隔离在穆勒辛顿琼脂(MH,英国,中的布宜诺斯艾利斯,阿根廷)和孵化24小时37°C沙门氏菌和大肠杆菌在25°C,或48 h鼠疫菌株。殖民地的应变直接悬浮在4毫升的暂停缓冲(100毫米三,100毫米EDTA, pH值8.0)1.0。二百毫升水中细菌悬液混合着相同体积的1% SeaKem黄金琼脂糖(美国我Cambrex,罗克兰)和倒在模具获得“插头。“塞治疗20 h在溶解溶液(50更易Tris-EDTA(σ),1%月桂酰肌氨酸钠(σ)和蛋白酶K 0.1毫克/毫升(丙烯酰胺应用化学、书、瑞士)pH值8.0)在37°C,然后洗了四次与TE缓冲(10毫米三羟甲基氨基甲烷(σ),液1毫米EDTA(σ),pH值8.0)为30分钟37°C。染色体DNA琼脂糖中包含插头与10 U消化XbaI(加拿大安大略省Fermentas,伯灵顿)了两个小时,根据制造商的指示。插头是削减大约1-mm-thick片,放在CHEF-DRIII室(Bio-Rad、大力神、钙、美国),但是脉冲场凝胶电泳的出现是使用电场执行6 V /厘米在14°C, 120°角和切换时间2.2(初始时间)到63.8(最后一次)沙门氏菌和大肠杆菌O157: H7和1.8(初始时间)到20年代(最后一次)y enterocolitica,超过20 h (6,8]。DNA片段的迁移是实现pulsed-field 1.0%琼脂糖凝胶(Bio-Rad)淹没在0.5 x此种缓冲(45毫米Tris-borate(σ)和1毫米EDTA(σ))。凝胶是沾胶红酸凝胶染色(美国CA Biotium, Hayward)制造商建议的条件下,在紫外线透照器可视化,拍照。标准应变大小年代。Braenderup H9812,请捐赠的n . Binsztein博士(INEI-ANLIS,布宜诺斯艾利斯,阿根廷)。

2.7。毒性的表型分析y enterocolitica隔离

这些化验据美国食品及药物管理局进行细菌学的分析手册(http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm072633.htm,2011年9月访问)。

2.7.1。自身凝集

每个菌株接种到两管甲基Red-Voges Proskauer肉汤(默克公司)。管是孵化在37°C和另一个是孵化25°C。18到24 h后,细菌自身凝集MR-VP管的管观察孵化25°C 24 h应该显示浊度从细菌生长。37°C MR-VP管应该显示凝集(聚集)的细菌沿着墙壁和/或底部的管与上清液。隔离给毒力质粒假定这个结果是积极的。任何其他模式自身凝集在这两个温度下被认为是负面的。

2.7.2。钙依赖在37°C和刚果红绑定

刚果Red-Magnesium草酸钠琼脂(CR-MOX)是由TSA加上2.68 g / L草酸钠(Mallinckrodt), 4.067 g / L MgCl₂ H₂O(σ),5毫升/ L(1%刚果红染料(Baker),使可视化calcium-dependent增长和刚果红染料的吸收相同的板。测试生物接种到TSB和孵化隔夜25°C。小数在生理盐水稀释了获得1000细胞/毫升。卷0.1毫升的适当的稀释spread-plated CR-MOX板块和孵化37°C。假定的质粒y enterocolitica显示稀缺的发展定位、圆凸,红色,和不透明的殖民地;而plasmidlessy enterocolitica表现出丰富的大增长,不规则,平,半透明的殖民地。

2.7.3。七叶灵水解

这个测试进行七叶灵琼脂(10 g polypeptone(英国)中的1 g七叶灵(σ),1 g枸橼酸铁铵(σ),和5 g琼脂(英国)中的1000毫升蒸馏水)。菌株接种,孵化出了25°C,播种后观察7天。琼脂表面暗色素的发展表明缺乏毒性。

第2.7.4。Pyrazinamidase生产

菌株接种在整个倾斜的吡嗪酰胺琼脂(30 g TSA(默克公司),1 g pyrazinecarboxamide(σ),和0.2 Tris-maleate缓冲区(σ)1000毫升),孵化出了25°C 48 h,充斥着刚做好的硫酸亚铁铵1毫升的1%。粉红色的发展在15分钟是积极的测试,表明pyrazinoic酸pyrazinamidase形成酶的存在。

2.8。聚合酶链反应对y enterocolitica分子毒性标记(游泳时和ystB基因)

2.8.1发布。嵌套的游泳时聚合酶链反应

DNA提取进行描述(9]。一个nested-PCR针对y enterocolitica雅达基因(11使用两套引物)是应用。5毫升的模板是用于第一次PCR和2μL在这个步骤中获得的产品是用作第二个PCR模板。反应混合物(50 mL)包含1 x PCR缓冲,1.5毫米MgCl₂每个核苷酸的更易与200毫升,1 U Taq dna聚合酶,更易与0.1毫升每个引物(或含Biologicos)。第一个通过以下寡核苷酸引物对集成:YadA1 5′taa手枪CAG TGT CTC TGC GGC a - 3′, 5′YadA2标签TTA TTT GCG ATC的有条件现金援助AGC AC-3′以下循环条件下使用:初始变性在95°C 3分钟,然后在95°C 40周期的变性30年代,退火在58 60°C, 90年代在72°C和扩展,紧随其后的是最后一个在72°C扩展为放大10分钟747 bp的片段。第二YadA3组成的一对引物5′gcg TTG TTC柠檬酸TCT CCA答GC-3′, 5′YadA4 ggc TTT猫广汽CAA TGG ATA CAC-3′以下循环条件下使用:在95°C初始变性3分钟紧随其后20 30年代周期在95°C的变性、退火62°C的60年代,90年代在72°C和扩展,并最终在72°C扩展10分钟放大529 pb的片段。产品在80 V电泳40分钟在1%琼脂糖凝胶染色GelRed,可视化的紫外线透照器(UVP),并与100 - bp梯子DNA(或含Biologicos)。

2.8.2。简单的ystB聚合酶链反应

DNA提取是由沸腾的方法(9]。反应混合物(25μL)包含PCR缓冲1 x, 200μ每个核苷酸的米,1.5毫米MgCl₂0.08 U /μL的Taq dna聚合酶,1 pmol /μ每个引物(或含Biologicos)的L。它使用底漆对由YstB-F 5′GTACATTAGGCCAAGAGACG 3′, 5′YstB-R GCAACATACCTCACAACACC 3′放大146个基点片段(12]。PCR产物电泳在80 V 40分钟在2%琼脂糖凝胶染色GelRed和可视化的紫外线transiluminator (UVP)。扩增子的分子质量是决定如上所述。

2.9。抗菌药物敏感性

抗菌药物敏感性的隔离是通过磁盘穆勒辛顿琼脂扩散法。以下抗生素磁盘(英国)中的使用:氨苄西林,10μg;cephalotin 30μg;aztreonam 30μg;红霉素,15μg;粘菌素10μg;氯霉素,30μg;庆大霉素、10μg;四环素,30μg;功效,25μg;环丙沙星5μg;新霉素,30μg;呋喃唑酮、5μg;萘啶酸,30μg;头孢噻肟,30μg;头孢曲松钠,30μg;phosphomycin, 50μg。区域经济增长的抑制作用进行了评估根据临床和实验室标准协会(CLSI)指南13]。

2.10。统计分析

统计分析大肠杆菌群的数量相关类型的示例进行了使用卡方检验(美国佛罗里达州塔拉哈西分析软件)。统计计算是基于置信水平等于或高于95% (被认为是统计学意义)。置信区间为每个百分比计算使用公式:±95% CI =百分比(1.96SE),标准误差,计算SE =百分比/ (N°的阳性病例)^1/2。但是脉冲场凝胶电泳的出现的歧视指数(DI)值被辛普森多样性指数计算。集群模式通过使用Statistica 6.0软件执行但是脉冲场凝胶电泳的出现(StatSoft Inc .)、塔尔萨,美国)和未加权的两组与算术平均法(UPGMA)。

3所示。结果

3.1。调查总大肠菌、志贺产毒大肠杆菌(STEC),沙门氏菌spp。,y enterocolitica

项总大肠菌新鲜香肠和死鸡了和日志₁₀分别CFU / g,显著提高(比猪皮肤和骨头观察()日志₁₀CFU / g)和山羊奶酪(日志₁₀CFU / g)(表1)。STEC的检测频率,沙门氏菌血清型,鼠疫物种在453年样本如表所示2。的数量鼠疫积极的样品(9/453,2.0%、95% CI, 0.7 -3.3%)高()比观察针对产志贺毒素大肠杆菌(4/453,0.9%、95% CI, 0 - 1.8%)沙门氏菌spp。(3/453, 0.7%、95% CI, 0 - 1.5%)。

样品被认为是“STEC积极”大肠杆菌殖民地携带stx1 / stx2基因可以通过培养恢复,或者当只有“假定STEC积极”stx1 / stx2信号是由PCR检测DNA提取SMAC汇合的增长。因此,四个样品是积极的:一个从小儿腹泻患者粪便样本(1/70,1.4%、95% CI, 0 - 4.2%)了大肠杆菌O157: H7应变在SMAC文化为特征stx2⁺通过PCR和三个样本的牛大便(3/129,2.3%、95% CI, 0 - 5.0%),放大stx基因DNA提取汇合的增长(两个样本stx1⁺/stx2⁺第三个stx2⁺)。不能孤立个体STEC殖民地从这些样本。

另一方面,三个样品产生了四个沙门氏菌隔离对应不同的血清型:一个年代。沙门氏菌感染菌株获得了凳子的有症状的患者(1/70,1.4%、95% CI, 0 - 4.2%)和1年代。新港和两个年代。Gaminara菌株是从一个扁桃体,一个孤立的舌头野猪的216个样本用于人类食用的动物源(2/216,0.9%、95% CI, 0 - 2.1%)。野猪的少量样品,沙门氏菌恢复是高(1/3,33%、95% CI, 0 - 99%)。有趣的是,扁桃体阳性样本进行年代。Gaminara和年代。新港菌株。此外,9鼠疫隔离从九(9/216,4.2%、95% CI, 1.5 - -6.9)样品用于人类食用的动物源。分为两个隔离Y。enterocolitica五25-12 B1A O: 12日,26日y enterocoliticaB1A O: 7, 8-8-8, 19岁y媒介物B6 O: 17岁,另一个y媒介物B4 O: 40(表2)。他们是孤立的从六个死鸡(6/80,7.5%、95% CI, 1.5 -13.5%)和三个猪皮肤和骨头(3/10,30%、95% CI, 0 - 65%)。

3.2。但是脉冲场凝胶电泳的出现

XbaI限制的DNA多态性沙门氏菌隔离观察图1。两个主要的集群,A和B,相似性为65%。尽管六年代。纽波特从扁桃体和五个隔离年代。Gaminara隔离从扁桃体和舌头最初恢复从一个野猪,限制它们的DNA的分析资料,但是脉冲场凝胶电泳的出现表明,所有年代。新港菌株分为集群一段时间年代。Gaminara的分组在集群中的基因型GTB1 b因为相同的DNA带模式之间的隔离观察同一型的,只有三个沙门氏菌据报道(表压力2)。在系统树图,年代。沙门氏菌感染人类的来源是包括在集群内GTB2 B,显示与GTB1 68%相似。

虽然15鼠疫隔离最初从九个阳性样品,分析DNA限制资料但是脉冲场凝胶电泳的出现可以得出这样的结论:一些隔离观察到复制同样的压力。因此,细菌隔离被分为两个主要的集群,A和B(63%相似),根据鼠疫物种(图2)。因此,集群由GTA1 5y enterocolitica25-12 B1A O: 12日,26株死鸡隔绝,GTA2八y enterocoliticaB1A O: 7, 8-8-8, 19隔离从死鸡和猪的皮肤,和GTA3参考y enterocoliticaW1024压力。集群包括B GTB1组成的y媒介物B6 O: 17株,GTB2对应y媒介物B4 O: 40株(86%相似),两株从死鸡中恢复过来。但是脉冲场凝胶电泳的出现并没有应用于人类STEC应变孤立在这个研究。

3.3。表型和分子毒性分析y enterocolitica隔离

五y enterocoliticaB1A O: 7, 8-8-8, 19株和两个y enterocolitica25-12 B1A O: 12日,26株孤立在这个研究结果为阴性钙依赖的增长和刚果红绑定在37°C显示pyrazinamidase活动,水解七叶灵和autoagglutinated 37°C(表3)。嵌套PCR的目标游泳时基因在所有情况下都产生了消极的结果。当ystB基因化验,一个y enterocoliticaB1A O: 7, 8-8-8, 10株分离猪皮肤和骨头是正面的。

3.4。抗菌药物敏感性

人类STEC应变敏感抗菌素化验除了氨苄青霉素和利福平。同样的,沙门氏菌除了cephalotin菌株都是容易受到药物。与此同时,所有y enterocolitica隔离共享抗氨苄青霉素,y enterocolitica25-12 B1A O: 12日,26株容易cephalotin,两个y enterocoliticaB1A O: 7, 8-8-8, 10株显示阻力cephalotin和红霉素。

4所示。讨论

总大肠杆菌群被认为是在食品的卫生质量指标及其存在可能与病原菌的存在。低总大肠杆菌计数观察猪皮肤和骨骼,和山羊奶酪可能归因于热治疗的影响应用于猪的尸体在屠宰,分别和巴氏灭菌和保存的奶制品。没有微生物规范对猪皮肤和骨头都包含在阿根廷滋养代码(AAC格式,http://www.anmat.gov.ar/alimentos/normativas_alimentos_caa.asp2013年11月访问)。另一方面,每克500总大肠菌值45°C是允许奶酪水分(AAC)与36 46%。因此,低大肠杆菌计数食物将符合良好的生产实践。相比之下,低微生物成分或卫生质量可以解释大肠杆菌计数高于10³或然数/ g的最大极限了AAC新鲜香肠。虽然没有死鸡解决AAC,微生物标准的大肠杆菌群数高于2.7工作日志₁₀CFU / g观察到人均et al。14在西班牙)。显然,污染可能是在生产过程的任何阶段,从拔毛,取出内脏,清洗存储通过冷却或冻结。

关于enteropathogens搜索的,人类大肠杆菌O157: H7应变是孤立的文化和特点stx2⁺通过聚合链反应。相反,从正面STEC应变不可能是孤立的stx1 / stx2牛大便,可能是因为他们可行但noncultivable菌株。与此同时,法律上et al。15)确定了stx2基因在7个样品在阿根廷的肉;然而,只有一个大肠杆菌O157: H7应变可以被孤立。STEC的低检测牛在圣·路易斯·与报告4 - 39% STEC隔离恢复从小腿Meichtri et al。16)在我国,丰富凳子和直肠拭子TSB加用抗生素,然后进行筛选stx常规PCR基因的DNA提取SMAC汇合的细菌生长。如果放大,PCR是重复的各个殖民地。同样,Sanz et al。17恢复44% STEC从牛屠宰阿根廷在其他地区。广泛的协议描述了检测或隔离STEC以来,所有不能检测到一个方法(血清型18]。Trypticase酱油汤,大肠杆菌肉汤、缓冲蛋白胨水和脑心浸液肉汤添加与选择性的代理推荐针对产志贺毒素大肠杆菌的浓缩。在目前的研究中,样品被浓缩在EC汤没有抗生素可能是明智的,当压力或受伤STEC细胞培养(19]。此外,浓缩协议的比较研究Vimont et al。20.显示的初始水平大肠杆菌O157浓缩协议测试并不影响很大,而背景微生物区系的初始水平似乎减少EC肉汤时使用。已推荐给其他技术提高检测方法的敏感性。immunomagnetic分离(IMS)可以使用前经过浓缩和镀选择性STEC细胞浓度,并建立了检测大肠杆菌O157食物中,产生检测极限低至1 - 2 CFU / 25克(18]。虽然IMS是不习惯在这项研究中,我们实验室的后续STEC研究将包括这个过程。否则,常规PCR和实时PCR等分子手段非常敏感,并提供结果在更短的时间比文化。因此,ISO / TS 13136:2012标准是基于样品浓缩紧随其后的是一个实时PCR检测的目标stx和运算单元毒力基因,O157的决心,O111, O26 O103, O145 STEC血清型在食品和动物食品。当检测到基因,STEC应变应隔离确认(18]。同时,immunoassay-based一个可用的环境影响评价等方法测试志贺毒素1和2已经从人类粪便用于STEC检测(21]。STEC马车已经观察到的差异食草和饲养场的牛22];在目前的研究中,两个正面stx1 / stx2样品与饲养场动物和另一个来自食草动物。虽然STEC检测和/或恢复负样本研究,Ojo et al。23]证明STEC牛的粪便(15.2%)、羊(10.7%)、山羊(7.5%),和猪(5.6%)以及牛肉(3.8%)、山羊肉后(1.7%),和猪肉(4.0%)。

的隔离年代。凳子的沙门氏菌感染病人符合研究报告这一个最经常孤立型从人类在阿根廷自2006年以来24]。我们报告的隔离年代。新港,年代。从野猪Gaminara首次在我们的地区。这些沙门氏菌血清型之前从暴发期间的临床样本中分离出引起饮用未经巴氏灭菌的橙汁在美国(25)和恢复患者腹泻在哥伦比亚加勒比区域的26]。环境因素和季节性变化以及不同的供应来源的样本可能低复苏的影响沙门氏菌从动物在我们的研究样本。

的鼠疫普遍观察到在这个工作是低于5.5%的猪肉和牛肉香肠和肉末产品埃斯特拉达所的的得到Lucero et al。8]谁发现y enterocoliticaB1A (O: 5和O: 6、30), B2 O: 9,y媒介物在我们的地区。此前,Floccari et al。27孤立的10%y enterocoliticaB1A O: 5y媒介物,y frederiksenii从70年在阿根廷死鸡。AAC格式建立了没有y enterocolitica限制在任何的食物进行了分析,但没有这个病原体是可取的。虽然y enterocolitica不是在人类和动物粪便调查发现在目前的研究中,这种微生物分离人类腹泻的粪便(28和动物粪便29日在我们的国家。

在这项研究中,毒性表型测试y enterocoliticaB1A菌株产生负面结果除了自身凝集在37°C;然而,游泳时基因并不是通过PCR检测。之间缺乏相关性y enterocolitica表型和基因型的毒性标记如上述报道了郑et al。30.]。这些作者发现一些y enterocolitica菌株包含其他未知毒性标记相互作用和发病机制中发挥重要作用。在这方面,染色体的基因ystB已经与生产密切相关的腹泻B1A菌株。巧,在115y enterocolitica隔离猪起源分析Bonardi et al。31日),75.7%与B1AystB作为最常见的毒性基因(72.4%)。在我们的研究中,这个基因是一个证明y enterocoliticaB1A O: 7, 8-8-8, 10株(1/7,14%、95% CI, 0 - 42%)与猪皮肤和骨头。的存在y enterocoliticaB1A和y媒介物死鸡和猪皮肤和骨头可以交叉污染的结果在加工这些产品或马车被屠宰的猪,分别。

STEC抗菌易感性相关,因为抗菌素可以伤害细菌膜造成急性释放的志贺毒素(32],溶血性尿毒综合征治疗的患者大多是支持足够的下士液体和电解质管理、控制的血液学的并发症,抗高血压、镇痛治疗,机械通风,必要时和透析33),避免抗生素的管理。在我们地区,STEC菌株从腹泻病人身上分离出来了在体外对常用抗生素治疗感染引发的其他肠道菌。与抗生素敏感性证明了我们沙门氏菌隔离,伊等。34)观察到在不同的多药耐药性沙门氏菌血清型与猪在阿根廷对抗菌素在兽医常用。关于y enterocolitica抗菌药物敏感性,我们的结果与这些产品埃斯特拉达所的的报道Lucero et al。8)和Bonardi et al。31日观察抗cephalotin和氨苄青霉素。

5。结论

STEC的低流行率,沙门氏菌spp。,鼠疫物种在人类,动物,食物样本在这一地区的阿根廷。低数量的STEC发现在这项研究中,一个大肠杆菌从人类粪便O157: H7,与其他工作相比,可能是由于所使用的检测方法。否则,检测stx1 / stx2基因在牛大便突出的风险暴露STEC动物运营商和强化卫生的良好实践的要求在屠宰和肉类加工。另一方面,高沙门氏菌频率中观察到少量的野猪样本强调需要进一步研究这些动物副产品的生产和销售在零售。最后,生物/血清型和毒性特征描述y enterocolitica隔离是零或低致病性相关的人类;然而,一个广泛的知识领域还有待开发y enterocoliticaB1A毒性。我们的研究结果表明,微生物密切监测可能导致患病率和分布的知识这些enteropathogens病人,可能有的动物水库、和食物在我们的地区,这将允许公共卫生服务采取预防措施。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项工作是支持的项目8803年,科技部门,国立大学的圣·路易斯·圣·路易斯·阿根廷。作者要感谢大肠Carniel博士,巴斯德研究所,巴黎,为当地的分类鼠疫菌株,比利时鲁汶天主教大学的g . Cornelis博士和博士g . Kapperud(挪威公共卫生研究所,奥斯陆,挪威)提供y enterocolitica参考菌株;和Drs。麻省理工学院caf和i .杭州中能汽轮动力有限公司(INEI-ANLIS,布宜诺斯艾利斯,阿根廷)和善的血清型沙门氏菌分别菌株STEC应变和提供参考。