鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba：印度尼西亚雅加达Cipto Mangunkusomo医院新生儿病房血流感染中的作用GydF4y2Ba

摘要GydF4y2Ba

鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba(GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba)为革兰氏阴性球菌，已成为一种医院致病菌。印度尼西亚的几份报告显示持续存在GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba．这项研究的目的是确定癌症的发病率GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba印度尼西亚雅加达Cipto Mangunkusomo医院（RSCM）新生儿病房的菌血症，并使用抗菌谱和脉冲场凝胶电泳（PFGE）基因分型评估其在血流感染中的作用。受试者为临床败血症的新生儿。对新生儿血液标本和新生儿病房内可疑环境的样本进行培养。为分析目的，对抗菌药物耐药性进行分类。GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba采用PFGE进行基因分型，确定其相似性。总共24个GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba在本研究期间，从80名新生儿和环境中分离到7株细菌。来自新生儿的7株细菌表现出多重耐药性（MDR），占82%(GydF4y2Ba)环境分离株中也有MDR。抗生物型“d”似乎占优势（62.5%）。PFGE分析显示患者与环境分离株之间存在非常密切的遗传关系（Dice系数0.8–1.0）我们得出结论，RSCM新生儿病房存在环境微生物向患者传播的模式，因此需要克服。GydF4y2Ba

1.介绍GydF4y2Ba

不动杆菌GydF4y2Baspp普遍存在于环境中，即土壤和水中，偶尔从住院患者的粘膜、分泌物和皮肤中分离出来，也在医院环境的表面[GydF4y2Ba1.GydF4y2Ba］．这种需氧革兰氏阴性球菌已成为重要的医院病原菌。临床脓毒症(CSEP)属于血液感染(BSI)类别，仅限一岁以下的婴儿感染[GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba］．但在CDC/NHSN 2013的协议中，CSEP标准不在BSI组名单中，而是实验室确认的BSI 1、2、3型[GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

的多药耐药性GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba已导致许多国家的发病率、死亡率和患者住院时间延长[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba–GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba］．患者死亡率GydF4y2Ba不动杆菌GydF4y2BaSp.感染率达到17%-46% [GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba］．据报道，印度尼西亚雅加达临床标本中持续存在这种环境微生物[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba].自从GydF4y2Ba不动杆菌GydF4y2BaSp.经常被确定为住院患者的皮肤和呼吸菌群的一部分，特别是长时间的住院患者，评估GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba因为疾病的病原学或定植是一个特别的挑战[GydF4y2Ba9GydF4y2Ba］．众所周知，细菌分型无论是非型还是基因型在指示HAI病例方面都非常有用[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba,GydF4y2Ba11GydF4y2Ba］．还建议在医院/医疗机构获得性感染调查中使用病例对照研究[GydF4y2Ba12GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

不动杆菌GydF4y2Basp.不发散，容易在常规培养基（如血琼脂、MacConkey和巧克力琼脂）中生长[GydF4y2Ba9GydF4y2Ba,GydF4y2Ba13GydF4y2Ba］．它在血琼脂和麦康凯琼脂中看起来光滑、不透明、凸起和奶油状菌落[GydF4y2Ba1.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba9GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

这项研究的目的是确定癌症的发病率GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba印度尼西亚雅加达Cipto Mangunkusumo医院(RSCM)新生儿病房新生儿菌血症的研究，并使用抗生素谱和脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行基因分型，评估其在血液感染中的作用。GydF4y2Ba

2.材料和方法GydF4y2Ba

2．1．主题和标本GydF4y2Ba

这是一项横断面研究。本研究的研究对象为新生儿(0-28天;出生体重1,000-2,000克)，并在住院48小时或以上，9个月期间(2010年6月至2011年2月)未发现明显的局部感染，使用导管。出生体重为1,000-2,000 g的新生儿是重点研究对象，因为他们的生存能力或在正确的治疗下应该能够存活并避免医院获得性感染。采用疾病预防控制中心/国家卫生健康网络监测定义的HAI标准[GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba］．在BACTEC PAED瓶中培养同时抽取的两个不同静脉穿刺的两份血液标本;严格执行无菌程序以防止污染[GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba9GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

所有微生物学程序均在印度尼西亚医学院大学临床微生物实验室(CML-FMUI)进行。GydF4y2Ba

2．2.环境标本GydF4y2Ba

根据对疑似医院工作人员、设备和同一病房患者的观察，从环境中选择样本。GydF4y2Ba

2．3.培养和鉴定GydF4y2Ba

血液标本用BACTEC PAED培养。对阳性瓶进行革兰氏染色，然后接种血琼脂和麦康基。采用凝固酶、过氧化氢酶、甘露醇、API STREP、API葡萄球菌对革兰氏阳性菌进行鉴定。革兰氏阴性的则为氧化酶、API 20E和API 20NE [GydF4y2Ba9GydF4y2Ba]。在44°C下进行孵育，以区分GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba从GydF4y2Ba答:calcoaceticusGydF4y2Ba[GydF4y2Ba1.GydF4y2Ba,GydF4y2Ba9GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

２.４.抗菌药物敏感性试验GydF4y2Ba

使用纸片扩散法对每个分离物进行抗菌药物敏感性试验。临床和实验室标准研究所（CLSI）作为参考[GydF4y2Ba14GydF4y2Ba］．抗菌药物分别为:头孢他啶、阿米卡星、甲氧苄啶磺胺恶唑、氨苄舒巴坦、氧氟沙星、左氧氟沙星、美罗培南、亚胺培南、阿莫西林-克拉维酸、头孢曲松、头孢噻肟、庆大霉素、妥布霉素、四环素、环丙沙星、氮曲南、头孢吡肟、哌拉西林-他唑巴坦、替卡西林。GydF4y2Ba

抗生素类型由Tega et al.， 2007确定[GydF4y2Ba11GydF4y2Ba，并标记为小写字母。一种或两种抗生素敏感性的差异被归为相同的抗生素类型。GydF4y2Ba

2．5．存储GydF4y2Ba

所有菌株均保存在含7.5%甘油(v/v)的营养肉汤中，保存在−80℃。GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba分离株在血琼脂上传代后进行基因分型。GydF4y2Ba

2.6.基因分型GydF4y2Ba

先制备含有细菌颗粒的塞GydF4y2Ba美国心理学协会GydF4y2BaI (Vivantis)酶消化。手术过程由Suwanto和Kaplan描述[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba].使用CHEF-DR II仪器（美国加利福尼亚州Bio-Rad Laboratories）在TBE缓冲液中，在14°C下进行电泳。电泳的初始和最终时间为5.3–34.9秒；运行时间为19.5小时。GydF4y2BaRhodobacter sphaeroidesGydF4y2Ba2.4.1。用作分子标记物[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba］．采用Seifert等人2005年所描述的未加权对组均数法(UPGMA)进行分析，以确定分离株的脉冲类型[GydF4y2Ba16GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

3.结果GydF4y2Ba

3．1.主题和标本GydF4y2Ba

在本研究纳入的80名新生儿中，28名（35%）新生儿经血培养结果确诊为败血症，其中5名新生儿患有败血症GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba菌血症。从阳性血培养中分离出的37株菌株为革兰氏阴性菌(见表)GydF4y2Ba1.GydF4y2Ba）.总共7个GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba发现了分离株。GydF4y2Ba

3.2.来自环境的样本GydF4y2Ba

从环境中分离出多种微生物。对病房内50多个可疑表面和设备进行了检查。17株细菌GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba被隔离在17个地点。以下这些隔离的起源:呼吸机的按钮,会阴和臀肌面积不同的新生儿,手臂(手和手腕)区域不同的新生儿,护士的手,手的医生,塑料覆盖着舷窗的婴儿保温箱,波哥大包放在患者结肠造口术,自来水(见表GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba）.GydF4y2Ba

3.3.抗菌药物敏感性GydF4y2Ba

总共24个GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba测试了他们对抗生素的敏感性GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba抗生素的比例非常低，在0%到21%之间。对头孢他啶4%，阿米卡星21%，曲美托林-磺胺甲恶唑8%，氨苄舒巴坦16%，氧氟沙星4%，左氧氟沙星16%，美罗培南16%，亚胺培南16%，阿莫西林-克拉维酸8%，头孢曲松16%，头孢噻肟0%，庆大霉素16%，妥布霉素16%，四环素16%，环丙沙星16%，氨曲安0%，头孢吡肟4%，哌拉西林-他唑巴坦8%，替卡西林4%(图)GydF4y2Ba1.GydF4y2Ba）.所有来自血液的分离株均表现出多药耐药(MDR)，而环境分离株的多药耐药率为82%。GydF4y2Ba

所有的GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba9种不同的抗生素类型(“a”-“i”)被测定(表GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba）.主要抗生素类型为“d”，由4个来自血液的菌株和11个来自环境的菌株组成。因此，62.5%的菌株在抗生素谱上是相同的。GydF4y2Ba

3．4．但是脉冲场凝胶电泳的出现GydF4y2Ba

美国心理学协会GydF4y2Ba我消化了所有24人的基因组DNAGydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba发现11-13个DNA片段，分子量在63 - 1100 kb之间。估计的基因组大小从1,663 kb到3,392 kb不等(图GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba）.电泳结果转化为二进制数据，用UPGMA软件进行分析。7种不同的PFGE类型(“A”型-“G”型)被识别出来(图GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba）.23株(96%)与Dice系数0.8 ~ 1.0(脉象型“a”~“F”)高度相似;因此，这些分离株的亲缘关系非常密切。其中7株来自血液，16株来自环境。GydF4y2Ba

一个环境GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba从婴儿培养箱窗盖塑料中分离得到的菌株与其他菌株的相似性不高(Dice系数0.667)(图GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba）.GydF4y2Ba

4.讨论GydF4y2Ba

鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba被称为环境微生物;然而，在住院病人的皮肤、会阴和消化系统中发现了共生菌。我们的发现与其他报告一致[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba,GydF4y2Ba17GydF4y2Ba］．大部分的GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba本研究中从环境中分离出的来自患者自身皮肤的分离物表明了定殖GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba在医院感染的发生中起着重要作用GydF4y2Ba金黄色葡萄球菌，石棉肠杆菌，GydF4y2Ba和GydF4y2Ba铜绿假单胞菌GydF4y2Ba在新生儿皮肤上发现的定植物、塑料覆盖的培养箱舷窗、注射泵、附在培养箱上的加湿器液体等(数据未显示)，当侵入性手术中的无菌和消毒技术操作不当时，也可能造成感染的风险[GydF4y2Ba13GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

大部分的GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba多药耐药(MDR)。根据Abbo et al.， 2005, MDR标准的定义是当对所有研究的抗生素，即哌拉西林-他唑巴坦、头孢吡肟、头孢他啶、氮曲南、环丙沙星、庆大霉素和妥布霉素耐药时，但可能对阿米卡星、氨苄西林-舒巴坦、亚胺培南、美罗培南和米诺环素敏感[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba].几份报告显示，使用广谱抗生素会影响正常菌群并诱发MDRGydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba[GydF4y2Ba19GydF4y2Ba,GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba］．同样的情况也发生在进行这项研究的单位;广谱抗菌药物如碳青霉烯、哌拉西林-他唑巴坦、头孢吡肟、氨基糖苷、阿米卡星等广泛应用。GydF4y2Ba

在本研究中，遗传关系GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba使用抗生素图和基因分型对分离株进行评估，而其他研究人员仅使用抗生素图进行种间分化，尽管它没有得到证实[GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba］．脉冲场凝胶电泳的基因分型已被证明能在物种内部提供更好的分化[GydF4y2Ba17GydF4y2Ba,GydF4y2Ba18GydF4y2Ba］．我们的结果显示，超过50%的GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba抗生素“d”型的菌株具有相同的基因组图谱(脉冲星“A”型)。GydF4y2Ba

5.结论GydF4y2Ba

所有GydF4y2Ba鲍曼不动杆菌GydF4y2Ba从新生儿血液中分离出的败血症与环境的遗传关系非常密切。结论:环境微生物通过医务人员和医疗设备污染的手传播给患者。利用分子方法对医院感染病原进行追踪，有助于了解医院感染的传播途径和来源，有助于控制感染。GydF4y2Ba

致谢GydF4y2Ba

这项研究由印度尼西亚雅加达的RSCM资助。作者要感谢Tjahjono D. Gondhowiardjo博士，感谢该机构的资助。GydF4y2Ba

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