文摘
总共9植物提取物进行了测试,使用两种不同的提取方法评价抗氧化和抗菌活动Pilea microphylla(荨麻科家族),包括毒性测试。抗氧化活性测试利用DPPH自由基清除,还总酚含量和总类黄酮含量测定。通过使用盐水虾毒性试验进行。甲醇提取的方法我(我)显示最高的抗氧化活性。氯仿提取的方法我(CE)的总酚含量最高的和氯仿提取方法II (II CE)显示总类黄酮含量最高。的抗菌活性Pilea microphylla提取测试体外采用纸片扩散法和最低抑制浓度(MIC)。的Pilea microphylla提取显示对某些革兰氏阴性和阳性菌抗菌活性。提取不表现出抗真菌和antiyeast活动。己烷提取的方法我(他)没有毒性对盐水虾(LC50值是3880g / ml)。因此,提取可能是合适的抗菌和抗氧化制剂在食品工业。
1。介绍
近几十年来,植物的精油和各种提取物已经极大的兴趣,因为他们的来源天然产物(1]。目前最常用的抗氧化剂叔丁基羟基茴香醚(BHA),丁羟甲苯(二叔丁基对甲酚)propylgallate (PG)和叔丁基羟基甲苯(特丁基对苯二酚)2]。然而,他们被怀疑在实验室动物负责肝损伤和致癌作用(3,4]。因此,更有效的抗氧化剂的开发和利用自然源所期望的(5]。
酚类化合物的抗氧化活性主要是由于其氧化还原性质,可以发挥重要的作用在吸收并中和自由基,猝灭单线态和三线态氧,或分解过氧化物酶(6]。因此,调查这类抗氧化酚类化合物可食用的植物进行了改善我们对其营养价值的理解和潜在的利益7]。Pilea microphylla(PM)(家庭:荨麻科)是被用作民间医药治疗一些过敏/伤口在马来西亚半岛及周边尤其是槟榔屿岛。据报道具有抗菌活性(8)、温和的抗氧化活性和总酚含量(9)和下午也用于不孕症,子宫炎症,清洁剂(10]。
没有足够的报告对其抗氧化和抗菌的活动。本研究的目的是比较提取方法在一起,来评估Pilea microphylla荨麻科家族中新的潜在来源的天然抗氧化剂,抗菌活动。
2。材料和方法
2.1。植物材料和提取
整体的一部分Pilea microphylla收集在槟榔屿岛从振子结构主校区(马来西亚理科大学)2008年3月。凭证标本已经沉积的标本生物科学学院,2008年4月马来西亚理科大学。植物材料清洗、干燥和接地小块。第一种方法(方法)的提取包括四种溶剂的使用遵循非极性与极性溶剂(通过使用索氏仪器)。在这种方法中,干粉状植物提取。使用的溶剂正己烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇等。第二种方法(方法二)包括5溶剂系统(通过使用分区技术)。方法二,干材料被用索氏提取器提取甲醇作为溶剂在室温下72小时()。methanolic提取进一步分区通过添加蒸馏水在随后一个分液漏斗,然后使用氯仿、乙醚、乙酸乙酯,和丁醇作为被Mellidis et al。(1993),有轻微修改(11]。干提取然后使用微量天平称重,并保存在。缩写用于本文的粗提物,即他我(我)己烷提取方法,CE我(我)氯仿提取的方法,运算单元(乙酸乙酯提取的方法我),我(我)甲醇提取的方法,我二世(方法二)甲醇提取,II CE(氯仿提取的方法(二),迪II(乙醚提取的方法(二),运算单元二世(乙酸乙酯提取的方法(二)和II(丁醇提取方法II)。
2.2。测定抗氧化活性:DPPH自由基清除实验
自由基清除活性Pilea microphylla(甲醇、Chlorofom、乙醚、乙酸乙酯、正己烷,和丁醇提取物)测试用DPPH法最终浓度1000克/毫升(Etanolic DPPH)(美国西格玛化工有限公司)(300米),反应混合物中使用。刚做好的测试样本(50(150 L)结合DPPH的解决方案L)在96年的微量滴定板。DMSO作为消极的控制。反应混合物在孵化30分钟在515纳米和吸光度的变化测量使用微板读者(热电子公司、芬兰)。所有的决定都是一式三份。获得的吸光度值转化成自由基清除活性的比例使用以下方程: 的地方为:样品的吸光度,AC:吸光度的负面控制。
自由基清除能力确定获得的价值。较低的值表示强烈的自由基清除活性。
2.3。总酚类化合物的测定
大量的酚醛树脂的选择药用植物提取物测定Folin-Ciocalteu试剂使用的方法Salvi等人稍微修改(12].0.5毫升每个样品溶解在1.0毫升DMSO(3)复制,1.0毫升的10%稀释Folin-Ciocalteu试剂和3分钟后,3毫升(1%,w / v)添加和由此产生的混合物在室温下2小时孵化。所有样品的吸光度为760 nm使用分光光度计(模型u - 1900分光光度计日立高新技术公司2006)。标准曲线的制备使用0,五十,100,150,200,250 mg / l。没食子酸当量结果表示为毫克每克干重(GAE毫克/克干重),这是一个共同的参考化合物。
2.4。总类黄酮含量的测定
总类黄酮含量是决定使用多德方法(13];5毫升的2%三氯化铝()在甲醇与同样体积的混合提取解决方案(0.4毫克/毫升)。吸收在415 nm 25用lambda PerkinElmer紫外可见分光光度计读数被10分钟后对一个空白样品组成的5毫升与5毫升甲醇提取的解决方案。总类黄酮含量测定用标准曲线与槲皮素(0 - 100毫克/升)的标准。总类黄酮含量表示为毫克的槲皮素提取的等价物(QE) / g。
2.5。抗菌活性测试
抗菌活性测定使用盘后扩散方法所描述的国家临床实验室标准委员会(NCCLS) [14]。所有的菌株包括临床和写明ATCC被用于这项研究。测试细菌被无菌接种环和转移到试管中包含5毫升无菌蒸馏水。足够的接种物被添加到浊度等于0.5麦克法兰(108cfu /毫升)标准(bioMerieux、马西d 'Etoile、法国)。试管悬浮(1毫升)添加到15 - 20毫升的营养琼脂或Sabouraud葡萄糖琼脂之前留出播种琼脂板(直径9厘米)巩固15分钟。三个磁盘的绘画纸1号滤纸,直径6毫米,被用来屏幕的抗菌活性。每个无菌盘浸满20岁L的提取(相应的原油提取100毫克/毫升),阿莫西林(和万古霉素链球菌sp,硝酸咪康唑(30)g / mL,作为细菌和真菌的积极控制,分别),或10% DMSO (v / v)(如负控制),之前放在播种盘的表面。盘子被孵化一夜之间,检查区域增长的抑制。抗菌活动记录如果生长抑制的区域大于6毫米的测量。任何提取显示抑制测试两次。
2.6。确定的最低抑制浓度(MIC)
麦克风是由液体稀释法。稀释系列被设置为0.13,0.26,0.52,1.04,2.10,4.17,8.33,16.66,33.33,66.66和133.33毫克/毫升的营养肉汤培养基。每个试管,0.5毫升的标准化的悬浮细菌被添加和孵化为24小时。测试持续在一式三份。的最低浓度后没有任何测试微生物的增长宏观评估被确定为麦克风。
2.7。确定的最低杀菌浓度(MBC)
最低杀菌浓度的植物提取物临床细菌隔离了根据该方法强调在国家临床实验室标准委员会(2002)。简单,1毫升,用移液器吸取从混合物中获得的决心麦克风阶段是有24小时营养肉汤。提取的最小浓度没有明显的增长作为最低杀菌浓度。
2.8。毒性试验
初步生物评估的粗提物Pilea microphylla决定使用盐水虾杀伤力测试根据Simionatto等人与一些修改(15]。盐水虾(卤虫盐沼)杀伤力分析被认为是一个有用的工具,初步评估细胞毒性的16]。盐水虾化验也被用于农药残留的分析(17),监控有机废物的毒性海洋生物(18和活跃的植物成分19]。Muka头提供的盐水虾鸡蛋是马来西亚理科大学海洋研究所,并在人工孵化的海水盐(38 g / l的水)。24小时后,无节幼虫孵化的悬挂了站1小时没有充气,然后收集的无节幼虫被从中间移液层的解决方案,大部分无节幼虫在游泳。原油提取被溶解在蒸馏水各种浓度和虾幼虫被放置在他们(复制)。海水没有提取作为消极的控制,而重铬酸钾有 作为一个积极的控制g / mL。通过玻璃毛细管十五无节幼虫被撤回,放置在每个瓶包含4.5毫升的盐水溶液。最终浓度的提取在每个实验中使用了5.000,2.500,1.250,0.625,0.312,0.156和0.078毫克/毫升。0.5毫升的植物提取物添加到4.5毫升的盐水溶液,在室温下保持24小时光下幸存的幼虫数。
2.9。统计分析
结果被GraphPad棱镜进行统计显著性检测。被认为是具有统计学意义的差异水平和方差分析的方法之一。
3所示。结果
3.1。抗氧化活性
结果如表所示1。我表现出最高的抗氧化活性最低的%81.32g / mL,如果相对于其他提取物。因此,提取被用来检测不同浓度的自由基清除活性。窄范围的总酚醛树脂含量在研究中被发现。其内容包括来mg没食子酸提取等效(GAE) / g,平均为41.00毫克/克。如表所示1,CE我酚醛最高mg GAE / g和CE II类黄酮含量最高mg QE / g,除非我给更高的类黄酮含量在II CE毫克QE / g。
CE我给我和实验性自身免疫性脑脊髓炎最弱的DPPH自由基清除能力,只有和,分别。深造,丁醇提取方法II (BEPM II)被选为被纸色谱法分离(PC)。四个乐队。BEPMf4显示最高的抗氧化活性比其他分数()。
一般来说,如果总酚含量和总类黄酮之间的比例如图所示将超过1,它显示在提取的总酚含量增加(见最后一列)。的总酚含量与抗氧化活性之间的关系点计算的两种方法提取。结果表明,当所有提取方法二世被包括在统计分析中,它们之间有负相关关系(方法),除非我给一点抗氧化活性和总酚含量之间的相关性()。
3.2。抗菌活性
点提取物对病原菌的抗菌作用,真菌和酵母展示在表2。此外,纯甲醇(控制)对病原微生物测试没有抑制的影响。点提取在100毫克/毫升浓度测试细菌是有效的。点提取给了很大的抑菌圈芽孢杆菌spizizenii写明ATCC 6633和微球菌sp。分别通过CE I和II CE。根据表2II CE,有效对抗大肠杆菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)。
所有测试提取则没有表现出抗真菌的活动除了己烷提取黑曲霉子结构AI1显示减少的终极格斗冠军赛,但也没有菌丝。
麦克风和MBC值测试细菌表中列出3。MBCs被定义为最低浓度,杀死了至少99.9%的细胞最初的培养液。显示的MBCs测试麦克风的高抗菌测试。
MIC值介于8.33 - -33.33毫克/毫升。运算单元我给麦克风和MBC值的最低浓度为8.33毫克/毫升芽孢杆菌spizizenii写明ATCC 6633。
3.3。毒性试验
选择最好的提取物抗菌活性的毒性测试。盐水虾(表中给出的结果4)表明他I和II虾几乎无毒,也表现出非常低的毒性,给值大于10024小时后g / mL。
有一个广泛的原油提取2 - 3880之间的值克/毫升。我(己烷提取的方法3880年g / mL)表现出毒性很低,(图1)。
4所示。讨论
Pilea microphylla传统医药中用于治疗细菌感染(8]。的claims for treatment infertility, inflammation and cleaning of reproductive sex organ of female human [10]。
筛选实验结果证明p . microphylla包含不同层次的总酚、总类黄酮和拥有不同的抗氧化性能。甲醇提取的方法我给较低的抗氧化活性最高。同时,先前的研究显示ethanolic提取的Pilea microphylla被发现是最有力的进行详细的自由基清除时23.15克/毫升(20.]。否则,甲醇和乙醇的极性相同的水平。我们的结果证实了他们的结果。
在这项研究中,Pilea microphylla有丰富的抗菌活性与病原微生物。大多数这些粗提取物抑制细菌生长的活性对革兰氏阳性细菌等b的仙人掌,枯草芽孢杆菌,和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,除非非极性和极性提取方法二世和丁醇提取极性提取方法我,表现出对低活性蜡样芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌写明ATCC 10876。结果似乎表明,方法二世(顺序分区)可能是更有效的比方法(利用soxhelt器)。大肠杆菌,枯草芽孢杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抑制二世的提取方法。这个原因可能与提取方法从极地到非极性成分。这项研究表明,63.6%的提取物抑制革兰氏阳性细菌(7 11)和60%的提取物抑制革兰氏阴性细菌(9 15)。然而,抗菌活性的频率统计为13.13% (39 297)。Facey等人发现抗菌活性较低金黄色葡萄球菌通过使用丙酮和乙酸乙酯的混合物p . microphylla(8]。
革兰氏阴性细菌的更大阻力之前植物提取物已被记录(21,22),支持我们的结果。这些观察的结果很可能是革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌细胞壁的结构差异,与革兰氏阴性外膜充当障碍许多环境物质,包括抗生素(23]。阀瓣扩散法显示,MIC值的8.33 - 33.33毫克/毫升。点提取也可以用来治疗的大部分芽孢杆菌sp,大肠杆菌,和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)。
己烷提取并非有毒针对盐水虾(价值超过1毫克/毫升)。这是令人印象深刻的建议己烷提取和贷款支持点可以用来治疗病原微生物感染等b的仙人掌可引起食物中毒的症状。
总之,Pilea microphylla可以建议作为天然植物来源的抗氧化剂和抗衰老的因素。进一步评估其提取物的抗菌性能和说明组件负责活动是十分必要的。的两个生物被提取,b的仙人掌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,是重要的食源性致病菌,提高的可能性,使用这种植物的活性化合物,防止食源性疾病。然而,任何化合物在医学的应用程序将需要解决安全性和毒性问题和进一步的研究需要做活性化合物的净化Pilea microphylla。
缩写
| 他我: | 己烷提取的方法, |
| CE我: | 氯仿提取的方法, |
| 运算单元我: | 乙酸乙酯提取的方法, |
| 我: | 甲醇提取的方法, |
| 我二世: | 甲醇提取方法二世, |
| II CE: | 氯仿提取方法二世, |
| 迪二世 | 二乙醚提取的方法, |
| 运算单元2: | 乙酸乙酯提取方法二世, |
| 二: | 丁醇提取的方法。 |
确认
本文是基于工作从马来西亚理科大学提供资助()。作者还要感谢振子结构,因为这项研究支持的部分提供了奖学金。