甘油提高乳制品Propionibacteria的抗真菌活性

文摘

乳制品propionibacteria广泛应用于发酵剂瑞士奶酪。这些细菌能发酵葡萄糖、乳酸、甘油丙酸、乙酸、二氧化碳。本研究调查了乳制品的抗真菌效果propionibacteria甘油作为碳源时,细菌生长。5型菌株propionibacteria对酵母进行了测试红酵母mucilaginosa和模具青霉菌公社和青霉菌roqueforti。的转换¹³C甘油,丙酸菌属jensenii随后与核磁共振。在双重文化分析,模具是强烈的抑制程度增强了甘油浓度的增加,而酵母的影响较小。在肉汤文化中,在甘油培养基pH值降低可能是负责完成抑制真菌的指标。核磁共振光谱证实,丙酸甘油转换的主要代谢物。根据获得的结果,增加了抗真菌效果被甘油除了文化propionibacteria是由于生产丙酸和介质的pH值降低。

1。介绍

在存储的谷物,水果,蔬菜,青贮饲料,加工食品,污染霉菌和酵母可能导致腐败,可与巨大的经济损失和潜在的健康危害。延长保质期的食品和饲料,使用大量的化学防腐剂。微生物组成的天然防腐剂的发展,通常被认为是安全的(肝),可能会形成另一种化学物质。乳酸菌(LAB)和propionibacteria是安全的,良好的细菌,常用在许多工业过程(1,2]。抗真菌活性实验室(了3])是探索在这两个应用系统4- - - - - -6和在物质层面上7- - - - - -9]。使用propionibacteria biopreservative文化已被单独测试(10,11)并结合实验室(12- - - - - -15]。Propionibacteria也发现生产抗菌化合物(16- - - - - -18]。

甘油是一种无色,无味的液体,广泛应用于许多应用程序(例如,皮肤护理产品和药物溶剂)。近年来生物柴油生产的快速增长(19)提供了一个丰富而廉价的甘油作为残留的来源。

以前,研究抗真菌活性的实验室发现,添加甘油增强某些种类的抗真菌效果(20.]。在实验室中,辅酶B₁₂端依赖甘油/二醇脱水酶是参与甘油转化为1,探索。3-hydroxypropionialdehyde中间过程中,也被称为reuterin,一个强有力的抗菌化合物。二醇脱水酶的存在丙酸菌属freudenreichii已经证明(21),但比较属于属的物种数量肠杆菌科显示的二醇脱水酶p . freudenreichii不同于肠道菌酶(22]。增长propionibacteria甘油的产量提高丙酸(23),但对这些细菌的抗真菌活性的影响当使用甘油作为单一碳源没有先前描述。

本研究旨在调查甘油对五种不同的抗真菌活性的影响乳制品propionibacteria物种,以及它们的代谢物轮廓在甘油的存在。核磁共振光谱被用来阐明转换途径和最终产品,使用¹³C-labeled甘油美联储propionibacteria文化。

2。材料和方法

2.1。微生物、媒体和生长条件

propionibacteria用于本研究的类型菌株乳制品propionibacteria物种后,来自德意志Sammlung冯Mikroorganismen和Zellkulturen GmbH (DSMZ):丙酸菌属acidipropioniciDSMZ 4900,p . freudenreichii无性系种群。shermaniiDSMZ 4902,p . freudenreichii无性系种群。freudenreichiiDSMZ 20271,p . thoeniiDSMZ 20276,p . jenseniiDSMZ 20535。中使用的真菌叠加分析和microtitre板测定酵母红酵母mucilaginosaJ350 (CFSQE 63)和模具青霉菌公社10763年J236 (IBT)青霉菌roqueforti6754年J268 (IBT)。所有的真菌都是文化的一部分微生物系的集合,瑞典农业科学大学。

文化propionibacteria被种植在修改乳酸钠(SL)介质(1%乳酸钠;胰蛋白胨Sigma-Aldrich Steinheim,德国,1%;Oxoid有限公司,英国汉普郡,酵母提取物0.5%;KH Oxoid ltd .)和0.5%₂阿宝₄在厌氧罐)30°C(洗液,正欲,迪金森和有限公司,火花,医学博士,美国)有限公司下₂+ N₂大气(正欲GasPak系统、洗液,迪金森和有限公司)。增长与甘油试验,使用相同的介质,但乳酸钠取代1%甘油(默克公司,达姆施塔特,德国)(g)。酵母和霉菌继续麦精(我)琼脂(Oxoid Ltd .)偏在2°C。在使用之前,酵母培养在我汤(Becton, Dickinson和有限公司)在旋转瓶(公司AG)、Bottmingen-Basel、瑞士)在120 rpm 25°C一夜之间,在模具表面传播新鲜我琼脂(Oxoid有限公司)偏和孵化25°C到孢子形成(3 - 4天)。分生孢子(无性孢子)然后从偏收获使用无菌蛋白胨水。酵母细胞和模具分生孢子数使用伯克计数室(Marienfeld, Lauda-Koenigshofen,德国)。

2.2。抗真菌覆盖分析

propionibacteria接种在两个平行2厘米条纹在SL盘子每应变(6)和孵化30°C在厌氧条件下72小时。软琼脂(0.15%麦芽提取物(Becton, Dickinson和Co .)和1%琼脂基(Oxoid有限公司))与不同浓度的甘油(0、10、50、100、200和500毫米)是冷却到45°C真菌细胞或分生孢子被添加到之前获得的浓度为10⁴孢子* ml⁻¹。软琼脂当时涌上盘子SL琼脂覆盖。孵化后30°C 48到72小时在有氧条件下,板检查视力。

2.3。从“叠加”板块中提取酸

板块也准备了几乎一样的叠加分析,但覆盖软琼脂包含0毫米或100毫米甘油和没有添加真菌细胞或分生孢子。48小时后第二个孵化(30°C在有氧条件下),细菌之间的琼脂条纹被手术刀,用无菌水混合实现的稀释1:10。液体是均质在实验室搅拌机(400年三角胸衣,苏厄德有限公司,沃辛顿,英国)60秒钟,其次是浸泡时间的30 - 60分钟。液体被转移到瓶和离心机(4500 rpm, 10分钟)获得agar-free液体。上层清液过滤0.45μ过滤器(耐尔根Nunc Int,罗切斯特,纽约,美国)的高效液相色谱分析。标准解决方案的乳酸、乙酸和丙酸的浓度在0.1,0.5,1.0,5.0,10和15毫米包括在分析中,C-18列上执行(Zorbax SB-C18,安捷伦科技,Waldbronn,德国)在30°C。作为流动相20毫米H₃阿宝₄、最小流量为1.0毫升⁻¹,洗出液是监控使用紫外检测器(安捷伦1100系列,安捷伦科技)在210海里。所有的实验都重复四次,值是平均值。

2.4。液体培养基

Propionibacteria被数使用Petroff-Hausser细胞计数器(haus科学合作,霍舍姆PA)和接种,以达到最终的浓度10⁷细胞* ml⁻¹在SL和g汤(4为每个组合复制)。文化仍然被孵化的文化在30°C 72小时。为可行的细菌数,一毫升整除系列稀释(1:10)无菌蛋白胨水的六倍,和100年μl两个最低稀释扩散的SL琼脂板和孵化在厌氧条件下30°C。发酵培养基配方的草人是离心机(4500 rpm, 10分钟)和0.45过滤μm过滤器(耐尔根Nunc Int)获得浮在表面的游离。十倍稀释后,由高效液相色谱分析的样本如上所述。所有的实验都重复四次,值是平均值。

2.5。抗真菌筛选Microtitre板块

文化的上层的液体也使用microtitre板试验检测抗真菌活性。对于每一个文化,通过添加50两井准备μ50 l的浮层μl细胞或分生孢子悬液(如前所述)准备实现的最终浓度5×10⁴毫升¹。未经变质处理的SL,通用电气,我和媒体被用作控制(50μl汤+ 50μl细胞或分生孢子悬浮液)。板块在30°C孵化塑料袋,用潮湿的纸补充组织保持湿度,和视觉检查真菌生长抑制后48到72小时。

2.6。增长阶段和抗真菌活性之间的相关性

关联的成长阶段和抗真菌活性,两个代表propionibacteria菌株被选中。新鲜的文化p . freudenreichii无性系种群。freudenreichii和p . jensenii在0.8%氯化钠溶液和洗-Hausser的计算使用彼托夫计数室。的浓度为10⁷细菌毫升⁻¹接种于g肉汤和厌氧孵化文化仍然在30°C。后2、8、12、24、36岁,48岁,56岁,72年,80年和98年小时,1毫升样品取消,一个aliquota -Hausser的稀释和计算使用彼托夫计数室。剩余的样本离心机(12 000 rpm, 10分钟)和上层的收集和保存在-20°C到进一步分析。然后用无菌水稀释两个上层清液,4和8倍。整除(50μl)的稀释是添加到两个microtitre板井含有50μl的p . roqueforti分生孢子的悬架。八井也准备50μl我肉汤和50μl分生孢子的悬浮生长控制。最后的上层清液浓度因此井是50%(纯上层清液),25%,12.5%,6.25%,5×10分生孢子浓度⁴毫升⁻¹。盘子在30°C孵化塑料袋含有湿纸巾来保持湿度。48小时后,板检查视力,和抑制的程度与控制井和额定根据以下范围:0,没有抑制,1,弱势明显抑制,2,明显的抑制,3,强烈的抑制作用,但仍可见的增长,和4,完全抑制。实验重复了一次。

2.7。发酵与¹³C-Labeled甘油

甘油转换途径在propionibacteria生长的细胞进行了研究¹³C-labeled甘油,和核磁共振分析花生长介质。根据前面的实验结果,p . jensenii被选为这个评价。的设置是一样的在上面的相关实验中,除了含有的媒介¹³C-labeled甘油(50% 1、2-labeled 3-labeled和50%;Larodan精细化学品AB,马尔默,瑞典)代替甘油。收集的样本(0)24、48和96小时。细胞数量计算,其余样本的离心机(12 000 rpm, 10分钟),过滤(0.45μ米),冻结在−20°C到进一步分析。分析了上层的有机酸和low-molecular-mass代谢物和高效液相色谱法¹³C NMR光谱。高效液相色谱分析进行阳离子排除列(Rezex ROA-Organic酸,Phenomenex Inc .托兰斯,CA,美国)25°C,使用5毫米H₂所以₄作为流动相流速为0.6毫升分钟⁻¹。洗出液是监控和示差折光检测器(安捷伦1100系列,安捷伦科技)。标准解决方案的乳酸、乙酸和丙酸的浓度,25日,50和100毫米包括在分析中。的¹³C NMR样本由混合整除(600μl)的上层清液与D₂O (100μl)。样品进行分析¹³C NMR光谱(100 MHz)在30°C力量drx - 400核磁共振谱仪(力量Biospin GmBH, Rheinstetten,德国)配备了5毫米QNP探针头。128扫描的数据积累,光谱宽度是240 ppm。的¹³对甘油CH C NMR数据引用₂哦,信号在δ_C66.9。上层清液的pH值记录使用PHM92酸度计(辐射计,哥本哈根,丹麦)。

2.8。统计分析

细菌生长的差异(监控),pH值,并为每个propionibacteria体内酸性物质的产生进行了分析在不同的媒体,琼脂和汤的方法,通过双向方差分析使用Bonferroni期末测验(Prism4图垫软件)。水平的重要性设置为5%。

3所示。结果

3.1。抗真菌覆盖分析

所有五个类型菌株propionibacteria测试对三个不同目标真菌(两个模具和一个酵母)甘油浓度在0毫米和500毫米之间。模具的增长是影响进行测试p . freudenreichii无性系种群。freudenreichii(图1),以及其他测试propionibacteria(结果未显示)当细菌生长在甘油,甘油浓度增加和增强抗真菌的效果。模具的指标青霉菌公社测试是最敏感的真菌,它在500毫米的存在完全抑制甘油propionibacteria菌株。青霉菌roqueforti只是稍微抑制p . acidipropionici和p . thoenii甚至在高甘油浓度,但P。freudenreichii无性系种群。freudenreichii(图1),p . freudenreichii无性系种群。Shermanii,和p . jensenii明显增加了抑制甘油的添加。酵母r . mucilaginosa是最耐药生物体propionibacteria的抑制活性。从获得的结果p . jensenii显示明显的抑制效果r . mucilaginosa在甘油,浓度的200和500毫米(结果未显示)。

3.2。最终产品分析叠加板实验

酸的结果分析和pH值测量的琼脂的抽取,如表所示1。评估从琼脂丙酸的提取效率,是第一次做这样的分析与板块包含50和100毫米纯丙酸。过程证明了自己是足够的自相似数量的丙酸提取物中量化分析(数据没有显示)。从板块没有细菌,只有乳酸(120毫米)和/或甘油(30毫米)从介质中提取。的初始pH值无教养的盘子,有或没有甘油,是5.5。板块之间的比较有和没有甘油为每个丙酸菌属显示显著差异只剩下大量的乳酸p . jensenii()和一个较小的数量没有添加甘油剩下的盘子上。p . thoenii也显示出倾向减少乳酸剩余在盘子里没有甘油,但由于甘油的结果覆盖盘子代表只有两个测量,没有可靠的统计分析可以做。为p . freudenreichii无性系种群。freudenreichii和p . freudenreichii无性系种群。Shermanii,丙酸的产量有显著差异,高量生产的甘油(和、职责)。甘油的含量降低后在中所有菌株细菌生长,但在小程度上p . acidipropionici。pH值有显著差异时所有菌株的生长相比,丙三醇的存在()。

3.3。最终产品的分析Propionibacteria在液体培养基中生长

生产的酸和pH值的变化记录五propionibacteria菌株生长在SL和g的培养基配方(表2)。无教养的SL肉汤的初始pH值为5.5,而g肉汤的pH值6.0。乳酸和乙酸只是文化中发现SL中、生产丙酸明显高于在这些文化(为p . freudenreichii无性系种群。shermanii,p . freudenreichii无性系种群。Freudenreichii,和p . jensenii和为p . acidipropionici)除外p . thoenii()。最后cfu计数毫升⁻¹只有SL和g之间差别很大吗p . freudenreichii无性系种群。freudenreichii()。最后的pH值明显低于g介质(所有菌株)(表2)。

3.4。抗真菌筛选Microtitre板块

上层清液的液体培养实验测试了抗真菌活性microtitre板试验(表2)。从文化生长在SL中浮在表面的,没有任何测试了真菌的抑制增长,尽管增长propionibacteria g中给了一个明确的抑制作用。r . mucilaginosa完全抑制由所有propionibacteria g文化的上层清液。模具被抑制p . acidipropionici p . thoenii和p . jensenii,但不p . freudenreichii无性系种群。freudenreichii或p . freudenreichii无性系种群。shermanii,即使g汤用于细菌生长。所有三个真菌能够生长在无教养的SL和g的培养基配方(数据没有显示)。

3.5。增长阶段和抗真菌活性之间的相关性

稀释培养滤液的抗真菌活性p . freudenreichii无性系种群。freudenreichii和p . jensenii对青霉菌roqueforti评估在细菌生长,结果图中可以看到吗2。没有检测到抗真菌活性在平稳增长阶段(48小时)。然而,经过48小时的潜伏期,效果随着时间的增加,在80 h达到最高水平。演示上层清液的增加抗真菌活性随着时间的推移,他们在无菌水稀释2,4,8倍。培养滤液的抗真菌活性p . freudenreichii无性系种群。freudenreichii显示出“弱抑制”的规模(1)青霉菌roqueforti当两个稀释后48 h的孵化。在这个稀释,最大限度抑制被认为在80 h。文化滤液稀释4倍时,抑制青霉菌roqueforti是弱甚至在56 h,但增加72 h后,在整个实验过程中保持在较高的水平。p . jensenii比早些时候显示更强的抗真菌活性p . freudenreichii无性系种群。freudenreichii。当文化的滤液p . jensenii稀释2倍,“完全抑制”的规模(4)被认为已经在48 h。滤液稀释四倍相同的文化,完全抑制了56个小时。8倍稀释时,明显的抑制青霉菌roqueforti被记录在72 h后,与最大抑制达到80 h和维护直到实验结束。没有观察到抑制活动进一步增加在80年和98年之间h。实验重复了相同的结果(没有显示)。

3.6。发酵与¹³C-Labeled甘油

新鲜的文化p . jensenii生长在96 h g肉汤准备¹³C-labeled甘油。样本撤回在0、24、48、96 h和pH值,分析细菌计数,丙三醇,酸(表的生产3)。汤的pH值6.2实验的开始,经过24小时的潜伏期p . jensenii只观察到轻微减少到6.1。孵化后48 h, pH值下降到4.9,在最后采样点,96 h,它是4.6。最初,高效液相色谱法分析只检测到甘油g肉汤,但在每个采样点后,丙酸的水平为代价的甘油浓度增加。然而,甘油浓度的下降速度比丙酸的生产,表明利用甘油细菌生长支持途径。每个样本进行了分析¹³C NMR光谱遵循甘油转换和丙酸是唯一的¹³C-labeled代谢物检测(图3)。丙酸的浓度随着时间的增加,浓度最高的样本中检测到96 h后收获。图3(一个)显示¹³C-labeled甘油,星号表示标记碳。丙酸形成的标记模式也由星号图3 (d)。的信号¹³C-labeled甘油下降随着时间的推移,在48 h(图3 (c)),小的信号¹³C-labeled丙酸出现了。图3 (d)显示了丙酸信号产生了96 h后孵化。它也提出了区域的放大¹³C NMR谱和示意图丙酸形成的照片和标签在C₁和C₂C₁C₃在C和一个标签₂。标签在C₁和C₂导致偶极子对C信号₁和C₂由于自旋自旋耦合(53个邻近的Hz)¹³C核。标签在C₁和C₃没有导致任何可观察到的信号分离,由于小值吗在脂肪族羧酸(通常~ 1 Hz) [24]。

4所示。讨论

乳制品propionibacteria类型的抗真菌活性菌株在甘油的评估。研究进行液体和固体介质和补充甘油转换研究使用¹³C-labeled甘油。霉菌的抑制叠加分析观察细菌,通过增加甘油浓度,抑制作用增强。p . freudenreichii无性系种群。freudenreichii和p . freudenreichii无性系种群。shermanii显示最抑制的结果。然而,叠加分析,不同的细菌与酵母的抑制活性r . mucilaginosa几乎是增加甘油的浓度的影响。在汤中,模具只是抑制g的上层清液中培养p . acidipropionici,p . jensenii和p . thoenii。与固体矩阵分析,酵母在评估完全是被所有propionibacteria当g的上层清液中使用。有一个重要的区别需要考虑的两个实验系统。在肉汤文化中,细菌生物被移除后72小时的潜伏期,导致一个恒定的pH值和代谢物浓度的试验后,在琼脂板分析产生一个连续的供应增长细菌的代谢产物,扩散到琼脂层和降低博士在丙酸的连续扩散叠加方法有利于抑制霉菌生长,酵母没有影响到相同的程度。众所周知,丙酸、钠、钾、丙酸钙,是一种有效的抑制剂的模具但可能只显示弱活动对酵母和细菌(25]。

当比较的琼脂扩散法和肉汤采用测试确定的最低抑制浓度(MIC)值不同的抗生素Brachyspira hyodysenteriae罗德,et al。26)发现了一个显著的差异在两种方法获得的结果。获得的MIC值,平均一个稀释步骤肉汤稀释法低。观察到的差异解释是基于固体和液体介质的不同特点,提供不同的抗生素或其他物质的扩散条件(26]。的具体生长特性单细胞酵母和丝状霉菌也可能导致不同的反应在不同环境中抗真菌条件。甘油是一种常用的化学调节水活动(1]。然而,甘油的含量增加的琼脂板化验没有明显减少在水中活动(数据未显示)。事实上,100毫米的甘油水只减少活动从1.000到0.995,所以需要更高的甘油浓度造成任何真菌生长抑制。

最后pH液细菌培养生长在甘油的存在显著降低,可能导致增强的效果观察与这些文化。媒体扮演着一个重要的角色的构成的最终pH值的文化。SL中含有乳酸钠,使它的初始pH值5.5 - -5.7。增加酸这一媒介降低pH值(4.7之后的50 mM丙酸)但不一样而酸除了纯水与相同的酸(pH值2.9),由于乳酸钠的缓冲能力。甘油没有缓冲能力,所以产生的酸propionibacteria g中更有效地降低pH值。

因为丙酸Pk_一个pH值为4.87,在最后取得培养的培养基配方(pH值4.3 - -4.7),超过50%的总丙酸含量未离解的形式出现。弱酸(即的抑制作用。,propionic acid) is often attributed to the undissociated molecules [27]。然而,行动的具体模式仍不完全清楚,许多理论存在。一个表明抑制增长的预防的主动运输进入细胞(28),而另一个涉及的负面影响泵的质子酸的质膜H⁺_{- - - - - -}政府内部泵atp酶,阻止进一步促进增长的经济行动29日]。

此前,八个腐败真菌三个弱酸的敏感性在不同的pH值已经被报道30.]。麦克风在pH值为丙酸5日报道r . mucilaginosa30毫米,清楚地解释了这个酵母的抑制增长的propionibacteria测试液体g文化(表吗2)。在这项研究中,使用的模具林德et al。30.)报道,丙酸有一个麦克风的40毫米pH值5.0,这也是根据研究结果对液体的文化。p . freudenreichii无性系种群。freudenreichii和p . freudenreichii无性系种群。shermanii仅26毫米丙酸,这是模具测试的总增长不足抑制pH值约为5.0。文化生长在SL中显示最终的pH值更高,接近6,这需要丙酸浓度增加抑制真菌生长,因为只有大约7%的丙酸存在于其未离解的形式在这个pH值(30.]。

当生产酸的两个系统用于细菌生长(液体和叠加分析)被认为是这两种方法不能直接比较。上层清液肉汤文化同质和含酸的总量取决于分析。在凝胶插头,不同底物混合在一起的两层为酸提取、和提取包含均值从琼脂基板。在固体培养基,丙酸的含量明显高于3的5株产生底物甘油在场时进行测试。考虑到细菌生长在SL琼脂已经在SL 72小时,然后提供一个额外的碳源(覆盖甘油),丙酸产量越高并不令人感到意外,也可见表1。相比之下,液体SL中增长导致液体g中丙酸比增长。菌株属于p . freudenreichii物种表现出更明显的差异,生产不到一半的丙酸在g比在SL肉汤。自从SL介质的缓冲能力(乳酸钠)g中缺席,丙酸的生产立即降低pH值,这可以促进一个抑制环境甚至propionibacteria本身。

结果表明倾向homofermentative途径只生产丙酸甘油时能量源(表2)。早期的研究表明,使用甘油作为碳源导致更高收益率的丙酸和最终产品的多样性组成相比,使用葡萄糖或乳酸(31日]。类似的观察也在比较甘油和葡萄糖作为碳源两种propionibacteria批文化中(23]。

观察到的¹³C标记的模式丙酸同意先前建议的代谢途径从甘油(丙酸的形成31日]。在这个途径,甘油转化为丙酮酸,通过二羟丙酮磷酸和磷酸烯醇丙酮酸(图4)。随后,从丙酮酸形成草酰乙酸的有限公司₂。草酰乙酸盐转化为苹果酸和琥珀酸,最后有限公司₂消除来自琥珀酸生产丙酸。Propionibacteria已知能够使用甘油作为碳源。因此,在增长¹³C甘油,有限的一部分₂预计将发布的细菌¹³C-labeled。如果¹³C-labeled有限公司₂来自一个标记甘油分子,加入丙酮酸,丙酸¹³在两个C C-labeled₁和C₂可能形成(图4),目前的研究(图中观察到3)。

甘油转化为3-hydroxypropionaldehyde,也称为reuterin,在实验室,包括辅酶B₁₂端依赖甘油/二醇脱水酶。这种酶被发现的物种肠杆菌科和丙酸杆菌科,但酶免疫截然不同(22]。调查的可能性propionibacteria产生reuterin-like抗菌化合物类似发现在实验室,我们试图找到等价的酶基因序列。我们从菌株杂交染色体DNAp . freudenreichii无性系种群。freudenreichii和无性系种群。shermanii消化和Bam你好,两个相邻³²P-labeled生态RI-fragments来自l . coryniformis根据标准方法(Si332]。这两个片段,一起构成约5500个基点,包含完整的pdu一个,两个pduB,pduC,pduD,pduE-genes。然而,甚至没有得到信号在低,严格条件(数据未显示)。

抗真菌propionibacteria和甘油的组合可能被用作biopreservation系统由食品和饲料行业,在真菌污染的担忧。在最近的一项研究中,Suhr和尼尔森(33发现丙酸是一种有效的霉菌抑制剂,除了反对p . roqueforti p .公社,和Eurotium石,只要和pH值_w不是太高。甘油和丙酸都是批准的食品添加剂,和今天propionibacteria常用在乳制品发酵剂和面包(2]。因此,使用甘油作为真菌抑制系统的一部分,连同propionibacteria可以提供额外的积极的属性,因为甘油经常用作添加剂减少一个_w(1]。此外,生物柴油行业也将受益于增加甘油过剩的新用途(34]。找到一个合格的propionibacteria和甘油为应用程序作为biopreservation系统在食品和饲料行业是未来研究的一个有趣的挑战。

确认

战略环境研究基金会的资金支持(MISTRA)和卡尔Trygger基金会。作者也谢谢培特博士梅林宝贵的援助与统计分析。作者都没有任何经济利益的商业身份的文本。

引用

1. m·r·亚当斯和m·o·莫斯食品微生物学英国皇家化学学会的,剑桥,第二版,2000年版。
2. l . VorobjevaPropionibacteria,Kluwer学术出版商、莫斯科、1版,1999。
3. j .她和j . Magnusson抗真菌乳酸菌biopreservatives”,食品科学和技术的趋势,16卷,不。1 - 3、70 - 78年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. 美国劳斯·d·哈尼特,a·沃恩和d·杰费里•v•辛德伦“乳酸菌与潜在消除食品中真菌污染,”应用微生物学杂志,卷104,不。3、915 - 923年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. s . j .•萨瑟n n . Nawani p . k . Dhakephalkar和b . p . Kapadnis“抗真菌乳酸菌与潜在延长保质期的新鲜蔬菜,”应用微生物学杂志,卷103,不。6,2622 - 2628年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. c . l . Gerez都灵,g . Rollan g .字体德瓦尔迪兹,“预防面包模具损坏和抗真菌特性,利用乳酸菌”食品控制,20卷,不。2、144 - 148年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. a . Broberg k .路上、k斯特罗姆和j .她“代谢物的乳酸菌在青贮草,”应用与环境微生物学,卷73,不。17日,第5552 - 5547页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. j .干燥,所以马格努松j ., a . Broberg j .她和l . Kenne抗真菌3-hydroxy脂肪酸乳杆菌MiLAB 14日”应用与环境微生物学,卷69,不。12日,第7557 - 7554页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. f p . Lavermicocca Valerio a·维斯孔蒂“抗真菌活性phenyllactic酸对模具从面包店分离产品,”应用与环境微生物学,卷69,不。1,第640 - 634页,2003。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. f . y . Ekinci和m . Gurel”效应的利用丙酸的细菌作为兼职在酸奶生产、文化”乳品科学杂志》,卷91,不。3、892 - 899年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. g . e . Higginbotham s c·穆勒k . k . Bolsen和e . j .碎石面饰“菌剂含有丙酸菌对发酵的影响,玉米青贮饲料的有氧稳定性”乳品科学杂志》,卷81,不。8,2185 - 2192年,1998页。视图:谷歌学术搜索
12. 即Filya、大肠Sucu和a . Karabulut”的影响丙酸菌属acidipropionici和乳杆菌,应用于在地窖里贮存的发酵和有氧稳定性低的玉米和高粱青贮饲料干物质,”工业微生物学和生物技术杂志》上,33卷,不。5,353 - 358年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. s . m .严峻程度和l . Meile”混合的文化丙酸菌属jensenii和乳酸菌paracasei无性系种群。paracasei食物变质抑制酵母”,系统和应用微生物学,27卷,不。2、229 - 237年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. p h . Ho, j·b·罗和m·c·亚当斯”乳酸杆菌与潜在biopreservatives对食品和乳制品丙酸菌属真菌和酵母污染,”应用生物化学和微生物学,45卷,不。4、414 - 418年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. k . El-Shafei m·A . m . Abd El-Gawad: Dabiza et al .,“混合的文化丙酸菌属thoeniip - 127,乳杆菌和乳杆菌保护文化kareish奶酪。”波兰食品和营养科学杂志》上,卷。58岁的没有。4、433 - 441年,2008页。视图:谷歌学术搜索
16. t·法耶,d . a .刺绣t . Langsrud i f . Nes和h .整体抗菌肽是由细胞外加工的一种蛋白质丙酸菌属jensenii”,细菌学期刊,卷184,不。13日,3649 - 3656年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. n . f .陶菲克o·m·拉夫b . a . Effat和n s Mahanna保留Domiati奶酪用代谢物丙酸菌属thoeniip - 127。”波兰食品和营养科学杂志》上,13卷,不。3、269 - 272年,2004页。视图:谷歌学术搜索
18. d . Gwiazdowska和k . Trojanowska”产生的部分纯化细菌素的抗菌活性和稳定性丙酸菌属freudenreichiissp。freudenreichii和ssp。shermanii”,牛奶,卷86,不。2、141 - 154年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. 退潮,“欧洲生物柴油委员会”,http://www.ebb-eu.org/stats.php。视图:谷歌学术搜索
20. j .所以马格努松乳酸菌的抗真菌活性博士论文,瑞典农业科学大学微生物系乌普萨拉,瑞典,2003。
21. n Hosoi k .森本晃司,c . Ozaki et al .,“酶参与代谢活动的2-propanediol丙酸菌属freudenreichii”,发酵技术杂志》卷,56号6,566 - 572年,1978页。视图:谷歌学术搜索
22. t . Toraya、美国Kuno和福井,“辅酶B-dependent二醇脱水酶的分布和甘油脱水酶在选定的属肠杆菌科和丙酸杆菌科”,细菌学期刊,卷141,不。3、1439 - 1442年,1980页。视图:谷歌学术搜索
23. e·h·Himmi a .伯a . Boussaid和l . Hassani丙酸发酵甘油和葡萄糖丙酸菌属acidipropionici和丙酸菌属freudenreichiissp。shermanii”,应用微生物学和生物技术,53卷,不。4、435 - 440年,2000页。视图:谷歌学术搜索
24. H.-O。Kalinowski, s·伯杰和布劳恩,碳13核磁共振光谱学约翰·威利& Sons,纽约,纽约,美国,1988年。
25. p . m . Davidson“化学防腐剂和天然抗菌化合物,”食品微生物学:基本面和前沿m·p·道尔l . r . Beuchat, t·j·蒙特维尔。ASM出版社,页593 - 627年,华盛顿特区,2001年。视图:谷歌学术搜索
26. j .罗德·m·凯斯勒c·g·鲍姆和g . Amtsberg”比较的方法对抗菌药物敏感性测试和pleuromutilin药物的MIC值Brachyspira hyodysenteriae孤立在德国,”兽医微生物学,卷102,不。1 - 2,25-32,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. t·埃克伦,“有机物酸和酯类”食物保藏过程的作用机制Ed, g·w·古尔德,页161 - 200,爱思唯尔科学,纽约,纽约,美国,1989年。视图:谷歌学术搜索
28. e·弗里兹·c·w·许凤,e . Galliers“亲脂的酸作为抗菌功能食品添加剂。”自然,卷241,不。5388年,第325 - 321页,1973年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. m·b·科尔和m·h·j·基南”效应的弱酸和外部的酸度在细胞内Zygosaccharomyces bailii耐弱酸及其影响”,酵母,3卷,23-32,1987页。视图:谷歌学术搜索
30. h·林德、h·琼森和j .她“抗真菌的影响乳制品propionibacteria-contribution有机酸。”国际食品微生物学杂志》上,卷98,不。2、157 - 165年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. f . Barbirato d Chedaille, a .伯”丙酸发酵甘油:比较与常规基质,”应用微生物学和生物技术卷,47号4、441 - 446年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. j . Sambrook e . f·弗里奇,t .则分子克隆:实验室手册冷泉港实验室,冷泉港,纽约,美国,第二版,1989年版。
33. k . i Suhr p v .尼尔森,“弱酸性防腐剂对增长的影响面包店产品腐败真菌在不同的水上活动和pH值,“国际食品微生物学杂志》上,卷95,不。1,第78 - 67页,2004。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. a . Behr j . Eilting k . Irawadi j . Leschinski f·林德纳,“改进的利用可再生资源:甘油的新重要的衍生品,”绿色化学,10卷,不。1,13-30,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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