文摘
76年的药敏资料链球菌agalactiae(B组链球菌(GBS))从阴道标本分离的孕妇近期与他们的基因型产生的随机扩增多态性DNA分析及其毒力因子的编码基因周期,lmb, scpB,肋骨,bca通过聚合链反应。基于敏感性的分布模式,六个概要文件生成。RAPD分析检测到7的基因型。的周期基因存在于99%的隔离lmb实验室在96%,scpB在94.7%,肋骨在33%,bca在56.5%的隔离。抗菌素耐药性之间的分离表现出显著相关性和基因型集群表示特定的克隆不同的抗菌素耐药性的分布概况,必然要谨慎的做法在治疗选择。毒力因子编码基因被发现在所有七个基因型集群肋骨和bca不相同的基因组中共存。
1。介绍
感染新生儿B群链球菌(GBS)从0.5到2每1000活产是垂直传播的结果交付期间婴儿在殖民地的母亲1]。近期尝试识别GBS殖民孕妇通过评估GBS的风险因素,未能诊断所有情况下(2]。第35 - 37的普遍筛查孕妇对GBS的孕周目前推荐的疾病控制和预防中心(CDC)在美国(2]。
尽管变化坚持疾病预防控制中心建议在不同的中心在世界各地,抗菌药物预防,提出女性殖民GBS产时(在出现劳动或胎膜破裂后),导致早发性GBS新生儿感染减少70%以上(3]。然而,由于孕期GBS殖民的变异率(4),抵抗殖民菌株的出现(5),这些菌株的潜在毒性,产时筛选GBS基因型(6连同他们的抗菌素耐药性资料,毒性成为理想的编码基因。
幸运的是,GBS耐青霉素没有报道到目前为止(7];然而,罕见的GBS临床菌株对青霉素的敏感性减少记录(8]。另一方面,GBS分离孕妇的早期研究,显示抗菌素耐药性高达18%,8%,80%对红霉素、克林霉素、四环素(分别9]。
GBS感染新生儿疾病的严重程度可以确定主要由一些毒性编码等的因素cps基因簇编码胶囊(10),scpB基因编码酶表面ScpB (ca5的肽酶)造成损害的嗜中性粒细胞招聘和结合纤连蛋白促进细菌侵入上皮细胞(11),bca基因编码alpha-C蛋白质、细菌表面蛋白,帮助进入宿主细胞(12),lmb实验室基因编码lmb (laminine-binding蛋白质),在入侵过程中发挥作用的表面蛋白受损上皮(13),周期基因编码溶血素,一种毒素,扮演一个角色在组织损伤和系统性的传播细菌和导致脑膜炎(14),肋骨基因编码肋表面蛋白主要存在于侵入性压力(15]。其他毒性因素参与GBS发病机理的过程包括beta-C蛋白质编码的bac基因。Beta-C蛋白质功能与IgA-Fc部分由交互导致吞噬作用的抑制16)和绑定湿型中保持其作用抑制补体激活通过替代途径(17]。其他重要的毒力因子的GBS Fibrinogen-Binding蛋白质:FbsA FbsB。FbsA是一个表面蛋白编码fbsA基因。它从opsonophagocytosis保护病原体,并促进坚持上皮细胞和人类大脑微血管内皮细胞(HBMEC)从而帮助它穿过血脑屏障和发展脑膜炎(18,19]。FbsB蛋白质编码fbsB基因,也是一个表面蛋白,有助于GBS入侵上皮细胞(20.]。最后,cell-surface-associated蛋白质(CspA)是一个表面蛋白编码cspA基因。参与维护病原体生存在主机通过逃避免疫系统(21]。
在这项研究中,基因型是相关的一些毒力基因和药敏资料。这些信息有助于识别特定GBS株高毒性的潜力,与抗常规抗菌药物管理,并很有可能与特定的地理区域。
2。材料和方法
2.1。细菌的分离
七十六GBS分离培养的标本来自阴道孕妇妊娠35到37周之间,在两个三级保健中心参加私人诊所在贝鲁特,黎巴嫩,2007年10月至2008年7月。第一个中心(A)是位于城市的西部城市贝鲁特,第二个(B)东部的贝鲁特。这两个医院为两个不同的种群,在某种意义上,医院求诊的患者来自两个不同的地理区域,他们之间的来往很少。然而,当地的卫生保健系统的两个地区很相似,和病人有类似的抗生素消费习惯。76 GBS分离由47(61.8%)隔离从第一个获得三级护理中心和29(38.2%)分离获得第二个三级保健中心。
2.2。识别
隔离被确定使用传统方法的基础上,菌落形态、革兰氏染色法,红血球溶解,乳胶凝集试验与特定的抗血清使用Slidex Strepto + (BioMerieux,马西L 'Etoile;法国)。
2.3。抗菌药物敏感性试验
药敏测试是由disk-diffusion (Kirby-Bauer)方法在Mueller-Hinton琼脂(Difco实验室、底特律、密歇根)补充5%的羊血,用悬浮液0.5 MacFarland新鲜的细菌培养。测试是通过使用以下抗菌药物:青霉素、头孢吡肟、头孢曲松、氯霉素、克林霉素、红霉素、左氧氟沙星、四环素。结果解释根据临床实验室标准研究所(CLSI) [22]。
2.4。总DNA提取
从所有使用illustra隔离细菌DNA提取genomicPrep迷你旋转工具(英国通用电气医疗集团有限公司,英国白金汉郡)根据制造商的指示。
2.5。聚合酶链反应(PCR)
总DNA的76 GBS分离被用来放大5编码基因毒性因素:周期(23),肋骨(24),lmb实验室(25),bca(25),而scpB(26通过使用特定的引物PCR。标准PCR条件被用来放大周期,lmb实验室,scpB(23),肋骨(24),而bca基因(25]。
在Sprint进行PCR反应,热电动热循环。扩增子受到电泳在2%琼脂糖凝胶(σ)1Tris-Borate-EDTA缓冲pH值8.3(三基地0.089 M,硼酸0.089米,和EDTA 0.002米)在120 V 45分钟。
琼脂糖凝胶与溴化乙锭染色(σ)和用UV-transilluminator和奥林巴斯数码相机拍摄Digi-Doc程序。
2.6。基因分型
基因分型用随机扩增多态性DNA (RAPD)分析上执行所有的隔离,以确定菌株的多样性。RAPD与准备好进行RAPD分析珠子工具包(英国通用电气医疗集团有限公司,英国白金汉郡)和GBS 2引物(6),使用冲刺,热电动热循环。一个系统树图生成的RAPD模式使用BIONUMERICS软件。(应用数学、Saint-Martens-Latem、比利时)。
3所示。结果
3.1。细菌隔离分布及药敏
药敏试验显示:所有GBS分离是容易青霉素G,头孢吡肟,头孢曲松钠、左氧氟沙星。以下的比例分离,4%,11.8%,15.8%,和86.8%,耐氯霉素(背影),克林霉素(CLI)、红霉素(非常),分别和四环素(春节)。6抗菌素耐药性(AR)的隔离检测:一个(对CLI、非常的背影,和春节;4.0%)、B(耐CLI、红霉素、春节;6.6%),C(耐CLI和春节;1.3%)、D(耐红霉素和春节;5.3%),E(仅对春节;69.7%)和F(容易;13.2%)。
3.2。RAPD分析
基因分型的分离检测七GBS集群I, II, III, IV, V, VI,和七以下流行的百分比:18.4%,13.2%,19.4%,7.9%,11.8%,11.8%,和17.1%,分别。基因型的七个集群的系统树图如图1。最常见的集群是三世(19.7%)和最普遍的是静脉(7.9%)。表1展示了GBS集群之间的相关性及其基于“增大化现实”技术的概要文件。
(一)
(b)
某些基因型集群的数据显示患病率在三级护理中心,而其他基因型集群仅仅是局限于一个特定的三级中心(表2)。同样,某些基于“增大化现实”技术的概要文件是普遍的在这两个中心,而另一些被局限于一个中心。
3.3。PCR扩增的基因毒性
PCR检测表明毒性的基因周期,lmb, scpB,bca,肋骨基因是积极的,99%,96.1%,94.7%,56.6%,和33%的GBS分别隔离。有一个广泛的流行周期,lmb,scpB基因的完全隔离,因此3基因基因型集群中均匀分布。表3节目的流行bca和肋骨基因在GBS基因型集群。六十八年分离的76个(89.5%)的bca或者是肋骨基因和8隔离的76例(10.5%)bca也不肋骨检测到。
4所示。讨论
新生儿GBS感染是一种严重的并发症的垂直传播细菌,来自母亲的新生儿,阴道分娩的时候(1]。这就是为什么普遍筛查GBS在短期孕妇阴道殖民推荐(2]。
幸运的是,GBS耐青霉素没有报道世界各地,和选择的药物,在治疗感染,仍青霉素(7,9]。但是,问题的情况下,对青霉素过敏,其他抗菌药物如CLI和一般管理(2]。然而,德Azavedo et al。9)发现,18%,8%,80%的孕妇GBS分离株耐红霉素,CLI和春节9]。在我们的研究中,11.8%,15.8%,和86.8%的GBS分离,耐红霉素,CLI,和春节,表示百分比类似于先前的研究。的患病率相对较高的基于“增大化现实”技术的百分比,导致的推荐请求敏感抗菌谱的GBS培养女性对青霉素过敏。
基因分型的GBS分离,利用RAPD分析确定共有7基因型集群。最常见的是基因型集群第三(19.7%),最常见的是IV中发现7.9%的隔离。
基于“增大化现实”技术和基因型集群之间的相关性,显示(表之间的关联1)。抵抗的背影是局限于基因型集群V, VI,七世,而阻力CLI和红霉素在基因型集群,我才发现,二,七世。所有的GBS分离耐CLI也耐红霉素,表明关联模式的基因表型之间的阻力。这可以预期自CLI阻力在GBS几乎总是基于一个的存在ermB基因赋予抵抗大环内酯类、lincosamides streptogramin B (27]。
这项研究的重要发现是特定基因型集群的患病率之间的相关性与特定的基于“增大化现实”技术的概要文件在一个给定的医疗中心。这个观察表示盛行的某些基因型集群对某些抗菌药物在特定医疗中心需要谨慎的做法,推断基于“增大化现实”技术的研究结果从一个医学中心。
另一个观察是bca和肋骨与此同时在同一基因组基因没有礼物。先前的研究指出这观察28,29日]。肋骨蛋白质编码的肋骨基因股票几个属性α- c蛋白编码bca基因。蛋白质都是抗胰蛋白酶消化和属于同一细菌表面蛋白家族的重复结构显示47%的身份,他们的n端序列相关和相互61%相同的30.]。这些属性表明,两种蛋白可能有共同的起源。进一步的调查仍需要执行为了发现功能之间的关系bca和肋骨确定是否有相应的函数。