文摘
我们分析了90年nonduplicates community-associated耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)菌株隔绝皮肤和软组织感染。所有的压力都台面式晶体管积极的。24 90株显示诱导macrolide-lincosamide-streptogramin B的阻力。所有菌株产生的毒素;96%和100%的人显示出积极的效果lukS-F和中央社基因,分别。Eigthy-five菌株表达荚膜多糖血清型8。六种不同pulsotypes被歧视pulsed-field凝胶电泳(但是脉冲场凝胶电泳的出现)和三个主要组CA-MRSA菌株(1、2和4),同意表型和基因型的特征。组1株(pulsotype CP8 +,和金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素(PVL) +)是最常恢复和表现出但是脉冲场凝胶电泳的出现带模式与其他CA-MRSA菌株先前孤立在乌拉圭和巴西。三年之后第一个当地CA-MRSA报告,这些菌株仍然生产皮肤和软组织感染证明这community-associated新兴的稳定性随着时间的病原体。
1。介绍
金黄色葡萄球菌有能力建立一个广泛的人类宿主的相互作用。它可以被微生物菌群的一部分,或者导致多种疾病从轻微损害皮肤和软组织感染严重威胁生命的疾病,如坏死性肺炎、菌血症、骨髓炎、中毒性休克综合征,脑膜炎(1]。金黄色葡萄球菌港口几个毒力因素包括surface-associated丰富,分泌exo-proteins和毒素2- - - - - -5]。另一个重要的特点金黄色葡萄球菌是获得抗菌药物耐药性的能力。耐甲氧西林的第一隔离金黄色葡萄球菌(MRSA)于1960年报道,此后耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的流行增加了所有关注区域,与不同的数据即使在同一个国家(6,7]。甲氧西林耐药性是授予的台面式晶体管基因编码的额外penicillin-binding蛋白质,即2 (PBP2a)减少了亲和力内酰胺代理。这个基因位于变量大小的可动遗传因子称为葡萄球菌盒式染色体mec(鳞状细胞癌mec)。到目前为止,七个类型和几种亚型的鳞状细胞癌mec特点是(8- - - - - -11]。
自1990年以来,越来越多的情况下由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在社区已报告,尤其是在儿童和年轻人没有古典参与罹患卫生保健相关耐甲氧西林病危险因素金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)感染12- - - - - -15]。这些被称为CA-MRSA (community-associated耐甲氧西林菌株金黄色葡萄球菌从HA-MRSA)来区分它们。通常HA-MRSA菌株对其他抗生素不同-lactams,而CA-MRSA大多只对甲氧西林耐药。港SSC HA-MRSA隔离频繁mec类型II和III而CA-MRSA菌株携带类型IV, V, VI和七世。最后,与HA-MRSA不同,多数CA-MRSA菌株携带lukS-F金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素基因代码(PVL) [9,16]。
此前,马等。17]报道的结果CA-MRSA爆发发生在乌拉圭在2002 - 2003之间。本研究观察到的情况下告知孩子,年轻人和囚犯。疮感染和脓肿是最普遍,其次是汗腺炎和蜂窝组织炎。
本研究的目的是建立CA-MRSA菌株的表型和基因型的特点从皮肤和软组织感染。
2。材料和方法
我们分析了213年金黄色葡萄球菌菌株获得了2004年12月至2005年11月从213年门诊病人的皮肤和软组织感染(SSTI)。这些菌株被从四个不同的实验室中恢复过来,他们三个位于蒙得维的亚大都会区,另一个位于400公里蒙得维的亚。
每个病人的临床和流行病学相关信息收集的医疗记录和病人访谈。对抗菌药物的敏感性是由磁盘扩散法按照临床和实验室标准协会指南(18]。苯唑西林测试包括抗生素,头孢西丁,环丙沙星,四环素、庆大霉素、利福平、甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑、氯霉素、万古霉素、红霉素、克林霉素(Oxoid有限公司,贝辛斯托克,汉普郡,英国)。金黄色葡萄球菌写明ATCC 25923菌株作为质量控制。双盘扩散试验进行确定诱导克林霉素电阻()[18]。
对莫匹罗星和梭链孢酸也由磁盘扩散法进行测试。结果解释根据福克斯等。(19)和法国标准莫匹罗星和梭链孢酸,分别为(20.]。
中等收入国家新青二和万古霉素是由琼脂稀释法(18]。
九十的213株被定义为CA-MRSA基于病人的流行病学分析21)和抗生素敏感性简介:cefoxitin-resistant和容易受到甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑,环丙沙星,四环素和庆大霉素。这些90 CA-MRSAstrains进一步分析如以下所述。
2.1。毒力因子识别
α-溶血素检测按照程序所描述的库珀et al。22]金黄色葡萄球菌木头46株作为一个积极的控制。的存在溶血素通过演示确定溶血增加羊血琼脂平板在37°C孵化24小时然后在4°C为其他24小时(加热溶菌作用)。CP打字是由殖民地CP5 CP8-specific抗体,免疫印迹方法被李et al。23]。这个测试菌株表现出消极的反应被免疫扩散后调查。每个应变测试至少两次和隔离没有反应CP5和CP8抗体被定义为nontypeable (NT)。的存在cap5或cap8基因在NT菌株是由PCR扩增所描述的其他地方24]。
2.2。基因分型
使用向导细菌DNA从孤立的殖民地获得基因组DNA (Promega准备工具包。美国威斯康星州麦迪逊)添加20毫克/毫升溶葡球菌酶(σ化学)在细胞溶菌作用步骤25]。的存在中央社,和陆- - - - - -lukF基因是由PCR扩增26- - - - - -28]。
鳞状细胞癌mec打字是由多重PCR方法只有23日属于group1的隔离和四组4株(在下面描述)10]。
2.3。Pulsed-Field凝胶电泳(但是脉冲场凝胶电泳的出现)
片段的DNA macrorestriction和分离但是脉冲场凝胶电泳的出现进行了使用标准化的过程(29日]。DNA与SmaI消化(新英格兰生物学实验室)。但是脉冲场凝胶电泳的出现条件6 V / cm在11日23小时3°C, 5到35秒的脉冲。电泳都使用一个厨师II仪器博士(美国加州Bio-Rad,大力神)。乐队模式是标准后的视觉解释Tenover et al。30.]。
3所示。结果与讨论
的台面式晶体管基因被发现在90年CA-MRSA菌株进行了分析。不过,3的90株苯唑西林显示抑菌圈直径13毫米。这些结果与前面描述的其他作者关于头孢西丁30的最佳性能苯唑西林g磁盘和1g磁盘的筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌表型授予的台面式晶体管基因(31日,32]。苯唑西林的麦克风CA-MRSA菌株的范围从4到32用麦克风g / mL90年16g / mL,与异构抗性表型一致。这些发现苯唑西林同意报告显示麦克风CA-MRSA菌株低于观察HA-MRSA孤立的值(33]。
24 90(26.6%)显示诱导macrolide-lincosamide-streptogramin CA-MRSA菌株B ()双盘扩散电阻的测试。这图类似于通过Patel et al。34),根据这些作者建议,可能是因为在乌拉圭CA-MRSA盒式IV的优势菌株(17这没有嗯与诱导相关的基因表现型。在这方面,二十三CA-MRSA菌株属于组1(在下面描述)显示SSCmeciv型,而四组4株鳞状细胞癌mec元素二型。
两个分离株耐氯霉素和利福平。耐利福平有一个强有力的antistaphylococcal活动,然而发展总是当它作为单一疗法治疗金黄色葡萄球菌感染。三个90株耐莫匹罗星而所有菌株都容易梭链孢酸。这些结果表明,梭链孢酸可以作为局部经验辅助治疗鼻CA-MRSA根除。
所有CA-MRSA菌株研究对万古霉素敏感的磁盘扩散试验和显示的中等收入国家2克/毫升。
所有的CA-MRSA隔离α溶血素但没有生产溶血素。
八十五隔离CP8表示,一个是CP5-positive和四个菌株NT。这四个NT隔离着cap8基因。这种低患病率的CP5 CA-MRSA(1%)可以解释,至少部分,没有死亡病例中观察到这组患者(35]。
百分之九十六的CA-MRSA菌株表现出积极的PCR扩增lukS-F基因引物和所有菌株产生了积极的放大的结果中央社基因引物。PVL生产与CA-MRSA菌株有关隔绝皮肤感染和坏死性肺炎患者(28,36]。CA-MRSA相比,HA-MRSA菌株一般不港lukS-lukF基因。因此,PVL基因的存在成为一个好地方CA-MRSA标记。关于中央社基因,一些报告描述了一个这种基因的存在和发展之间的联系与深部组织感染相关的菌血症(26,37]。在这项研究中我们没有进行血培养后续的病人感染CA-MRSA菌株,没有本地信息的进化引起的感染中央社负金黄色葡萄球菌菌株。
六种不同pulsotypes (f)(图1(一)但是脉冲场凝胶电泳的出现)被确定。90株属于Eigthy-two pulsotype一群(图1(一)巷1和表1);4隔离包括在pulsotype B, C, D, E, F pulsotypes被表示为一个隔离。三个小亚型在pulsotype (A1、A2和A3)(图1 (b)根据Tenover)被确定的标准。Pulsotype隔离展出一个乐队模式相同的隔离被马et al。17),是最经常发现在乌拉圭(UR06 ST30)在2002 - 2003年期间。视觉上,pulsotype乐队模式(图1(一)community-associated巷1)相似,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在西南太平洋地区克隆报道。这一发现此前曾报导过类似里贝罗et al。38在阿雷格里港,巴西,它可能在协议区域传播的大洋洲西南部太平洋克隆(OSPC)。
(一)
(b)
考虑到但是脉冲场凝胶电泳的出现结果,诱导表型,PVL基因的存在和CP(表血清型1),但我们的研究发现,几组CA-MRSA菌株流传在乌拉圭期间的分析。90株的主要组(62)提出了以下特点:pulsotype, CP8 PVL。23这些62株鳞状细胞癌meciv型。这组还包括三个NT菌株但为PCR阳性结果cp8基因(表1)。这些结果可能以茎序列类型(MLST)或作为补充spaA -打字。
总之,三年后的第一个发现CA-MRSA隔离在乌拉圭这些菌株仍然生产SSTI,说明这个紧急的稳定性随着时间的病原体,以及其出色的适应社会环境。头孢西丁磁盘测试会比新青二磁盘更可靠的测试筛选的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌表型授予的台面式晶体管基因和梭链孢酸可以作为局部经验辅助治疗鼻CA-MRSA根除。我们的研究结果还表明,PVL基因的存在表现为有用的地方标记CA-MRSA菌株的检测。在这项研究中我们确定了三个主要组CA-MRSA菌株(1、2和4)定义根据表型和基因型的特征。最常见的团体,G1,但是脉冲场凝胶电泳的出现模式相同CA-MRSA菌株先前孤立在乌拉圭和巴西。
确认
这项工作被授予部分支持从这场扇形de Investigacion Cientifica (CSIC) 2004 - 23日大学de la那时,蒙得维的亚,乌拉圭,赠款ANPCyT皮克特人05 - 32577和UBACyT M070 DOS。