破译哮喘与蛋白质生物标记分析技术

文摘

哮喘是一种慢性气道炎症性疾病,导致支气管高反应性,每一个接触过敏原。现在清楚的是,哮喘不是一个单一的疾病,而是一种多方面的综合症,结果从不同的生物机制。哮喘是进一步的问题考虑到疾病包括许多变体,每种方法都有自己的病原学和病理生理的因素,包括不同的细胞反应和炎性表型。这些方面做出快速、准确的诊断(更不用说)治疗哮喘极其困难的。蛋白质生物标记物可以作为强大的检测工具在基础研究和临床应用。最近的努力从生物医学研究人员已经开发出的技术平台,如细胞因子抗体阵列,使用并用于进一步的全球分析哮喘生物标志物的研究。在本文中,我们讨论潜在生物标志物参与哮喘哮喘的病理生理的过程和最终的发病机理,这些生物标记物是如何被利用,以及如何进一步测试方法可能有助于提高诊断和治疗压力,目前哮喘病人受苦。

1。介绍

1.1。哮喘

哮喘是一个越来越流行的慢性疾病进行的航空公司,影响全世界超过3亿人的生命。常见的哮喘症状包括粘液生产过剩,情景气道阻塞,支气管代(BHR),以及肺功能降低。这种疾病具有较高的发病率,在富裕的社区相比,更多的贫困地区,8 - 10%的成人和儿童的影响。这么高的患病率会导致相当大的发病率和受影响的家庭(也会造成重大的经济负担1,2]。增加经济负担估计每年花费超过180亿美元在美国仅对直接医疗费用和间接的生产力损失(3]。鉴于目前的疾病发展趋势,哮喘可能影响到2025年超过4亿人如果没有进一步干预是发展(1,2]。

传统上哮喘分为两个表型基于潜在疾病引发,过敏性哮喘,或nonallergic哮喘。孩子主要是受到过敏性哮喘(外在)的影响,而大约50%的成年人有过敏性哮喘。过敏性哮喘通常表现为高血清2型CD4 IgE水平和主要⁺辅助T细胞(Th2)响应(4]。这种类型的哮喘通常开始痒,呼吸短促,肺部炎症,往往导致鼻炎,哮喘症状在许多过敏原暴露(5]。相反,nonallergic(内在)哮喘常常出现在以后的生活中,而不是通常与高水平的antiallergen IgE有关。内源性哮喘更与疾病肥胖或压力等因素有关,焦虑,剧烈运动,甚至寒冷的空气。检测不到发炎的迹象nonallergic哮喘的本质,它通常是更难以治疗,类固醇和其他常见治疗方法不一样有效的哮喘引起的环境和免疫触发器(6]。

最近的工作在过去二十年中已经给社会增加对哮喘的病理生理性质的理解,导致疾病的更好的分类分组称为endotypes [7]。这些endotypes具有多个疾病相关因素包括疾病的临床特性、遗传易感性、环境危险因素和疾病发病的年龄(6]。哮喘的异质性是因此日益表明哮喘本身更多的是一种综合症,而不是一个单一的疾病(8]。这种异构的疾病类型,然而,早期、准确的诊断哮喘越来越困难。目前,疾病的主要手段确认依靠整体的测试肺功能(肺量测定法),但这种方法是有限的,有一个高度的变化在病人组气道阻塞的程度。此外,测量肺功能可以反映疾病的病理严肃但不可能精确对应不同的疾病endotypes创建只有部分病人的疾病的快照。

治疗哮喘通常由全身性类固醇,这种方法已经雇佣了30多年。然而,并不是所有哮喘患者应对这种广义治疗,进一步强调这样一个异质性疾病的本质。当考虑的高成本和不受欢迎的副作用甾族的疗法,需要更好的endotype筛查,提供更好的有针对性的治疗有改善病人状况(9,10]。蛋白质生物标记物最近探索和发现的疾病,而这些标记有很大的优势在临床诊断,疾病进展预测,和个性化的治疗。鉴于这些标记通常是孤立的和从无损检测手段(血清、血浆、尿液等)的限制需要昂贵的操作或手术,他们可以一起进行更多的历史测试提供更完整的诊断病人的资料。事实上,许多生物已经在使用的心血管疾病和某些癌症的诊断和治疗,以及其他复杂的疾病。社区取得的进步在过去的25年了解哮喘疾病的细胞和分子机制,更多的哮喘生物标志物可以指日可待。

1.2。生物标志物

与大多数疾病,早期、快速、准确评估病人的条件大大改善长期预后和/或生存。为了提供更准确的评估一个人的疾病状况/状态,全面、准确的医学诊断是必要的,和哮喘也不例外。这样一个具体应该允许哮喘的诊断测试更准确地定义疾病表型,从而导致更多的靶向治疗的最终目标和准确的预测。记住这个目标,生物标志物,定义为可衡量的指标,可以定义一个生物状态等疾病,感染,或环境暴露,引起巨大关注。在基础研究和临床研究。有许多类型的生物标记物对各种疾病的途径,其中一些甚至被医学界作为疾病检测的标准方法。其他潜在的生物标记物,如小分子核糖核酸,正迅速崛起为强大的疾病生物标记(11,12]。目前发表的生物标志物包括小分子核糖核酸、小生物代谢物,存在/没有细胞的数量,或各种分子或酶的水平在一个已知的样本。

鉴于他们在疾病发展和不断变化发展,蛋白质提供丰富的疾病识别潜在生物标志物池(13]。甚至可以提供多个蛋白质水平的疾病信息,它们可以在不同疾病状态差异表达和处理。通过测量蛋白质含量的变化在任何生物状态,我们可以直接比较健康的状态,各种疾病状态,收集大量的信息关于这些蛋白改变的疾病。这种独特的洞察力可以显示增加或减少表达水平是否存在或是否有规范的偏差,可能说明有分歧在病人的状况。例如,C反应蛋白(CRP)是一个特别有价值的生物标志物的炎症中炎症反应引起的感染期间,通过自身免疫系统疾病如红斑狼疮和类风湿性关节炎,或在某些癌症14]。

其次,微分蛋白质加工、改变蛋白质折叠或蛋白质糖基化,可以偏离正常的转译后的修改在疾病。τ聚合成配对螺旋细丝在阿尔茨海默病(AD)和其他tauopathiesτ蛋白磷酸化在大脑中增加有关(15]。同样,抗体的发展上,与自身抗体与类风湿因子(RF)在RA,可以另一个分子识别疾病的发展和进步。这些可以或者作为宝贵的疾病标记和突出独特的洞察力,蛋白质可以为诊断提供生物学途径和目的。

生物标志物的应用并不仅仅适用于临床诊断和预后也感兴趣的领域的基本生物学疾病,随着这些标记也可以用来评估药物毒性和有效性。23到2012年,美国食品和药物管理局已批准蛋白质肿瘤生物标志物的临床使用,其中9中使用不同的肿瘤诊断、监测疾病进展,6和5是应对治疗的预测。24生物标志物在2007年被批准为药物评价和研究,包括各种效果与毒性和治疗效果(http://www.fda.org/)。近年来生物标志物批准已经放缓,然而,即使在临床前研究和临床试验研究继续识别它们并把它们使用。鉴于这种衰落,被假定“低挂”生物标记已经被发现。这些早期的生物标记物更容易找到他们单射频等与特定疾病相关蛋白质。生物标志物来更有可能会更加复杂,有多个蛋白质或其他分子参与各种疾病状态,而不是一个单一的标记。因此这多因子的复杂性将需要一个新工具,可以同时测量多种因素在一个样本。

1.3。细胞因子

细胞因子是蛋白质研究的家庭,因为他们拥有无数的地方和系统功能,还提供了巨大潜力在生物医学中的应用。除了扮演关键的角色在许多正常的细胞事件,细胞因子参与启动还指出,发展,和疾病的进展,从无害的生命危险。出于这个原因,细胞因子一直探索和研究潜在的疾病生物标志物。

细胞因子分泌蛋白质生成或传送信息的信号。这些蛋白质包括干扰素、白细胞介素、趋化因子、生长和分化的因素,赞成和抗血管新生因素,发病,粘附分子和细胞外基质蛋白。细胞因子发挥关键作用的细胞和身体机能,从体内平衡,成长,和伤口愈合,炎症,免疫和血管生成16- - - - - -23]。鉴于其在体内广泛作用,也就不足为奇了,细胞因子与癌症相关,糖尿病,自身免疫性和传染病。有人建议,慢性炎症中发挥着关键作用在神经退行性疾病,如阿尔茨海默氏症和帕金森氏症的疾病,胰岛素抵抗和2型糖尿病、动脉粥样硬化等心血管疾病(16,24- - - - - -27]。

通常,细胞因子作为复杂网络的具体控制信号通路。个人甚至全球信号调制通过特定细胞因子受体彼此。许多细胞因子多效性的,也就是说,一个细胞因子可能产生广泛的影响在不同的细胞和组织类型(28]。白细胞介素- 6 (il - 6),例如,刺激巨噬细胞和促炎因子的作用生成1型辅助T细胞反应,但也可以作为抗炎药通过抑制细胞因子影响的tnf水平,il - 1,其激活IL-1ra和il - 1029日]。这多效性的本质常常导致细胞因子冗余,在多种细胞因子在单个细胞类型有类似的效果。例如,il - 4、IL-5 IL-13也有类似的活动,诱发Th2细胞的分化28]。一些细胞因子的冗余特性及其信号事件是由于在蛋白质序列同源性或使用相同或相似的受体类型,每个生成相同的信号通路在细胞因子绑定。然而,其他细胞因子有着最小的序列同源性,但仍导致相似的下游信号事件,可能由于融合信号通路或微分分布的细胞受体在靶细胞(30.]。

批准的疾病治疗工作通过特定的细胞因子通路,直接针对细胞因子激活/封锁或通过使用重组细胞因子,以创建一个特定的响应在病人。这些治疗包括生长因子,如上皮生长因子受体(EGFR)在许多肿瘤中31日),肿瘤坏死因子-α(TNFα),是一个关键的促炎的蛋白质在许多自身免疫性疾病(32),α干扰素(干扰素α),用于治疗慢性病毒性肝炎(33),和艾滋病卡波济氏肉瘤34),等等。因为细胞因子生物学的复杂性,单一的细胞因子分析和评价已经成为限制其能力诊断、评估、治疗疾病,需要更多的多路复用细胞因子平台用于考虑疾病的复杂性,涉及多种细胞因子的扰动。

2。生物标志物发现哮喘

通常在哮喘反应,炎症在气道上皮细胞中起着重要的作用疾病症状和进展。这衬里充当主机之间的主要界面和环境刺激引起过敏高反应性,无论是从微生物、微粒,污染物和氧化剂。这些环境的侮辱导致病原体识别受体和/或已生成特定的抗体,刺激炎性细胞因子和趋化因子的产生。污染物和氧化剂一般另一方面刺激炎症反应通过直接影响细胞或蛋白质的功能,脂质和核酸,一起导致细胞应激和损伤(35- - - - - -38]。在哮喘患者,持续的炎症刺激调节气道上皮的功能,与先天和适应性免疫系统,进一步增加慢性过敏反应的发展。一旦足够先进,支气管代(BHR)(的趋势平滑肌细胞在哮喘患者对非特异性刺激如寒冷的空气和运动),粘液生产过剩,气道壁重构,气道狭窄发展的慢性接触(39]。

哮喘的immunohistopathologic特性包括上皮损伤和炎性细胞的浸润,通常嗜酸性粒细胞、肥大细胞和淋巴细胞进入肺。自适应免疫反应的发展通常是Th2 CD4极化⁺T细胞反应,表现为il - 4的表达升高,引发和il - 10。这种T细胞极化优先促进B细胞活化和生产支持过敏IgE抗体和免疫球蛋白g同形像。血清IgE的高程和相应增加渗透嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞和肥大细胞都是典型的过敏性哮喘患者的标志(3,39]。然而,由于血清IgE水平也在加剧nonasthma相关糖甙,血清IgE水平可能不是一个合适的哮喘生物标志物单独考虑时(40]。因此,有必要寻找代孕这个哮喘endotype的生物标记物。概述在表1,由上皮细胞因子释放和激活炎症细胞的数量和数字是最感兴趣的方面(生物标记物)对哮喘的研究,因为他们招募炎症细胞气道和改变气道居民细胞的激活状态41]。

患有哮喘和收集的数据也在哮喘小鼠模型由模型的吸入抗原卵白蛋白(OVA)表明,il - 4, IL-5, IL-13有潜力作为过敏性哮喘生物标志物概要文件。肺Th2极化一直被视为典型的过敏性哮喘的特征,已由研究支气管肺泡灌洗(BAL)液、支气管活检,从哮喘病人痰42- - - - - -45]。轻度到中度哮喘患者存在高浓度的il - 4和IL-5 BAL液体,和肺隔离发现提高CD4 + T细胞的数量和高度的气道嗜酸性粒细胞(46]。谨慎的枚举的il - 4水平,IL-5, IL-13一起和嗜酸性粒细胞的水平在血清和组织可以分类哮喘endotypes和(子集40,47]。

哮喘小鼠模型支持il - 4的角色,IL-5, IL-13在疾病发展,这些细胞因子的基因敲除小鼠显示总体减少哮喘症状(48]。在老鼠中,il - 4的发展是必要的Th2 CD4 T细胞反应,结果IgG1和IgE抗体卵子(过敏原刺激)和启动的血管壁嗜曙红细胞外渗(48,49]。il - 4也导致嗜碱性粒细胞和肥大细胞的启动和激活,导致炎症的进一步释放组织胺和白细胞三烯,进一步加剧和延长慢性疾病。

IL-13报道中发挥不可或缺的作用越来越多的支气管代(BHR)和杯状细胞增生,引起的黏液蛋白MUC5AC的表达和MUC5B升高,最终导致粘液生产过剩和气道阻塞50,51]。与高水平的严重哮喘病人血嗜酸性粒细胞,治疗用单克隆疗法调节信号的il - 4受体(dupilumab;Regeneron制药),肺功能显著改善。这种治疗,过敏性皮炎发作的频率也明显降低,这样药物收到FDA在2014年突破治疗名称(52]。类似的效果被认为从lebrikizumab (Genentech),抗体阻断IL-13人类endotype哮喘(53]。最后,IL-5促进交易和维护肺组织内的嗜酸性粒细胞通过直接从循环,也促进嗜酸性粒细胞招募嗜酸性粒细胞分化的骨髓。人源化单克隆抗体,阻止IL-5信号受体(mepolizumab;葛兰素史克)已完成三期试验和正在等待FDA和欧洲间隙严重嗜酸性哮喘患者(54]。当IL-5被阻塞,改善气道重塑被这些改善与嗜酸性粒细胞减少发生了积累,进一步暗示有加剧作用IL-5和肺嗜酸性粒细胞的水平(55]。

嗜酸性粒细胞诱导BHR直接通过嗜伊红的过氧化物酶和由此产生的炎性氯和溴离子的增加,都显著影响过敏原暴露期间气道重塑。加上树突状细胞抗原呈递的特性,自适应免疫反应是准备应对重复抗原侮辱和气道代答。嗜酸性粒细胞哮喘的基因敲除小鼠模型已经证实这个细胞群的作用,导致气道壁重构和牙龈膜增厚56,57]。嗜酸性粒细胞在肺组织招聘驱动部分的嗜酸性粒细胞肺粘膜和间质由于气道IL-5生产,以及生产eotaxin (CCL11) eotaxin-2 (CCL24)和eotaxin-3 (CCL26) [58,59]。Eotaxins CC趋化因子特异性高嗜酸性粒细胞数量给定这个细胞类型优惠eotaxin受体的表达、CCR2, CCR3, CCR5。Eotaxins被首次发现的净化BAL流体从allergen-challenged,致敏豚鼠,,他们的发现之后,他们很快就发现在老鼠和人类60,61年]。

在动物模型的肺过敏性炎症,嗜酸性粒细胞积累与当地eotaxin生成和分化,从循环,增加招聘的嗜酸性粒细胞和嗜酸性粒细胞的快速扩散在骨髓内(62年,63年]。eotaxin表达的增加网站的过敏性炎症已经观察到在过敏性哮喘患者和nonatopic哮喘病患者,也见过水平增加病人痰液(64年- - - - - -67年]。即使在职业性哮喘患者,增加eotaxin mRNA水平在痰液白细胞已报告,和中村等人报道eotaxin水平之间的相关性和妥协哮喘病人的肺功能68年,69年]。同样,据报道,急性哮喘患者显示明显高于血浆eotaxin水平相比,那些有稳定的哮喘(70年]。

还有两个功能eotaxin同系物,eotaxin-2 eotaxin-3,显示40%的同源性,eotaxin在氨基酸水平,也具有类似的eosinophil-selective属性通过CCR3信号(71年,72年]。化验的嗜酸性粒细胞趋化作用,eotaxin eotaxin-2表现出类似的效能的能力招募嗜酸性粒细胞。增加eotaxin-2 mRNA水平在支气管活检已报告从过敏性和nonatopic哮喘患者65年]。eotaxin-3的趋化作用还不太清楚不同研究之间有相互矛盾的结果。在一个调查中,eotaxin-3显示只有大约10%的活动eotaxin [72年];然而,教务长等人最近的一项研究发现,eotaxin-3比eotaxin更有效的化学引诱物,eotaxin-2嗜酸性粒细胞,特别是在哮喘患者相比,健康志愿者(73年]。单独或集体,这些嗜酸性粒细胞趋化因子可能是潜在生物标志物的诊断和预后嗜酸性粒细胞哮喘具有哮喘患者组之间特别是eotaxin概要文件可以被识别。

过敏原诱导表达单核细胞化学引诱物含有(MCP-4;CCL-1)在哮喘气道最近也被证明是一个潜在的生物标记(74年]。MCP-4信号通过一些受体,包括CCR2, CCR-3, CCR5和是一个有力的化学引诱物,表明哮喘相关的细胞群包括嗜酸性粒细胞、单核细胞、嗜碱粒细胞(65年,75年,76年]。MCP-4信号诱导从IL-3-primed嗜碱性细胞释放组胺,激活嗜酸性粒细胞呼吸破裂。在过敏性炎症,MCP-4水平显著提高哮喘痰,BAL流体,呼吸道上皮细胞和细胞内的航空公司(77年,78年]。过敏原引起的挑战后,肿瘤坏死因子α和il - 1β触发释放MCP-4上皮和内皮细胞的发炎,进而促进其他类型的哮喘的招聘诱导炎性细胞和细胞因子的产生。

MCP-4表达式的恶化作用在哮喘最近支持大规模哮喘研究。使用240正常人、356名慢性的哮喘患者和30哮喘病人需要紧急治疗,研究发现,等离子体相比,慢性的哮喘病人MCP-4水平明显高于正常患者(399 pg / mL和307 pg / mL) (74年]。此外,> 218 pg / mL MCP-4水平标志着一个病人组患哮喘的风险增加(优势比)。在急性哮喘病人,MCP-4水平更高的在恶化事件相比,慢性但稳定的哮喘患者(513和355 pg / mL)。总之,系统性MCP-4水平可能是一个优秀的哮喘生物标志物可以预测对哮喘,哮喘发作的严重程度,因此潜在的哮喘控制药物的功效。

发炎上皮公布的另一个强大的细胞因子,与哮喘发作就是胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)。TSLP需要挂载一个正常的CD4 T细胞反应,它直接作用于天真,但CD4记忆T细胞,促进其增殖反应同源抗原(79年]。然而,TSLP与树突细胞群体的互动有利于影射CD4 T细胞的极化Th2表型(80年,81年]。TSLP诱导树突状细胞的关键变化,这样,在同源T细胞抗原结扎,DCs也晋升为表达趋化因子配体17 (CCL17)和CCL22,以及诱导表面表达OX40 12个配体(81年,82年]。与其他epithelial-derived音乐会炎性细胞因子,如肿瘤坏死因子α和il - 1β,TSLP激活肥大细胞反过来也可以产生细胞因子,增加Th2极化的优先发展41]。在缺乏TSLP受体基因敲除的小鼠实验中,Th1反应升高,包括细胞因子水平的增加白介素- 12 (IL),干扰素-γ和免疫球蛋白G2a (IgG2a),也显示较低的表达Th2细胞因子il - 4、IL-5, il - 10, IL-13。此外,TSLPR KO小鼠挑战与吸入抗原展览减少肺部炎症,因此,可以恢复如果野生型CD4 T细胞(80年]。肺部炎症的回归表明TSLP也可以直接在CD4 T细胞在炎症反应。集体TSLP似乎发挥重要作用的发展呼吸道过敏反应和监测水平的患者样本可以提供另一种疾病生物标志物(83年]。

IgE水平在过敏性哮喘患者疾病可能是一个有价值的指标,IL-25和IL-33可能更好的代理分层哮喘疾病的生物标记物,甚至疾病。为了应对气道损伤或过敏原刺激,上皮细胞能产生IL-25 IL-33,进而可以在附近先天淋巴细胞(84年]。天生的人口接收这些信号,可以启动脱粒细胞因子和趋化因子加载颗粒,释放额外的过敏原加剧的因素。这些细胞因子包括TSLP、il - 4、IL-5 IL-9,所有古典Th2两极分化的细胞因子和细胞因子显著影响肺部炎症的发展。有趣的是,同样的人口能产生相同的Th2细胞因子(IL-5、IL-9 IL-13)小鼠单独感染,促进嗜酸性的直觉反应和增强粘液生产(85年]。这些派生的先天淋巴细胞CD4 T细胞,但不像Th2极化表达抗原特异性受体(86年- - - - - -88年]。它可能是这些细胞负责抹布KO小鼠(即的能力。,mice lacking T and B cells) to generate a potent Th2-like allergic response and eosinophilia independent of any adaptive immune response. Data suggests that these cells originally develop from common lymphoid progenitors, and, following their initial allergen exposure, they can rapidly be activated to induce the features of atopic asthma following antigen reexposure [89年]。

IL-9最近也被评价为其作为哮喘生物标志物由于其高度表达哮喘病人的肺。IL-9功能在多个潜在哮喘角色,促进柱状细胞生长和发育启动il - 4的表达和随后的B细胞生产的过敏抗体(90年,91年]。哮喘小鼠模型突出了IL-9的角色,作为治疗哮喘小鼠中和抗体IL-9明显减轻症状(92年,93年]。这也封锁治疗减少气道重塑的水平也发生在慢性哮喘和减少浸润炎症组织肥大细胞进入的水平(90年]。最近的证据表明IL-9可能源自上述先天淋巴细胞群,而不是直接从T细胞(94年,95年]。然而,IL-9的贡献(s)哮喘疾病,先天的或适应性细胞群,还有待确定。anti-IL-9治疗而减轻在小鼠模型提供了一个前景的潜在的治疗和疾病监测,治疗效果尚未完全评估哮喘病人(96年]。

许多其他哮喘的新生物标志物可能可以从当前的文学,以及正在进行的研究。例如,CCL-17 (TARC)是一个树突和上皮细胞中细胞因子最初发布在过敏原接触。CCL-17是一个有力的化学引诱物,CCR4表达Th2细胞然后前馈到过敏原派生的炎症反应。最近的研究发现,CCL-17水平显著提高哮喘病人痰液和血清样本中也提升儿童患有哮喘(97年,98年]。有趣的是CCL-17也可以作为治疗的有效性的指标,作为其水平显著下降甾体治疗后(98年]。

细胞因子生物标志物因此举行重大的承诺为他们潜在的预测能力,诊断和监测哮喘疾病。因为底层的异构性哮喘的表型和细胞因子生物学的复杂性,检查一个生物标志物,甚至少数分子,检测和/或治疗哮喘病人是不现实的。与他们的能力在非侵入式量化样本类型,如血清、痰,甚至呼出气息冷凝物,细胞因子可以补充目前的诊断和监测措施,给病人疾病的一个更完整的资料。结合这两种方法的病人分析,比较健康和患病的病人可能更好地帮助分层各自疾病潜在的生物标记物。

3所示。哮喘的新发现抗体阵列技术

3.1。抗体阵列技术

传统上,细胞因子/蛋白质介质的测量包括生物的使用,酶化验,或者免疫测定。因为这些单一目标检测,同时检测的目标是不可能的,这些化验的使用需要一个相当大数量的样品和/或预算。同时,研究者必须已经相当具体假设蛋白生物标志物来评估的。这使得真正发现未知的越来越困难。如果最初选择标记不出现在不同样本建立组织(尤其是小样本组),整个样本集或实验可能会丢弃,同时一些与他人结合这些标记可能仍未被发现的。

在过去的20年中,发现、描述和应用生物标志物在临床和基础研究领域的爆炸与一些关键的进步和发现。通过DNA测序技术的可用性,人类基因组计划的完成,和基因测序平台,全面快速检测的基因样本现在是可能的。高通量基因微阵列技术极大地扩大了能够定义单一样本中核酸疾病的生物标记物,和现在一样如此蛋白质生物标记物。蛋白质微阵列已经改编自DNA微阵列平台和提供多路复用能力的蛋白质生物标志物发现和高通量的方式这样做。这些蛋白质数组,数组也称为抗体或抗体微阵列,其中一个最有前途的平台突破单一生物标志物领域目前陷入瓶颈。

抗体阵列的设计原则通常是基于一个三明治建立ELISA免疫测定或direct-labeling目标蛋白质的方法。类似于常见的单一目标夹心ELISA平台、多路复用抗体阵列平台利用抗体,在捕获抗体固定在玻片表面或硝化纤维膜,搭配了一个标记目标解决方案(图中的特定检测抗体1(一))。该方法具有良好的特异性和敏感性的双重约束力的目标信号检测的要求。捕获抗体特定的靶蛋白的一个地区,而检测抗体识别不同地区的目标,结合消除抗原决定基几乎所有潜力大。然而,组合和蛋白质的数量目标来衡量每个数组是有限的,因为大检测抗体之间在一个数组中。为了克服这个限制,多个独立的阵列板不重叠的,大可以使用兼容的抗体对允许越来越多的细胞因子被测量(99年]。

另外,基于标签的策略可以用来删除需要检测抗体和显著增加潜在的数组的大小(One hundred.]。在基于标签的方法,样品本身直接贴上一些衬底,稍后可以测量(例如生物素),在捕获抗体仍排列到固体表面(图1 (b))。在这种情况下,有敏感性的增加,双绑定要求删除,但同时损失一些特异性的与一个标准的夹心ELISA检测对格式。只有一个单一的目标探测所需的抗体,基于标签的技术特别适合小分子肽/或更多新颖的蛋白质的抗体可能不可用。这两个平台类型被广泛发表在疾病生物标志物的发现和分析并提供市场上可用的最大同步阵列(101年,102年]。

载玻片基于阵列提供了几个优势相比,基于膜或96 -多路传输平台。功能点目标抗体直径< 200μm允许基于玻璃抗体阵列更小的规模和目标探测需要更少的样本,同时也允许他们在大量机械印刷适合高通量分析(103年]。载玻片支持格式的另一个优点是使用荧光信号读出。荧光检测提供一个更大的信号检测的线性范围和优越的信号稳定长期相比,化学发光检测技术(103年- - - - - -105年]。这个平台是由许多公司提升和探索包括RayBiotech Abcam, Sigma-Aldrich,研发系统,满月生物系统,Gentel,绘画纸,Aushon,中尺度和Quansys。这些强大的平台,近年来被广泛出版以来,其发展在2000年代早期,也被全面应用于临床和基础研究的生物标志物的发现(106年- - - - - -109年]。

3.2。新发现哮喘生物标记的抗体阵列技术

抗体阵列的应用在生物标志物的发现使得在许多疾病方面取得了重大进展,包括癌症、神经退化,心血管疾病,以及哮喘。如前所述,哮喘综合症的复杂生物学有关的细胞因子和趋化因子作为潜在疾病的生物标记物。额外的哮喘生物标志物的局限性是由于一系列单目标细胞因子生物标志物研究的有限使用或产生了不完整的定义进一步评估后的疾病。这就是多元分析这样一个广泛的吸引力,因为它提供一个大型nonbiased看大量的蛋白质样品中包括一系列广泛的蛋白质因子。发表的生物标志物,探索和/或发现与抗体阵列部分编译表2。的注意,抗体阵列都证实了先前提出的生物标志物的研究和也发布了一系列新颖的生物标志物。

最近,帕蒂尔等人使用抗体阵列研究血清学资料对中度和重度持续性哮喘的不吸烟者nonasthmatic健康对照组血清。使用50-target蛋白质多元阵列包括检测细胞因子,趋化因子,生长因子,这组发现,一些蛋白质可以作为潜在的疾病生物标志物(值得注意的是,FGF, HGF和SCGFβ中度和重度哮喘组)。除了地震-而且,这些生物标志物被发现与哮喘控制不佳正相关和负相关的生活质量评分(110年]。希望确定至关重要的炎症分子在COPD和哮喘,金等人分析了哮喘痰样本79目标多重数组。检测细胞因子中,哮喘病人痰显示处于含量严重超标,eotaxin-2, CCL18。有趣的是,CCL18的水平显著相关水平整体的嗜酸性粒细胞的痰样本,这是一个重要的潜在疾病的标志(111年]。这可能允许病人疾病的无创性和新颖的诊断测量从一个简单的痰样本也进一步凸显了CCL18哮喘疾病的作用。

考虑到大量炎症细胞进入肺部哮喘发作期间,非创伤性痰样本可能允许生物标志物检测潜在的肺内炎症。这个假设被Hastie测试等人使用煽动性的抗体阵列在一群哮喘病人严重哮喘研究项目。痰液样本表明,高浓度的嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞计数与肺功能下降和脑源性神经营养因子的细胞因子水平升高,IL-1b,巨噬细胞炎性蛋白质3 / CCL20与疾病严重度增加有关,也与增加中性粒细胞计数(112年]。同样Matsunaga等人也表现出很强的相关性之间的咆哮CCL5水平和FEV₁,以及表达的肿瘤坏死因子水平α和TGFβ与BHR (1113年,114年]。此外,这些细胞因子的表达水平也积极,特别是与哮喘病人的疾病症状和疾病严重程度。

一种非常独特的研究样本是最近由中村et al。使用呼出的气息冷凝物(EBC),这部小说相比,这组样本类型的入侵BAL流体样本从哮喘病人115年]。他们发现的细胞因子水平EBC,包括TNF -α和咆哮,明显与那些在病人的落下帷幕。BAL收集病人是一个极其不愉快和入侵过程要求病人的肺液的冲洗。然而,EBC买得起nontraumatic样本类型更容易获得,而且更经济可行的病人疾病的监测。作者还指出肿瘤坏死因子的水平——的相关性α和咆哮EBC样本与淋巴细胞的水平最终从球隔离。肺淋巴细胞计数的一个关键指标与哮喘疾病状态有关,所以EBC测量诊断疾病监测可能允许另一个选择。

沿着这些相同的实验线路,Matusunaga集团也使用大量抗体阵列监测哮喘病人接受皮质类固醇治疗的细胞因子配置文件(116年]。糖皮质激素患者显示CXCL10水平降低,增加水平的il - 4和咆哮而未经处理的控制,改善FEV和这些变化相关₁和整体气道阻塞。这些结果强烈表明,il - 4和咆哮水平EBC不仅可以作为预测生物标志物应用甾族的疗法的成功但也标志着细胞因子与潜在治疗靶点在疾病干预和监测。

像应用于其他疾病,炎症抗体阵列也一直在探索在疾病疗效评价的药物和其他疾病的指标。抗体阵列甚至被用于研究顺势疗法对哮喘疾病,像在平喘药芒果苷的影响。芒果苷是主要的生物活性成分Mangifera籼林恩。叶子和目前作为土著在中医治疗呼吸道疾病。研究芒果苷的影响,作者使用鼠标过敏原模型(卵子模型)来评估Th1 / Th2细胞因子的水平概要文件在疾病。芒果苷治疗炎性细胞大量嗜酸性粒细胞减少,减少了BAL流体PGD2水平,并降低血清卵白蛋白的水平具体IgE [118年]。抗体阵列的Th2差别分析证实了对这些相关细胞因子(il - 4、IL-5 IL-13),甚至upregulation Th1细胞因子促进干扰素-γ、2、il - 12在芒果苷治疗。这些结果表明芒果苷的潜力作为平喘药治疗和也可能表明其潜在的行动路线,因为治疗导致过敏Th2反应转化为更不会引起过敏的Th1反应类型。这些炎症阵列板,或者更广泛的面板,可以用来监测疾病的结果,其他平喘药药物进展和效果。

虽然针对炎症抗体阵列可能似乎是最明显的候选人哮喘疾病分析、其他数组也承诺在哮喘生物标志物的研究。多项研究表明,哮喘气道血管结构的数量和规模增加,造成气流阻塞和高反应性119年- - - - - -121年]。因此评价血管生成标记的多路复用数组可能的效用监测病人气道重塑。使用这个假说,BAL过敏性哮喘病人样本被发现含有严重超标的血管生成生长因子包括angiogenenin, VEGF, MCP-1 nonatopic相比健康控制。健康对照组相反显示,常见的抗血管新生因子的水平没有变化。proangiogenic效果证实了体外当同一组发现BAL取自哮喘病人可以支持小管船形成的coculture人类内皮细胞和真皮成纤维细胞。这艘船形成能力产生主要是由于中VEGF的存在球样品。这项观察表明一组血管生成标记,如血管生成素、VEGF, MCP-1,可以作为新的监测血管疾病的诊断面板建模和可能是一个好伙伴研究其他传统诊断措施(117年]。

4所示。结论

在过去的几年里已有大量的出版物提供具体的信息共同揭示了大量的生物通路参与哮喘的发病机制。最近的异构本质哮喘疾病已被确认和建议的存在许多疾病endotypes保证特殊诊断措施甚至特定疾病治疗的最佳结果。宿主免疫参与发展的多个方面,加重,最终慢性哮喘的本质。过敏性疾病发展的主要原因包括常见的过敏原,环境诱因,甚至呼吸道病毒。这些致敏创建特定疾病的结果,我们目前的理解疾病意味着每个可能需要一个特定的疾病治疗。理解这些个体疾病组和他们的根本原因是至关重要的疾病可能的最好的结果。

诊断措施目前围绕视觉检查和肺量测定法,但越来越多的研究发现,这两个方法是最好的哮喘疾病分类不足。有广泛的努力目前正在发现蛋白质生物标记物可以用于哮喘的诊断、预后和作为治疗靶点。没有一个蛋白质的目标可能是对所有疾病有效,特别是这样的复杂性,但针对细胞因子面板可以提供希望multiprotein检测面板所需的未来基础研究和临床试验的衰弱综合症。

细胞因子抗体阵列获得了流行在过去的几年中,数以百计的出版物在科学期刊上。他们的声望是欠他们的能力接近一个示例nonbiased方式和检测同时广泛和大量的细胞因子。这广泛的视图允许最好的机会发现庞大网络复杂的交互发生在疾病状态。随着越来越多的细胞因子评估对于任何疾病状态和越来越多的样本调查,毫无疑问,我们可以揭示复杂和深入的分子途径参与疾病的结果,疾病进展和疾病治疗和治愈。

缩写

艾滋病:	获得性免疫缺陷综合症
广告:	阿尔茨海默病
拜尔港:	支气管肺泡灌洗液
BHR:	支气管代
创新领导力:	CC趋化因子配体
c反应蛋白:	C反应蛋白
CSF:	脑脊髓液
CT-1:	Cardiotrophin-1
CXCL:	科学家趋化因子配体
EBC:	呼出的气息凝结
表皮生长因子受体:	上皮生长因子受体
ELISA:	酶联免疫吸附试验
FEV1:	在1秒用力呼气量
FGF:	纤维母细胞生长因子
格:	Growth-regulated致癌基因
HGF:	肝细胞生长因子
炎症性肠病:	炎症性肠病
干扰素:	干扰素
IL:	白介素
IL-2Rα:	白介素2受体α
ilc:	先天淋巴细胞
马伯:	单克隆抗体
MCP-1:	单核细胞趋化蛋白1
MCP-4:	单核细胞趋化蛋白4
卵巢:	卵清蛋白
帕洛阿尔托研究中心:	肺和activation-regulated趋化因子
类风湿性关节炎:	类风湿性关节炎
咆哮:	监管在激活正常T细胞表达和分泌
SCGFβ:	干细胞生长因子β
TGFβ1:	转化生长因子beta 1
Th1:	CD4+1型辅助T细胞
Th2:	CD4+2型辅助T细胞
TLR:	toll样受体
肿瘤坏死因子:	肿瘤坏死因子
TSLP:	胸腺基质淋巴细胞生成素
VEGF:	血管内皮生长因子。

利益冲突

本文的作者都是员工RayBiotech, Inc .公司生产商用抗体阵列用于引用一些参考资料。

确认

作者想表达他们的感谢RayBiotech创新研究基金的支持,广东创新研究团队项目(201001 s0104659419),中英(广州)Healthtech开放创新(2012 q-p182),广州市创新基金(2013 j4400170),广东省企业大学研究所的合作基础和中国教育部(2012 b090600021),特殊项目发展的科技企业孵化器在广州(2013 j4200016)和企业大学的基础研究所合作,广东和中国教育部(2012 b091000145), 863年国家高技术研究发展计划(2014 aa020905),“十二分之五”国家科技支撑计划(2012 ep001000),和英中(广州)Healthtech开放创新(2014 q-p037)。

引用

1. 吉娜,”全球哮喘管理和预防战略,”全球倡议为哮喘,2004年,http://www.ginasthma.org/。视图:谷歌学术搜索
2. m . Masoli d·费边,s·霍尔特和r·比斯利”的全球负担哮喘:执行摘要吉娜传播委员会的报告,“过敏卷,59号5,469 - 478年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. b . n . Lambrecht和h . Hammad“哮喘免疫学,”自然免疫学,16卷,不。1,45-56,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. j . m . Spergel和a·s·佩拉“过敏性皮炎和过敏性三月,”变态反应与临床免疫学杂志》上,卷112,不。6,S118-S127, 2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. j·a·辛普森v . y . f . Tan韦恩et al .,“超越特异反应性:多种模式的敏感与哮喘在出生队列研究中,“美国呼吸和重症监护医学杂志》上,卷181,不。11日,第1206 - 1200页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. e . w . Wu布,w·摩尔et al .,“无人监督的表型出现严重的哮喘研究项目参与者使用肺扩张数据,”变态反应与临床免疫学杂志》上,卷133,不。5,1280 - 1288年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. j . Lotvall c . a . Akdis l . b . Bacharier et al .,“哮喘endotypes:一种新的分类方法内的疾病实体哮喘综合症”变态反应与临床免疫学杂志》上,卷127,不。2、355 - 360年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. s e文策尔,“哮喘表型:从临床到分子进化方法,”自然医学,18卷,不。5,716 - 725年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. a·j·阿普特”2013年成人哮喘的诊断和治疗的进步,”变态反应与临床免疫学杂志》上,卷133,不。1,49-56,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. 答:布什”,在五岁以下儿童哮喘的诊断初级护理呼吸杂志,16卷,不。1、7 - 15,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. h . s .道理,j·j·罗西,p . Sætrom“小分子核糖核酸在疾病和潜在的治疗应用,”分子治疗,15卷,不。12日,第2079 - 2070页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 诉Rottiers和a . m . Naar”小分子核糖核酸的代谢,代谢紊乱。”自然评论分子细胞生物学,13卷,不。4、239 - 250年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. k·诺瓦克,“倒垃圾”,自然评论药物发现,5卷,不。2、104 - 105年,2006页。视图:谷歌学术搜索
14. b . Clyne和j·s·Olshaker c反应蛋白”,《急诊医学》杂志上,17卷,不。6,1019 - 1025年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. C.-X。锣,f . Liu Grundke-Iqbal,和k·伊克巴尔,“tau蛋白质的转录后修饰在阿尔茨海默氏症,”《神经传输,卷112,不。6,813 - 838年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. g·k·汉森”、炎症、动脉粥样硬化和冠状动脉疾病,”《新英格兰医学杂志》上,卷352,不。16,1626 - 1695年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. g . Trinchieri“Interleukin-12:促炎细胞因子和免疫调节功能,桥先天抵抗和抗原适应性免疫,”年度回顾的免疫学,13卷,不。1,第276 - 251页,1995。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. l·冯·帕里斯基和a·k·阿巴斯”体内平衡和免疫系统的自我耐受性:淋巴细胞,”科学,卷280,不。5361年,第248 - 243页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. b•莫泽m .狼a Walz, p . Loetscher“趋化因子:多级白细胞游走控制。”免疫学的趋势,25卷,不。2、75 - 84年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. j . a . Belperio m·p·基恩·d·a·阿伦伯格et al .,”科学家趋化因子在血管生成,“《白细胞生物学,卷68,不。1,1 - 8,2000页。视图:谷歌学术搜索
21. o . a . MacDougald和s . Mandrup“脂肪生成:起决定性作用的力量,”内分泌和代谢的趋势,13卷,不。1,第5 - 11页,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. k·a·琼斯j·g . Albeck s Gaudet p . k .佐尔格·d·a . Lauffenburger和m . b . Yaffe“细胞信号:信号识别的系统模型细胞因子诱导的细胞凋亡的分子基础组,“科学,卷310,不。5754年,第1653 - 1646页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 沃纳和r·格罗斯,“伤口愈合生长因子和细胞因子,调节”生理上的评论,卷83,不。3、835 - 870年,2003页。视图:谷歌学术搜索
24. h .秋山s Barger s .巴纳姆et al .,“炎症和阿尔茨海默氏症,”神经生物学衰老的,21卷,不。3、383 - 421年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. e·c·赫希和s . Hunot”在帕金森病神经炎症:神经保护的目标?”《柳叶刀神经病学,8卷,不。4、382 - 397年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. 韦伦医生和g . s . k . e .格克汗。“炎症、压力和糖尿病,”《临床研究杂志》上,卷115,不。5,1111 - 1119年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. j·s·罗斯和j·a·弗莱彻,her - 2 / neu致癌基因在乳腺癌预后因素,预测因素,和治疗的目标,“干细胞,16卷,不。6,413 - 428年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. k . Ozaki和w·j·伦纳德,“细胞因子和细胞因子受体基因多效性和冗余,“《生物化学》杂志上,卷277,不。33岁,29355 - 29358年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. 岸本t . s .彰,m . Narazaki和t . Taga“白细胞介素- 6细胞因子家族,gp130。”血,卷86,不。4、1243 - 1254年,1995页。视图:谷歌学术搜索
30. j .奥迪特”,在时间和空间冒险:细胞因子的非线性和复杂性影响干细胞命运决定,”生物技术和生物工程,卷106,不。2、173 - 182年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. j . Mendelsohn和j . Baselga”地位的表皮生长因子受体拮抗剂的生物学和治疗癌症,”临床肿瘤学杂志,21卷,不。14日,第2799 - 2787页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. m . Feldmann和r . n . Maini肿瘤坏死因子定义为类风湿性关节炎的治疗目标和其他自身免疫性疾病,”自然医学,9卷,不。10日,1245 - 1250年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. j . h . Hoofnagle“急性和慢性病毒性肝炎的治疗,”内科医学的进步39卷,第275 - 241页,1994年。视图:谷歌学术搜索
34. h·c·莱恩j . Feinberg诉戴维et al .,“抗逆转录病毒影响的α干扰素AIDS-associated卡波西氏肉瘤,”《柳叶刀》,卷332,不。8622年,第1222 - 1218页,1988年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. r·p·Schleimer加藤,r·克恩d·库珀曼和p·c·阿维拉,“上皮:先天和适应性免疫反应的界面,“变态反应与临床免疫学杂志》上,卷120,不。6,1279 - 1284年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. r·p·Schleimer加藤,a . Peters等人,“上皮细胞、炎症和人类上呼吸道免疫力:慢性鼻窦炎的研究,“美国胸腔学会学报》上》第六卷,没有。3、288 - 294年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. 答:加藤和r . p . Schleimer超越炎症:气道上皮细胞天然免疫与适应性免疫的接口,“当前舆论免疫学,19卷,不。6,711 - 720年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. j . Ciencewicki s Trivedi, s . r . Kleeberger“氧化剂和肺部疾病的发病机制,变态反应与临床免疫学杂志》上,卷122,不。3、456 - 468年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. 联邦贸易委员会以实玛利”,炎症反应在哮喘的发病机制,“美国骨科协会的杂志上,卷111,不。11日,S11-S17, 2011页。视图:谷歌学术搜索
40. p·g·伍德拉夫,b . Modrek d . f .白菜et al .,“辅助类型2-driven炎症的定义主要subphenotypes哮喘,”美国呼吸和重症监护医学杂志》上,卷180,不。5,388 - 395年,2009页。视图:谷歌学术搜索
41. p•j•巴恩斯,在哮喘和慢性阻塞性肺疾病、细胞因子网络”《临床研究杂志》上,卷118,不。11日,第3556 - 3546页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. j·g·r·德Monchy h·f·考夫曼,p .铁刀木et al .,“在allergen-induced哮喘反应后期,支气管肺泡嗜酸细胞增多症”美国的呼吸道疾病,卷131,不。3、373 - 376年,1985页。视图:谷歌学术搜索
43. d . c .韦伯a·n·j·麦肯齐a . m . l . Koskinen m .杨j .锍和p . s .培养“综合IL-13之间的信号、il - 4和IL-5规范航空公司代答,“《免疫学,卷165,不。1,第113 - 108页,2000。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. m . Wills-Karp“Interleukin-13在哮喘发病机制”,免疫学检查,卷202,不。1,第190 - 175页,2004。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. k·明顿,”过敏和哮喘:“驱动器”il - 4和IL-13信号?”自然评论免疫学,8卷,不。3、166 - 167年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. 问:哈米德·d·s·罗宾逊,美国应et al .,“主要TH2-like支气管肺泡早期人口过敏性哮喘,”《新英格兰医学杂志》上,卷326,不。5,298 - 304年,1992页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. p·g·伍德拉夫,h·a·鲍施伊认为,通用汽车Dolganov et al .,“全基因组分析确定上皮细胞基因与哮喘和糖皮质激素治疗反应,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷104,不。40岁,15858 - 15863年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. m·t·Kasaian k马奎特,美国鱼et al .,“il - 4 / IL-13双重拮抗剂减少肺部炎症、气道高反应性,和IgE生产在老鼠身上,“美国呼吸道细胞和分子生物学》杂志上卷,49号1,37-46,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. d·b·科里h . g . Folkesson m·l·沃诺克et al .,“白介素4,但不是白介素5或嗜酸性粒细胞,需要在小鼠模型的急性呼吸道代答,“《实验医学杂志》上,卷183,不。1,第117 - 109页,1996。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. m . Wills-Karp j . Luyimbazi x徐et al .,“Interleukin-13:过敏性哮喘的中心中介,”科学,卷282,不。5397年,第2261 - 2258页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. g . Grunig d·b·科里j . Reibman和m . Wills-Karp”白介素13,哮喘治疗的进化。”美国的《临床与实验免疫学,1卷,不。1日相较2012页。视图:谷歌学术搜索
52. 文策尔,l·福特·d·克罗et al .,“Dupilumab与嗜酸性粒细胞水平升高持续哮喘,”《新英格兰医学杂志》上,卷368,不。26日,第2466 - 2455页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. j . Corren r . f . Lemanske Jr . n . a . Hanania et al .,“Lebrikizumab治疗成人哮喘,”《新英格兰医学杂志》上,卷365,不。12日,第1098 - 1088页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. h·g·奥尔特加·m·c·刘,拿身份证Pavord et al .,“Mepolizumab治疗严重嗜酸性哮喘患者,”《新英格兰医学杂志》上,卷371,不。13日,1198 - 1207年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. p . Flood-Page a . Menzies-Gow s·菲普斯et al .,“Anti-IL-5治疗减少ECM蛋白质的沉积在轻微的过敏性哮喘患者的支气管牙龈基底膜,“《临床研究杂志》上,卷112,不。7,1029 - 1036年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. d . j .歌曲,j . y .赵郑胜耀李et al .,“Anti-siglec-F抗体减少allergen-induced嗜酸性炎症和气道重塑,”《免疫学,卷183,不。8,5333 - 5341年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. r . Fattouh a . Al-Garawi m . Fattouh et al .,“嗜酸性粒细胞是可有可无的过敏模型的重构和免疫房子尘埃mite-induced气道疾病,”美国呼吸和重症监护医学杂志》上,卷183,不。2、179 - 188年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. a . j . Coyle s·j·阿克曼,r·伯奇d自豪,和c·g·欧文,“人类eosinophil-granule主要碱性蛋白和合成聚阳离子诱导体内气道高反应依赖于缓激肽的一代,”《临床研究杂志》上,卷95,不。4、1735 - 1740年,1995页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. d . k .楚r . Jimenez-Saiz c·p·Verschoor et al .,“土著肠嗜酸性粒细胞DCs控制启动主Th2免疫反应体内,”《实验医学杂志》上,卷211,不。8,1657 - 1672年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. p·d·Ponath秦,d . j . Ringler et al .,“克隆人类嗜酸性粒细胞的化学引诱物,eotaxin。表情,受体结合和功能性质表明嗜酸性粒细胞的选择性招聘机制”《临床研究杂志》上,卷97,不。3、604 - 612年,1996页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. m·e·罗斯伯格、公元光泽和p .莱德”小鼠eotaxin:嗜酸性粒细胞化学引诱物诱导内皮细胞和白介素4-induced肿瘤抑制,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷92,不。19日,8960 - 8964年,1995页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. 体能训练时p c . Fulkerson c A Fischetti这样m . l .麦克布莱德l . m . Hassman s p·霍根和m . e . Rothenberg”中央监管角色嗜酸性粒细胞和eotaxin / CCR3轴在慢性实验性过敏性气道炎症,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷103,不。44岁,16418 - 16423年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
63. s . m .教皇n .齐默尔曼k·f·斯金格,m . l . Karow和m . e . Rothenberg”eotaxin趋化因子和CCR3的基本监管机构,allergen-induced的肺嗜酸细胞增多症”免疫学杂志,卷175,不。8,5341 - 5350年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. j . d . Wu, h . Bi et al .,“CCL11作为一个潜在的诊断标记哮喘?”杂志的哮喘,51卷,不。8,847 - 854年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. 美国,问:孟,k Zeibecoglou et al .,“嗜酸性粒细胞趋化现象的趋化因子(eotaxin eotaxin-2,咆哮,单核细胞化学引诱物蛋白质3 (MCP-3)和MCP-4),和CC趋化因子受体3表达式从过敏性支气管活检和nonatopic(内在)哮喘患者,”《免疫学,卷163,不。11日,第6329 - 6321页,1999年。视图:谷歌学术搜索
66. n Bhardwaj和g . Ghaffari“嗜酸性食管炎生物标记:一个评论,”年报过敏、哮喘和免疫学,卷109,不。3、155 - 159年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. 山本m . h . Yamada山口,k . et al .,“Eotaxin在哮喘患者诱导痰:痰与嗜酸性粒细胞和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白的关系,“过敏,55卷,不。4、392 - 397年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. c . Lemiere s Chaboilliez c特鲁多et al .,”特征的气道炎症反复接触职业特工,”变态反应与临床免疫学杂志》上,卷106,不。6,1163 - 1170年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
69. 中村h, s·t·维斯,大肠以色列,公元光泽,j·m·德拉赞和c m .莉莉“Eotaxin和哮喘、肺功能受损”美国呼吸和重症监护医学杂志》上,卷160,不。6,1952 - 1956年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
70. c·m·莉莉·g·伍德拉夫c a Camargo jr . et al .,“等离子eotaxin水平升高在急性哮喘患者,”变态反应与临床免疫学杂志》上,卷104,不。4、786 - 790年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
71. m . e . Scheicher m . m .特谢拉f .问:达et al .,“Eotaxin-2在痰液细胞培养评价哮喘炎症,”欧洲呼吸杂志卷,29号3、489 - 495年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
72. j·m·科尔曼·c·奈克,f·奥尔金et al .,“上皮eotaxin-2 eotaxin-3表达式:哮喘严重程度的关系,细胞腔的嗜酸性粒细胞和发病年龄,“胸腔,卷67,不。12日,第1066 - 1061页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
73. 诉教务长,M.-C。然而,a . Langlois m . Rola-Pleszczynski n . Flamand和m . Laviolette”CCL26 / eotaxin-3更有效诱导迁移的嗜酸性粒细胞哮喘患者比CCL11 / eotaxin-1和CCL24 / eotaxin-2”《白细胞生物学,卷94,不。2、213 - 222年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
74. o . Kalayci洛杉矶,p·g·伍德拉夫,c . a . Camargo Jr .)公元光泽,和c·m·莉莉,含有“单核细胞的趋化作用(MCP-4;CCL-13):哮喘的生物标志物,”杂志的哮喘第41卷。。1,即,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
75. c . Stellato p·柯林斯,p . d . Ponath et al .,“小说的生产碳碳由气道细胞趋化因子MCP-4和比较其他碳碳趋化因子的生物活性,”《临床研究杂志》上,卷99,不。5,926 - 936年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
76. h .淘金热潮,r . Hochstetter d . Kimmig r . Smolarski a·卡普和j·Elsner”检测MCP-4真皮成纤维细胞及其激活人类嗜酸性粒细胞呼吸爆发的,”《免疫学,卷160,不。2、555 - 558年,1998页。视图:谷歌学术搜索
77. b . Lamkhioued e·a·Garcia-Zepeda s Abi-Younes et al .,“单核细胞化学引诱物蛋白(MCP) 4表达在哮喘患者的气道。诱导上皮细胞和单核细胞的促炎细胞因子,”美国呼吸和重症监护医学杂志》上,卷162,不。2、723 - 732年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
78. r . a . Taha s Laberge哈米德,r . Olivenstein,“化学引诱物的增加表达细胞因子eotaxin,含有单核细胞的趋化作用,和interleukin-16在哮喘患者诱导痰中,“胸部,卷120,不。2、595 - 601年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
79. A . al shami r . Spolski j·凯利,A . Keane-Myers和w·j·伦纳德,”一个角色TSLP在哮喘模型炎症的发展,“《实验医学杂志》上,卷202,不。6,829 - 839年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
80. 诉Soumelis, p . a . Reche h . Kanzler et al .,“人类上皮细胞引起树突细胞生产TSLP过敏性炎症,”自然免疫学,3卷,不。7,673 - 680年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
81. t .伊藤,中州。王,o . Duramad et al .,“TSLP-activated树突状细胞诱导炎症通过OX40配体辅助2型T细胞反应,”《实验医学杂志》上,卷202,不。9日,第1223 - 1213页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
82. 渡边n s Hanabuchi诉Soumelis et al .,“人类胸腺基质淋巴细胞生成素促进树突状细胞CD4⁺T细胞稳态扩张。”自然免疫学,5卷,不。4、426 - 434年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
83. A . al shami r . Spolski j .凯利et al。”在CD4胸腺基质淋巴细胞生成素的作用⁺T细胞的发育《实验医学杂志》上,卷200,不。2、159 - 168年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
84. z d . Cheng雪,l . et al .,“上皮interleukin-25 Th2-high是一个关键的中介,corticosteroid-responsive哮喘,”美国呼吸和重症监护医学杂志》上,卷190,不。6,639 - 648年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
85. j·a·沃克·j·l·巴洛和a·n·j·麦肯齐,“先天淋巴细胞我们想念他们了吗?”自然评论免疫学,13卷,不。2、75 - 87年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
86. p·g·法伦,s . j .巴兰坦n e·摩根et al .,”标识的白介素(IL) 25-dependent提供IL - 4的细胞群,IL-5,爆发和IL-13寄生虫驱逐,“《实验医学杂志》上,卷203,不。4、1105 - 1116年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
87. m . m .堡j .张d .日圆et al .,“IL-25诱导il - 4、IL-5 IL-13 Th2-associated病态体内,”免疫力,15卷,不。6,985 - 995年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
88. z Kang s Swaidani w .阴et al .,“上皮特异性Act1适配器介导interleukin-25-dependent寄生虫通过扩大林驱逐⁻c - kit⁺天生的细胞群。”免疫力,36卷,不。5,821 - 833年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
89. k·r·Bartemes k饭岛爱,t .小林et al .,“IL-33-responsive血统⁻CD25⁺CD${44}^{\text{嗨}}$2型免疫淋巴细胞调节先天和过敏性肺部炎症,”《免疫学,卷188,不。3、1503 - 1513年,2012页。视图:谷歌学术搜索
90. j . Kearley j . s . Erjefalt c·安德森et al .,“IL-9支配allergen-induced肥大细胞数量在肺癌和慢性改造的航空公司,”美国呼吸和重症监护医学杂志》上,卷183,不。7,865 - 875年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
91. v . j . Erpenbeck j . m . Hohlfeld b .福et al .,“节段在过敏性哮喘患者过敏原的挑战导致增加IL-9表达式在支气管肺泡灌洗液淋巴细胞,”变态反应与临床免疫学杂志》上,卷111,不。6,1319 - 1327年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
92. 诉Staudt e . Bothur m . Klein et al .,“Interferon-regulatory因素4是至关重要的发展计划9 T辅助细胞,”免疫力,33卷,不。2、192 - 202年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
93. j . Kerzerho h . Maazi a . o . et al .,说话“细胞程序性死亡配体2调节TH9分化和诱导慢性气道代答,“《变态反应与临床免疫学杂志》上,卷131,不。4、1048. e2 - 1057页。e2, 2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
94. c .威廉k .大臣b·施蒂格利茨et al .,”一个IL-9命运记者演示了天生的感应IL-9肺部炎症反应,”自然免疫学,12卷,不。11日,第1077 - 1071页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
95. 戈尔。特纳,p . j . Morrison c .威廉et al .,“IL-9-mediated生存2型先天淋巴细胞促进helminth-induced肺部炎症、损伤控制”《实验医学杂志》上,卷210,不。13日,2951 - 2965年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
96. j·m·帕克,c . k .哦(指中立国)c·拉弗斯et al .,“安全性和临床活动的多个皮下剂量的读出- 528,人性化anti-interleukin-9单克隆抗体,在两个随机的第二阶段与哮喘、受试者的研究”BMC肺药,11卷,不。1,第十四条,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
97. m . t .漫画家关谷神奇,h . Yamada山口et al .,“增加水平的th2型CC趋化因子胸腺和activation-regulated趋化因子(TARC)在哮喘患者血清和诱导痰,“过敏卷,57号2、173 - 177年,2002页。视图:谷歌学术搜索
98. T.-F。梁,C.-K。Wong i . h . s . Chan W.-K。Ip、c·w·k·林和g . w . k . Wong“胸腺和activation-regulated趋化因子的血浆浓度升高在儿童哮喘,”变态反应与临床免疫学杂志》上,卷110,不。3、404 - 409年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
99. H.-Y。许,美国Wittemann, t·o·乔斯“小型并行三明治免疫测定,”分子生物学方法卷,428年,第261 - 247页,2007年。视图:谷歌学术搜索
100. w·Kusnezow诉Banzon c·施罗德et al .,“抗体芯片分析复杂的标本:系统评价标记策略,”蛋白质组学,7卷,不。11日,第1799 - 1786页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
101. 杨黄r·w·江,j . et al .,“一系列生物素抗体基于标签的蛋白表达的高含量分析,“癌症基因组学和蛋白质组学,7卷,不。3、129 - 141年,2010页。视图:谷歌学术搜索
102. 雷,m . Britschgi c·赫伯特et al .,“分类和预测临床阿尔兹海默症的诊断是基于等离子体信号蛋白,”自然医学,13卷,不。11日,第1362 - 1359页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
103. h·钱德拉,p . j . Reddy,斯利瓦斯塔瓦,“蛋白质微阵列和新颖的检测平台,”蛋白质组学的专家审查,8卷,不。1,第79 - 61页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
104. c . Wingren和c·a·k·Borrebaeck“免疫抗体微阵列”微芯片的方法诊断卷,509年,页57 - 84,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
105. c . a . k . Borrebaeck和c . Wingren”使用抗体微阵列高通量蛋白质组学:一个更新”,分子诊断的专家审查,7卷,不。5,673 - 686年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
106. a . Vazquez-martin r·科罗姆和j·a·梅内德斯”蛋白质芯片技术检测HER2 (erbB-2)全身的细胞因子的签名在乳腺癌,”欧洲癌症杂志,43卷,不。7,1117 - 1124年,2007页。视图:谷歌学术搜索
107. j·l·Perez-Gracia c之前,f . Guillen-Grima et al .,“TNF -的识别α和MMP-9作为潜在的基线预测血清标记舒尼替活动的肾细胞癌患者使用一系列人类细胞因子,”英国癌症杂志》,卷101,不。11日,第1883 - 1876页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
108. M.-Y。金姆,t . Oskarsson s Acharyya et al .,“肿瘤self-seeding循环肿瘤细胞,”细胞,卷139,不。7,1315 - 1326年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
109. 王t . Deuse x, d . et al .,“二氯醋酸防止再狭窄的临床前动物模型血管损伤,”自然,卷509,不。7502年,第644 - 641页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
110. s p·帕蒂尔,j.p. Wisnivesky, p . j .会e·a·茎,X.-M。李,“检测免疫生物标志物与哮喘控制和生活质量测量慢性哮喘患者血清中,“年报过敏、哮喘和免疫学,卷106,不。3、205 - 213年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
111. H.-B。金,C.-K。金,k饭岛爱,t .小林和h .北城,“蛋白质微阵列分析哮喘患者:海拔的趋化因子帕洛阿尔托研究中心/ CCL18痰,“胸部,卷135,不。2、295 - 302年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
112. a . t . Hastie w·c·摩尔·d·a·迈耶斯et al .,“分析哮喘严重程度的表型和痰粒细胞炎性蛋白对象分层,”变态反应与临床免疫学杂志》上,卷125,不。5、1028. e13 - 1036页。e13, 2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
113. k . Matsunaga s平贺柳泽t .川et al .,“气道细胞因子表达蛋白质阵列的测量通过呼出的气息凝结:相关性哮喘病人生理属性,“变态反应与临床免疫学杂志》上,卷118,不。1,第90 - 84页,2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
114. t市川k . Matsunaga y Minakata et al .,”可能产生的影响唾液影响细胞因子分析呼出气息冷凝,“分析化学的见解,2卷,第92 - 85页,2007年。视图:谷歌学术搜索
115. 中村k、m . Mikuniya s Takanashi et al .,“分析呼出的气息凝结相当于支气管肺泡灌洗液吗?”欧洲呼吸杂志,38卷,补充55岁,p。476年,2011年。视图:谷歌学术搜索
116. k . Matsunaga t市川平贺柳泽et al .,“临床应用呼出的气息凝结分析哮喘:预测残改进的类固醇治疗,”呼吸,卷78,不。4、393 - 398年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
117. d·e·Simcock诉Kanabar g·w·克拉克,b·j·奥康纳t·h·李和s·j·赫斯特,“Proangiogenic活动支气管肺泡灌洗液从哮喘患者,”美国呼吸和重症监护医学杂志》上,卷176,不。2、146 - 153年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
118. H.-W。郭,C.-X。Yun, G.-H。”侯et al .,芒果苷变弱Th1 / Th2细胞因子的不平衡在一个ovalbumin-induced哮喘小鼠模型,”《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。6篇文章ID e100394 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
119. a . Chetta a . Zanini a Foresi et al .,“血管组成部分在哮喘气道重塑是减少了高剂量的fluticasone,”美国呼吸和重症监护医学杂志》上,卷167,不。5,751 - 757年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
120. a . Grigoras i d . Caruntu c . c . Grigoras et al .,“免疫组织化学之间的关系评估哮喘,支气管粘膜microvascularization和临床阶段”罗马尼亚的形态和胚胎学杂志》上,53卷,不。3、485 - 490年,2012页。视图:谷歌学术搜索
121. m .桥本和y Hatanaka“Post-biotinylation photocrosslinking staudinger-bertozzi结扎的预装alkylazide标签,”化学和制药公告,53卷,不。11日,第1512 - 1510页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2015 Zhizhou旷等。这是一个开放分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。