文摘

肥胖的特点是慢性低度炎症和作为一个主要的危险因素高血压、冠状动脉疾病、血脂异常和2型糖尿病。本研究的目的是检查代谢激素的变化,炎性细胞因子,免疫功能,在精益,超重,肥胖黑猩猩在一个被控制的环境中。我们观察到等离子循环促炎th1细胞因子的水平,增加干扰素γ,interleukin-12p40、肿瘤坏死因子、白细胞介素- 6,可溶性CD40配体和Interleukin-1β和抗炎th2细胞因子、Interleukin-4 Interleukin-RA,白细胞介素- 10”,Interleukin-13超重和肥胖的黑猩猩。我们还观察到glucagon-like-peptide-1代谢激素水平增加,胰高血糖素,连接肽,胰岛素,胰肽YY_3-36,瘦素在超重和肥胖的黑猩猩的等离子体。趋化因子、eotaxin fractalkine,单核细胞化学引诱物蛋白1是高瘦肥胖黑猩猩相比,在趋化因子配体8增加肥胖的黑猩猩的等离子体。我们还观察到与肥胖相关的对免疫功能的影响,证明了低促分裂原诱导增殖,以及自然杀伤活性和更高的生产IFN -γ有关酶联免疫斑点试验在PBMC,这些发现表明,精益,超重和肥胖的黑猩猩分享循环炎性细胞因子和代谢激素水平与人类和黑猩猩可以作为对人类有用的动物模型研究。

1。介绍

人类肥胖已经建立多种疾病的危险因素包括心血管疾病(CVD)、2型糖尿病(T2DM)病人体内,高血压,肾脏疾病和神经功能障碍。此外,肥胖会导致各种癌症的风险因素或作为预后[负面因素1- - - - - -3]。

最近的研究表明,链接到这些疾病或疾病是由于慢性低度炎症与肥胖相关联(4- - - - - -7]。辩论是否存在炎症是肥胖或者炎症的产物结果处于肥胖状态。然而,一旦建立了多余的脂肪组织,组织的功能似乎比得上一个动态的内分泌器官(8,9]。在肥胖个体,巨噬细胞、脂肪细胞和上皮细胞通过肥胖相关通信荷尔蒙,炎性细胞因子和其他介质。例如,脂肪组织生产和分泌各种发病,如瘦素和脂联素和促炎症因子,TNF、il - 6、il - 1、c反应蛋白(CRP) (4,5]。所有这些因素不仅是重要的在脂肪生成,与心血管疾病的发病密切相关,2型糖尿病(1- - - - - -3),和代谢综合征6,7]。此外,最近的报道这种慢性炎症在肥胖与癌症相关促销和开发(10- - - - - -12]。纵向社区心血管危险因素流行的一项研究(薯片),来自香港的人体试验表明,il - 6,可溶性肿瘤坏死因子受体2 (sTNFR2;作为一个代理标记的肿瘤坏死factor-α活动),瘦素,lipocalin 2,脂联素,adipocyte-fatty酸结合蛋白(A-FABP)是癌症发展预测10- - - - - -12]。

在过去的十年中,一些研究已经表明升高il - 6、TNF和il - 1的水平在肥胖病人13- - - - - -17];然而,关于这些细胞因子的相关性有争议的数据(18,19]。这可能部分归因于肥胖的病因复杂,它由相互作用的基因,饮食,和身体活动水平,另外,受环境的影响,社会经济,和行为因素。

黑猩猩最接近人类和同源性也有着许多相似的疾病与肥胖相关包括心血管疾病、2型糖尿病,高血压和肾脏疾病。肥胖被黑猩猩是众所周知的管理问题。尽管人类的理解,它是未知的,如果肥胖黑猩猩分享慢性炎症状态。肥胖的黑猩猩的研究可以帮助管理这个物种也借人类肥胖症的线索。

在目前的研究中,我们研究了细胞因子,趋化因子,在等离子体和代谢激素水平的三个黑猩猩体重类别;精益、超重和肥胖。我们测量等离子体浓度的细胞因子和趋化因子:干扰素(IFN -γ)、白细胞介素- 6 (il - 6)、interleukin-12p40 (IL-12p40)、肿瘤坏死因子(TNF)、可溶性CD40L (sCD40L) interleukin-1β(il - 1β),interleukin-4 (il - 4)、interleukin-RA (IL-RA)、白细胞介素- 10”(il - 10), interleukin-13 (IL-13) eotaxin, fractalkine,单核细胞化学引诱物蛋白1 (MCP-1)和趋化因子(科学家主题)ligand8 (CXCL8或正式称为引发)),和连接等代谢激素肽(c -肽),Glucagon-like-peptide-1 (GLP-1),胰高血糖素、胰岛素,多肽酪氨酸或胰肽YY_3-36(PYY组)和瘦素。我们也测量了肥胖对免疫功能的影响。本研究的目的是调查肥胖之间的关系,这些细胞因子/趋化因子/代谢激素的黑猩猩。假设是将类似于人类和黑猩猩将演示炎症越来越肥胖。

2。方法

2.1。学习小组

研究人口分组根据身体情况得分和定义为精益,超重和肥胖。黑猩猩在精益组织被定义为肌肉的身体,正常的身体条件,一些腹部塞,凹和凸的腹部。超重的黑猩猩被定义为圆凸的腹部,大腿,脂肪臀部肌肉的存在。腹部肥胖的黑猩猩被定义为拥有一个非常大的身体之外的扩展框架,胸部脂肪,脂肪臀部肌肉,和脂肪沉积在腋窝区域和/或低于肱二头肌。同时收集血液样本点在12个月期间。所有受试者认为健康和正常社会群体他们取样。黑猩猩与慢性疾病并不包括在这一研究。研究人口组成的黑猩猩研究中使用如表所示1。

所有黑猩猩群体居住(multimale multifemale)米歇尔·e·基林比较医学和研究中心的德克萨斯大学MD安德森癌症中心和维护按照“指导护理和使用实验动物”研究所的实验动物资源,国家研究委员会。设备完全认可的评估和认证协会国际实验动物保健。所有黑猩猩附件每天都清洗和黑猩猩接受完整的营养。黑猩猩有完全访问水和有室内和室外的访问。饮食营养的主要来源是哈伦Teklad黑猩猩(# 7775),高纤维,20% protein-containing饮食一天喂两次。此外,黑猩猩是美联储每天生产四顿饭。环境浓缩提供日常使用各种食品问题设备,饲料,如爆米花或葵花籽散落在室外使用的草,可以操作的项目(纸箱和正面强化训练,通过对作为报酬。

2.2。血液收集和PBMCs准备

收集血液样本(10毫升)在肝素涂层立即收集管和等离子体被离心分离,直到进一步使用储存在−80°C。外周血单核细胞(PBMCs)分开肝素化血液通过离心Histopaque(密度、1.077 g / mL;σ,圣路易斯,密苏里州)。外周血单核细胞从接口和洗两次完整的RPMI 1640 (Hyclone,洛根,UT)补充了100 000 U / L青霉素(σ),100 mg / L链霉素(σ),2更易与L谷酰胺(σ),和25更易与L玫瑰(σ)。在适当的浓度细胞resuspended成套RPMI文化在不同的免疫分析。

2.3。循环血浆细胞因子、趋化因子和代谢激素量化

血浆浓度的细胞因子/趋化因子、干扰素-γsCD40L、il - 6、IL-12p40肿瘤坏死因子,il - 1β、il - 4、il - 10, IL-13、IL-RA MCP-1, fractakine, eotaxin, IL-15, IL-17A, TGF-α,巨噬细胞炎症proteins-1α,(MIP-1α或CCL3)、巨噬细胞炎性蛋白质1β(MIP-1β或亚兰)和咆哮和代谢激素面板包含瘦素、c -肽、GLP-1(主动)胰高血糖素、胰岛素,胰肽,肽yy(总)测量使用多路复用映射磁Bead-based免疫测定试剂盒(密理博公司Billerica, MA)或包从英杰公司(CA)卡尔斯巴德。从精益血收集(n# 28),超重(n# 10),和肥胖(n# 10)黑猩猩。离心后,等离子体立即被冻结在−整除,80°C到化验。那天化验,冷冻血浆解冻,涡流的混合,然后在10000转离心5分钟分离碎片之前,在试验中使用。所有化验根据制造商的说明进行使用手持磁选机块96 -好平底盘子(微孔,微孔corp .)和分析使用Luminex 200系统(Bio-Rad corp .)。所有样品都是运行在制造商提供的复制和细胞因子标准运行在每个盘子里。收购盖茨被设定在8000 - 15000年,样本成交25μL, 50事件/珠。平均荧光强度进行了分析使用BioPlex管理器软件5.0版本相比(Bio-Rad)和浓度标准曲线生成的值。值低于标准曲线的范围被设置为降低检测极限。试验敏感性(最低可检测浓度,pg / mL)干扰素-γ和肿瘤坏死因子(0.1 pg / mL)、il - 6和il - 10 (0.3 pg / mL), il - 1β和IL-13 (0.4 pg / mL) IL-12p40 (10.5 pg / mL),为sCD40L (4.9 pg / mL), il - 4 (0.6 pg / mL),为IL-RA (2.9 pg / mL),为Eotaxin (1.2 pg / mL),为Fractakine (6.0 pg / mL),为MCP-1 (0.9 pg / mL),为CXCL8 (0.2 pg / mL)、c肽(24 pg / mL),为GLP-1 (7.0 pg / mL),胰高糖素(6.0 pg / mL)、胰岛素(58 pg / mL),瘦素(27.0 pg / mL),和肽yy(8.0毫克/毫升)。

2.4。淋巴细胞增殖

黑猩猩的PBMCs样本的扩散是由标准(³H]胸腺嘧啶核苷掺入如前所述[20.,21]。简单地说,PBMCs整除(10⁵/)被播种一井的96孔板和6天分别与有丝分裂原刺激concanavalin-A (Con),植物凝集素(PHA)和商陆促分裂原(PWM)(每5点μg / mL最终浓度)(σ,圣路易斯。密苏里州)。培养基无添加的有丝分裂原担任负控制。培养5天之后在37°C公司5%₂,每个脉冲18 h和0.1μCi甲基-³H-thymidine (ICN欧文CA)。PBMCs数字,这些分裂素浓度和培养时间被认为是最佳的条件刺激PBMCs从健康的动物在我们的实验室。井被收获的内容到玻璃纤维光盘使用Skatron细胞收割机(Skatron实验室,弗吉尼亚州,美国)。放射性物质的量是决定Wallac液体闪烁计数器(Wallac1409, Mustionkatu, Tarku,芬兰)。结果报告为纠正每分钟计数(cpm),即平均每分钟计数(cpm) mitogen-stimulated文化的平均cpm -文化没有有丝分裂原。

2.5。ELISPOT试验检测抗原干扰素-γ产生细胞

Freshly-isolated PBMCs,如上所述,与有丝分裂原PHA刺激,骗一个,PWM(每5μg / mL最终浓度)来确定干扰素-的数量γ第细胞的酶联免疫斑点有关酶联免疫斑点)(测定使用早些时候报道的方法(20.,22]。简单地说,PBMCs整除(10⁵/)被播种一式三份井96 -孔板(聚乙二烯二氟化物支持板块,MAIP 45,微孔,贝德福德,MA)与主干扰素-预镀γ抗体和淋巴细胞有丝分裂原刺激的不同。孵化后30小时37°C,细胞被移除和井彻底清洗用PBS和开发按协议提供的制造商。紫色代表单个细胞分泌干扰素,彩色的斑点γ是由一个独立的机构数(Zellnet咨询,新泽西,新泽西)使用KS-ELISPOT自动化系统(纽约Thornwood卡尔蔡司Inc .)的定量分析的干扰素-γ点形成细胞(证监会)10⁵输入PBMCs。反应被认为是积极的数字证监会与试验抗原至少五,也高于背景值控制细胞培养在中孤独。

2.6。体外由TLR配体诱导细胞因子

PBMCs获得血液使用密度梯度离心后用PBS。1×10的整除⁵细胞在培养基resuspended rpmi - 1640 (Hyclone实验室)被分配在每一个96孔板。是免费使用的培养基检测内毒素(< 0.1欧盟/毫升)和所有其他解决方案使用pyrogen-free准备水和无菌聚丙烯塑料制品。细胞被孵化有或没有TLR配体肽聚糖(PGN TLR-2配体),ultrapurified脂多糖(LPS、地配体),polyinosinic-polycytidylic酸(聚IC, TLR-3配体),和cytosine-phosphate-guanine (CpG) DNA (TLR-9配体)所有Invivogen (Invivogen Corp .)、圣地亚哥、钙、美国)在1μ克/毫升每24小时37°C的5%的股份有限公司₂的气氛。浮在表面的游离是收获和储存在−70°C的后续分析细胞因子和趋化因子与人类炎症仪珠阵列(CBA)工具如上所述。

2.7。自然杀伤细胞毒性试验

自然杀伤细胞活性评估使用标准的4 h放射性铬(⁵¹Cr -)释放试验如前所述[20.]。外周血单核细胞被隔绝肝素化血液和孵化与51铬(⁵¹Cr -)标记细胞K562目标产量100:1,50:1,25日:1和12.5:1 effector-to-target比率。一式三份的试验进行U-bottom微量滴定板。微量滴定板被孵化4人力资源在37°C的5%二氧化碳培养箱。100年,在孵化的结束μL的上层清液收集从每个的数量⁵¹Cr决心使用发布γ计数器。占最大的释放,细胞被孵化Triton x - 100的5%。自发释放决心从靶细胞孵化没有额外的效应细胞。特定的细胞溶解的%计算平均每分钟计数(cpm)由以下公式:%具体裂解=(实验释放−自发释放)/(最大释放−自发释放)×100。

2.8。统计分析

统计分析,样本分组根据身体情况的动物获得的样本。对比组黑猩猩与克鲁斯卡尔-沃利斯是由单向方差分析测试和高斯近似和邓恩的多重比较测试。数据组意味着±SD。只有不同概率小于0.05被认为是重要的。所有统计分析进行了使用GraphPad Prism 6.00 (GraphPad软件,圣地亚哥,加利福尼亚,美国)。

3所示。结果

在目前的研究中,我们比较了循环血浆浓度促炎细胞因子,抗炎细胞因子,生长因子,在精益和代谢激素,超重和肥胖的黑猩猩。

3.1。炎性细胞因子和代谢激素

等离子体干扰素-γ、il - 6、IL-12p40 TNF、sCD40L和il - 1β水平被发现显著提高(在超重和肥胖的黑猩猩比精益控制(图1(一))。抗炎细胞因子il - 4、il - 10, IL-13 IL-RA也明显高于在超重和肥胖的黑猩猩(图1 (b))。

等离子体MCP-1和fractakine水平显著高于在精益组相对于肥胖组eotaxin水平更高的肥胖组相比,肥胖组;然而,肥胖和苗条之间没有发现差异(图组1 (c))。细胞因子CXCL8明显高于肥胖组相比,精益和超重(图组1 (c))。

此外,没有观察到显著差异il - 12, IL-15, IL-17A, TGF-α,MIP-1a MIP-1β,咆哮3组之间的等离子体浓度黑猩猩(数据未显示)。肥胖也增加了瘦素的含量,胰岛素,胰高血糖素,GLP-1, PYY组、c -肽在超重和肥胖的黑猩猩(图2)。

3.2。有丝分裂原诱导增殖和干扰素-γ生产

我们还研究了精益的免疫反应,超重,肥胖和肥胖的黑猩猩来测试假设与免疫功能受损和放松管制的炎症反应。体外增殖反应PBMCs和干扰素的生产γ测定。我们观察到ConA、PHA和PWM, 3种不同的有丝分裂原诱导的淋巴细胞增殖反应显著降低超重和肥胖组相比,精益集团(图3)。

干扰素-γ产生T细胞干扰素-γElispot试验,PHA,欺诈,PWM刺激PBMCs肥胖和超重的团体产生更高水平的干扰素-γ(比从精益组(图)4)。

3.3。自然杀伤细胞毒性试验

我们还研究了自然杀伤(NK)细胞在精益活动,超重和肥胖的黑猩猩使用标准⁵¹Cr释放试验。我们观察到NK活性明显降低(47%相比51%)在肥胖黑猩猩相比,精益黑猩猩(图5)。

3.4。PBMCs与TLR配体刺激

通常扮演着重要的角色在宿主防御入侵的病原体通过调停先天和适应性免疫系统。最近的研究表明,脂肪细胞可能发挥重要作用的生理调节免疫反应脂肪存款通过toll样受体(TLR)信号级联23]。因此我们决定学习效果的各种PBMCs TLR配体与不同群体的黑猩猩。PBMCs隔绝精益和肥胖的黑猩猩血液与TLR配体刺激20人力资源和上层的细胞因子的测定。肥胖的黑猩猩显示增加的能力产生il - 6和CXCL8 TLR-2之后,TLR-3, TLR-5, TLR-9刺激(图6)。相比之下,与地PBMCs刺激时,肥胖黑猩猩降低il - 6和CXCL8黑猩猩相比,精益生产。然而,无统计差异被发现之间的精益生产和肥胖的黑猩猩PBMCs炎性细胞因子的刺激与脂多糖(通常)。

4所示。讨论

流行病学证据表明一个重要的肥胖和炎症之间的联系,尽管这些发现并不欣赏与肥胖相关的病理生理的条件。例如,循环纤维蛋白原的水平和其他急性期反应物,包括TNF、il - 6和c反应蛋白(CRP)被发现是高架在肥胖24,25]。在目前的研究中我们调查细胞因子和肥胖之间的关系通过测量等离子体浓度不同的细胞因子和代谢激素在精益,超重和肥胖的黑猩猩。此外,我们还研究了肥胖对免疫功能的影响。

本研究的重要发现是,肥胖与同步感应等离子体的一些细胞因子和代谢激素超重和肥胖的黑猩猩与对照组相比。我们证明肥胖与c -肽水平上升有关,瘦素、胰岛素,GLP-1, PYY组和胰高血糖素。我们的发现与研究一致表明积极的人际关系之间的脂肪组织和循环血浆c -肽水平,胰岛素、瘦素,il - 6和c反应蛋白水平和释放脂肪组织矩阵的肥胖发病的人(26- - - - - -28]。

血浆c -肽已被证明是极其有价值的自然历史的研究1型糖尿病监测患者的胰岛素分泌胰岛素抗体和作为一个兼职的调查患者低血糖症的疾病(29日]。Abu-Farha et al。24)在人类的研究表明,血清中瘦素浓度成比例的增加身体肥胖,因此,肥胖患者代谢综合征通常有较高的循环瘦素浓度。在动物模型中,增加了瘦素的表达与释放促炎细胞因子如TNF和il - 6在单核细胞和巨噬细胞。瘦素对适应性免疫也有重要影响,如诱导一个开关向Th1-cell通过增加干扰素-介导的免疫反应γ、TNF分泌和Th2-cell反应的抑制脂肪组织(30.,31日]。

Glucagon-like肽1 (GLP-1),一个insulinotropic激素与肥胖也增加了在我们的研究中。GLP-1已表现出抑制食物摄取和诱导减肥在人类2型糖尿病的独立地位。GLP-1的厌食的作用可能是由于它对胃排空的影响和直接影响神经元在中枢神经系统参与调节食欲(32]。glp - 1在内分泌与肽yy colocalizes L回肠粘膜细胞(33]。类似于GLP-1, PYY水平可增加餐后,作为抑制食欲34]。

超重和肥胖的黑猩猩也有高浓度的干扰素-γ、TNF、il - 6、CXCL8 IL-12p40, sCD40L, il - 1βil - 10、il - 4、IL-RA, IL-13, MCP-1精益同行相比。这些发现符合最近的报道在人类研究荣格et al。35),展示了人类肥胖减肥对血清细胞因子的影响。其他研究也显示,促炎细胞因子il - 6和TNF是最早涉及的预测或致病性中介胰岛素抵抗,心血管疾病和2型糖尿病患者(36,37]。Bruun et al。38)发现,等离子体水平的CXCL8更高肥胖受试者相比,精益科目。这一发现可能与肥胖是已知的事实与慢性低度炎症状态有关(39]。

我们的研究显示IL -β、il - 6和il - 10在肥胖的黑猩猩更高。il - 1β据报道,与il - 6浓度预测人类2型糖尿病的风险比单独或细胞因子(40]。il - 10是一种抗炎免疫细胞产生的细胞因子作用于脂肪细胞脂肪组织,改善胰岛素信号,有可能进一步降低巨噬细胞招聘(41,42]。2003年,埃斯波西托et al。43]显示循环水平的il - 10高高架在肥胖女性和推测,il - 10水平代表着身体试图抑制促炎细胞因子的生产。在我们的研究中,我们还发现显著增加水平的il - 10在超重和肥胖的黑猩猩。埃斯波西托et al。43)也报告说,生活方式的变化,旨在减少体重和增加体力活动高度超过1年显著降低il - 10水平在肥胖妇女,虽然Manigrasso et al。44]报道il - 10水平无显著变化后观察体重减少肥胖的另一项研究。

在目前研究il - 12、MCP-1 sCD40L水平升高在肥胖的黑猩猩。Strissel et al。45]欠high-fat-diet-fed小鼠的实验证据表明,il - 12可以额外作用的系统性低度炎症和随后的发展与肥胖相关胰岛素抵抗。Schernthaner et al。46]证明了循环sCD40L水平肥胖患者胰岛素水平密切相关,甘油三酯和炎症生物标记(MCP-1)。两个独立的研究令人信服地表明,adipocyte-specific超表达小鼠MCP-1足以增加脂肪组织巨噬细胞招聘并导致系统性胰岛素抵抗,肝脂肪变性,肝和肌肉中胰岛素抵抗[47]。

数据从这项研究表明肥胖与降低T - b细胞增殖功能和自然杀伤细胞的活性和更高的干扰素-γ分泌的肥胖相比,精益黑猩猩。肥胖与T和b细胞功能受损,建议可以诱导代谢改变或改变的后果self-immune宽容和/或调制的免疫反应报道肥胖的男性和女性相比,nonobese对照组(48]。肥胖的儿童和青少年已报告有受损皮肤的dth反应,mitogen-stimulated淋巴细胞增殖,和杀菌能力(49,50]。一些报道存在,比较自然杀伤细胞的活性在肥胖和nonobese人类。守口等。51]表明,肥胖是降低自然杀伤细胞活性有关的年长的男性和女性。相似的研究结果报道在肥胖Zucker老鼠;自然杀伤细胞的活性被报道得到抑制,影响是可逆的通过运动训练通过改善淋巴细胞葡萄糖摄取和增强GLUT-1表达式(52]。

我们发现减少细胞因子(il - 6和CXCL8)在肥胖黑猩猩PBMCs TLR3的刺激与特定的配体时,TLR4和TLR9识别,但精益黑猩猩相比差异不显著。最近,科普等。53)表明,il - 6在小鼠脂肪细胞释放刺激特定的配体TLR1/2, TLR2 / TLR6, TLR3, TLR4,而单核细胞化学引诱物蛋白1 (MCP-1)释放增加TLR1/2的刺激与特定的配体,TLR3和TLR4。

优势的黑猩猩研究肥胖和炎症的模型,除了基因相似度大于98%相比,人类,是我们可以控制肥胖引起的外生因素,如营养和生活方式,因此研究分子事件导致代谢综合症,炎症和/或自身免疫状况。我们意识到我们的研究有一定的局限性。这些限制之一是我们报告系统性循环细胞因子/趋化因子和代谢激素浓度。例如,瘦素可能是由当地瘦素浓度调制函数,自由与束缚瘦素之间的比例,不同形式的表达受体的信号和nonsignaling受体之间的比率,和/或特定的抑制剂的存在。第二个限制是,我们有一个有限数量的超重和肥胖的动物在我们的黑猩猩的殖民地获得样本。

本研究最重要的发现是,血浆细胞因子/趋化因子和代谢激素浓度显著增加肥胖的黑猩猩相对于体重正常健康的黑猩猩。此外,在目前的研究中,我们观察到一个肥胖对免疫功能的影响。事实上,当前的研究提供的证据表明,促炎的状态可以被视为一个重要的预后指标的风险,肥胖、心血管疾病和代谢综合征。尽管肥胖是一个复杂的、多因子的特点,不能用一个因素来解释,本研究的结果代表了未来规划的重要方向项目旨在防止与肥胖相关的疾病和小说典型目标的识别。

利益冲突

作者宣称他们没有相互竞争的利益。

作者的贡献

Nehete博士已经完全访问所有数据的研究,负责数据的完整性和数据分析的准确性。研究设计是由Pramod Nehete和帕特里克·w·汉利。Bharti Nehete和Pramod Nehete负责采集的数据。数据的分析和解释由Pramod Nehete,帕特里克·w·汉利和伊丽莎白·r·Magden。Pramod Nehete,伊丽莎白·r·帕特里克·w·汉利Magden和基督教r . Abee负责手稿准备。统计分析是由Pramod Nehete和帕特里克·w·汉利。

确认

作者感谢丽贝卡•琼斯和斯蒂芬妮Buchl博士的援助提供血液样本的黑猩猩。本研究在一定程度上是由癌症研究牧畜者(PN)和NCRR U42 (CA)。