神经紧张素降低人皮肤成纤维细胞的促炎状态和增加表皮生长因子的表达

摘要

在伤口愈合(WH)期间，成纤维细胞定植到损伤区域，负责皮肤重塑，也参与炎症的调节，因为成纤维细胞具有免疫活性。在此，我们的目的是确定神经紧张素对成纤维细胞免疫调节谱的影响，无论是在稳态和炎症条件下。神经紧张素介导的反应通过NTR1或NTR3受体发生，而在炎症条件下，NTR1表达增加似乎调节神经紧张素反应。在不同的免疫调节基因中，CCL11、IL-8和IL-6表达最多，而CCL4和EGF表达较少。神经紧张素暴露后，IL-8 mRNA表达升高，CCL11表达降低，提示成纤维细胞促炎上调，趋化能力下调。在炎症条件下，基因表达明显增加。神经紧张素暴露后，CCL4和IL-6 mRNA表达减少，而CCL11表达增加，再次表明成纤维细胞的趋化能力和促炎状态下降。此外，表皮生长因子(EGF)是皮肤细胞增殖和WH的关键生长因子，在所有条件下表达均增加。总的来说，神经纤维或皮肤细胞释放的神经紧张素可能参与了肝素增殖和重塑阶段的趋化性和促炎状态的降低。

1.介绍

神经肽可以由皮肤细胞产生，也可以由周围神经释放到皮肤中，在那里它们与各自的受体结合，刺激不同的信号通路和细胞反应[1.,2.]在神经肽可在皮肤中调节的细胞反应和事件中，炎症过程是最重要的。然而，神经降压素（NT）在皮肤炎症调节中的作用仍不清楚。

1983年，第一份报告显示皮肤中存在NT阳性纤维[3.]，随后于2006年被Donelan等人证实[4.］．当发现NT对因压力而加剧的皮肤病发病机制的影响时，人们首次对NT产生了兴趣[5.］．事实上，已经观察到，在许多因压力而恶化的皮肤疾病中，肥大细胞的数量和激活状态都会增加。因此，NT已被证明在皮肤发病机制中增加肥大细胞的数量和激活，如银屑病[6.]，这与其他一些报告一致，这些报告显示肥大细胞脱颗粒是由压力和神经紧张素引发的[7.–9]此外，促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）对肥大细胞诱导的皮肤血管通透性通过神经降压素依赖机制发生[4.］．事实上，人肥大细胞能够合成神经紧张素前体，分泌具有生物活性的NT样肽，并表达NT受体NTS1 [10］．除了肥大细胞外，神经紧张素也被证明可以增强淋巴细胞的趋化能力，并限制皮肤t细胞淋巴瘤肿瘤细胞的生长[11］．最近，我们已经证明NT可以调节皮肤树突状细胞系的炎症事件[12］．胎皮树突状细胞同时表达NTR1和NTR3，神经紧张素能够下调炎症信号通路的激活和细胞因子IL-6、TNF-的表达α， IL-10，以及血管内皮生长因子(VEGF)，同时上调生存通路ERK和表皮生长因子(EGF)的表达[12］．

尽管有这些结果，但关于成纤维细胞中NT效应的研究还不多。因此，在本研究中，我们使用了从正常新生儿包皮成纤维细胞皮肤建立的细胞系。成纤维细胞是一种来源于间充质的异质性细胞群，支持成纤维细胞的发育、修复和稳态真皮成纤维细胞在细胞外基质（ECM）沉积、上皮-间质相互作用和伤口愈合中起着关键作用[13］．它们还有助于皮肤的免疫调节，产生和释放趋化因子IL-8和CCL5、环加氧酶和前列腺素，在被炎症因子(如细菌因子)激活后[14］．通过使用这种细胞系，我们打算减少捐献者的可变性，尽管缺乏来自不同身体部位皮肤的可变性。使用来自包皮的成纤维细胞可确保来自皮肤区域的细胞具有丰富和复杂的神经网络，并具有神经生理学参数[15,16］．

这项工作的主要目的是揭示神经降压素及其化学吸引能力在新生儿包皮成纤维细胞中的作用，包括在稳态和炎症条件下，为了了解该神经肽在皮肤伤口愈合中可能的生理作用，以及推测该神经肽在其他皮肤病理学中的作用。

2.材料和方法

2.1.材料

脂多糖(LPS)大肠杆菌(血清型026:B6)从Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)获得，NT从Bachem (Weil am Rhein, Germany)获得，30% Acrylamide/BisSolution 29: 1, TEMED, SYBR Green从Bio-Rad获得，High Capacity cDNA Reverse Transcription kit从Applied Biosystems获得。

蛋白酶抑制剂鸡尾酒（Complete Mini）和磷酸酶抑制剂鸡尾酒（PhosSTOP）从罗氏（葡萄牙卡纳希德）获得。Bicinchonic酸（BCA）试剂盒测定从Novagen获得。聚偏二氟乙烯（PVDF）膜和抗β-肌动蛋白购自美国麻州贝德福德的密理博公司。抗NTR1（H-130）、NTR2（H-19）和NTR3（H-300）的多克隆抗体购自圣克鲁斯（Frilabo），参考文献分别为sc-15311、sc-31696和sc-30217。碱性磷酸酶连接的二级抗体和增强化学荧光（ECF）试剂从GE Healthcare（葡萄牙卡纳希德）获得。Vectashield安装培养基从Vector Inc.（美国加利福尼亚州伯林盖姆）购买，Alexa Fluor 488抗体从Molecular Probe（美国加利福尼亚州尤金）购买，Alexa Fluor 555 phalloidin抗体从Invitrogen（西班牙巴塞罗那）购买.TRIzol从Invitrogen获得；焦碳酸二乙酯（DEPC）从AppliChem获得。甲醇、乙醇和异丙醇从默克获得。所有引物从MWG Biotech（德国埃伯斯堡）获得。所有其他试剂从Sigma Chemical Co.购买。

2.2.BJ细胞系的培养

BJ细胞系(ATCC编号CRL-2522)由Paula Marques和João Malva(葡萄牙科英布拉大学生命科学系和神经科学与细胞生物学中心)提供。该细胞系是从正常新生人包皮成纤维细胞的皮肤中提取的。BJ细胞系在衰老开始前最多可增殖72倍。

BJ细胞在无内毒素的Dulbecco 's modified eagle培养基(DMEM)中培养，DMEM中添加10% (v/v)的灭活胎牛血清、3.02 g/l碳酸氢钠、100 U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和30 mM葡萄糖，置于5% CO的湿化培养箱中_2./95%的空气，在37°C。BJ成纤维细胞的倍增时间约为72小时，在达到80-90%的汇合后使用，大约每7天发生一次。在实验过程中，通过显微镜观察细胞的形态变化。

2.3.蛋白质印迹

细胞(汇合75厘米)^2.烧瓶）用冰冷的PBS洗涤，并在超声缓冲液中收集。细胞裂解物和蛋白质定量如前所述进行[12］．Western blot检测NTR1、NTR2和NTR3水平。蛋白质通过电泳分离并转移到PVDF膜上，如前所述[12］．通过对ECF试剂的膜暴露检测免疫复合物，然后在VersaDoc (Bio-Rad Laboratories, Amadora, Portugal)上扫描蓝色激发荧光。膜被剥离，并用抗体进行重测β-使用Image Quant TL软件分析产生的信号。

２.４.RNA提取

细胞（8×10^5.)在60 mm的培养皿中，最终体积为6 mL，用10 nM的NT处理30 h，或用10 nM的NT预处理24 h，然后用1μ在6小时内，g/mL LPS h、 治疗6个月 h，LPS，或未经处理（对照组）。根据制造商的说明，用TRIzol从这些细胞中分离总RNA。使用纳米滴分光光度计（美国德州威尔明顿）通过OD260测量确定RNA浓度。RNA储存在RNA储存溶液中（美国加利福尼亚州福斯特市安比昂）−80摄氏度。

2．5．实时rt - pcr

1微克总RNA使用应用生物系统的高容量cDNA逆转录(RT)进行逆转录。在20μL容量为2.5 μL cDNA (25ng)μL 2X SYBR Green Supermix, 2μ每种底漆（250 纳米）和1 μH的L_2.O PCR品位。样品在95°C下变性3分钟。随后，在95°C下运行40个循环，10秒用于变性，30秒用于适当的退火温度，30秒用于72°C延伸。每个样品在Bio-Rad My Cycler iQ5上进行重复的实时RT-PCR反应。扩增后，为每个基因设定阈值，计算ct值如前所述[12］．

使用Premier Biosoft International的Beacon Designer软件v7.2设计引物，并进行彻底测试。表中给出了引物序列1.．结果用一个内参基因，次黄嘌呤磷酸核糖转移酶1 (HPRT-1)归一化。该参照基因之前在我们实验室验证过[17]，其表达不受LPS和NT刺激的影响。

2.6。免疫细胞化学检测

细胞（2×10^5.)细胞在24孔培养板中培养，培养板底部有圆形玻璃板，细胞用冷PBS洗涤，用4%多聚甲醛固定在PBS中10分钟 最小值，然后在含有200的PBS中用0.1%Triton X-100渗透 mM甘氨酸5 用PBS/1%BSA阻断步骤30分钟后 分钟后，细胞与抗NTR1、NTR2和NTR3（1）的抗体一起孵育过夜 : 用PBS洗涤后，用Alexa Fluor 488结合的山羊抗兔抗体（1）孵育细胞 : 500）和Alexa Fluor 555 phalloidin抗体（1 : 500美元，30美元 在室温下培养1分钟。在洗涤步骤后，将细胞培养1小时 含DAPI的最小值（0.1 μg/mL（在PBS中），并安装Vectashield培养基以减少光漂白。对于图像采集，使用荧光显微镜蔡司Axiovert 200观察荧光标记，并使用耦合的AxioCam HR相机拍摄图像。在每个实验中，为对照细胞定义最佳采集参数，并在同一实验中为所有其他条件保持最佳采集参数。

2.7。统计分析

使用非参数Kruskall-Wallis检验和Dunn后验，使用Graphpad软件对结果进行统计分析。结果以平均值±SD表示，显著性水平为,,．

3.结果

3.1.皮肤成纤维细胞上神经降压素及其受体的表达

无论在基础条件下还是LPS刺激下，BJ细胞都不表达神经紧张素(数据未显示)。

采用实时RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学方法检测神经紧张素受体NTR1、NTR2和NTR3的表达。BJ细胞组成表达NTR1、NTR2和NTR3基因，其中NTR2最为丰富，如图所示1.（A） 然而，如图所示，只有NTR1和NTR3被有效地转化为蛋白质1.(B)，表明可能的细胞转录后修饰。小鼠皮质皮层的脑匀浆被用作NTR反应的阳性对照，因为它们表达所有的神经紧张素受体，通过Western blot分析确定(图)1.（B） ）。

此外，研究了炎症条件下神经紧张素受体的表达。LPS刺激BJ细胞6h后，NTR1和NTR2基因表达增加2.9±1.9- (,)和0.7±0.9-()折叠以上控制，分别。而NTR3的表达略有下降0.2±0.3- ()折叠，如图所示1.(C)。

在这些细胞中测量神经紧张素受体定位，证实NTR1定位于细胞膜、细胞质和细胞核，而NTR3主要定位于细胞核(图)2.）.

３．２．LPS对成纤维细胞基因表达的调控

评估不同基因在体内平衡条件下和6小时后的表达 在LPS暴露h后，对CCL4、CCL5、CCL11、IL-8、IL-1进行实时RT-PCRβ、IL-6和表皮生长因子(EGF)。

非刺激BJ细胞组成表达所有的趋化因子、细胞因子和生长因子EGF，其中IL-6、IL-8和CCL11是表达最多的基因(^##< 0.01,），(^＃＃＃< 0.001,),(^＃＃＃< 0.01,)分别与HPRT1基因表达相关，而CCL4几乎不表达()，相对于HPRT1基因表达(图3.)当LPS刺激时，所有这些基因的表达水平都高度上调，包括趋化因子CCL5的表达(), il - 1β(,)，CCL4(,), CCL11 (,),引发(,)，和IL-6(,)，相对于未受刺激的细胞(图3.)，增强成纤维细胞作为皮肤免疫调节剂的作用。

３．３．神经紧张素对成纤维细胞基因表达的调控

为了评估神经紧张素对关键炎症细胞因子和趋化因子的影响，我们将BJ细胞单独与神经肽一起孵育，或单独与LPS的炎症刺激一起孵育，或与神经紧张素和LPS共同孵育(图)4.）.确实，细胞被(1)10或100 nM的NT处理30 h;(2)单独与LPS孵育6h;(3)用10或100 nM的NT孵育24 h，再用LPS刺激6 h;或(4)不予治疗(对照)。为了了解神经紧张素在皮肤中的作用，特别是在皮肤成纤维细胞中，细胞在炎症环境(LPS刺激)内外受到不同浓度的神经紧张素(10和100 nM)。事实上，为了更好地理解神经紧张素在炎症环境中的作用，我们首先用NT预处理细胞，然后用LPS刺激细胞。此外，该协议可以模拟一个在活的有机体内损伤后立即进行NT治疗(在炎症开始前)。经过这些潜伏期后，将总RNA分离、定量，并逆转录为cDNA，最后进行实时RT-PCR。

NT (10 nM)处理BJ细胞后，EGF和IL-8的表达显著增加- （,),- （,)分别比对照组高倍，同时降低CCL4的表达−- （,)折叠到控件下方(图4(一))然而，当细胞与100℃孵育时，这些细胞的细胞因子和趋化因子谱均未显示出显著的表达差异 纳米NT（图4(一)).然而，当用NT（10）预处理细胞时 在24小时内 h后面跟着一个6 在h-LPS刺激下，这些细胞的细胞因子和趋化因子谱均受到显著调节。当细胞同时受到10 在NT和LPS的nM中，CCL4的表达显著降低- （,)折叠，相对于控件，如图所示4 (b).此外，当细胞与100 在NT+LPS的nM中，细胞因子IL-6的表达显著降低(,)，相对于经NT处理的细胞（10 相反，趋化因子CCL11的表达显著增加- （,)，相对于NT (10 nM)处理的细胞。EGF表达显著增加- （,)相对于控件折叠（图4 (b))总之，我们观察到，在神经降压素（10 纳米）BJ细胞CCL11趋化因子表达减少，IL-8细胞因子表达增加。在炎症条件下，在神经降压素存在的情况下，BJ细胞CCL4和IL-6表达减少，而CCL-11表达增加。此外，在单独使用NT或在c与LPS结合。

4.讨论

BJ细胞表达NTR1和NTR3；NTR1位于细胞膜、细胞质和细胞核，而NTR3仅位于细胞核内。由于NTR3仅位于细胞核内，其介导的反应只能由细胞内神经降压素发生。考虑到神经降压素不由BJ细胞表达，因为它们不表达NT、 NT-NTR3信号通路只能由邻近皮肤细胞（如角质形成细胞）先前产生的内吞神经降压素激活。此外，NT-NTR3介导的反应将比NT-NTR1介导的反应具有更晚的效果，因为NTR1位于细胞膜上，并且该信号通路的激活oes不需要NT内化。此外，NT与其受体结合后，NT激活不同的信号通路和细胞反应，如趋化因子和细胞因子表达，正如我们之前对树突状细胞系和其他人所述[4.,9,18–25］．

正如在大鼠巨噬细胞中观察到的P物质受体一样，炎症环境下的神经肽受体表达受神经肽调节[26和在HUVECs中发现NPY受体[27］．事实上，我们确定了神经紧张素受体在炎症环境中的表达是否不同，并且在细胞暴露于LPS后，NTR1基因表达被诱导，而NTR3的表达减少。这些结果表明，炎症环境(LPS)中神经紧张素受体的上调将导致NT介导效应的增加和NT信号通路的传播。虽然内源性NT在BJ细胞中不表达，但由邻近细胞产生的外源性NT在NTR激活中发挥重要作用。

在NT对BJ细胞免疫调节功能的影响方面，NT在炎症条件下下调BJ细胞的免疫调节能力，显著上调EGF的表达，EGF是参与细胞生长和创面愈合的关键生长因子[28,29］．

在稳态条件下，外源NT能够显著上调这些细胞中的IL-8，下调CCL11。这些细胞因子参与了免疫细胞向炎症部位募集的重要过程[30]IL-8是一种中性粒细胞激活细胞因子，可诱导趋化性和颗粒酶的释放[31而CCL11(或eotaxin)是一种重要的嗜酸性粒细胞趋化剂，它也招募嗜碱性粒细胞、Th2淋巴细胞和胰酶-胰酶肥大细胞[32–35］．由于成纤维细胞协调并响应炎症级联反应，NT上调IL-8可激活中性粒细胞，而下调CCL11趋化因子表达可减少稳态条件下的白细胞招募。

在炎症环境下(LPS处理)，NT似乎在趋化因子/细胞因子方面具有相反的作用，显著下调趋化因子CCL4和促炎细胞因子IL-6。同时NT也上调了CCL11的表达。除了作为一种化学引诱剂，CCL11还可诱导嗜酸性粒细胞脱颗粒[36]和不依赖ige的嗜碱性粒细胞脱粒[37，通过选择性招募Th2淋巴细胞，促进适应性免疫反应，而Th2淋巴细胞依赖于Th2细胞上CCR4和CCR8的表达[38］．事实上，由NT介导的CCL11在成纤维细胞中的表达增加可能与Th2极化反应有关。

考虑到表皮生长因子是一种细胞生长和伤口愈合生长因子，其表达明显增强，这与我们之前在树突状细胞中进行的研究一致[12］．事实上，神经肽物质P已经在肉芽组织成纤维细胞中观察到了同样的效果[39］．EGF的增加可能通过调节表皮增殖和分化，潜在地触发BJ细胞的自分泌效应以及角化细胞的旁分泌效应[40]，同时强调表皮生长因子在伤口愈合过程中的作用[28,29］．

5.结论

这些结果报告了外源性NT在稳态(无LPS)和炎症条件(有LPS)下对BJ细胞的影响。在炎症条件下，NT能够下调成纤维细胞的趋化功能，这对伤口愈合的最后阶段至关重要，包括其迁移-增殖和重塑阶段。外源性NT引发的趋化因子下调可以降低伤口的炎症状态，并可以有益地促进成纤维细胞向伤口部位迁移，从而表达对皮肤修复很重要的ECM蛋白。此外，表皮生长因子介导的成纤维细胞和角质形成细胞的作用将是伤口愈合的重塑阶段的支点。

事实上，延迟的伤口，如糖尿病伤口愈合，其特征是促炎细胞因子谱[1.]，可以潜在地用NT治疗，促进炎症期向伤口愈合的最后阶段过渡，从而促进伤口愈合。总的来说，我们的结果表明，神经紧张素通过促进伤口愈合，在炎症性皮肤病的治疗方法中可能有很大的价值。然而,我们的在体外模型的局限性及对成纤维细胞的治疗在体外NT可能不会模仿其在自然环境中的生物过程，没有考虑神经内分泌，例如，交感神经和副交感神经对组织的控制。因此，这些发现应该得到证实在活的有机体内同时，我们可以假设在活的有机体内在类似的情况下，NT可以通过这些细胞促进炎症反应的降低，这在愈合的后期阶段可能是重要的。体内NT作为治疗糖尿病足溃疡的潜在应用还需要进一步的研究。

缩写

NT:	神经降压素
IL:	白细胞介素
表皮生长因子:	表皮生长因子
ECM：	细胞外基质
WH:	伤口愈合
有限合伙人:	脂多糖
中枢神经系统:	中枢神经系统
NTR:	神经降压素受体
全球气候变化报告：	G蛋白偶联受体
肿瘤坏死因子:	肿瘤坏死因子
BCA：	Bicinchoninic酸
PVDF:	聚乙二烯二氟化物
ECF：	增强化学荧光
DEPC:	焦碳酸二乙酯
DMEM:	杜尔贝科的改良版鹰牌
rt - pcr:	逆转录聚合酶链反应
HPRT-1：	次黄嘌呤phosphoribosyltransferase 1。

利益冲突

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

致谢

作者感谢Paula Marques和João Malva（葡萄牙科英布拉大学生命科学系和神经科学与细胞生物学中心）赠送BJ细胞系。他们感谢Francisco Ambrósio博士在这项工作的一部分期间提供的实验室设施，以及Carlos Duarte博士提供的RT-PCR设备。他们还感谢Ana Tellechea和Ermelindo Leal在细胞培养过程中的帮助，以及Vera Godinho在建立RNA提取实验方面的合作。他们感谢SFRH/BD/60837/2009（Liane Moura）、SFRH/BD/30563/2006（Bruno Miguel Neves）、EFSD/JDRF/Novo Nordisk欧洲1型糖尿病研究计划（Eugénia Carvalho）、法国糖尿病与技术研究基金会PTDC/SAU-MII/098567/2008（Eugnia Carvalho）和葡萄牙糖尿病学会（Sociedade Portuguesa de Diabetologia）（Eugénia Carvalho）。

参考文献

1. L.da Silva，E.Carvalho和M.T.Cruz，“神经肽在皮肤炎症中的作用及其参与糖尿病伤口愈合，”生物治疗专家意见，第10卷，第10期，第1427-1439页，2010年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
2. A.Tellechea，E.Leal，A.Veves和E.Carvalho，“糖尿病伤口愈合中的炎症和血管生成异常：神经肽的作用和治疗前景，”开放循环与血管杂志， 2010年，第2卷，第42页。视图:谷歌学术搜索
3. W. Hartschuh, E. Weihe, M. Reinecke，“皮肤中的肽(神经紧张素，VIP，物质P)神经纤维:神经肽参与痛觉、瘙痒和炎症的免疫组化证据，”英国皮肤病杂志，第109卷，第2期。第25页14-17页，1983。视图:谷歌学术搜索
4. J. Donelan, W. Boucher, N. Papadopoulou等，“促肾上腺皮质激素释放激素通过神经紧张素依赖过程诱导皮肤血管通透性，”美国国家科学院院刊号，第103卷。20, pp. 7759-7764, 2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
5. L. K. Singh, X. Pang, N. Alexacos, R. Letourneau，和T. C. Theoharides，“急性固定应激通过促肾上腺皮质激素释放激素、神经紧张素和P物质触发皮肤肥大细胞脱颗粒:与神经源性皮肤疾病的联系，”大脑，行为和免疫，第13卷，第2期3，页225-239,1999。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
6. M.Vasiadi，A.Therianou，K.D.Alysandratos等人，“银屑病患者血清神经降压素（NT）增加，NT诱导人肥大细胞释放血管内皮生长因子。”英国皮肤病杂志，第166卷，第6期，第1349-1352页，2012年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
7. T.C.Theoharides，K.D.Alysandratos和A.Angelidou，“肥大细胞与炎症，”生物化学与生物物理学学报(一九八二十二日卷)1，页21-33,2012。视图:谷歌学术搜索
8. K. Alysandratos, S. Asadi, A. Angelidou等人，“神经紧张素和CRH的相互作用增加了人肥大细胞的激活，”公共科学图书馆一号，第7卷，第5期11、文章ID e48934, 2012。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
9. R.Carraway、D.E.Cochrane和J.B.Lansman，“神经降压素刺激大鼠肥大细胞分泌胞外组胺并提高血浆组胺水平，”生理学杂志，第323卷，第403-41414页，1982年。视图:谷歌学术搜索
10. D. E. Cochrane, R. E. Carraway, K. Harrington, M. Laudano, s . Rawlings, R. s . Feldberg，“HMC-1人肥大细胞合成神经紧张素(NT)前体，分泌生物活性NT样肽(s)并表达NT受体NTS1，”炎症反应的研究，第60卷，第2期12, pp. 1139-1151, 2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
11. M. Ramez, M. Bagot, M. Nikolova等，“人皮肤T细胞淋巴瘤恶性淋巴细胞中神经紧张素受体的功能特征”，皮肤病学调查杂志，第117卷，第3期，第687-693页，2001年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
12. L.da Silva、B.M.Neves、L.Moura、M.T.Cruz和E.Carvalho，“神经降压素下调皮肤树突状细胞的促炎症特性并增加表皮生长因子的表达。”生物化学与生物物理学学报(第1813卷)10，第1863-1871页，2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
13. J. M.索雷尔和A. I.卡普兰，《成纤维细胞异质性:比皮肤更深》，细胞科学杂志，第117卷，第117号5，页667-675,2004。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
14. R. S. Smith, T. J. Smith, T. M. Blieden，和R. P. Phipps，“成纤维细胞作为前哨细胞:趋化因子的合成和炎症的调节”，美国病理学杂志号，第151卷。2，页317-322,1997。视图:谷歌学术搜索
15. 温克尔曼，《人类新生包皮的皮肤神经支配》皮肤学研究杂志第26卷第2期第1页，53-67,1956。视图:谷歌学术搜索
16. A. K. Antony, W. Kong，和H. P. Lorenz，“无疤痕愈合过程中神经发育基因的上调”，整形外科年鉴号，第64卷。2，页247-250,2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
17. B. M. Neves, M. T. Cruz, V. Francisco等，“pi3激酶、MAPKs和NF-的不同作用κB关于树突状细胞Th1/Th2细胞因子/趋化因子极化曲线的操纵，”分子免疫学，第46卷，第13期，第2481-24922009页。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
18. R. Goldman, Z. B. Shavit，和D. Romeo，“神经紧张素调节人类中性粒细胞运动和吞噬能力，”2月的信第159卷第1期1-2页，63-67,1983。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
19. I. Lemaire，“神经紧张素增强活化的肺泡巨噬细胞产生IL-1，”免疫学杂志号，第140卷。9、1988年。视图:谷歌学术搜索
20. J. J. Garrido, R. M. Arahuetes, A. Hernanz, and M. De la Fuente，“神经紧张素和神经髓质N对小鼠淋巴细胞粘附和趋化能力的调节”，监管肽号，第41卷。1，第27-37页，1992。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
21. I. castagliolo, C. Wang, L. Valenick等，“神经紧张素是结肠炎症中的促炎神经肽，”临床研究杂志号，第103卷。6，第843-849页，1999。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
22. S. Martin, J. Vincent和J. Mazella，“神经紧张素受体-3在神经紧张素诱导的人类小胶质细胞迁移中的参与”神经科学杂志，第23卷，第4期，第1198-1205页，2003年。视图:谷歌学术搜索
23. D.Zhao，S.Kuhnt Moore，H.Zeng，J.S.Wu，M.P.Moyer和C.Pothoulakis，“神经降压素通过Rho GTPase介导的NF刺激人类结肠上皮细胞中IL-8的表达-$\kappa$B途径，”美国生理学杂志细胞生理学，第284卷，第6期，C1397-C1404页，2003年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
24. E. Dicou, J. P. Vincent，和J. Mazella，“神经紧张素受体-3/sortilin介导神经紧张素诱导的细胞因子/趋化因子在海洋小胶质细胞系中的表达”，神经科学研究杂志第78期1，页92-99,2004。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
25. S. F. Assimakopoulos, C. D. Scopa, V. N. Nikolopoulou，和C. E. Vagianos，“蚕豆素和神经紧张素对肠粘膜的多效作用:不仅仅是三叶肽，”世界胃肠病学杂志第14卷第2期22, pp. 3602-3603, 2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
26. K. L. Bost, S. A. L. Breeding, D. W. Pascual，“LPS对大鼠巨噬细胞中P物质及其受体mrna编码的调节”，区域免疫学，第4卷，第2期，第105-112页，1992年。视图:谷歌学术搜索
27. A.P.Silva、C.Cavadas、B.Baïsse Agushi、O.Spertini、H.R.Brunner和E.Grouzmann，“NPY、NPY受体和DPP IV活性受LPS、TNF的调节-α和干扰素-κ在HUVEC,”监管肽，第116卷，第1-3期，第71-79页，2003年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
28. J.Grzybowski，E.Ołdak和M.K.Janiak，“G-CSF、GM-CSF和EGF在伤口治疗中的局部应用，”后现代医学，第53卷，第1期，第75-86页，1999年。视图:谷歌学术搜索
29. M. Jost, C. Kari，和U. Rodeck，《表皮生长因子受体——多种表皮功能的基本调节器》欧洲皮肤病杂志，第10卷，第7期，第505-510页，2000年。视图:谷歌学术搜索
30. C. Esche, C. Stellato, L. A. Beck，《趋化因子:先天和适应性免疫中的关键角色》，皮肤病学调查杂志，第125卷，第5期4，页615-628,2005。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
31. M. Baggiolini, a . Walz, and S. L. Kunkel，“中性粒细胞激活肽-1/白细胞介素8，一种激活中性粒细胞的新型细胞因子”临床研究杂志，第84卷，第4期，第1045-1049页，1989年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
32. E.A.Garcia Zepeda、M.E.Rothenberg、R.T.Ownbey、J.Celestin、P.Leder和A.D.Luster，“人嗜酸性粒细胞趋化因子是嗜酸性粒细胞的一种特异性化学引诱剂，为解释组织嗜酸性粒细胞提供了一种新机制。”自然医学，第2卷，第4期，第449-456页，1996年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
33. U. Forssmann, M. Uguccioni, P. Loetscher等人，“eotaxin -2，一种新的CC趋化因子，对趋化因子受体CCR3有选择性，并像eotaxin一样对人类嗜酸性粒细胞和嗜碱性白细胞起作用，”实验医学杂志，第185卷，第12期，第2171-2176页，1997年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
34. F. Sallusto, C. R. Mackay和A. Lanzavecchia，“人T辅助2细胞选择性表达eotaxin受体CCR3”，科学第277期第5334页，2005-2007,1997。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
35. A. de Paulis, F. Annunziato, L. di Gioia等，“趋化因子受体CCR3在人肥大细胞上的表达”，国际变态反应与免疫学档案号，第124卷。1-3页，146 - 150,2001。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
36. T. Fujisawa, Y. Kato, H. Nagase等，“趋化因子通过CCR-3诱导嗜酸性粒细胞脱粒”过敏与临床免疫学杂志，第106卷，第3期，第507-513页，2000年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
37. M. Uguccioni, C. R. Mackay, B. Ochensberger等人，“趋化因子受体CCR3在人类血液嗜碱性粒细胞中的高表达。eotaxin、MCP-4和其他趋化因子的激活作用临床研究杂志，第100卷，第5期，第1137-1143页，1997年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
38. S. J. Ono, T. Nakamura, D. Miyazaki, M. Ohbayashi, M. Dawson, M. Toda，“趋化因子:在白细胞发育、贩运和效应功能中的作用”，过敏与临床免疫学杂志号，第111卷6，页1185-1199,2003。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
39. 赖欣，王志强，魏磊，王磊，“外周神经末梢释放P物质对创伤愈合中表皮生长因子及其受体内源性表达的影响”，中华创伤杂志英文版，第5卷，第3期，第176-179页，2002年。视图:谷歌学术搜索
40. 白桦，“生长因子对表皮角质形成细胞的调节，”皮肤病科学杂志，第59卷，第2期，第73-802010页。视图:出版商网站|谷歌学术搜索

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