治疗的潜力HGF-Expressing人类脐带间充质干细胞在小鼠急性肝衰竭

文摘

人类脐cord-derived间充质干细胞(UCMSCs)尤其具有吸引力的细胞细胞和基因治疗在急性肝功能衰竭(ALF)。然而,这种细胞疗法的疗效在动物实验中需要显著提高,才能翻译成诊所。在这项研究中,我们调查了UCMSCs的治疗潜力,过表达肝细胞生长因子(HGF)在急性肝衰竭acetaminophen-induced小鼠模型。我们发现HGF-UCMSC细胞疗法从急性肝衰竭保护动物通过减少肝损伤和延长动物的生存。HGF-UCMSCs的治疗效果与增加血清中谷胱甘肽(GSH)和肝酶,维持体内氧化还原平衡,包括γ-glutamylcysteine合成酶(γgcs)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)。免疫组织化学染色证实HGF-UCMSCs动员肝脏受伤的部位。此外,HGF-UCMSCs调制凋亡通过上调抗凋亡Bcl2和表达下调proapoptotic基因,包括伯灵顿和肿瘤坏死因子α。综上所述,这些数据表明,异位表达UCMSCs HGF的保护动物免受acetaminophen-induced通过antiapoptosis急性肝衰竭和抗氧化作用机制。

1。介绍

急性肝功能衰竭(ALF)、严重肝损伤由多种因素引起,特征是严重的肝功能异常合成、解毒、排泄和生物转化。流行病学资料表明,治疗相关性或suicide-driven过剂量的对乙酰氨基酚(APAP即)是最常见的病因阿尔夫在发达国家1,2]。的机制APAP-induced阿尔夫与氧化应激在肝细胞,导致肝细胞的大量死亡。肝移植是最常用的疗法,但由于器官排斥很大的局限性,缺乏捐助者,以及高成本(3- - - - - -5]。

最近,细胞疗法都集中在使用间充质干细胞(MSC)对肝脏再生(6),包括那些从人类骨髓msc (7,8],脐带血[9),胎儿肝脏(10,11),或脂肪组织1,12- - - - - -14]。这些MSC食谱已经批准诱导宿主肝脏恢复和刺激内源性再生项目(2,3,12,14,15]。然而,这些MSC治疗的疗效在动物实验中仍然需要显著提高前就被翻译成诊所。

肝细胞生长因子(HGF),一个强有力的肝有丝分裂原,有多个生理生化功能。HGF提高DNA合成和作为抗氧化因子通过减少氧化应激在肝脏16]。此外,HGF还参与调节各种流程在肝脏和证明刺激肝再生和肝功能衰竭(17,18]。HGF / c-Met信号通路被牵连是细胞氧化还原内稳态的关键调节器和氧化应激。信号通路保护对抗氧化应激细胞损伤(19]。

在这项研究中,我们确定人类HGF的异位表达基因是否会提高治疗的潜力在APAP-induced UCMSCs阿尔夫老鼠。我们假设这个独特的治疗方法结合的再生作用UCMSCs HGF的抗氧化活性的因素。为此,我们建立了一个阿尔夫致命剂量的APAP即小鼠模型,研究的治疗潜力HGF-expressing UCMSCs。

2。材料和方法

2.1。隔离和流式细胞术UCMSCs表现型

脐带采集后交付足月婴儿在医院获得父母同意写的。如前所述(执行隔离UCMSC20.,21]。短暂,沃顿商学院的果冻是切成小块,用胶原酶治疗1型(σ,密苏里州),然后在含10%胎牛血清的DMEM培养(FCS)和抗生素在37°C公司5%₂湿润的气氛。细胞迁移从外植体5 - 7天后收集和扩展。细胞通过3被用于细胞移植。《京都议定书》是人类医学伦理审查委员会批准的从深圳北科细胞工程研究所。

培养UCMSCs特点是血细胞计数。细胞使胰蛋白酶化和暂停1×10的浓度⁶细胞/毫升含有0.1% BSA的磷酸盐(PBS)。在4°C细胞孵化msc标记抗体(CD90、CD73和CD105),造血细胞标记(CD45、CD34、CD14、CD19),和受体细胞外基质(CD29、CD44)和主要组织相容性(HLA-DR)从BD生物科学(所有)。30分钟后,细胞被洗,并于300年暂停μL PBS。流式细胞仪进行使用FACSAria三世4细胞分选机(BD生物科学,CA)。实验重复了三次,结果是代表三个独立的实验。

2.2。克隆肝细胞生长因子(HGF)

以下PCR引物被用来扩大人类胶质瘤cDNA: HGFNheI-F: 5′-TGCTAGCGCCACCATGTGGGTGACCAAACTCCTGCCAGC-3′和HGFSalI-R: 5′-AGTCGACCTATGACTGTGGTACCTTATATGTTA-3′。放大了HGF cDNA PCR使用pSNAV2.0-hHGF质粒为模板。PCR产品被NheI和萨利·限制性内切酶消化,从琼脂糖凝胶中提取,克隆到pDC315 adenoviral向量与T4 DNA连接酶。

2.3。代HGF-Expressing UCMSCs

腺病毒包装和生产使用方法之前报道[22,23]。Adenoviral包装293个细胞(1×10⁵在24孔板细胞/)被播种在杜尔贝科修改鹰的媒介(DMEM)补充10%胎牛血清的边后卫和孵化在37°C公司为5%₂过夜。媒介是取代Opti-MEM (CA)表达载体,转染前。融合细胞转染在80% -90%,骨干质粒pBHGlox(δ)E1, 3 Cre穿梭质粒pDC315-HGF使用Lipofectamine 2000(表达载体,CA)根据制造商的指示。转染后6天,病毒空斑出现,为生产Ad-HGF收集。

人类UCMSCs被播种在T175瓶的浓度为10⁶细胞/瓶和孵化24小时的生长介质。细胞转向杜尔贝科的鹰介质(DMEM)包含5修改μM HP4没有血清和感染adenoviral携带50 HGF在感染复数(MOI = 50)。4小时后病毒暴露,媒介改变了正常的生长介质和细胞培养48 h。受感染的细胞收获48小时后。流式细胞仪是用来描述表型的HGF-UCMSCs转染与adenoviral HGF。

2.4。免疫荧光染色

免疫荧光法进行了研究在感染细胞和控制细胞的基因表达。培养细胞与刚做好的4%多聚甲醛固定(PFA) 10分钟RT和permeabilized 0.1% Triton x - 100 3 - 5分钟在冰上。被屏蔽后阻断缓冲区(4% BSA) 30分钟在RT,细胞被孵化与兔子反HGF在一夜之间抗体在4°C,用PBS洗净,然后二次抗体孵育山羊anti-rabbit抗体标记与PE RT 1 h。幻灯片和PBS洗。DAPI (4′, 6-diamidoino-2-phenylindole表达载体,CA)被用来可视化核。免疫荧光的荧光显微镜下观察(观察A1、蔡司、德国)。

2.5。成骨、脂肪形成的分化

细胞被播种在5×10³细胞/厘米²,然后使用成骨分化和脂肪形成的差异化工具包(表达载体,CA)。大约21到28天后,细胞被沾油红O或茜素红检测中性脂质空泡的存在在骨细胞分化的脂肪细胞和钙沉积,分别。

2.6。细胞移植到小鼠APAP-Induced肝损伤

雄性BALB / c小鼠体重(18 - 20 g)购买来自广东省的医学实验动物中心,中国。老鼠在标准条件下维护。APAP即(阿拉丁,中国上海)溶解在无菌生理盐水(NS)的浓度为18.75 mg / mL的致命的研究。ALF模型生成6-8-week-old小鼠腹腔内政府单一剂量的800μL / 20克体重无菌生理盐水(NS)包含15μg APAP即。一个小时后,老鼠接受静脉注射HGF-UCMSCs尾静脉移植()或UCMSCs ()1×10的浓度⁶细胞/鼠标。控制老鼠收到800μL / 20克体重无菌生理盐水(NS);)。在不同的时间点鼠标存活率计算。

在第二个实验中,APAP即准备12.5的浓度μg / mL的亚致死的研究。在这组实验中,小鼠腹腔注射10μg APAP即让亚致死的阿尔夫模型。收集细胞移植后,肝脏病理变化进行分析和肝脏功能进行评估。

动物安乐死标准有限公司₂吸入过程的研究或如果他们显示死亡的迹象。所有研究指导原则和协议下进行制度动物伦理委员会批准深圳北科细胞工程研究所。

2.7。血清和抗氧化的酶检测参数

收集血液样本的亚致死的阿尔夫老鼠在4个小时,8个小时,APAP即注射后24小时。血样离心机在3000 x rpm,血清收集确定活动的天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)。血清AST、ALT,老鼠血液中LDH与自动生化分析仪测定(迈瑞、深圳、中国)。移植后一个星期,老鼠牺牲有限公司₂。的部分肝脏重和肝匀浆是由组织匀浆机(IKA)。蛋白质浓度的肝匀浆用自动生化分析仪测定。活动的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT),γ-glutamylcysteine合成酶(γgc)和丙二醛(MDA)、谷胱甘肽的水平(谷胱甘肽)在肝组织SOD测定了试验设备,γgcs化验设备,猫试验装备,谷胱甘肽试验装备,和MDA测定工具包(南京建成生物工程研究所,中国),分别。SOD的活动,猫,γgcs记录相对活动的正常化匀浆的蛋白质浓度。同样,MDA的水平和相对水平为谷胱甘肽在匀浆蛋白浓度正常化。

2.8。组织学和免疫组织化学检查

在研究结束时,肝脏的亚致死的阿尔夫老鼠移除并称重。大约50毫克的肝组织磨在试剂盒和存储实时PCR的−80°C。其余的肝脏样本在4%多聚甲醛固定24小时为组织学和免疫组织化学分析和处理。固定肝脏样本切成小块从每个肝脏(3),脱水,石蜡包埋,切成5μ米厚的部分。部分与苏木精染色曙红的病理观察。相对坏死区域在显微镜下在三个领域的计算使用以下公式:相对坏死区域=(坏死面积/总面积形象)×100%。免疫组织化学染色进行使用方法如前所述[8,24]。兔子反HGF单克隆抗体(圣克鲁斯生物技术,CA)和兔反CD90单克隆抗体(BD生物科学,CA)被用作主要的抗体。山羊anti-rabbit多克隆抗体探测与民建联作为第二抗体。

2.9。定量实时聚合酶链反应

移植后一个星期,总RNA的亚致死的阿尔夫老鼠准备使用试剂盒(表达载体,CA)。RNA治疗由DNase我主人的组合和转换为cDNA MMLV RT混合(表达载体,CA)。整除的cDNA PCR试验测试使用SYBR预混料交货Tq II(豆类、日本)Bio-Rad CFX96实时系统的标准循环条件下2分钟在95°C,紧随其后的是40 PCR在20秒的周期95°C,在56°C, 30秒,30秒72°C。目标基因的表达(P65 TNFα、bcl - 2、Bax)计算的相对价值表达GAPDH正常化,使用ΔΔCt方法(24,25]。基因表达数据提出了褶皱的变化相对于负对照组(正常小鼠)。三个复制每执行条件和实验中,与每个样本化验为每个扩增子一式两份。使用的引物PCR包括以下:P65 F: ACAGACCCAGGAGTGTTCACAGAP65 R: CATGGACACACCCTGGTTCAG肿瘤坏死因子αF: ATGAGAAGTTCCCAAATGGC肿瘤坏死因子α接待员:CTCCACTTGGTGGTTTGCTAmBcl2-E1F: GCATCTGCACACCTGGATCCAGGATmBcl2-E2R: GAAATCAAACAGAGGTCGCATGCTGmBax-E4F: ACCATCATGGGCTGGACACTGGACTmGAPDH-F: AGGTCGGTGTGAACGGATTTGmGAPDH-R: TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA

2.10。免疫印迹分析

细胞细胞溶解在radioimmunoprecipitation化验(里帕)裂解缓冲(圣克鲁斯生物技术,CA),蛋白质含量是决定使用Bio-Rad蛋白质测定试剂(Bio-Rad大力神,CA)。等量的细胞溶解产物蛋白质10% sds - page分离和转移到PVDF膜(美国微孔,Billerica的)。主要的抗体HGF, p65,β肌动蛋白(1:1000)来自圣克鲁斯生物技术、CA。与Tris-buffered盐水洗膜后含有0.05%渐变20(洗涤缓冲),辣根过氧化物酶(合)共轭二次抗体(1:1000;圣克鲁斯生物技术,CA)补充道。进一步洗涤后颜色开发使用鲁米诺试剂(圣克鲁斯生物技术,CA),和的合活动印迹分析使用LAS1000成像仪(富士胶片、东京、日本)。

2.11。统计分析

数据提出了均值±标准差(SD)。单向方差分析(方差分析)与Bonferroni调整被用来分析两组血清参数之间的差异。分析了动物生存使用kaplan meier日志等级的方法。被认为是具有统计学意义。数据用SPSS统计软件进行分析。

3所示。结果

3.1。异位表达HGF不会影响Multipotency UCMSCs

UCMSCs是从人类脐带组织培养(20.]。附着UCMSCs开始生长初始组织镀后8 - 12天。UCMSCs感染了腺病毒的感染复数胶质瘤50。见图1(一),immunofluorescent染色发现HGF的表达两天后病毒转导(右面板)。然而,父UCMSCs没有表达HGF(左面板)。免疫印迹也验证了在病毒转染UCMSCs HGF的表达(图1 (b))。

然后我们检查的性质HGF-UCMSCs诱导成骨、脂肪形成的分化。分化后,我们没有观察到显著差异父UCMSCs HGF-UCMSCs,胞浆内脂滴的外观由油红O染色(图1 (c),右面板)和钙存款染色茜素红(图1 (c)、中间板)。这些数据表明,异位HGF的表达并不影响潜在的脂肪形成的,在UCMSCs成骨分化。

我们进一步的表型特征HGF-UCMSCs使用流式细胞仪病毒感染后48小时。我们发现干细胞标记CD105、CD73 CD90, CD44, CD29同样表达了父母和HGF-expressing UCMSCs(数字1 (d)- - - - - -1 (e))。消极CD45标记,CD34, CD14、CD19和HLA-DR HGF-UCMSCs表示在非常低的水平。因此,adenoviral HGF的表达并不影响的表达间充质标记,如CD90、CD105, CD73。

3.2。HGF-UCMSCs保护肝损伤小鼠阿尔夫

评估治疗肝再生的潜力,HGF-UCMSCs被移植到小鼠阿尔夫。阿尔夫模型成立于老鼠APAP即使用剂量腹腔注射诱导氧化应激,肝细胞坏死,大量空泡变性,炎性细胞浸润在大多数区域的实质26]。在阿尔夫决定HGF-UCMSC的功效,我们进行滴定实验来确定适当的剂量的细胞和细胞治疗的时间窗。我们发现1×10⁶UCMSC可能导致降低转氨酶水平。静脉移植提供HGF-UCMSCs是最有效的方法。因此,1×10⁶HGF-UCMSCs是静脉注射移植到老鼠APAP-injured一小时后阿尔夫归纳。

相比于控制老鼠(图2(一个)),亚致死的APAP即治疗小鼠表现出严重的内出血和坏死肝细胞(图2 (b))。值得注意的是,移植HGF-UCMSCs显著减毒肝损伤(图2 (c))。他走时染色也证实肝部分的治疗潜力HGF-UCMSCs衰减APAP-induced坏死(图2 (g))。总的来说,HGF-UCMSCs显示治疗效力比UCMSCs在治疗阿尔夫(数字2 (d),2 (h),2(我))。

在另一项研究中,动物注射了致命剂量的APAP即评估的角色HGF-UCMSCs改善阿尔夫生存。一剂1×10⁶细胞移植静脉注射到接受者的动物。我们发现,移植的HGF-UCMSCs UCMSCs显示显著增加动物存活率比NS控制。阿尔夫HGF-UCMSC组的老鼠有一个更好的生存比UCMSC组(85.7%和78.6%),尽管没有统计上的不同(图的差异2 (j))。

3.3。HGF-UCMSCs伤肝的功能改进

诱发小鼠肝损伤程度的次致死量APAP即被监测血清肝总蛋白和白蛋白水平在24小时时间进程的研究。我们发现总肝蛋白质并没有显示出多少不同的治疗组(图之间的区别3(一个))。然而,血清白蛋白水平高出1.5倍在小鼠24小时接受HGF-UCMSCs比未经处理的APAP-mouse组和治疗组与UCMSCs(图3 (b))。

肝脏功能也进行了测量血清AST、ALT和LDH。我们观察到所有的酶在阿尔夫升高小鼠相比控制但减少时间点(4 h, 8 h和24小时)HGF-UCMSC治疗组(,数据3 (c)- - - - - -3 (e)),而未经处理的APAP-mouse组。最重要的是,AST和ALT水平在24小时和LDH水平4 h显著降低小鼠接受HGF-UCMSC比UCMSCs治疗组。

3.4。HGF-UCMSCs迁移到受伤的肝区

描绘的保护作用机制HGF-UCMSCs APAP-induced次致死量的阿尔夫的动物,我们追踪了移植细胞的免疫组织化学染色HGF和人类CD90阳性细胞在小鼠的肝脏移植后7天。使用反HGF和反CD90抗体,我们发现HGF-UCMSCs被发现受伤的老鼠的肝脏(图4)。这些数据表明,移植UCMSCs能够迁移到受伤部位。

3.5。HGF-UCMSCs减少氧化应激小鼠阿尔夫

过剂量的APAP即可以在肝细胞诱导氧化剂的压力,尤其是谷胱甘肽疲惫。HGF / c-Met信号通路是细胞氧化还原内稳态的关键调节器和氧化应激19]。我们因此检查如果治疗HGF-UCMSCs保护的亚致死的剂量APAP-induced阿尔夫动物通过修改氧化应激机制。为此,我们研究了肝脏中谷胱甘肽的水平。APAP-injured小鼠的肝脏谷胱甘肽略下降4 h和8 h与控制。对待动物与UCMSCs对谷胱甘肽水平没有显著影响。然而,治疗HGF-UCMSC显著提高谷胱甘肽水平在4 h和24 h(图5(一个))。

活性氧(ROS)回收的细胞的抗氧化防御系统包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶。在此系统中,超氧化物阴离子的SOD酶催化转换()激进的过氧化氢+氧气分子。谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶控制氧化剂的平衡,包括活性氧、活性氮物种(RNS)和含硫自由基27- - - - - -29日]。我们在阿尔夫因此测量这些酶的动物。如数据所示5 (b)- - - - - -5 (c),HGF-UCMSC疗法增强酶的活动APAP-induced阿尔夫动物8 h和24小时。

γ-Glutamylcysteine合成酶(γgcs)病原反应酶的谷胱甘肽合成,决定了细胞内的谷胱甘肽的量。通过测量肝的活动γgcs团体在不同的实验,我们发现HGF-UCMSC治疗增加肝γgc活动(图5 (d))

接触APAP即引起的丙二醛(MDA)的血清。我们发现治疗HGF-UCMSCs显著抑制血清MDA的增量(图5 (e))。值得注意的是,HGF-UCMSCs消除血清MDA比UCMSCs更有效地在任何时间点。

3.6。HGF-UCMSCs减轻氧化应激细胞凋亡

Antiapoptosis和肝细胞再生的关键预防亚致死剂量的毒性APAP-induced阿尔夫老鼠。我们使用定量PCR来衡量mRNA的表达与细胞凋亡相关基因,包括bcl - 2、Bax, P65和肿瘤坏死因子α。我们发现HGF-UCMSC配方调节凋亡bcl - 2,但下调proapoptotic伯灵顿和肿瘤坏死因子α基因比USMSC配方效果更佳(,图6(一))。

核因子-κB (NF -κB)是一种多效性的转录因子在200个基因参与调节细胞生长、细胞凋亡、肿瘤发生、肿瘤转移、胚胎发育、炎症的影响。我们发现HGF-UCMSC治疗调节在阿尔夫老鼠P65(图的表达6(一))。同样,用免疫印迹我们发现的积极核P65 NF -κB被HGF-UCMSCs升高(图6 (b))。正如预期的那样,人类HGF表达只在从HGF-UCMSC组小鼠的肝脏。在一起,这些数据表明,这些基因的表达改变可能为行动提供一个潜在的分子基础的HGF-UCMSCs ALF模型。

4所示。讨论

在这项研究中,我们首次证明的治疗潜力HGF-expressing UCMSCs小鼠阿尔夫。这种方法结合了间充质干细胞的细胞治疗与HGF表达的病毒的作用。虽然UCMSCs援助APAP-induced肝坏死的再生,HGF减少组织损伤通过多种机制。我们证明系统管理HGF-UCMSCs保护动物急性肝衰竭,减轻肝损伤和延长生存。值得注意的是,过度的HGF通过adenoviral感染没有不利影响UCMSCs的形态和多功能分化。

有趣的是,HGF-UCMSCs能够提高受伤的老鼠的存活率比父母的UCMSCs更显着地。我们还发现一个更好的功效比UCMSCs HGF-UCMSCs改善肝功能和病理变化。免疫组织化学和他染色进一步证明归航的存在HGF-UCMSCs小鼠肝脏内,在那里他们可能在受伤部位,以减少肝坏死和炎性细胞浸润。

HGF,也称为散射因素,支持不同的细胞功能,包括形态发生、能动性,增殖和凋亡保护30.]。HGF和其受体c-Met激活信号通路促进细胞对凋亡诱导物生存。有几个报告,强烈支持HGF / c-Met[凋亡的影响31日- - - - - -34),主要由感应ant-apoptotic bcl - 2这样的蛋白质,Bcl-XL或mcl1 [35]。在这项研究中,我们还发现,阿尔夫老鼠收到HGF-UCMSC治疗肝脏中表达更高的凋亡Bcl2比老鼠收到UCMSC治疗。同时,治疗也会使proapoptotic基因,伯灵顿,TNFα(图6(一))。未来的研究将调查的详细机制,特别是细胞凋亡在不同实验条件下使用TUNEL或cleaved-caspase 3化验。

HGF / c-Met通路的作用氧化应激的保护仍缺乏定义。一些报道表明,从氧化损伤(HGF能保护36,37),但这种增长的影响因素APAP-induced肝损伤实际上是未知的。接触APAP即导致肝细胞氧化应激,导致大量的肝细胞死亡。APAP即能够分解和破坏N-acetyl-L-cysteine,这是必要的对谷胱甘肽合成氨基酸。细胞色素P450在肝细胞内可以消除APAP-derived主要有毒代谢物和导致的形成N-acetyl-p-benzoquinoneimine (NAPQI)。持续的形成NAPQI是谷胱甘肽共轭,最后导致谷胱甘肽的耗竭,然后导致肝细胞内氧化应激(7]。

在这项研究中,我们证明HGF-UCMSCs可以减少氧化应激通过增加细胞谷胱甘肽和降低MDA含量,可能通过其能力提高的活动三个酶(SOD, CAT,γgcs)参与细胞氧化还原体内平衡的维护。综上所述,我们的数据表明,HGF-UCMSC疗法结合的独特的再生作用UCMSCs人类HGF的抗氧化活性。

msc可以直接分化成hepatocytic细胞在适当的培养条件。HGF能诱导肝脏特定基因的表达,包括甲胎蛋白、白蛋白、细胞角蛋白,通过其受体的激活在msc c-Met [38- - - - - -40]。间充质干细胞和组织委员会国际社会的细胞治疗人类msc (ISCT)提出了最低限度的标准,包括可能分化成成骨细胞、脂肪细胞和内层在体外(41]。在临床前研究中,我们遵循了ISCT的标准检查潜在的成骨和脂肪形成的分化。HGF hepatocytic血统的感应的作用从UCMSCs将在未来的研究调查。此外,氧化剂产生的细胞,包括活性氧、活性氮物种(RNS),包含激进分子和硫,控制支持和抗氧化酶(27,28]。未来的研究需要解决氧化剂的变化,特别是活性氧,在我们HGF-UCMSC ALF模型处理。

总之,暴露于各种因素,如药物、外源性物质,和病毒,可能会导致肝衰竭。来自本研究的发现展示的潜力HGF-expressing UCMSCs治疗阿尔夫。这种方法结合了独特的UCMSCs再生作用与抗氧化作用和人类HGF的antiapoptosis属性。我们的数据从而突出的临床潜在有价值的双管齐下的方法治疗严重肝损伤患者。

缩写

阿尔夫:	急性肝衰竭
ALT:	丙氨酸转氨酶
AST:	天冬氨酸转氨酶
ELISA:	酶联免疫吸附测定
FCS:	胎牛血清
谷胱甘肽:	谷胱甘肽
HGF:	肝细胞生长因子
UCMSC:	人类脐cord-derived间充质干细胞
MDA:	丙二醛
硕士:	间充质干细胞
NS组:	Nontransplantation集团
NS:	生理盐水
PBS:	磷酸盐
SOD:	超氧化物歧化酶
猫:	过氧化氢酶
SD:	标准偏差
肿瘤坏死因子α:	肿瘤坏死因子-α
APAP即:	对乙酰氨基酚。

利益冲突

作者指出任何潜在的利益冲突。

作者的贡献

选手唐、Qiongshu李和泛威孟同样导致了项目。

确认

这项研究是由深圳科研补助金(GJ200807210024A CXZZ20150430152511042)李道和湘胡锦涛;沈阳科研补助金(f13 - 205 - 9 - 00)李道;广东研究资助(2013 b070704118);加州再生医学研究所(CIRM)授予(rt2 - 01942);吉林国际合作格兰特(20120720);和中国的国家自然科学基金委格兰特对胡锦涛纪梵(81272294,31430021)。

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