Label-Free细胞生物学的生物传感器

文摘

Label-free生物传感器为研究细胞生物学终于来的年龄。最近的事态发展先进的生物传感器低吞吐量和高维护研究工具高吞吐量和低维护筛选平台。并行,生物传感器已经从一个分析工具专为分子间相互作用分析的强大平台在整个单元级别学习细胞生物学。介绍了历史发展、检测原理和应用细胞生物学label-free生物传感器。未来展望进行了讨论。

1。介绍

细胞是生命的功能的基本单位。研究活细胞的能力是至关重要的细胞生物学。在过去的几十年里,分子生物学的进步已经使它成为常规实验室实践操纵细胞活细胞的目标。基因表达可用于细胞内增加一个特定的蛋白质,而干扰RNA可以用来抑制或消除一个特定的蛋白质,和诱变改变一个特定的蛋白质的结构和功能,以便目标蛋白质的功能后果研究[1,2]。并行,分析技术也先进,满足日益增长的需求描述分子与时间和空间分辨率高活细胞,以及高通量(3,4]。虽然这些分子化验只测量一次独立的分子,他们可以识别不同的活化剂,效应物,酶和底物对许多重要的细胞过程包括信号(5]。因此,现在这些化验控制细胞生物学研究。然而,由于信号蛋白主要通过大而复杂的网络操作直接细胞内信号的传播,最终确定细胞如何回应环境因素(6,7),越来越多的技术要求不仅允许一个调查细胞反应在整个细胞和细胞系统层面,但也使机械的描述。Label-free生物传感器满足这些需要通过测量集成和整个细胞的表型反应具有高时间分辨率(8,9]。此外,这些生物传感器使非侵入性和高度敏感的测量许多不同的细胞反应,从细胞粘附到细胞屏障功能、信号、感染、迁移、增殖和死亡,和分化(图1),其中部分是本文的主题。

2。Label-Free生物传感器

Label-free生物传感器通常使用一个传感器将stimulus-induced细胞反应转化为可量化的信号(即。,生物传感器信号)[9]。根据传感器的性质,label-free生物传感器用于整个细胞传感大多分为光学和electric-based(图2)。值得注意的是,有许多其他类型的生物传感器目前正在发展。这些包括原子力显微镜测量细胞的生物力学10,11),拉曼成像测量的生产和组织细胞中不饱和脂肪分子(12,13],whispering-gallery-mode生物传感器(14和共振的镜子15若]。因为这些生物传感器吞吐量有限整个细胞传感目前,他们被排除在外。

光学生物传感器包括表面等离子体共振(SPR)和共振波导光栅(RWG),这两个用表面绑定隐失波描述当地改变折射率传感器表面。SPR雇佣了光激发表面等离子体极化声子(许可证)来检测生物分子在金属表面的吸附(通常是金或银)(16)(图2(一个))。SPP是表面束缚产生的电磁波相互作用的光与移动充电器在金属表面17,18]。海浪沿界面传播之间的正面和负面的介电系数的材料(如金属/电介质界面),导致一个主要出现在和衰减的电磁场消散到电介质由于增加了阻尼金属(19]。Biacore(现在通用电气医疗集团)首次引入的SPR生物分子相互作用分析仪器市场在1990年20.]。因为它的能力来衡量的亲和力和动力学交互,SPR通常被称为affinity-based生物传感器。最近SPR成像已成为现实(21),本地化SPR也已经开始获得景点(22]。然而,SPR仍然局限于低吞吐量今天在处理不同的样品。商业产品包括SPR系列通用电气医疗集团和从GWC SPR成像仪器和其他人(图2(一个))。

RWG使用一对漏水的模式nanograting波导结构光波导薄膜通过衍射,所以一个隐失波生成(图2 (b))。RWG也叫光栅耦合器,或光子晶体生物传感器。共振异常在周期性结构在1902年首次报道(23,24]。直到1980年代,一个表面束缚和波导制导模式共振是通过使用光栅耦合器和用于化学传感Teifenthaler和Lukosz [25,26]。类似于SPR, RWG还雇佣了一个隐失波检测,因此,最初开发生物分子相互作用分析(27,28]。近年来,大规模制造,加上新的生物传感器和仪器设计以及先进的试验协议,使得RWG系统第一个商业平台的高通量生物化学和细胞化验9,29日- - - - - -38]。商业产品包括史诗系统从康宁公司EnSpire multimodal读者从PerkinElmer包含史诗般的技术,从蒸发器和绑定系统生物系统(图2 (b))。

电动生物传感器使用一个低电解质阻抗界面检测细胞层的阻抗产生与电场下正弦电压(38,39]。电场下细胞的质膜作为绝缘层指导或在细胞之间的电流,分别导致细胞外和transcellular电流(图2 (c))。细胞外电流主要是由于细胞间传导,而transcellular电流细胞膜电容控制的结果。细胞外电流可以分开transcellular当前使用复杂的算法和比transcellular更健壮的电流。欧洲互通性系统委员会(电气细胞基质阻抗传感)仪器应用生物物理学的第一个商业细胞阻抗系统分析(40,41]。新系统使用复杂的算法来记录和过程阻抗信号,从而提高信号噪声比(42]。商业产品包括欧洲互通性系统委员会系统从应用生物物理学,xCELLigence(实时细胞电传感;RT-CES)从罗氏/究其生物科学和Cellkey(细胞介电谱;CDS)从分子设备(图2 (c))。

第一代生物传感器系统一次只能测量几件样品。SPR被限制到4个人还需要渠道并行测量和微流体样品交付。第一个欧洲互通性系统委员会系统测量电极阻抗的活细胞培养小到好吧板(41]。这一代系统是针对中度到高通量筛选(高温超导),这需要高度可再生的数据收集和简单的数据分析。这些产品的用户体验是当务之急;因此,创新仪器设计、试验协议和数据分析软件使这些系统低维护筛选平台(9,32]。

当前生物传感器在测量系统有很大的不同。光学生物传感器,细胞反应通常被称为动态质量重新分配(DMR) [8,9]。这是因为当地的折射率是在传感器表面质量密度成正比;因此,当地的折射率的变化(即。,the detected signal) reflects the redistribution of cellular matter within the sensing volume of the biosensor. Due to the relatively short penetration depth (~200 nm) of the evanescent waves, both SPR and RWG measure the DMR originated from the bottom portion of cells. However, for electric biosensors, the cellular responses are often referred to impedance signal, which is sensitive to ionic movement and cell morphological changes [9,41]。

当前生物传感器系统有很大的不同在仪器配置。所有的生物传感器系统是独立的读者,除了EnSpire读者这是一个台式多通道微量滴定板包含史诗label-free技术除了标签技术。所有的生物传感器系统是针对台式工具低到中度筛选市场,除了史诗系统专门为高温超导实验室。虽然有一些差异在空间和时间分辨率,所有生物传感器系统提供了一个平均人口的细胞反应。值得注意的是,由于制造业以及相对较低的体积在早期阶段的发展和采用这些技术,所有label-free生物传感器被认为是中等或高成本。

3所示。细胞粘附

细胞粘附是指绑定一个细胞的表面,细胞外基质(ECM)或另一个细胞。几乎所有的早期作品相关label-free整个细胞传感是集中在细胞粘附(图1(a))。这是意料之中的部分原因是细胞粘附常常会导致当地环境的改变在传感器表面,还有部分原因是细胞粘附是重要的组织细胞的生存和功能。

在欧洲互通性系统委员会的一项具有里程碑意义的论文,杰伯和Keese [40]调查两个纤维母细胞细胞系在金电极的行为在一个交变电场在4000赫兹。结果表明,这些细胞的粘附和传播有一个显著影响生物传感器系统的阻抗。此外,细胞粘附后的阻抗随时间波动,敏感肌动蛋白抑制剂的存在,细胞松弛素b后,他们发现电动生物传感器可以检测细胞微动到纳米级别(43]。因此,他们得出结论,电子生物传感器是活细胞的形态生物传感器(41]。

ECM到哪些细胞存在的环境因素调节细胞的动态行为。粘着斑复杂和podosome通常形成在细胞表面的粘附和ECM。粘着斑复杂是一种特定附件地方细胞高度底层ECM或邻近细胞通过细胞表面分子与整合素受体在质膜。podosome是cell-matrix粘附复杂,功能与细胞活性和细胞相关的细胞粘附事件蔓延。Label-free生物传感器被用来研究不同类型的细胞的粘附和传播各种表面,包括不同的ECM的蛋白质(44- - - - - -48)和自组装单层膜(SAMs)呈现为整合蛋白配体(49,50]。

细胞粘附机制依赖于细胞和ECM的类型。韦格纳et al。45]应用欧洲互通性系统委员会的附着力和传播Madin Darby狗肾上皮细胞(MDCK),发现不同的机制调节细胞粘附在不同ECM coatings-cell粘附在层粘连蛋白主要是由醣脂类的绑定,福斯曼抗原,细胞粘附在纤连蛋白主要是由于与整合素受体的相互作用。陈德良et al。48)发现,人类的附着力横纹肌肉瘤细胞系RDX2C2胶原蛋白——或者laminin-coated黄金电极增加细胞转染α2β1整合素。然而,在纤连蛋白细胞粘附似乎是最优的;的表达α2β1整合素对细胞粘附度影响不大,但删除的α2胞质域导致显著降低细胞粘附。这α2β1突变被认为导致招聘特异表达粘着斑复合物,调解细胞纤连蛋白的结合。

因为ECM蛋白质是大分子与多个结合位点的细胞表面蛋白很可能是多种机制参与细胞粘附过程。因此,地空导弹展示特定的整合素结合主题将有利于研究细胞粘附。罗伯茨et al。49SPR)应用于研究牛毛细血管内皮细胞的粘附alkanethiolates黄金的地对空导弹。SAMs获得包含arginine-glycine-aspartate的混合物(RGD)和低聚糖(乙二醇)半个。RGD三肽,通过促进细胞粘附结合细胞表面整合素受体,和低聚糖(乙二醇)抵制nonbiospecific半个吸附细胞。附件和随后的可溶性GRGDSP-induced超然的细胞表明RGD单独是充分的细胞的粘附和生存超过24小时。

细胞粘附基质是一个活跃的和动态的过程。细胞粘附的特性可以使用label-free生物传感器研究的细节,因为他们允许非侵入性和整个细胞粘附过程的实时定量(51- - - - - -53]。在第一篇描述利用RWG生物传感器为研究细胞粘附,拉姆斯登等人发现,细胞粘附是两相的过程:一个初始被动沉积其次是主动传播(51]。使用红外SPR (IR-SPR)提供了一个扩展的穿透深度,Yashunsky等人发现MDCK上皮细胞进行了多相细胞粘附和增殖过程,从最初接触基质细胞扩散,细胞间联系的形成,细胞集群,最后形成一个连续的细胞单层(52]。

细胞粘附的一个重要特征是细胞基质分离距离。罗等人应用的互通性测量变化平均细胞基质分离在回应一个向上磁力(53]。磁力是由永久磁铁的位置和数量,应用平均320年或560年pN每个细胞后collagen-coated氧化铁珠相连的背表面整合素受体osteoblast-like ROS 17/2.8细胞。基底细胞表面和底物之间的平均距离被发现敏感温度;估计有大约84的距离,45岁,和38海里的温度在4°,22°,分别和37°C。细胞基质的距离也是敏感的外部磁力;力导致增加分离距离增加;和22°C及外力变化11和21 320年和560年纳米pN,分别。作者进一步估计,弹簧常数从大约10个人粘附债券⁻³到10⁻¹pN纳米⁻¹。

细胞识别的能力,互动,和应对环境信号,包括ECM组件,是许多生物过程包括核心和器官发生炎症。因此,难怪看到各种感受器影响细胞粘附和传播过程使用label-free生物传感器都进行了广泛的调查。这些感受器包括生物传感器表面化学(44- - - - - -51)、温度(53),生物传感器表面粗糙度(54),细胞数(55),细胞类型(56),和特定的蛋白质如整合蛋白的表达48),环氧酶和脂氧合酶(57),小分子调节细胞粘附细胞目标重要(8,58]。使用高通量RWG我们检查了小分子的调节细胞粘附能力的过程。使用人类皮肤癌细胞行A431模型,RWG测量显示,长春新碱,植物生物碱,抑制微管装配与微管蛋白结合蛋白,大大降低了细胞的细胞粘连程度和动力学扩散。这项研究可能打开HT细胞adhesion-modulating小分子的筛选。

细胞的粘附到ECM是一个复杂的动态过程,涉及生物信号流程。通常细胞表面蛋白与配体结合在ECM下层和转导信号通过胞内域,从而调节不同功能的细胞。Label-free生物传感器可以提供洞察细胞信号在细胞粘附过程。使用反向波导配置,允许multidepth传感、霍等人表明成纤维细胞的粘附效果在折射率不均匀性在不同的细胞层垂直于生物传感器表面(58),可能是由于细胞粘附过程中信号的结果。

交互与ECM信号形状和功能的许多类型的细胞和受体。此外,不同的ECM涂料已用于多种基质受体生物学特征,以及分析和筛选药物分子。因此,阐明影响的表面化学生物学和配体受体药理学是重要的提高筛选的质量检测和识别。最近,我们系统地研究应用RWG截然不同的ECM涂料的影响信号的内生purinergic P2Y受体在人类胚胎肾HEK293细胞(59]。Purinergic 2 y (P2Y受体)是一个家庭的G protein-coupled受体(GPCRs)天然受体激动剂是核苷酸包括ATP、ADP, UTP, UDP, UDP-glucose。label-free受体化验表明,P2Y受体激动剂的效力和有效性是敏感ECM涂料。在组织培养处理的表面相比,纤连蛋白涂层增加了所有受体激动剂的效力,而明胶几乎没有影响。第四,纤连蛋白、胶原蛋白和明胶通常所有P2Y受体激动剂的生物传感器信号振幅增加。

4所示。细胞屏障功能

Label-free生物传感器发现应用程序在描述细胞屏障功能包括血脑屏障(BBB)和上皮细胞屏障(图1(b))。BBB是末梢循环之间的管理界面和中枢神经系统(CNS) [60]。微血管内皮细胞行脑BBB和形式。BBB控制之间的分子交换血液和中枢神经系统,从而维持体内平衡大脑的微环境,对神经信号是至关重要的。BBB与星形胶质细胞相互配合、周神经元,ECM形成神经与血管的单位,对中枢神经系统的健康和功能至关重要。此外,BBB经常限制在活的有机体内功效的药物候选分子设计目标与中枢神经系统相关的疾病如恶性原发性或转移性脑部肿瘤(61年]。

BBB的标志是其内在和高电阻,因为BBB由毛细血管内皮细胞与连续紧密连接(连接在一起62年]。BBB的渗透率是严格监管通过一个至关重要的和复杂的过程,涉及紧密连接蛋白的细胞内信号和重排。在与外源性刺激信号和物质,BBB进行重构,导致transendothelial渗透率的变化。因此,测量BBB的渗透率对其完整性和监管机制可以提供见解。迄今为止,transepithelial电阻(三通或后)是最受欢迎的技术来测量BBB的功能在体外(63年]。电动生物传感器也适合测量的功能在体外endothelia细胞模型系统,由于他们对离子运动的敏感性和单独的细胞外的能力抵抗transcellular电阻(9,39]。

凝血酶是一个有力的刺激,endothelium-dependent血管舒张,是一种天然的兴奋剂,凝血酶受体(protease-activated receptor-1;PAR1)。凝血酶的氨基酸裂解PAR1揭开拴在配体,而反过来,结合并激活受体分子内。凝血酶被发现导致细胞间隙的形成,从而减少迫切通过蛋白激酶C inhibitor-sensitive方式当牛肺微血管内皮细胞和牛肺动脉内皮细胞进行了测试与欧洲互通性系统委员会(64年]。

PAR1调解信号通过多种途径。因此,它是可能的,多途径控制endothelia thrombin-induced渗透率的细胞(65年- - - - - -67年]。麦克劳林等人相比的功能后果PAR1激活凝血酶和PAR激活肽(65年]。结果表明,效力(EC₅₀:0.1海里)凝血酶引起的内皮细胞单层通透性增加使用欧洲互通性系统委员会获得高于引起细胞内钙(EC的动员₅₀:1.7海里)。然而,相反的顺序观察活化的受体激动剂肽(SFLLRN-CONH₂或TFLLRNKPDK)。此外,只有PAR1激活屏障功能的影响,主要是通过G_α12/13介导的信号,而不是G_α问介导的信号。然而,对于人类脐静脉内皮细胞(HUVECs),王et al。66年)发现Ca^{2 +}/ calmodulin-dependent蛋白激酶2 (CaMKII)是一个中介的thrombin-stimulated渗透率的增加细胞单层。CaMKIIδ6同种型是主要的CaMKII同种型HUVEC的表达。凝血酶强有力地,最大限度地增加CaMKIIδ6激活,激活RhoA。核目标内生CaMKIIδ抑制激酶的表达> 80%,显著地抑制2.5 nM thrombin-induced增加单层渗透欧洲互通性系统委员会的评估。此外,ρ激酶抑制强烈抑制thrombin-induced HUVEC研究进展,但抑制ERK1/2激活没有效果。有趣的是,CaMKII的相对贡献δ6 / RhoA通路(s)减少凝血酶剂量增加,说明招聘替代信号通路调节内皮屏障功能障碍。

测量细胞屏障功能与欧洲互通性系统委员会是复杂的多种类型的阻力包括信息、cell-matrix, transcellular电阻(68年- - - - - -70年]。一般来说,细胞间的差距主要是影响总电阻的值,而cell-to-substrate差距主要影响总电容值。效应器,调节内皮细胞的组件的阻力包括细胞类型和confluency68年,71年)、内源性和外源性细胞外基质(71年],外源性分子的存在[68年,72年,73年),和底物(74年,75年]。人工培养的HUVEC细胞汇合的,一个欧洲互通性系统委员会的测量表明,组胺导致transendothelial迅速减少阻力主要是通过减少信息阻力,阻力和恢复是由第一cell-matrix阻力增加,其次是增加信息电阻(66年]。然而,组胺导致阻力增加subconfluent HUVECs有限或没有信息联系。在一起,这些结果表明,有可能deconvolute调节细胞屏障功能的分子机制。

为研究细胞屏障功能,不同的生物传感器可以提供互补的见解如何调节细胞的屏障功能。由于短穿透深度或感应体积,光学生物传感器可以直接解决cell-matrix交互,但不能直接解决信息交互。相比之下,电生物传感器提供了一个聚集的测量和信息集成和cell-matrix交互,可以分开使用数学建模[69年,70年]。

5。细胞间通讯

Label-free生物传感器是灵活的测定条件和格式(9]。结合实时动力学,label-free生物传感器提供了一个替代方法研究细胞通讯(图1(c))。多细胞生物细胞间的沟通是至关重要的。细胞通过缝隙连接连接可以迅速通过相互交流电流或通过扩散小第二信使如环腺苷酸、肌醇1 - 4,5-trisphosphate (InsP3)。斯等人。76年)使用欧洲互通性系统委员会来研究卵巢癌细胞的影响渗透率的支流胸膜间皮的细胞单层(PMC)。结果表明,卵巢癌细胞坚持PMC单层,这反过来,诱导局部功能障碍的PMC障碍。

在化学沟通的情况下,一个细胞激活释放的刺激后,扩散到目标细胞的受体刺激。绑定的刺激激活受体,导致靶细胞的细胞信号传导等。Treeratanapiboon et al。77年)应用膜相关的欧洲互通性系统委员会的研究效果malarin antigen-activated人类外周血单核细胞(PBMCs)猪脑毛细血管内皮细胞的完整性(PBCEC)。结果表明,获得的抗原的细胞溶解schizont-infected恶性疟原虫红细胞导致PBMC分泌肿瘤坏死因子α,,反过来,导致崩溃的endothelia PBCEC单层,可能通过破坏紧密连接复合体。

人类的免疫系统使危险的破坏微生物的精度通过特定目标的免疫细胞感染的网站。防御机制的核心是细胞粘附分子的相互作用参与迁移和入侵。Kataoka et al。78年)使用欧洲互通性系统委员会来研究单核细胞与内皮细胞的相互作用。通过结合AFM与欧洲互通性系统委员会,他们发现单核细胞的相互作用与interlukin-1 THP-1细胞β刺激HUVEC单层引起附着力减少基质和内皮细胞的可变形性的增加。RT-CES最近的一项研究表明,粘附的人类monoblastic细胞系U937细胞内皮细胞是敏感的脂多糖的存在79年]。

人类免疫防御机制的关键是effector-cell-mediated杀死靶细胞(80年]。例如,自然杀伤(NK)细胞介导细胞毒性要求细胞间接触,这是由成对识别多个受体之间的表面效应和目标细胞。NK细胞被认为是主要的细胞毒性效应细胞的先天免疫识别和杀死恶性转化和感染细胞。Glamann和汉森81年]利用实时细胞电传感(RT-CES)检测自然杀伤(NK)细胞之间的相互作用在悬架和附着在电极上乳腺癌MCF7细胞培养的生物传感器表面。结果表明,NK细胞MCF7细胞凋亡引起的,根据NK cell-to-target细胞比率。

6。细胞信号传导

细胞信号是一个严格监管的过程直接信息流和最终控制细胞反应一旦细胞接收外源信号(图1(d))。信号通过膜受体和受体的激活开始,紧随其后的是一代的细胞内信使。这些信使参与各种感受器激活多种细胞反应包括微丝重塑,贩卖蛋白质,细胞粘附和基因表达的变化。分子分析导致许多蛋白质的识别各种信号通路的组件,和高分辨率成像解决许多细胞事件下游受体的激活。然而,使用label-free生物传感器为研究细胞信号是稀疏的在2004年之前在文献[64年]。自2004年以来,两个重要的发展了label-free的多功能技术研究细胞信号传导等。首先,高吞吐量label-free系统变成了现实(29日,42,82年- - - - - -87年),所以它成为可能研究原生细胞受体信号没有任何标签以前所未有的规模。第二,它终于意识到一个生物传感器信号起源于一个受体的激活是一个综合的反应,忠实地反映了受体下游信号通路激活(8,83年,85年,86年]。这导致后续采用化学生物学通路反褶积的受体信号(85年,86年]。这些发展使label-free形态生物传感器为系统的细胞生物学生物传感器(9,29日]。

6.1。G Protein-Coupled受体

GPCRs是最大的基因家族在人类基因组中,领先的分子药物设计的目标类。GPCRs传输一个巨大的数量和种类外源信号包括光、气味、神经递质、激素、蛋白酶。这些外源性配体与受体结合,诱导受体的构象变化,然后通过膜激活heterotrimeric GTP-binding蛋白(G蛋白)。G蛋白作为传递信息的传感器对不同信号通路如环腺苷酸和InsP3 /甘油二酯信号通路。自2005年以来,label-free细胞化验吸引了太多的关注在分子生物学和配体受体药理学的描述许多GPCRs [8,42,59,62年,65年,85年- - - - - -120年]。许多不同的细胞GPCRs背景检查使用label-free细胞化验(表1和2)。这些受体是内生原生细胞主要包括细胞中表达时,稳定或运输中表达不同的细胞系。

Label-free分析内生的原生细胞受体导致发现的“签名”不同的GPCRs类,根据G蛋白的受体是耦合的9,42,86年,88年,92年]。尽管它拥有更大的潜力在给定细胞背景和受体导致一个G protein-mediated通路,迅速“签名”的概念产生了“表型反应”或“系统细胞生物学读出”(9,29日,99年,115年,121年]。这是因为label-free信号通常反映了细胞background-dependent和针对受体受体信号的复杂性。

Label-free表征各细胞背景导致了许多GPCRs发现小说通路下游受体(9,86年,96年,101年,105年,115年),也导致了高分辨率的分类不同的配体作用于一个特定的受体(9,65年,96年,One hundred.,101年,108年,109年,119年,120年]。这些受体包括血管舒缓激肽B2受体、蛋白酶激活receptor-1 (PAR1)和2 (PAR2) lysophosphatidic酸(LPA)受体,组胺H1受体,腺苷A2B受体,β2-adrenergic受体purinergic P2Y受体P2Y1、P2Y2 P2Y4,和P2Y11 sphingosine-1磷酸(S1P)受体,血管活性肠肽(VIP)受体VPAC1作用,抗利尿激素V1a受体血清素5 ht1a受体,多巴胺D1、D2、D3、D5受体,毒蕈碱的M1, M2, M3, M4受体,大麻素CB1和CB2受体,垂体腺苷酸cyclase-activating多肽受体(PACAP1)趋化因子受体CXCR2,游离脂肪酸receptor-1, 2和3(分别GPR40、GPR43和GPR41), metabotropic谷氨酸受体1 (mGluR1)和7 (mGluR7)、前列腺素EP2 EP4受体,GPR55,化学引诱物receptor-homologous分子表达在Th2细胞(CRTH2)、促肾上腺皮质激素释放激素受体1 (CRF),肾上腺皮质receptor-4(中的),μ和δ阿片受体,GPR35。

6.2。受体酪氨酸激酶

受体酪氨酸激酶(rtk)是一个家庭的内在细胞表面生长因子受体,ligand-regulated酪氨酸-活动。表皮生长因子受体(EGFR)的最佳rtk。表皮生长因子受体是一个单一membrane-spanning蛋白质的氨基端细胞外配体结合域和c端区域有一个激酶结构域和大量酪氨酸对接网站参与信号。EGF受体结合并激发其内在的酪氨酸蛋白激酶活性,启动信号转导主要涉及多个通路,包括MAPK、统计,PLCγ通路。RWG是第一个label-free生物传感器用于描述和deconvolute EGFR通路的原生A431细胞(39,83年,85年]。本研究是基于化学干预EGF-induced DMR信号映射出通路下游表皮生长因子受体激活(图3)。这项研究导致假设label-free信号产生的激活受体细胞生物学的综合读出系统。后续研究表皮生长因子受体信号与不同label-free技术(122年- - - - - -127年]证实这样一个假设。

6.3。离子通道

离子通道控制神经元的电特性和其他可兴奋细胞通过有选择地允许离子通过质膜流动。这些受体转导信息通道,导致显著放大的信号通过开展大量的电荷。这样一个放大使得这些受体的有效传感器感知信息。离子通道经常修改信号蛋白和分子调节神经元兴奋性和其他细胞功能。Label-free细胞化验持有承诺遵循实时通路下游离子通道的打开和关闭。这样的能力克服穷人解决传统化验检查之间的交互渠道和调节蛋白在活细胞。使用DMR化验通过RWG生物传感器,弗莱明和Kaczmarek发现内生Gq-coupled受体的激活hek - 293细胞明显修改sodium-activated钾通道的存在,Slack-B [110年]。最近,Panke等人还显示,电动生物传感器也可行的描述瞬时受体电位(TRP)离子通道包括TRP1 [128年]。TRP通道非选择性阳离子包括钠离子通道渗透⁺、钙^{2 +},毫克^{2 +}。许多Ca TRP通道参与^{2 +}介导的细胞功能和涉及炎症。

6.4。Immunoreceptors

免疫球蛋白E (IgE)是一种免疫系统,产生的免疫球蛋白和最与过敏有关。个体接触微量的过敏原过敏通常经验立即响应,这是由于粘膜肥大细胞的永久敏感有浓度过敏原特异性IgE抗体绑定到他们的高亲和性受体(Fcε国际扶轮)。的IgE肥大细胞激活包括两个重要事件:细胞致敏Fc IgE产生的约束力ε国际扶轮受体和细胞的激活触发allergen-mediated包围的IgE寡聚化。阿巴西等人利用RT-CES描述ige激活RBL-2H3桅杆,发现阻抗结果与形态学动态和中介发布(129年]。

隐藏和他的同事报道一系列相关的文件使用SPR描述RBL-2H3的激活肥大细胞,发现SPR检测活动PKC的下游事件β在antigen-stimulated肥大细胞(130年- - - - - -133年]。RBL-2H3的肥大细胞overexpressing显性负脾酪氨酸激酶或src-like适配器蛋白导致抑制SPR信号由肥大细胞激活。同样,表达显性负链接器激活T细胞和Grb2-related适配器蛋白质导致几乎完全抑制antigen-induced SPR的信号。超表达的蛋白激酶C (PKCs),除了PKCβ显示,减少SPR信号在抗原刺激,而击倒PKCβ与干扰RNA抑制antigen-induced信号。这些结果表明,多个激酶的活化在PKC途径决定antigen-induced SPR肥大细胞的信号。

7所示。病毒感染

病毒感染会引发免疫反应,通常会导致感染病毒的消除。但是,某些导致艾滋病的病毒包括那些逃避人体免疫反应,导致慢性感染。由于病毒感染细胞病变效应(CPE)在细胞培养中被用作在体外模型系统研究病毒感染和屏幕分子抑制病毒感染。然而,CPE一直难以量化。工作能力与原生细胞使label-free一个有吸引力的手段real-time-monitor病毒感染过程(图1(e))。欧洲互通性系统委员会一直在探索监控CPE的发展由于流感病毒感染(134年]。最近,欧文斯等人使用DMR化验监测海拉细胞的感染过程有两个不同的人类鼻病毒株,HRV14和HRV16135年]。结果表明,这两种病毒株病毒titer-dependent DMR触发信号,这是与病毒感染的多个阶段,从早期信号介导病毒进入病毒复制,最后细胞凋亡。这项研究还显示,屏幕是可能的抑制剂,调节不同的病毒感染的过程。贾庆林等人还显示,DMR化验与史诗系统启用的抑制剂的高通量筛选阻止流感病毒引起的细胞病变效应(Udorn / 72, H3N2) [136年]。

可卡因是一种可疑的辅助因子在人类免疫缺陷病毒(HIV)相关的痴呆症。然而,它是未知的可卡因如何影响艾滋病毒感染。Fiala等人使用欧洲互通性系统委员会来研究可卡因的机制增加hiv - 1通过入侵大脑微血管内皮细胞(BMVECs) [137年]。结果表明,可卡因治疗BMVECs破坏细胞间连接和诱发细胞激怒,也改变了位置模式的病毒一旦进入细胞。这项研究表明,血脑屏障的毒性的可卡因可能导致病毒对于滥用可卡因和血管神经并发症。

重组病毒载体广泛应用于活细胞的遗传操作。然而,这些向量对细胞生物学的影响在很大程度上是未知的。使用欧洲互通性系统委员会、穆勒等人发现adenoviral转染向量(Ad5-derivate)剂量依赖性的细胞凋亡引起猪回肠上皮细胞系IPI-2I [138年]。这项研究表明,label-free是一个有吸引力的变质性来确定最小的无毒剂量病毒研究基于矢量的转染。

8。Label-Free和基于标签的细胞化验

探索细胞信号的全部组件使得基于标签的细胞化验主流技术在细胞生物学。标签技术可以提供高空间分辨率解决位置、贩运和组织的单一信号分子在一个特定的路径。多色分子分析可以进一步探讨不同的信号分子和功能之间的交互影响的发明的细胞与分子的目标。然而,分子检测常常会导致较低的时间分辨率,软弱在解决生物学细胞表面,并提供一个细胞信号的线性测量。

基于标签的技术Label-free细胞化验是互补的。首先,与标签技术是偏向一个通路和/或一个分子,label-free提供集成和系统细胞生物学细胞信号传导的读数。这允许一个研究细胞信号的集成原生细胞,在地图上标出信号通路下游受体激活覆盖面宽的通路,并极大的区分目标药理学的药物分子作用于一个目标受体(139年]。其次,相比相对贫穷的动态标签技术的分辨率,label-free提供了一个实时动态测量细胞信号与高时间分辨率和高灵敏度。这允许一个跟踪整个过程不同的细胞信号传导和细胞过程的原生细胞。第三,与标签技术,通常需要修改甚至毁灭的活细胞,label-free无创性没有任何细胞操作的需要。这允许一个设计独特的分析格式,以及与其他技术,集成label-free所以受体信号的不同方面和药物药理学研究。例如,采用微流体使一个控制受体激活的持续时间,以便比较label-free持续刺激条件下信号与脉冲刺激条件下可以分化信号传播的路线受体激活后,以及长表演激动或拮抗药物分子(9,101年,119年,140年,141年]。但是,与标签技术,label-free缺乏细胞内空间分辨率解决许多重要的细胞过程,包括位置和信号分子的组织、细胞内走私、代谢、细胞骨架重塑。因此,重要的是要知道什么是假设被测试可以使用适当的技术。

9。结论的话

label-free生物传感器的发展,尤其是高通量筛选平台和采用化学生物学工具label-free细胞化验,让他们在细胞生物学研究中不可或缺的平台。今天,label-free生物传感器发现应用程序在一个广泛的细胞过程从细胞粘附到细胞屏障功能,受体信号和病毒感染。不断增加使用label-free细胞化验为研究各种目标包括GPCRs、rtk,离子通道,immunoreceptors已经目睹了近年来发表的文献数量的增加。小说的见解关于细胞信号的集成,受体信号通路的复杂性,和药物分子的行动模式。目前正在开发的新一代label-free将有更好的空间分辨率,这样细胞信号可以在单个细胞水平研究[142年- - - - - -145年]。发展新的数据分析方法(9,38,146年将进一步推进label-free成为事实上的技术在细胞生物学。

引用

1. b·r·斯托克,”化学遗传学:ligand-based发现基因功能”,自然遗传学评论,1卷,不。2、116 - 125年,2000页。视图:谷歌学术搜索
2. g . j . Hannon“RNA干扰”,自然,卷418,不。6894年,第251 - 244页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. j . Inglese r·l·约翰逊,a Simeonov et al .,“大规模筛选化验鉴定的化学探针,”化学生物学性质,3卷,不。8,466 - 479年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. t . p . Kenakin”细胞化验门户seven-transmembrane receptor-based药物发现,“自然评论药物发现,8卷,不。8,617 - 626年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. k . Oda y松岗,A . Funahashi h .北野,“一个全面的表皮生长因子受体信号通路地图,”分子系统生物学2005年,卷1,第2005.0010条。视图:谷歌学术搜索
6. j·d·乔丹·e·m·兰道,r . Iyengar”信号网络:细胞起源的多任务处理,”细胞,卷103,不。2、193 - 200年,2000页。视图:谷歌学术搜索
7. b . n . Kholodenko”四维组织蛋白激酶信号级联:扩散的作用,内吞作用和分子马达,”实验生物学杂志》上,卷206,不。12日,第2082 - 2073页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. y方,a . m .•菲利:h·方丹j .毛罗·j··,“共振波导光栅对活细胞生物传感器感应。”生物物理期刊,卷91,不。5,1925 - 1940年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. y方,“Label-free受体分析”,今天药物发现技术,7卷,不。1,pp. e5-e11, 2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. e . A-Hassan w·f·海因茨·m·d·Antonik et al .,“活细胞的相对microelastic映射通过原子力显微镜,”生物物理期刊,卷74,不。3、1564 - 1578年,1998页。视图:谷歌学术搜索
11. 答:埃利希和j . h . Hartwig”细胞力学:承包僵硬。”自然材料,10卷,不。1、12 - 13,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 程j . x, x s .谢。”相干anti-Stokes喇曼散射显微镜:仪器仪表、理论、和应用程序,”物理化学学报B,卷108,不。3、827 - 840年,2004页。视图:谷歌学术搜索
13. w·m . c . Wang, c . w . Freudiger g . Ruvkun和x s .谢“RNAi脂肪基因筛查与SRS显微镜,”自然方法,8卷,不。2、135 - 138年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. f . Vollmer和s . Arnold”Whispering-gallery-mode若:label-free检测到单分子,”自然方法,5卷,不。7,591 - 596年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. m . Zourob s Elwary x粉丝,s .莫尔和n·j·戈达德,“Label-free镜子共振生物传感器检测,”分子生物学方法卷,503年,第138 - 89页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. b . Liedberg c·尼兰德,Lundstrom,“若与表面等离子体resonance-how开始,“生物传感器和生物电子学,10卷,不。8、1 - 9,1995页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. r·h·里奇“等离子体损失快电子薄膜”,物理评论,卷106,不。5,874 - 881年,1957页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. a·奥托,“非辐射的表面等离子体波的激发在银沮丧全反射的方法,”Zeitschrift毛皮物理学强子和核,卷216,不。4、398 - 410年,1968页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. h . n . Daghestani b . w .天,“镜子理论和应用的表面等离子体共振,共振,共振波导光栅,和双极化干涉测量生物传感器,”传感器,10卷,不。11日,第9646 - 9630页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. r . l .富人和d . g . Myszka表面等离子体共振生物传感器的发展分析,“当前生物技术的观点,11卷,不。1,54 - 61年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. c·e·乔丹,a·g·Frutos a·j·泰尔和r . m .玉米,“表面等离子体共振成像测量DNA杂交吸附和链霉亲和素/ DNA形成多层化学改性金表面,”分析化学,卷69,不。24日,第4947 - 4939页,1997年。视图:谷歌学术搜索
22. a . Dahlin m·扎克t . Rindzevicius m .官员d·s·萨瑟兰和f .钩,“局部表面等离子体共振传感lipid-membrane-mediated biorecognition事件,“美国化学学会杂志》上,卷127,不。14日,第5048 - 5043页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. r·w·伍德,“非凡的衍射光栅光谱,”哲学杂志,4卷,不。40岁,396 - 402年,1902页。视图:谷歌学术搜索
24. 答:埃塞尔和A . A .奥利纳、“新木材的异常光学光栅理论,“应用光学,4卷,不。10日,1275 - 1297年,1965页。视图:谷歌学术搜索
25. k . Tiefenthaler和w . Lukosz光栅耦合器,光集成湿度和气体传感器,”薄固体电影,卷126,不。3 - 4、205 - 211年,1985页。视图:谷歌学术搜索
26. k . Teifenthaler和w . Lukosz敏感性光栅耦合器的光集成化学传感器,“美国光学学会杂志》上》第六卷,没有。2、209 - 220年,1989页。视图:谷歌学术搜索
27. b·坎宁安p·李、林b和j .胡椒”比色共振反射直接生化分析技术,”传感器和执行器B,卷81,不。2 - 3、316 - 328年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. b . m . Wu Coblitz, s Shikano et al .,“Phospho-specific承认14-3-3由高通量蛋白质和抗体监测label-free光学生物传感器,”2月的信,卷580,不。24日,第5689 - 5681页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. 方y”Label-free细胞化验与光学生物传感器在药物发现,“试验和药物开发技术,4卷,不。5,583 - 595年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. m·a·库珀”光学生物传感器:下一个多久?”药物发现今天,11卷,不。23 - 24日,第1067 - 1061页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. r . l .富人和d . g . Myszka”调查2005年商业光学生物传感器的文献中,“《分子识别,19卷,不。6,478 - 534年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. y方,“非侵入性的光学生物传感器探测细胞信号,”传感器,7卷,不。10日,2316 - 2329年,2007页。视图:谷歌学术搜索
33. a . k . Shiau m .大肠了,c . c . Ozbal“回到基础:label-free为小分子筛选技术,”组合化学和高通量筛选,11卷,不。3、231 - 237年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. p·h·李,“Label-free光学生物传感器:G protein-coupled受体药理学的工具分析和反兴奋剂识别、”杂志的受体和信号转导卷,29号3 - 4、146 - 153年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. j·j·拉姆斯登和r·霍法”对细胞粘附光学生物传感器,”杂志的受体和信号转导卷,29号3 - 4、211 - 223年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. m·a·库珀”使用label-free生物传感器信号转导分析,“杂志的受体和信号转导卷,29号3 - 4、224 - 233年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. m . Rocheville和j . c . Jerman 7 tm药理学衡量label-free:细胞信号的整体分析,“当前舆论药理学,9卷,不。5,643 - 649年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. y方”,探索癌症与共振波导光栅传感器信号,”专家意见在药物发现,5卷,不。12日,第1248 - 1237页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. r·麦吉尼斯“Impedance-based细胞分析技术:最近的进步,未来的承诺,“当前舆论药理学,7卷,不。5,535 - 540年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. 即杰伯和c·r·Keese”监测纤维母细胞行为在组织培养与应用电场,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷81,不。12日,第3764 - 3761页,1984年。视图:谷歌学术搜索
41. 即杰伯和c r . Keese“哺乳动物细胞的形态生物传感器,”自然,卷366,不。6455年,第592 - 591页,1993年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. d . c . g . j . Ciambrone v . f . Liu, r·p·麦吉尼斯g . k .梁和s . Pitchford”细胞介电谱:一个强大的新方法label-free细胞分析,“《生物分子筛选,9卷,不。6,467 - 480年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. 即杰伯和c . r . Keese哺乳动物细胞的微动测量电。”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷88,不。17日,第7900 - 7896页,1991年。视图:谷歌学术搜索
44. m . Kowolenko c . r . Keese d·a·劳伦斯和杰伯,“巨噬细胞粘附和传播测量电场较弱,”《免疫学方法,卷127,不。1,第77 - 71页,1990。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. j·韦格纳,c . r . Keese杰伯,“电动细胞基质阻抗传感(欧洲互通性系统委员会)作为非侵入性手段监控细胞扩散的动力学人工表面,”实验细胞研究,卷259,不。1,第166 - 158页,2000。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. c .小物,g . Sunahara和j·h·t·陈德良”深入分析电动细胞基质阻抗传感研究哺乳动物细胞的吸附和扩散,”分析化学,卷74,不。6,1333 - 1339年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. j . y . Chen, y王et al .,“实时监控方法:评估抗体对NCI-H460癌症细胞的粘附到细胞外基质,”生物传感器和生物电子学,23卷,不。9日,第1396 - 1390页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. j·h·t·陈德良c·肖b物et al .,“电动细胞基质的扩展应用阻抗传感结构的评估α2β1整合素”,分析Chimica学报,卷501,不。1,第69 - 61页,2004。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. c·罗伯茨,c . s . Chen m . Mrksich诉Martichonok, d . e . Ingber,和通用汽车Whitesides,使用混合自组装单层膜呈现RGD,(如)₃哦组描述长期依附牛毛细血管内皮细胞表面,“美国化学学会杂志》上,卷120,不。26日,第6555 - 6548页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. c . h . Chang j·d·廖j·j·j·陈,m . s .榉和c·c·k·林”细胞粘附及相关现象的基团,Au-deposited神经微电极检查总阻抗测量和细胞分离测试,”纳米技术,17卷,不。10日,2449 - 2457年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. 李郑胜耀,j·j·拉姆斯登,j . e . Prenosil大肠Heinzle,“动物细胞粘附和传播动力学”,生物技术和生物工程,43卷,不。10日,939 - 945年,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. 诉Yashunsky诉Lirtsman, m . Golosovsky d . Davidov和b . Aroeti“上皮和信息的实时监控和红外表面等离子体光谱细胞基质的相互作用,”生物物理期刊,卷99,不。12日,第4036 - 4028页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. c . m . Lo m . Glogauer m·罗西和j·费里尔,“细胞基质分离:作用力和温度的影响,“欧洲生物物理学杂志》,27卷,不。1,上行线,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. r·兰格f . Luthen贝克,j . Rychly a·鲍曼和b . Nebe”Cell-extracellular矩阵相互作用和物理化学特征的钛表面的粗糙度取决于材料,”生物分子工程,19卷,不。2 - 6,255 - 261年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. c .小物,g . Sunahara和j·h·t·陈德良”深入分析电动细胞基质阻抗传感研究哺乳动物细胞的吸附和扩散,”分析化学,卷74,不。6,1333 - 1339年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. i . h . Heijink s . m .勃兰登堡j . a . Noordhoek d s Postma, d . j . Slebos和a·j·m·范·Oosterhout”描述的细胞粘附在气道上皮细胞类型使用电动细胞基质阻抗传感、”欧洲呼吸杂志,35卷,不。4、894 - 903年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. 崔c . k . m . Sukhthankar c·h·金et al .,“环氧酶和脂氧合酶细胞粘附性能的影响:opto-electric方法,”生物化学和生物物理研究通信,卷391,不。3、1385 - 1389年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. r·霍k .农夫彼得森h·c·j·j·拉姆斯登,“Multidepth筛选使用光学波导的活细胞,”生物传感器和生物电子学,24卷,不。4、799 - 804年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. e . Tran h .太阳,y,“质量重新分布动态分析解码表面影响信号的内生purinergic P2Y受体,”试验和药物开发技术。在出版社。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. b·t·霍金斯·t·p·戴维斯,“血脑屏障/神经与血管的单位在健康和疾病,”药理评价卷,57号2、173 - 185年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. p·r·洛克曼r·k·昆虫学家米塔帕里k . s . Taskar et al .,“异构血肿屏障通透性决定了药物疗效实验脑转移的乳腺癌,”临床癌症研究,16卷,不。23日,第5678 - 5664页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. Schulze c, c·斯梅尔·l·l·鲁宾和j·m·顿斥责道,“Lysophosphatidic酸在培养大脑内皮细胞紧密连接渗透率增加,”神经化学杂志,卷68,不。3、991 - 1000年,1997页。视图:谷歌学术搜索
63. m . Gumbleton和k . l . Audus“进步和限制使用的体外细胞培养作为血脑屏障渗透屏幕,“制药科学杂志》,卷90,不。11日,第1698 - 1681页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. c . Tiruppathi a·b·马利克p . j .德尔维奇奥c . r . Keese i杰伯,“电法实时检测内皮细胞形状的变化:评估内皮屏障功能,“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷89,不。17日,第7923 - 7919页,1992年。视图:谷歌学术搜索
65. j·n·麦克劳克林,l .沈m . Holinstat j·d·布鲁克斯,e . DiBenedetto为首,h·e·哈姆”功能选择性受体激动剂的G蛋白信号肽及凝血酶protease-activated receptor-1,”生物化学杂志,卷280,不。26日,第25059 - 25048页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. z . Wang r . Ginnan i f . Abdullaev m . Trebak p·a·文森特·h·a·歌手,“钙/ calmodulin-dependent蛋白激酶2δ6 (CaMKIIδ6)和RhoA参与thrombin-induced内皮屏障功能障碍,”生物化学杂志,卷285,不。28日,第21312 - 21303页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. a . k . Fordjour和e·o·哈林顿PKCδ影响p190磷酸化和活动:活动独立于PKCδ介导内皮细胞调节应力纤维和粘着斑的形成和屏障功能,“Biochimica et Biophysica学报,卷1790,不。10日,1179 - 1190年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. Moy a . b . m .冬天,a Kamath et al .,“在信息和细胞组胺改变内皮屏障功能——矩阵网站,“美国生理学杂志》上,卷278,不。5,L888-L898, 2000页。视图:谷歌学术搜索
69. j·e·波曼,a .英语,m·布雷迪et al。”建模误差和内皮细胞骨架膜的稳定性参数基于建模transendothelial阻抗电阻器和电容器系列中,“美国生理学杂志》上,卷289,不。3,C735-C747, 2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
70. a . e .英语,a . b . Moy k·l·克鲁斯r·c·沃德s s·柯克帕特里克和m . h .高盛“仪器噪声估计稳定和量化内皮细胞micro-impedance障碍函数参数估计,“生物医学信号处理和控制,4卷,不。2、86 - 93年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
71. c·哈特曼a . Zozulya j·韦格纳,h·j·盖拉族”glia-derived细胞外基质的影响脑内皮细胞的屏障功能:一个在体外研究中,“实验细胞研究,卷313,不。7,1318 - 1325年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
72. c . Betzen r .白色,c . m . Zehendner et al .,“氧化应激在脑血管内皮移植NMDA受体,”自由基生物学和医学卷,47号8,1212 - 1220年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
73. p . Anastasiadis和j·s·艾伦,”与靶向造影剂Ultrasound-mediated内皮细胞通透性的变化,”《IEEE国际超声学研讨会(IUS ' 09),罗马,意大利,2009年9月。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
74. c . m . Lo, c . r . Keese杰伯,“细胞基质接触:另一个因素可能会影响transepithelial电阻上培养的细胞层渗透过滤器,”实验细胞研究,卷250,不。2、576 - 580年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
75. t .太阳,e . j .诈骗,j·e·柯林斯j·a·霍洛韦d·e·戴维斯和h·摩根,“芯片上的上皮屏障功能使用电阻抗谱分析,“芯片上的实验室,10卷,不。12日,第1617 - 1611页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
76. p·s·k·a·穆罕默德:Nasreen et al .,“坚持的卵巢癌细胞诱发胸膜间皮的细胞(PMC)渗透率,”肿瘤研究,13卷,不。2、79 - 85年,2002页。视图:谷歌学术搜索
77. l . Treeratanapiboon k . Psathaki j·韦格纳,s . Looareesuwan h·j·盖拉族和r . Udomsangpetch”体外研究疟原虫引起血脑屏障的破坏,”生物化学和生物物理研究通信,卷335,不。3、810 - 818年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
78. n . Kataoka k .磐k .桥本et al .,“测量的内皮细胞间和cell-to-substrate差距和内皮细胞的微机械性能在单核细胞粘附,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷99,不。24日,第15643 - 15638页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
79. x y通用电气、t·邓和郑,“动态监测变化的内皮细胞基质中粘性白细胞粘附microelectrical阻抗分析,“Biochimica et Biophysica学报第41卷。。3、256 - 262年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
80. j·利伯曼,“abc granule-mediated细胞毒性:在阿森纳新武器,”自然评论免疫学,3卷,不。4、361 - 370年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
81. j . Glamann和a·j·汉森,“动态检测自然杀伤细胞介导细胞毒性和细胞粘附的电阻抗测量,”试验和药物开发技术,4卷,不。5,555 - 563年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
82. b·t·坎宁安p, s .舒尔茨et al .,“绑定Label-free分析系统”,《生物分子筛选,9卷,不。6,481 - 490年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
83. y方,a . m .•菲利:h·方丹和p . k .袁”光学生物传感器用于监视动态质量重新分配在活细胞表皮生长因子受体介导的激活,”第27届国际研讨会论文集,生物医学工程学会(磨床' 05),1卷,第669 - 666页,2005年9月。视图:谷歌学术搜索
84. y方,a . m .•菲利·g·李,“探索细胞骨架调制的光学生物传感器,”2月的信,卷579,不。19日,4175 - 4180年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
85. y方,a . m .•菲利:h·方丹和p . k .袁”特征的动态质量重新分配活细胞表皮生长因子受体信号的测量与label-free光学生物传感器,”分析化学,卷77,不。17日,第5725 - 5720页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
86. y方、g·李和j .彭”光学生物传感器提供了见解缓激肽B2受体信号在A431细胞,”2月的信,卷579,不。28日,第6374 - 6365页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
87. a . m . g . Li•菲利,y,“Label-free分析内源性配体的GPCRs利用细胞大规模筛选技术,”协会的实验室自动化》杂志上,11卷,不。4、181 - 187年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
88. g .梁h·r·唐r·麦吉尼斯e . Verdonk父亲j·m·米歇洛蒂和v . f . Liu”细胞介电谱:label-free药物发现的技术,”协会的实验室自动化》杂志上,10卷,不。4、258 - 269年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
89. e . Verdonk k·约翰逊,r·麦吉尼斯et al .,“细胞介电谱:label-free综合平台功能内生评价受体,”试验和药物开发技术,4卷,不。5,609 - 619年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
90. 殷f和m . a . Watsky“LPA和S1P增加角膜上皮和内皮细胞transcellular阻力,”调查眼科及视觉科学,46卷,不。6,1927 - 1933年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
91. n . Yu j . m . Atienza j·伯纳德et al .,“实时监控活细胞的形态改变电子细胞传感器阵列:一种方法来研究G protein-coupled受体,”分析化学,卷78,不。1,35-43,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
92. y方、G·李和a . m .•菲利“非侵入性的光学生物传感器分析内源性G protein-coupled受体在贴壁细胞,”药理学和毒理学方法杂志》上,55卷,不。3、314 - 322年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
93. 大肠Tran和y方Label-free光学生物传感器探测综合在G protein-coupled腺苷酸环化酶受体信号的作用,“杂志的受体和信号转导卷,29号3 - 4、154 - 162年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
94. y方和a . m .•菲利”光学生物传感器区分信号的内生PAR1和PAR2 A431细胞,”BMC细胞生物学第二十四条,卷。8日,1 - 12,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
95. m·f·彼得斯k . s . Knappenberger d·威尔金斯et al .,“评价细胞介电谱、全细胞label-free技术对药物发现Gi-coupled GPCRs,”《生物分子筛选,12卷,不。3、312 - 319年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
96. m·f·彼得斯和c·w·斯科特,“评估细胞阻抗化验检测GPCR多向性的信号和功能选择性,”《生物分子筛选,14卷,不。3、246 - 255年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
97. 大肠Tran和y方,“双工label-free G protein-coupled受体为大规模筛选化验,”《生物分子筛选,13卷,不。10日,975 - 985年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
98. p·h·李,a高,c . Van Staden et al .,“动态质量评估药理研究重组和再分配技术内生表示G protein-coupled受体时,“试验和药物开发技术》第六卷,没有。1,第94 - 83页,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
99. y方,a . m .•菲利·g·李,“系统生物学和药理学${\beta }_2$在肾上腺素能受体A431。信号转导研究的趋势j·n·迈耶斯,艾德,页145 - 171,Nova科学出版社,纽约,纽约,美国,2007年。视图:谷歌学术搜索
100. y方和a . m .•菲利”Label-free ligand-directed选择性作用于功能的光学生物传感器β在活细胞2肾上腺素能受体2月的信,卷582,不。5,558 - 564年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
101. 诉羚,y, h .太阳,a . m .•菲利问:吴,和y方,“Agonist-directed脱敏${\beta }_2$肾上腺素能受体。”《公共科学图书馆•综合》》第六卷,没有。4篇文章e19282 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
102. 松本,y荒川,m . Ohishi h . Yanaihara t . Iwanaga和黑川纪章n时,“抑制作用垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)在未成熟小鼠睾丸间质细胞增殖行TM3细胞,”生物医学研究卷,29号6,321 - 330年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
103. 崔g .公园,c . k . a . e .英语,和t . e .节省物质“电阻抗测量预测细胞转变,”细胞生物学国际,33卷,不。3、429 - 433年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
104. a . Kebig大肠Kostenis、k·莫尔和m . Mohr-Andr“光学质量重新分布动态分析揭示了偏置信号dualsteric GPCR活化剂,”杂志的受体和信号转导卷,29号3 - 4、140 - 145年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
105. j .安东尼k . Kellershohn m . Mohr-Andra et al .,“Dualsteric GPCR目标:小说路线绑定和信号通路选择性,”美国实验生物学学会联合会杂志,23卷,不。2、442 - 450年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
106. k·道奇森,l . Gedge d . c . Murray和m .科“100 k屏幕使用史诗的毒蕈碱的受体®label-free系统反映label-free筛查方法的好处seven-transmembrane label-free方法筛选seven-transmembrane受体,受体”杂志的受体和信号转导卷,29号3 - 4、163 - 172年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
107. e·克里斯琴森c .城市:莫顿et al .,“发现强有力的和选择性受体激动剂的游离脂肪酸受体1 (FFA1 / GPR40),一个潜在的目标治疗II型糖尿病,”医药化学杂志,51卷,不。22日,第7064 - 7061页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
108. j·施密特,k Liebscher:莫顿et al .,“共轭亚油酸调节胰岛素释放通过胰岛受体G protein-coupled FFA1 / GPR40,”生物化学杂志,卷286,不。14日,第11894 - 11890页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
109. j·施密特:j .史密斯·e·克里斯琴森et al .,“选择性orthosteric游离脂肪酸受体2 (FFA2)受体激动剂:识别的结构和化学选择性激活要求FFA2与FFA3,”生物化学杂志,卷286,不。12日,第10640 - 10628页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
110. m·r·弗莱明和l . k . Kaczmarek”使用光学生物传感器来检测调制由G protein-coupled钾离子通道受体,淡季”杂志的受体和信号转导卷,29号3 - 4、173 - 181年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
111. p . Scandroglio r .囊g . Lozza et al .,“大麻素受体2和metabotropic谷氨酸受体1的评价功能使用细胞impedance-based技术响应,“《生物分子筛选,15卷,不。10日,1238 - 1247年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
112. j .江t . Ganesh y Du et al .,“神经保护的选择性变构电位器EP2前列腺素受体,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷107,不。5,2307 - 2312年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
113. c . m . Niswender k·a·约翰逊:r·米勒et al。”上下文相关的药理展出由负变构调节器metabotropic谷氨酸受体7日”分子药理学,卷77,不。3、459 - 468年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
114. c . m . Henstridge: a . Balenga r·施罗德et al .,“GPR55配体促进受体耦合到多个信号通路,”英国药理学杂志》上的报告,卷160,不。3、604 - 614年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
115. r·施罗德n .詹森·j·施密特et al .,“反褶积的复杂G protein-coupled受体信号在活细胞中使用动态质量重新分布测量,”自然生物技术,28卷,不。9日,第949 - 943页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
116. m·f·彼得斯f·瓦兰蔻,m . Heroux m . Valiquette和c·w·斯科特,“比较label-free生物传感器与细胞药理筛选功能分析,“试验和药物开发技术,8卷,不。2、219 - 227年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
117. r·施罗德:莫顿,j . m . Mathiesen et al .,“CRTH2 c端尾部的一个关键分子行列式,限制了Gα我和下游信号级联激活。”生物化学杂志,卷284,不。2、1324 - 1336年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
118. e·e·科德j·r·马布斯b·s·穆雷S.-P。张,c . m . Floresm“动态质量重新分配来测量和区分信号通过阿片和大麻素受体,”试验和药物开发技术,9卷,不。4、362 - 372年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
119. 诉羚,问:吴、h .太阳和y方,“Label-free光学生物传感器与微流体传感ligand-directed贩卖凝血酶受体的功能选择性,”2月的信,卷585,不。7,1054 - 1060年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
120. h·邓、h·胡和y方,“Tyrphostin类似物是GPR35受体激动剂”,2月的信,卷585,不。12日,第1962 - 1957页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
121. a·g·Frutos y方,r . Verklereen”Label-free GPCR筛选细胞化验,”组合化学和高通量筛选,11卷,不。5,357 - 369年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
122. j . m . Atienza n, x, x, y .阿巴西,“Label-free和实时细胞激酶试验筛查选择性和强有力的受体酪氨酸激酶抑制剂使用微电子传感器阵列,”《生物分子筛选,11卷,不。6,634 - 643年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
123. l . y, z . Li Li et al .,“不同的增长因素动态质量重新分配(DMR)概要文件监控致癌信号通路在各种癌症细胞,”受体和信号转导研究杂志》上卷,29号3 - 4、182 - 194年,2009页。视图:谷歌学术搜索
124. 邓j . f . Liu, y, y, d . Wang和x Yu”检测表皮生长因子受体在人类胃癌BGC823细胞使用表面等离子体共振传感、阶段”传感器和执行器B,卷153,不。2、398 - 403年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
125. l·s·m . j . y . Chen Li佩恩,j . Xi,“实时和label-free检测细胞反应的信号由不同的表皮生长因子受体子类,”分析化学,卷83,不。8,3141 - 3146年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
126. e . Kakiashvili问:丹·m·范德米尔et al .,“表皮生长因子受体介导肿瘤坏死因子-α全身的激活ERK / GEF-H1 RhoA通路在管状上皮细胞,”生物化学杂志,卷286,不。11日,第9279 - 9268页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
127. y方,a . m .•菲利·g·李,“细胞胆固醇与光学生物传感器,探测功能”Biochimica et Biophysica学报,卷1763,不。2、254 - 261年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
128. o . Panke w·魏盖尔,施密特,A . Steude A和A . Robitzki”细胞阻抗试验监测瞬时受体电位(TRP)离子通道活动,“生物传感器和生物电子学,26卷,不。5,2376 - 2382年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
129. y . a .阿巴西j·a·杰克逊,j .朱j . Oconnell x, x徐,“Label-free,实时监控的ige肥大细胞激活微电子细胞传感器阵列,”《免疫学方法,卷292,不。1 - 2、195 - 205年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
130. 佐藤m .隐藏t . Tsutsui h . et al .,“实时分析ligand-induced细胞表面和细胞内反应的生活使用表面等离子体resonance-based肥大细胞生物传感器,”分析生物化学,卷302,不。1,28-37,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
131. 铃木y濑进,h . t . Tsutsui t . Hiragun y Kameyoshi,和m .隐藏“活细胞的SPR信号反映了变化以外的粘附和细胞结构的形成,“生物传感器和生物电子学,22卷,不。6,1081 - 1086年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
132. 铃木h . y .濑进,t . Tsutsui k . Ishii t . Hiragun和m .隐藏“应用表面等离子体共振监控ige人类嗜碱粒细胞的活化,”变态反应学国际卷,57号4、347 - 358年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
133. m .田中t . Hiragun t . Tsutsui y濑进,铃木h . m .隐藏,“表面等离子体共振生物传感器检测到下游活动PKC的事件β在antigen-stimulated肥大细胞。”生物传感器和生物电子学,23卷,不。11日,第1658 - 1652页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
134. m·h·麦考伊和大肠王”,使用电动细胞基质阻抗传感作为量化工具在甲型流感病毒感染细胞病变效应MDCK细胞实时”病毒学杂志》的方法,卷130,不。1 - 2、157 - 161年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
135. j·r·m·欧文斯c . Wang你et al .,“实时定量病毒复制和使用label-free光学生物传感器抑制剂效力,”杂志的受体和信号转导卷,29号3 - 4、195 - 201年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
136. f·贾,c·马德克斯,A高et al .,“一种新颖的基于单元384 -嗯,label-free测定甲型流感病毒抑制剂的发现,“国际期刊的高通量筛选,1卷,页57 - 67,2010。视图:谷歌学术搜索
137. m . Fiala a . j . Eshleman j .男et al .,“可卡因增加人类免疫缺陷病毒1型对于通过重塑大脑微血管内皮细胞,”NeuroVirology杂志,11卷,不。3、281 - 291年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
138. j·穆勒,蒂里翁c和m . w . Pfaffl”电动细胞基质阻抗传感通性基于实时测量的效价依赖运载体引起的细胞毒性IPI-2I细胞培养模型,”生物传感器和生物电子学,26卷,不。5,2000 - 2005年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
139. a . m .•菲利h .太阳,和y方Label-free综合药理学药物的目标${\beta }_2$肾上腺素能受体。”科学报告,1卷,不。33岁的2011人。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
140. n . Zaytseva w·米勒诉羚,j .赫本和y方,“微流体谐振波导光栅完整的细胞传感、生物传感器系统”应用物理快报,卷98,不。16日,ID 163703条,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
141. t . Ona和j .柴田”先进的动态监测细胞状态使用label-free和非侵入性的细胞传感技术预测的抗癌药物疗效,”分析和分析化学,卷398,不。6,2505 - 2533年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
142. a . m .•菲利问:吴,y,“活细胞感应谐振波导光栅成像,”应用物理快报,卷97,不。22日,ID 223704条,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
143. l . Ghenim h . Kaji y Hoshino et al .,“监控阻抗变化与运动性和单个细胞的有丝分裂,”芯片上的实验室,10卷,不。19日,2546 - 2550年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
144. k . w . Wang Foley x山et al .,“单个细胞和细胞内过程plasmonic-based电化学阻抗显微镜,研究了”化学性质,3卷,不。3、251 - 257年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
145. t .苗族、d . Vrinceanu和e . Gheorghiu“活细胞集群的线性介电响应,”物理评论E,卷81,不。2、文章ID 021913, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
146. n Ke, b . Xi, p .你们et al .,“小分子化合物的筛选和识别使用时间干扰有丝分裂细胞反应资料,”分析化学,卷82,不。15日,第6503 - 6495页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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