文摘

本研究旨在探讨产前接触合成性类固醇的影响精子数量和质量,相对睾丸和附睾的重量、成人Wistar鼠生殖激素水平。四十雄性Wistar鼠被分成两组:一个测试组(n= 20),包括成熟的老鼠出生大坝暴露于妊娠羟孕酮治疗,对照组(n= 20),包括成熟的老鼠生的未经处理的水坝。测试组与对照组相比,显示精子数显著减少,生存能力和能动性,相对睾丸和附睾的重量一起增加异常精子( )。生殖激素测定显示显著降低血清睾酮和更高水平的测试组中FSH和LH与控制(对于所有)。产前暴露于合成孕激素负面影响精子的生产和功能,相对睾丸和附睾的重量、生殖激素水平。

1。介绍

最近,一个重要的进步人类不孕症和睾丸疾病的发病率增加,相当多的关注一直在表达的可能性,产前暴露于过量合成性激素和类固醇可能会影响男性生殖在动物和人类身上(1,2]。

临床和实验报告支持睾丸疾病的胎儿起源的假说与接触造成内分泌紊乱有关。新数据报道,产前接触这样的激素可能引起睾丸发育障碍,因此,引起不孕(3- - - - - -5]。然而,据报道,产前暴露于孕激素引起不可逆转的睾丸增长变化,降低精子的产生,抑制类固醇生成(5,6]。

羟孕酮是合成孕激素为许多产科和nonobstetric条件规定的传统。在妇产科,激素用于治疗异常子宫出血,威胁在妊娠前三个月流产,原发性不孕的情况下,预防早产的原因,以及预防和治疗异常子宫内膜增厚(子宫内膜增生)。Nonobstetric用途包括治疗乳腺疼痛与良性乳腺疾病和女性作为一个局部治疗某些皮肤病(7- - - - - -11]。

实验研究表明,暴露在这些药物在胚胎时期的发展被标记为关键时期可能显著降低大鼠附睾的精子计数和精子的运动性。这些异常可能导致改变动物的正常内分泌系统功能和干扰与合成、分泌、运输、代谢,绑定,和消除自然血液荷尔蒙负责体内平衡,生殖和发育过程(11,12]。

暴露于羟孕酮后,最近的证据显示异常的形态学和组织学改变,包括精子数量的减少,破坏细精管,降低睾丸和附睾重量(7,8,11]。

尽管许多实验协议广泛研究产前暴露于雌激素的类固醇的影响在男性和女性的生殖,数据稀缺有关男性生殖产前暴露于孕激素后的变化。在这种背景下,本研究进行了进一步探索产前暴露于羟孕酮的影响精子数量、精子质量,相对睾丸和附睾的权重,使用实验方法和生殖激素水平。

2。材料和方法

2.1。化学物质

合成孕酮、己酸羟孕酮酯(羟孕酮;先灵葆雅AG);德国。贸易名称:Proluton Depo®),可用油性溶液稀释的纯西班牙橄榄油(1:4毫升)。这是来自Najran妇产医院。

2.2。动物

8到10周的老了,怀孕的女性分为两组和分开远离任何压力在消毒聚丙烯的笼子里(90厘米×45厘米×15厘米)内衬木本外壳在12:12 h光/暗周期(28±7)°C的温度,美联储在商业颗粒和水随意。第一组(n= 10)作为控制和第二组测试组(n= 10)。女性在测试组皮下注射10毫克/公斤羟孕酮的1日7日和14天的妊娠。雌性在对照组注射类似剂量的安慰剂(纯西班牙橄榄油)。

二十男性小狗出生的每一个测试和对照组被随机选择并允许增长了90天达到成熟。出生的测试组雄性大鼠为实验对象,包括大坝合成孕激素治疗怀孕期间,而那些未经处理的大坝作为控制(生n在每组= 20)。大坝的身体重量被每日调整剂量(8,11,13]。本研究中使用的剂量范围内的常规临床使用和管理计划类似于人类在怀孕期间(11]。

2.3。组织收集和准备

老鼠与氯仿麻醉,牺牲了颈椎错位,并收集血液样本从每只动物心脏穿刺使用3毫升注射器和放置在5毫升纯血液收集管确定血清睾酮水平,促黄体,促卵泡激素。

每个老鼠的睾丸和附睾很快被删除从周围的结缔组织和清洁,然后重。附睾的mid-to-distal地区在培养皿中穿孔3毫升针。包含液体的流出精子被稀释在1毫升生理盐溶液(0.9%氯化钠)。明显的精子悬温柔地混合并保持在37°C 5分钟,以便精子的分散介质(4,12]。彻底的混合后,精子悬架被用来评估精子数,能动性,生存能力和形态。之后,相对睾丸和附睾重量计算每最终体重(11,14]。

2.4。精液分析

2.4.1。精子数量

一滴稀释精液(1:20),彻底混合,被转移到一家纽鲍尔血细胞计数器使用微量吸液管和盖玻片覆盖。精子的总数是观察和统计下卡尔蔡司(德国)Axio 2 + 100×显微镜放大。精子数在5个小正方形的大中心广场,16个小方块组成的每平方。因此,精子浓度表示的精子X 10⁶/毫升。两个样品从每个附睾被检查,平均数量计划(12,15- - - - - -17]。

2.4.2。精子的运动性

精子的运动性是化验显微镜下在5分钟后隔绝尾附睾在37°C。一滴精子悬架被放在一个纽鲍尔血细胞计数器使用微量吸液管,然后观察下卡尔蔡司(德国)Axio 2 + 100×显微镜放大。精子与任何不同的精子运动性类型记录。精子精液能动性被表示为一个百分比的统计的200个精子中随机挑选的10个领域里的每个大鼠(4,11]。

对于每一个动物,两个独立悬滴准备获得的平均。

2.4.3。精子生存能力

这种技术被用来区分活和死精子。一滴稀释精液被转移到一个埃普多夫管(1毫升)包含一个伊红染色的降幅为1%。内容轻轻涨跌互现,离开5分钟在37°C,大约10μL的样本被观察到在卡尔蔡司(德国)Axio 2 + 200×显微镜放大。死精子的头部被染成红色而活精子与伊红是清白的。精子活力,表示为一个百分比的活精子200个精子,是评估随机挑选的10个领域里的每个老鼠(4,11]。对于每一个动物,两个单独的悬滴准备,两个独立的观察员评估可行性。每只动物的数据被用来获得的平均。

2.4.4。精子形态

轻轻混合一滴精子悬在一个埃普多夫管(1毫升)被放在一个干净的幻灯片,轻轻蔓延到薄膜。这部电影是风干18),然后观察下卡尔蔡司(德国)Axio 2 +显微镜使用×100放大。异常精子的相对百分比计算为每个鼠样本来自10个不同的光学领域。精子异常包括无头无尾的,蛇的尾巴(11,13,19]。对于每一个动物,两个独立悬滴准备,和两个独立的观察员评估了异常。每只动物的平均结果。

2.5。血清收集和激素测定

血清分离是一夜之间在4000转离心5分钟后存储在4°C,然后储存在20°C (8,11,12]。特定的商用ELISA试剂盒,购自Elabscience生物技术有限公司有限公司(Elabscience),中国,被用来评估大鼠促黄体激素(LH)目录没有:E-ELR0026,睾酮(目录没有:E-EL-R0155)和促卵泡激素(FSH)(目录没有:E-EL-R0391)血清水平根据制造商的方法说明如下表(表上市1):

2.6。统计分析

分析了获得的数据使用SPSS version16(美国芝加哥)软件程序。数据被表示为平均数±标准差。单向方差分析(方差分析)是用来测试不同群体之间的显著差异的意义在 。

2.7。伦理批准

本研究致力于国家和国际伦理实验协议和批准医学院伦理批准committee-Najran University-KSA。

3所示。结果

3.1。精子数

均值附睾的精子数/ 0.1 g /附睾的测试组显著降低的控制( )(表2),这反映出的精子密度明显区别progesterone-treated和对照组。

3.2。精子能动性和精子的生存能力

精子能动性和可行的精子的平均百分比显示显著减少测试组与控制( )(表2,图1)。

3.3。精子形态

显著增加异常精子的总数相比,观察测试组来控制。平均占总数的百分比和特定(无头无尾的,和盘尾)异常显著更高的测试组(表中3,图2)。

3.4。相对睾丸和附睾的重量

与对照组相比,相对的平均百分比睾丸和附睾重量的测试组显著减少( )(表4)。

3.5。激素测定

血清睾酮水平显著降低 在雄性老鼠生大坝怀孕期间用合成孕激素治疗。然而,血清FSH和LH水平均在测试组显著增加(表5)。

4所示。讨论

目前的研究显示有趣的发现,坚持先前的研究(11,12)在产前接触合成孕激素会影响精子的产生,精子功能和睾丸激素的水平。

精子数、运动性和生存能力显著降低progesterone-treated(测试)组相比,控制,影响可能是由于激素睾丸结构和功能的异常改变在胚胎时期,进而影响精子发育和成熟。这些研究结果符合一些之前报道发现了产前暴露于孕激素的影响在雄性老鼠和老鼠繁殖,分别为(11,12]。然而,目前的研究提高产前暴露于这种激素诱发的事实长期在睾丸组织学异常,并确认显著改变权重的生殖器官,精子数量和质量,血清生殖激素的浓度,和生育到期后产前和新生儿老鼠的暴露在避孕化合物(20.]。相同的研究结果报道妊娠和哺乳的曝光后的雄性老鼠己烯雌酚(21]。

另一方面,总数的百分比显著增加精子异常,无头无尾的,卷尾巴精子测试组相比,孕激素的控制建议政府在怀孕期间也会干扰精子质量,因此可能会损害生育能力(1,20.]。

大大降低了相对睾丸和附睾重量( )和测试组相比,控制记录在当前的研究中。这个结果可能是由于胚体细胞损失或营养不良,细精管收缩,增加精子数量减少,精子异常(无头无尾的)由于产前孕激素暴露。这些发现符合相似的研究(5,22]。睾丸的重量主要取决于质量的分化精子发生的细胞,它被用来作为衡量精子发生在老鼠2]。睾丸的重量之间的正相关和生殖细胞也被观察到的数量8,23]。

目前的研究还包括产前孕激素治疗的影响生殖激素,即睾丸激素、血清LH和FSH水平。控制相比,显著降低血清睾酮水平以及血清FSH和LH水平大幅提高观察测试组。文章也提到过类似的发现老鼠产前接触后羟孕酮(11,12)以及新生儿暴露于雌激素(24,25]。测试组的血清睾酮水平降低可能是由于睾丸间质细胞数量减少,减少响应LH的睾丸间质细胞,或直接抑制睾丸甾类产生的5,25]。大大降低了3 b-hydroxysteroid脱氢酶(3 b-hsd)和17 b-hydroxysteroid脱氢酶(b-hsd 17日)活动和类固醇生成小鼠的睾丸中产前暴露于羟孕酮的报道(6]。随着睾酮对精子的正常发育至关重要的不同阶段在精子发生过程中,激素水平较低的测试组将有助于观察精子数减少。测试组的高血清FSH水平观察可能是由于生殖细胞在精子发生的损失或者损坏舱塞尔托利氏细胞,预计减少抑制素激素,从而影响FSH分泌的负反馈调节。

同样,LH水平的增加,加上在测试组的血清睾酮水平下降,表明损失引起的睾丸激素的负反馈LH分泌睾丸间质细胞结构或功能的障碍。早期的研究报道,新生儿暴露于己烯雌酚导致抑制雄激素作用除了在男性生殖系统异常。然而,增加血清LH水平推迟发病间充质细胞分化成睾丸间质细胞(12,22,26,27]。

总之,目前的研究表明,产前接触合成孕激素不利影响精子的生产和功能,相对睾丸和附睾的重量、生殖激素水平。这些发现提出问题在怀孕期间使用孕酮的安全性,尤其是睾丸异常的存在。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。