文摘

女性患上无排卵性不孕症的主要原因,多囊卵巢综合征(PCOS)影响很大一部分在生育年龄的女性。尽管glucagon-like肽1受体受体激动剂(GLP-IRAs)显示为多囊卵巢综合征的治疗效果,其目标和潜在机制仍然是难以捉摸的。在目前的研究中,我们发现,两者都有在活的有机体内和在体外,GLP-1充当核扩散的调节器和mgc antiapoptosis PCOS小鼠卵巢的卵泡。此外,forkhead盒蛋白质O1群(FoxO1)课程起着重要的作用。关于颗粒细胞的重要性(GCs)卵母细胞发育和功能,从目前的研究结果可以提供更详细的说明在已知有益GLP-1RAs对PCOS的影响和支持未来努力开发更高效的GLP-1RAs PCOS治疗。

1。介绍

多囊卵巢综合征(PCOS)是诊断在6% - -8%的妇女在生育年龄1]。PCOS的表现通常包括月经过少或闭经,folliculogenesis异常、慢性停止排卵,hyperandrogenemia,不孕2]。除了被女性患上无排卵性不孕症的最常见的原因(3),代谢综合征的患病率,血脂异常,2型糖尿病是更高的PCOS妇女相比,正常年龄和身体质量指数与女性。多囊卵巢综合征是一种严重威胁患者的身心健康。

PCOS的复杂的发病机制包括细胞凋亡相关基因的异常表达,MAPK信号通路和细胞周期相关的分子(4]。更具体地说,增殖和凋亡的GCs卵泡发展和闭锁的根本原因是(5]。这些在一起,PCOS GCs有助于调查研究其生理和病理作用在疾病进展,进一步可能的发病机制。

Glucagon-like肽1 (GLP-1)是一种激素处理过程中产生的肠上皮细胞内分泌L-cells proglucagon。在健康个体,GLP-1主要肠促胰岛素激素(6],GLP-1(7-36)醋酸GLP-1的生物活性形式。GLP-1行为通过GLP-1受体(GLP-1R),这是一个B类G-protein-coupled受体。考虑其对胰岛素的报道影响,GLP-1 / GLP-1R轴是一种很有前途的药物代谢疾病的目标(7,8]。除了GLP-1 / GLP-1R轴对新陈代谢的影响,GLP-1R受体激动剂(如liraglutide GLP-1RAs)也提高了卵巢功能的标记(出血模式;抗苗勒氏管激素水平(她们血液中的抗苗勒氏管激素)),性激素、促性腺激素、卵巢形态学与PCOS超重女性(9]。此外,偏见与低剂量liraglutide加入二甲双胍干预增加了在体外受精怀孕率与PCOS不孕肥胖女性(10]。GLP-1RAs治疗,也观察到,雄激素水平的小幅下降,月经频率增加(8,11,12]。一些学者认为GLP-1可能是最重要的一个调制信号连接生殖和代谢系统,主要是刺激作用glp - 1在哺乳动物生殖及其模拟超越单纯的减肥(13]。然而,对角色的理解glp - 1在繁殖和GLP-1RAs目前是有限的。PCOS的有益疗效造成的卵巢功能可以改善代谢后GLP-1RA治疗或药物的直接影响卵巢。

GLP-1R表示在许多组织,包括胰腺、肾、心、肺、脂肪组织,和平滑肌,以及在特定地区的中枢神经系统。GLP-1R表明GLP-1独立的广泛分布的影响在不同的组织(6]。相比之下,很少有研究关注GLP-1R进行表达与卵巢异常,报道GLP-1R在人类卵巢肿瘤细胞中表达14]。我们之前的研究(图S1)标识上的GLP-1R小鼠卵巢颗粒细胞的细胞膜和细胞质。因此,我们的中心假设是glp - 1在中介/ GLP-1R起着重要作用mgc的功能。

类的成员FoxO1 O在Forkhead转录因子(福克斯)的家庭,受PI3K / Akt通路,参与许多病理和生理过程,包括细胞增殖、凋亡、自噬、代谢、炎症反应等(15]。FoxO1 GCs基因表达不同发育阶段的卵泡,和FoxO1表达是最高的在闭锁卵泡的GCs,主要在细胞核的gc [16,17]。最重要的是,FoxO1扮演着一个重要的角色在促进卵泡闭锁和细胞凋亡的GCs PCOS [18]。互动glp - 1在胰腺和FoxO1报道B细胞(19,20.]。GLP-1激活PI3K通路,可以增加FoxO1细胞核转移,诱导目标基因pdk-1 FoxA2 FoxO1,以促进B细胞的增殖和antiapoptosis。然而,很少有研究glp - 1在GCs和FoxO1之间的互动。在现在的研究中,PCOS成立的老鼠模型来模拟疾病的血清学和病理改变。基于以前的结果,下一步的研究旨在探讨是否GLP-1调节卵巢PCOS-associated mgc核扩散和antiapoptosis通过修改forkhead盒蛋白质O1磷酸化位点。

2。材料和方法

2.1。多囊卵巢综合征小鼠模型和治疗

共有50个3个女C57BL6小鼠体重(8.85±10.42 g),选择和断奶年龄21天,被广东省实验动物中心提供。所有的动物被饲养,位于25°C(湿度50%),并适应标准实验室条件(12 h光明和12 h黑暗周期)与自由访问啮齿动物饲料和水。经过2天的适应性喂养,老鼠被随机分为两组(汽车集团(n= 10)、脱氢表雄酮组(n= 40))。汽车组的小鼠每日注射芝麻油(0.1σ,密苏里州,美国,100 mL / g)在脱氢表雄酮组的小鼠注射脱氢表雄酮(DHEA,σ,6毫克/ 100克⋅d) (21连续20天每天皮下注射。

在年龄32天,脱氢表雄酮治疗小鼠的子群(n= 10)收到每天两次(南)注射liraglutide(诺和诺德公司0.2毫克/公斤)22连续21天),其余(n= 30)也得到了盐水每天注射两次。6 - 7周,每日阴道细胞学测定三组每天早上,脱氢表雄酮+ liraglutide,脱氢表雄酮和车辆。使用生理盐水灌洗阴道细胞收集、固定与甲醇和沾赖特染色。阴道表皮剥脱的细胞周期的连续七天在显微镜下观察,发情周期的阶段是评估和记录。PCOS模型被认为是成功地建立了进一步的实验,直到消失在发情周期的优势cornified鳞状上皮细胞观察脱氢表雄酮组。所有小鼠的体重测量每两天整个实验。动物实验是按照南方医科大学的制度执行动物保健和使用委员会政策动物使用下一个批准的协议。

2.2。组织收集和组织学

治疗后liraglutide(54天的生活),生殖和代谢特性进行了评估。三组中所有的老鼠都在禁食条件下执行阴道涂片测试后表明他们在发情期或发情前期阶段。所有老鼠重禁食8 h后,分别给予4%水合氯醛麻醉的腹腔内。全血是在室温下保持1小时,离心机在1000克15分钟在4°C。血清分离和储存在-80°C葡萄糖,胰岛素,睾酮测量。血清胰岛素和睾丸激素使用酶联免疫吸附试验测定试剂盒(ARG81295, ARG80662、Arigo、台湾)。老鼠牺牲后,双边卵巢被检查并迅速收集。集合后,每组十小鼠卵巢隔绝在4°C和10%福尔马林固定8小时。分级乙醇系列的固定组织脱水,二甲苯清除,嵌在石蜡中。3到4μ米部分经常剪,贴在硅化玻璃,脱水,然后被苏木精和伊红染色的过程必须为histomorphological ())。而其他卵巢从二十PCOS老鼠使用mgc隔离的目的。

2.3。隔离小鼠卵巢颗粒细胞和文化

用于孤立的PCOS老鼠卵巢德国。老鼠的牺牲后,卵巢被收集和培养如下。卵巢洗了汉克的均衡解和转移到新鲜的DMEM(杜尔贝科修改鹰的介质)F12培养基(含10%胎牛血清(的边后卫))。presinusoidal和正弦卵泡穿刺25针。卵母细胞和mgc孤立从剩下的卵巢组织,释放到媒介。随后,细胞悬液与40μm细胞过滤器过滤,离心收集的和德国5分钟在4°C。mgc生存能力是由台盼蓝排斥,然后这些细胞被停职,包含10%的边后卫在DMEM培养,1毫米丙酮酸,2毫米谷氨酰胺,100国际单位/毫升青霉素、链霉素和100毫克/毫升。种子细胞培养在37°C和5%的公司₂24 h。免疫荧光染色法被用来检测FSHR表达和本地化(促卵泡激素受体),一个特定的标志GCs,识别孤立的细胞gc [23]。

2.4。免疫荧光

PCOS的mgc隔离小鼠卵巢固定在4%甲醛稀释在室温下15分钟,冲洗三次在PBS,被封锁在5%正常山羊血清/ 0.2% Triton 60分钟。吸气阻断方案后,细胞被孵化与兔子anti-FSHR滋润染色盒多克隆抗体(上海Kalang、上海、中国)一夜之间在4°C。主要抗体孵育后,细胞被洗了三次,每5分钟,PBS。洗后,细胞被孵化在黑暗与在室温下设计一个适当的二次抗体稀释1 h。卸载后二级抗体溶液,PBS的细胞被洗了三次,每5分钟。最后,这些细胞被孵化1毫克/毫升DAPI (4′, 6-diamidino-2-phenylindole)在室温下1分钟,用PBS冲洗一次。密封后,图片拍摄和激光共焦显微镜下获得的。

2.5。的建设和转染FoxO1⁃Ser 256突变体慢病毒质粒向量

进一步澄清是否GLP-1调节卵巢PCOS-associated mgc增殖和凋亡的修改forkhead盒子蛋白质O1磷酸化位点,我们构建慢病毒载体表达FoxO1-Ser 256磷酸化突变(FoxO1-mt): Lv201-FoxO1 S256A -Sv40-EGFP-IRES-Puro和FoxO1野生型慢病毒载体(FoxO1-wt): Lv201-FoxO1-Sv40-EGFP-IRES-Puro。从GeneCopoeia Lv201购买。PCOS mgc被播种到six-well板块(1×10⁶/毫升)和孵化DMEM-F12中(包含10%的边后卫)24 h。细胞被随机分为四组:空白对照组细胞,向量组,FoxO1⁃wt组和FoxO1-mt (S256A)组。适当的病毒浓度梯度是由前一个试点研究。每个好了5μl病毒悬液。盘子放在孵化器,培养在37°C。改变转染的介质在12个小时后,这些细胞被不断培养。72小时后,转染效率评估在荧光显微镜下,用于后续实验。

2.6。测量细胞的生存能力(CCK-8试验)

PCOS mgc被用来准备一个单细胞的混合物。细胞密度被调整至1×10⁵/毫升,细胞被播种到96孔板。每个包含100μL细胞悬液,和六个复制井建立了日常文化。confluency细胞达到80%后,10μL含有不同浓度的的刺激GLP-1(7-36)(美国新泽西州HY-P0054, MedChemExpress) (0、10、100、1000 nmol / L)被添加到细胞24、48、72、96和120 h。随后,10μL细胞计数kit-8 (CCK8)的解决方案是添加到每个在37°C和孵化2 h。吸光度值OD测量标在波长为450 nm,并相应地计算细胞的生存能力。实验重复三次。

2.7。流式细胞术

PCOS mgc播种在six-well板块(1×10⁶/毫升)和培养DMEM-F12介质(包含10%的边后卫)24一式三份。治疗后的梯度浓度GLP-1 (7-36) (0、10、100、1000 nmol / L)表示在图的传说中,文化的细胞保持48 h。在终点,细胞收获和PBS清洗三次。后使离心5分钟,每分钟1000转膜联蛋白V-FITC染色和π双重染色进行。细胞凋亡率评估使用流式细胞仪分析仪(Becton Dicknson,圣何塞、钙、美国)。膜联蛋白V-FITC-positive被评为凋亡或late-apoptotic。

2.8。西方墨点法

PCOS的德国被播种在21厘米²细胞培养密度1×10菜⁶/好,孵化16 h确保细胞附着。在DMEM-F12培养基培养细胞不断(containing10%的边后卫)24 h。治疗后与100 nM glp - 1在图传说(7-36)表示,这些细胞被维护在文化48 h。样本收集使用•瑞帕裂解缓冲(1% Triton x - 100, 0.1% SDS, PMSF 1毫米,1μg / mL抑肽酶,1μ在PBS g / mL亮抑酶肽)。蛋白质浓度测定BCA化验(Beyotime)。大约40μ总额的g蛋白在sds - page凝胶电泳和转移到PVDF膜(微孔)。膜被封锁在Tris-buffered盐水(TBS)含0.1% Triton x - 100 (TBS-T)和5% (w / v) BSA在室温下为90分钟。膜被孵化一夜之间在4°C主要抗体稀释TBS-T含有5% (w / v) BSA如下:GLP-1R (1: 500) (ARG65819数量,Arigo)、bcl - 2 (1: 1000) (A16776数量,ABcolnal),伯灵顿(1:1000)(# 2772,春秋国旅),FoxO1 (1: 500) (A13862数量,ABcolnal) pFoxO1 (Ser 391) (1: 500) (AP0176数量,ABcolnal)和pFoxO1 (Ser 256) (1: 500) (# 9461, CST)。洗后主要抗体,膜与二次孵化1 h抗体在1:2000稀释。具体使用增强化学发光反应乐队可视化系统和暴露。最后,ImageJ(医学博士,美国)图像分析软件被用来确定电泳带灰度值。转染后的操作是一样的。

2.9。统计分析

提出了定量数据意味着±标准错误的意思(SEM)三个独立的实验。7.0统计分析与GraphPad棱镜(La Jolla、钙、美国)软件。双组与双尾t配对的测试或未配对的数据。比较两组以上的,意义是由一个方差分析(方差分析)。一个被认为具有统计显著性值小于0.05。

3所示。结果

3.1。Liraglutide促进了颗粒细胞增殖DHEA-Induced PCOS鼠标

在活的有机体内和部分恢复了正常的发情周期

PCOS的小鼠模型建立了注入脱氢表雄酮(DHEA)探讨glp - 1在PCOS / GLP-1R信号卵巢。连续阴道涂片监测的结果显示,所有汽车组的老鼠有一个正常的发情周期的4到5天。在治疗后,小鼠阴道涂片显示4 liraglutide组(40%)恢复到正常发情周期,而在PCOS组仍然没有发情周期的维护。在协议与PCOS的代谢紊乱经常观察,小鼠的空腹胰岛素水平(54天的生活)PCOS增加小鼠相比汽车集团( )(图1 (b))。空腹血糖水平在PCOS组也高于汽车组,虽然效果边际(图1(一))。尽管异常代谢,PCOS组小鼠的体重并没有不同于对照组(图1 (c))。此外,作为一个主要的激素在女性生殖过程中,睾丸激素水平增加超过300倍的PCOS老鼠的生活(54天)( )(图1 (d))。如图,干预liraglutide显著降低PCOS的老鼠的体重( )。也观察到小鼠的空腹胰岛素liraglutide组低于PCOS组,但没有统计学意义。同样,liraglutide治疗后睾酮水平与PCOS组小鼠相比略有下降( )。

进一步描述在PCOS小鼠疾病进展,卵巢的形态学变化。整个卵巢体积增加的观察苍白的颜色在PCOS的老鼠。患多囊卵巢综合征的老鼠也显示多囊改变,囊状膨胀毛囊,多个闭锁的毛囊(数字2 (b)和2 (e))。此外,mgc厚度减少到两到三层,松散排列与卵母细胞或辐射电晕在囊泡;此外,luteum形成与PCOS(数据在老鼠身上很少见到2 (b)和2 (e))。窦的毛囊的数量(d> 300μ米,每子房)增加PCOS组与控制( )(图2 (g))。所有这些病理观察都是依照综合症在PCOS患者在诊所,没有观察到在正常控制老鼠(数字2(一个)和2 (d))。与liraglutide治疗后,德国的层数PCOS老鼠的毛囊显著增加,囊性扩张卵泡和多个闭锁卵泡减少,黄体是可见的(数字2 (c)和2 (f))。

3.2。GLP-1对分离的影响从PCOS小鼠卵巢颗粒细胞的生存

鉴于德国GLP-1R的分布,GLP-1 / GLP-1R轴调节卵巢功能可能通过控制德国的扩散。综上所述,GLP-1的扩散效应(7-36)主要mgc检查。

在24小时内主要PCOS-associated mgc表现出单层的依从性;然而,经济增长率在体外是慢的。文化的第三天,坚持细胞达到扩散高原阶段可行性高。培养细胞显示完整的形态,主轴或恒星的形状,边缘清晰,统一大小,大,圆形细胞核,细胞质的透明度好,丰富的颗粒(补充图S2)。6-7th天的文化,细胞开始变形,由于在confluency破产细胞凋亡。

刺激了患多囊卵巢综合征的mgc GLP-1(7-36)不同浓度(0、10、100、1000海里)。细胞生存能力是由CCK8试验,测量了OD(光密度)值的样本。结果(图3(一个))显示,100海里GLP-1(7-36)显著增强德国的可行性与空白对照组相比。因此,在后续的实验中,我们调查的行动方式GLP-1(7-36) 100海里的浓度。

通过流式细胞术(图3 (b)),我们发现,不同浓度的GLP-1(7-36)可以抑制细胞凋亡的PCOS-associated mgc脱氢表雄酮治疗。治疗后48小时内,凋亡和late-apoptotic细胞的百分比为11.97%,0.343%,0.152%,和1.162%,对应的浓度GLP-1(7-36) 0, 10, 100和1000海里。同样,凋亡bcl - 2蛋白的表达和proapoptotic蛋白质在PCOS治疗卵巢mgc伯灵顿100海里GLP-1 48小时被免疫印迹检测。结果表明,bcl - 2蛋白的表达GLP-1干预后显著增加,而伯灵顿减少(图的表达3 (c))。

3.3。的影响GLP-1 (7-36) FoxO1磷酸化修饰

鉴于FoxO1转录活动的磷酸化修饰是一种重要的监管机构(24]。我们检测到的变化FoxO1和pFoxO1 PCOS-associated mgc治疗或没有100海里GLP-1通过免疫印迹(7-36)48 h。如图4,FoxO1 pFoxO1 (Ser 256年和391年Ser)信号中检测出PCOS-associated德国。我们观察到,在GLP-1 FoxO1蛋白的表达(7-36)干预组没有明显比对照组增加。我们还发现FoxO1蛋白磷酸化水平的网站爵士256年和319年Ser显著调节后GLP-1(7-36)治疗。因此,我们得出结论,GLP-1(7-36)显著增加FoxO1磷酸化没有诱导的表达在DHEA-induced FoxO1 PCOS卵巢德国。

3.4。GLP-1的抑制效果(7-36)细胞凋亡的DHEA-Induced PCOS卵巢颗粒细胞取决于FoxO1蛋白磷酸化修饰

主要mgc源自DHEA-induced PCOS老鼠与FoxO1-wt转染,FoxO1-mt,向量组和转染率超过90%。免疫印迹结果证实超表达FoxO1转染后在德国。FoxO1蛋白的表达水平在FoxO1-wt组和FoxO1-mt组相似(图5(一个))。因此,在确保的前提下的表达水平FoxO1是一致的,我们探讨是否GLP-1(7-36)可以调节DHEA-induced PCOS卵巢mgc增殖和凋亡通过修改FoxO1磷酸化的网站。如图5 (b),显著增加FoxO1磷酸化FoxO1-wt组指出,GLP-1以及没有明显的影响(7-36)磷酸化的FoxO1 FoxO1-mt的存在。pFoxO1 wt组的蛋白质含量与GLP-1干预相比显著增强,没有干预。这些数据表明,GLP-1(7-36)可以调节FoxO1 / pFoxO1信号通路。

评估是否GLP-1-induced PCOS-associated mgc凋亡依赖于FoxO1蛋白磷酸化改性,PCOS老鼠的卵巢GCs培养有或没有100海里GLP-1(7-36)转染后48 h。培养细胞被评估使用免疫印迹(图5 (b))。德国的bcl - 2、bax的表达治疗PCOS鼠GLP-1(7-36)转染后发现。与GLP-1 bcl - 2蛋白的表达明显增加(7-36)干预后FoxO1-wt转染;相反,伯灵顿蛋白质的表达减少。然而,FoxO1-mt转染组没有显著差异之前和之后GLP-1(7-36)干预。因此,glp - 1在PCOS(7-36)可以抑制GCs凋亡老鼠FoxO1蛋白磷酸化修饰的网站。

总的来说,这些结果表明,FoxO1的磷酸化与GLP-1在PCOS-associated卵巢mgc的保护作用。

4所示。讨论

PCOS是女性患上无排卵性不孕症的最常见的原因(3]。伴随着一系列代谢紊乱,可能破坏卵巢功能,如血脂异常、2型糖尿病、胰岛素抵抗和代偿高胰岛素血(25]。肽激素或激素受体的受体激动剂在临床实践证明有效的治疗效果。除了他们的积极影响新陈代谢,GLP-1RAs(比如liraglutide)也与PCOS女性改善卵巢功能。但剩下的重要问题是,底层机制GLP-1 / GLP-1R轴卵巢没有明确说明。

在这项研究中,PCOS的小鼠模型建立来解决上述问题。用liraglutide治疗PCOS老鼠之后,我们得出这样的结论:liraglutide可以有效改善卵巢多囊扩张,促进GCs扩散,促进卵泡发育。我们确认之前,GLP-1R提出了小鼠卵巢颗粒细胞的细胞膜和细胞质和GLP-1R表达却降低了PCOS模型(补充图S1)。从那里,我们假设glp - 1在中介/ GLP-1R起着重要作用的功能卵巢GCs PCOS的老鼠。进一步测试我们的假设,我们调查的影响GLP-1 (7-36) PCOS老鼠的卵巢GCs增殖和凋亡在体外以及潜在的分子机制。

在卵泡发育,GCs分泌卵泡液,类固醇激素和生长因子。分泌调节生长、分化和成熟的卵泡细胞和卵母细胞,从而调节毛囊的发展(26]。gc的障碍导致卵泡发育异常。同时,GCs apoptosis-induced卵泡闭锁是失败的主要原因在优势卵泡选择(27]。在DHEA-induced的多囊卵巢综合征小鼠模型中,凋亡细胞的数量在preantral和窦的卵泡增加,和凋亡蛋白的表达与TUNEL-positive GCs毛囊是强于TUNEL-negative毛囊。一起,这些结果表明GCs凋亡扮演了一个至关重要的角色,在卵泡闭锁的中介在PCOS [28]。GLP-1是肠促胰岛素的激素,展览等药理作用神经保护,提高认知功能,心脏保护,减少高血压、抑制胃酸分泌,防止炎症(29日]。GLP-1可以通过其受体(GLP-1R)刺激细胞增殖和抑制细胞凋亡(19,30.- - - - - -33]。我们的数据解释建议的直接行动GLP-1 / GLP-1R轴mgc调节PCOS发病机理。同时,我们确认,GLP-1(7-36)显著减毒PCOS-associated卵巢mgc凋亡浓度的方式。

FoxO1蛋白是一种细胞生存的负面调节器。它的主要功能是抑制细胞增殖和促进细胞凋亡和周期阻滞34]。FoxO1表达于大脑、骨骼肌、肝脏和胰岛B细胞。最重要的是,高水平的FoxO1表达在不同发展阶段卵泡GCs和峰值在闭锁卵泡(35,36]。先前的研究已经发现FoxO1与PCOS发展有关。它扮演了重要的角色在促进卵泡闭锁和细胞凋亡的gc [18,37]。GCs磷酸化FoxO1主要集中在细胞核,这提高了下游的转录激活凋亡如p27基因^kipl和女子38),从而促进细胞凋亡的gc。foxo受磷酸化、乙酰化作用和蛋白质水解。三个高度保守的磷酸化的磷酸化网站Thr24 Ser256, Ser319 PI3K / Akt是主要的活动监管模式(39]。此外,它也证实,GLP-1模拟liraglutide可以抑制胰腺β细胞的凋亡,改善其功能通过P13K / AKT FoxO1通路(19]。做GLP-1影响颗粒细胞的增殖和凋亡通过修改FoxO1的磷酸化的网站吗?正如我们所知,当foxo进行磷酸化,其核本地化信号将被阻塞,诱导foxo从细胞核转移到胞浆,从而终止其约束力的下游靶基因的启动子(40]。ser256磷酸化的先决条件和必要条件的规定其他网站的磷酸化。Thr24可以绑定到14-3-3蛋白阻止绑定foxo启动子。ser319磷酸化后,它可以生成核信号促进转移的核(41]。因此,我们选择了变异ser256 FoxO1执行后续的检测。在这项研究中,我们发现GLP-1(7-36)可以增加ser256的磷酸化和ser319网站,促进德国的扩散,减少细胞凋亡没有诱导的表达在DHEA-induced FoxO1 PCOS卵巢德国。此外,我们发现GLP-1(7-36)不能使磷酸化Foxo1 (Ser 256)后有效地改变Foxo1的氨基酸序列(Ser 256)磷酸化的网站,也不能有效地抑制细胞凋亡的gc。我们的数据表明,GLP-1可以显著减少GCs细胞凋亡和/或在PCOS小鼠卵巢卵泡闭锁。最重要的是,glp - 1在德国对细胞凋亡的积极治疗效果与磷酸化有关修改FoxO1表达式。下一步,我们计划验证GLP-R基因敲除小鼠卵巢颗粒细胞上进一步证实GLP-1 / GLP-1R轴的影响小鼠多囊性卵巢颗粒细胞的功能。

5。结论

总的来说,我们的研究表明,GLP-1 / GLP-1R轴作用于PCOS卵巢mgc促进他们的生存能力在活的有机体内和在体外,从而导致PCOS卵母细胞成熟。PCOS的增强卵巢mgc GLP-1增殖和凋亡的调节,至少部分,通过修改forkhead盒蛋白质O1磷酸化位点。这些发现提供机械的见解GLP-1RAs在PCOS的已知有利影响和支持未来努力开发更高效的GLP-1RAs PCOS的治疗。虽然这项研究提供了一个新的方向的分子机制探索GLP-1RA治疗PCOS, GLP-1修改FoxO1站点的具体机制仍然需要大量的后续研究。

数据可用性

所有数据用于支持本研究的发现可以从相应的作者。

伦理批准

所有程序中执行研究涉及人类受试者按照道德标准机构和/或国家研究委员会1964年赫尔辛基宣言及其后来的修正案或类似的道德标准。

同意

知情同意是获得所有个体参与者包括在这项研究中。

的利益冲突

所有作者宣称他们没有利益冲突。

作者的贡献

志华太阳与李的贡献同样这项工作。

确认

本研究支持的中国广东省自然科学基金(项目编号:2018 a030313997),广东省医学科学技术研究基金项目(项目编号:A2019186)和番禺区科技项目(项目编号:2017 - z04 - 35)。

补充材料

图S1:本地化glucagon-like肽1受体在小鼠卵巢。免疫组织化学(S1.1)和免疫印迹(S1.3)分析是用来确定GLP-1R的分布在小鼠卵巢。德国被孤立起来,用共焦显微镜确认GLP-1R本地化的mgc (S1.2)。小鼠卵巢组织的免疫染色不仅展示了受体在小鼠卵巢的存在但还发现了卵母细胞和颗粒细胞的细胞质膜和卵巢的主要受体分布的场所。GLP-1R降低在PCOS的表达模型,和减少GLP-1R卵巢组织(F)和颗粒细胞(G)与控制老鼠相比,患多囊卵巢综合征的老鼠被qRT PCR检测(H)和免疫印迹分析。图S2:他和FSHR染色进行高分辨率成像确认身份的颗粒细胞(A)孤立主要颗粒细胞从PCOS老鼠(×200)。(B)染色后,贴壁细胞显示完整的形态,清晰的边缘,统一的大小;细胞核大而圆,深蓝色,透明和丰富的颗粒(×200)。(C)免疫荧光染色显示FSHR细胞质细胞核是红色和蓝色DAPI染色(×200)。结果证实,孤立的细胞PCOS小鼠卵巢颗粒细胞和颗粒细胞的纯度超过90%。(补充材料)