文摘
复发insulin-induced低血糖是糖尿病患者胰岛素治疗的一个主要限制导致一个条件称为hypoglycaemia-associated自主失败(HAAF)。HAAF的特点是减少sympathoadrenal后续低血糖反应从而诱发病人严重低血糖可导致昏迷甚至死亡。尽管几次,HAAF机制尚未明确。为了阐明HAAF的机理,建立一个人类/动物模型的现象是最重要的要求。几个研究小组试图重现这种现象在糖尿病和非糖尿病的人类和啮齿动物和变量的结果报道。成功的现象,显著减少血浆肾上腺素反应随后那些集相对于前期的那些事件。许多因素如胰岛素剂量,给药途径,禁食条件下,血液采样方法和分析、深度、时间和数量的前期那些情节会影响成功繁殖的现象,因此必须仔细考虑在开发协议。在本文中,我们概述了协议之后,不同的研究群体繁殖现象在糖尿病和非糖尿病的人类和老鼠的啮齿动物包括我们自己的观察和讨论的因素必须被仔细考虑繁殖成功的现象。
1。介绍
低血糖是一个不可避免的副作用胰岛素治疗1型和2型糖尿病和先进可以危及生命。在1型糖尿病患者中,2 - 4%的死亡归因于低血糖(1]。重要的是,那些情节在糖尿病患者不良性;他们减少生理防御随后的那些事件导致一个条件称为hypoglycaemia-associated自主失败(HAAF)。机制,减少低血糖的生理反应是不完全理解;因此,还需要进一步研究的可能机制HAAF缓解糖尿病患者的痛苦。为了实现这一目标,HAAF模型(人类和动物)已经开发出来。HAAF手稿评论人类和动物模型,描述了不同的协议被研究者用来建立HAAF模型,并突出我们在自己的实验室经历的挑战,虽然建立HAAF模型大鼠。在我们讨论HAAF的当前模型之前,我们将简要描述counterregulatory和反应在非糖尿病患者低血糖症状在HAAF个人和如何改变这些。
2。Counterregulatory和症状性低血糖反应
在非糖尿病患者个人,血糖浓度下降引发一系列典型组织的反应,防止低血糖(图的进一步发展1为全面审查是指()(2,3])。当血糖低于4.5更易/ L,第一道防线是胰腺胰岛素分泌减少;如果这项措施不足,血糖进一步下降低于3.8 L更易发生,从触发胰腺胰高血糖素的释放4- - - - - -7]。胰高糖素恢复血糖主要通过刺激糖质新生和肝糖分解,减少糖原生成和糖酵解。它还能增加氨基酸的吸收在肝脏和脂肪组织动员甘油用于糖质新生(8]。胰高血糖素释放也伴随着sympathoadrenal系统的激活导致肾上腺释放肾上腺素。肾上腺素增加血浆葡萄糖浓度通过一系列机制包括直接刺激肝(肾)葡萄糖生产、限制葡萄糖胰岛素敏感组织间隙,动员gluconeogenic基质如乳酸和氨基酸来自脂肪,肌肉和甘油增加胰高血糖素分泌,并限制胰岛素分泌(5,9- - - - - -11]。除了这些,当血糖进一步下跌低于3.7更易/ L的激活垂体轴导致生长激素和皮质醇的释放,进一步引发低血糖的适应性反应刺激脂解作用,生酮作用和糖质新生。进一步减少血浆葡萄糖水平低于3.2更易与L / L和2.8更易导致的神经性症状,如心悸、焦虑、震颤、饥饿、出汗、刺痛和neuroglycopenic思考困难等症状,困惑,无力,头晕,促使个体分别摄取碳水化合物(12]。据报道,神经性症状主要是由于sympathoneural而不是adrenomedullary反应,因为这些反应是在双边adrenalectomised个人(13]。心悸、焦虑和地震是由去甲肾上腺素释放肾上腺素引起的症状主要是交感神经,而饥饿、出汗、和刺痛是由乙酰胆碱释放引起的交感神经。大脑中的葡萄糖剥夺neuroglycopenic症状导致的。应该强调,严重低血糖在非糖尿病患者个人生理和应该考虑那些障碍;这些障碍会导致使用药物,激素干扰(例如,由于胰岛瘤胰岛功能亢进),或重要疾病(1]。
3所示。Hypoglycaemia-Associated自主失败(HAAF)
大部分的上述counterregulatory和症状反应对发展中在1型糖尿病患者低血糖通常妥协和先进的2型糖尿病(49]。这些反应发生的血糖水平被称为血糖阈值可调高葡萄糖水平在慢性高血糖症或后反复低血糖(血糖水平较低6]。先进1型和2型糖尿病,胰岛素反应缺席和胰高血糖素水平没有增加低血糖反应(1,50,51]。在这种背景下,sympathoadrenal响应成为糖尿病患者的关键。然而,反复发作低血糖导致的重置阈值的激活counterregulatory和症状反应到一个较低的葡萄糖水平。克莱尔已经将这种现象定义为hypoglycaemia-associated自主失败(HAAF) [10,52]。HAAF假设的概念,在最近的1型糖尿病和先进的2型糖尿病前期医源性低血糖引起缺陷adrenomedullary肾上腺素反应和低血糖的意识(图受损2)。应该强调,HAAF现象是不同于经典的糖尿病自主神经病变,糖尿病的常见并发症(53]。我们基础回顾克莱尔的定义的现象。
缺陷counterregulation和受损的认识低血糖发生最近前期低血糖减少sympathoadrenal响应和神经性和neuroglycopenic后续低血糖症状(14,19,20.]。1型糖尿病患者有缺陷的胰高血糖素和肾上腺素对低血糖有25倍或更高的风险增加医源性低血糖期间强化胰岛素治疗(54]。随着糖尿病的持续时间增加,防止低血糖,依赖sympathoadrenal激活和循环肾上腺素的释放,减少。进步sympathoadrenal障碍的机制在长期糖尿病低血糖并不完全理解尽管许多假说提出了(5,9]。因此,人类和动物的研究已经进行了阐明HAAF的机制。下面,我们回顾了人类和动物的研究,使用不同的方法来建模HAAF现象。
4所示。人类的繁殖HAAF现象
HAAF现象不是特定于糖尿病而是特定于低血糖刺激,因为它可以在健康个体复制;因此,许多研究小组试图调查HAAF的机制在非糖尿病患者和糖尿病人。下面,我们描述不同的协议用于诱导人类HAAF包括胰岛素剂量、深度、持续时间和数量的前期那些情节,血浆肾上腺素反应,症状评分。尽管克莱尔HAAF现象的原始定义具体是指减少神经性(自主)症状而不是neuroglycopenic症状10,52,55),神经性和neuroglycopenic症状都是减少复发性低血糖反应就是明证人类研究[14,15,18- - - - - -21];因此,这两种类型的症状反应综述。
4.1。通用协议
通常,受试者的平均年龄年平均身体质量指数被选出的大多数研究[15,16,19,22- - - - - -27]。一般来说,受试者禁食一夜之间所有的低血糖发作之前很少研究受试者仅仅是短期禁食或随后的那些事件之前没有禁食。所有受试者和两个留置导管插入,插入一个手静脉输液、注射胰岛素,血糖,药物和第二侧前臂的血液抽样。取血样的手臂是保存在有机玻璃框或调节套筒和维持在55°-65°C获得arterialised静脉血液样本。葡萄糖钳夹总是用于人类研究为了维持血糖在所需的水平,减少它在一个安全的、逐步的方式。艾滋病在提供适当剂量的胰岛素,同时注入20%葡萄糖所需的变量。血糖水平定期测试每隔5分钟使用葡萄糖氧化酶法,葡萄糖脱氢酶方法,或手持设备,这样的速度注入葡萄糖可以相应改变。定期收集血液样本的counterregulatory激素水平的测量包括胰高血糖素、肾上腺素、去甲肾上腺素、皮质醇和生长激素在euglycaemic (normoglycaemic)和那些集。在所有euglycaemic和那些潜在的事件,那些症状是衡量要求受试者得分6神经性症状,即(1)的心怦怦狂跳,(2)颤抖/发抖,(3)紧张/焦急,(4)出汗,(5)饥饿,(6)刺痛,和六个neuroglycopenic症状,即(1)思考困难/困惑,(2)疲劳/嗜睡,(3)弱点,(4)感觉温暖,晕倒(5),(6)头晕(14- - - - - -27]。Counterregulatory和随后的低血糖症状反应测量18至24小时后前期低血糖的最后一集在大多数研究[14- - - - - -19,22- - - - - -27]。
4.2。糖尿病人
糖尿病受试者平均糖化血红蛋白水平%是在大多数的研究表明足够的血糖控制(15- - - - - -17]。此外,由于低血糖开始之前的实验可能会混淆counterregulatory期间和症状反应的研究中,这些事件的发生是通过(1)避免频繁监测血糖水平的(或自我监控)1天(14,16)或3天(15)研究开始之前(15,16)和(2)不包括低血糖的患者记录开始前两周的研究。应该注意,减少肾上腺素对复发性低血糖了长达72个小时,8天在非糖尿病的受试者在两个独立的研究(21,56];因此,避免低血糖1 - 3天以上研究中使用可能没有足够确保完整counterregulation在糖尿病患者的实验。最常用的剂量胰岛素的糖尿病患者,导致前期和随后的低血糖/分钟(见表1 - 2μ/公斤1)。前期那些事件的深度介于2.2和3.3之间更易与L和事件的持续时间是保持1.5到2个小时。前期报告的那些事件的数量不同实验室从1到414- - - - - -17]。在1型糖尿病患者的研究表明,一个或两个前期那些情节足以显著降低血浆肾上腺素反应和/或症状反应随后集(14- - - - - -17]。然而,另一个在2型糖尿病患者进行的研究报道,对复发性低血糖血浆肾上腺素反应显著降低只在非糖尿病的对照组但不是在胰岛素治疗的2型糖尿病患者(18]。分析血浆肾上腺素水平是由高效液相色谱法(HPLC)使用电化学检测(15)或放射免疫检定法(14,16- - - - - -18和报道值介于187和817 pg / mL前期低血糖和75年至545年期间pg / mL在随后的低血糖(见下表1具体研究的更多细节)。尽管肾上腺素对低血糖反应的大小不同研究之间的不同(可能是由于不同程度的低血糖了肾上腺素和不同的方法来衡量),大多数的研究报道约40 - 50%减少血浆肾上腺素对糖尿病患者反复低血糖反应人类(见表1)。神经性和neuroglycopenic低血糖的症状得分,据报道这些患者也明显减少了在随后的低血糖在大多数的研究中,测量了症状(14,15,18]。
总的来说,这些数据表明,HAAF现象在人类糖尿病大多被成功复制。调查的主要挑战HAAF现象在糖尿病患者中,然而,是不明的可能发生那些事件的开始研究之前,这是一个重要的限制。另一个挑战是,糖尿病患者的血糖阈值可能被重置到一个较低的血糖水平由于之前反复那些事件(57,58]。因此counterregulatory反应和低血糖的症状才会触发在血糖水平要低得多,这可能不是伦理上可实现的。因此,调查HAAF在非糖尿病的人类,没有深远的影响与糖尿病相关的并发症或身份不明的那些事件之前,可能是一个有价值的选择。研究调查了健康人的HAAF现象介绍如下。
4.3。非糖尿病的人类
后研究海勒和克莱尔19)在非糖尿病患者个人成功地展示了HAAF现象,研究人员试图重现这种现象在非糖尿病的受试者研究HAAF的机制。
非糖尿病的受试者的研究选择根据他们的总体幸福没有糖尿病家族史。胰岛素的剂量诱导前期和后续低血糖在健康个体在大多数的研究范围从1到2μ/公斤/分钟(见表1)。前期那些事件的数量在大多数研究2,通常产生40 - 50%减少血浆肾上腺素后后续低血糖(见表1)。然而,Moheet et al。21)报道,显著减少血浆肾上腺素和症状评分与3前期那些仅仅是可以实现的,而不是2。在前期低血糖事件的深度范围从2.2到3.3更易与L。戴维斯et al。59)测试不同深度的影响counterregulatory前期低血糖的反应在人类和报道,非糖尿病患者血糖水平降低到3.9更易与L在先行词集只有血浆肾上腺素和胰高血糖素后续低血糖反应显著降低而更易与血糖水平3.3 / L或降低在前期低血糖导致显著减少胰高血糖素,肾上腺素,去甲肾上腺素和生长激素对后续低血糖的反应。前期那些事件的持续时间3小时40分钟,在不同的研究之间的不同。戴维斯et al。60)短期(5分钟)的影响相比,间歇(30分钟),和长时间(90分钟)前期那些情节counterregulatory和应对后续的低血糖症状。他们报告说,血浆肾上腺素反应是类似无论前期低血糖但低血糖症状反应的持续时间只有减少当先行词集间歇或延长。因此前期低血糖的深度和持续时间必须仔细考虑实现显著减少血浆肾上腺素反应和症状评分。
血浆肾上腺素反应前期和后续低血糖与电化学检测或放射免疫法所能衡量的。血浆肾上腺素水平的报道不同群体差异很大(再一次,可能是由于低血糖的不同程度,不同的方法来衡量肾上腺素);然而,大多数研究报告显著减少血浆肾上腺素在300 - 950 pg / mL前期低血糖期间150 - 450 pg / mL后续低血糖(见表1)。
一些研究测量neuroglycopenic和神经性症状评分在前期和随后的那些事件。他们通常报道,在随后的低血糖症状明显减少,同时减少neuroglycopenic但不是神经性症状得分是由克里门等。24),没有明显症状评分下降发生在戈德堡的研究等。22]。这些变化可能出现不一致的症状和年龄之间的差异(49岁)的参与者Goldberg et al。22)的研究。
大多数的研究测试了counterregulatory和应对后续的低血糖症状前期低血糖的最后一集(18 - 24小时后15- - - - - -17,19,22]。Moheet et al。21)诱导的两集前期低血糖在第一天和第二天其中一集,实现了显著降低血浆肾上腺素和症状评分在第五天随后的低血糖反应。乔治et al。56)诱导的前期低血糖事件的一天1和对比了counterregulatory顺向低血糖症状反应在天3和8和报道,8天症状评分已经恢复正常而sympathoadrenal反应仍减少。counterregulatory因此,测量的时间和最后一集后应对后续的低血糖症状前期低血糖是至关重要的成功繁殖的HAAF现象对低血糖的反应可以在指定的时间段之后恢复正常。
综上所述,大多数的研究已经成功地再现了HAAF在健康个体两个前期那些事件持续了约90分钟(血糖水平降低并维持在3更易/ L)诱导在第一天第三天那些集2紧随其后。
5。在啮齿动物繁殖HAAF现象
啮齿动物被广泛用于调查HAAF的机制和研究相比有很多优势现象在人类身上。动物模型提供的机会来达到降低血糖水平促进counterregulatory反应研究在更低的血糖阈值是不可能在人类道德原因。也有可能调查组织水平的变化除了测量血糖和血浆激素水平。动物模型是唯一的选择,当入侵过程是必需的,例如,调查在中枢神经系统水平的变化。动物模型检查的功效也很有可能恢复血浆肾上腺素药物反应。一个挑战在使用动物模型研究HAAF现象是无法衡量那些症状反应,这种现象的一个重要组成部分。此外,一些荷尔蒙和组织对低血糖的反应可能不同在啮齿动物和人类药理方法可能不同。人类和老鼠,例如,在非糖尿病患者胰高糖素后续低血糖反应报道是显著降低(14- - - - - -17,19,20.,22- - - - - -25,27,47,48),而在非糖尿病的老鼠的研究还没有定论,一些研究报告显著减少胰高糖素后续低血糖反应(28- - - - - -31日)和其他报告无显著差异(32- - - - - -36]。
使用啮齿动物模型HAAF现象被挑战是许多因素可以影响其再现性包括胰岛素剂量,胰岛素路线管理、低血糖的深度和持续时间,前期那些事件的数量。大多数研究使用Sprague-Dawley老鼠和一些使用Wistar鼠(见表2)。大部分的文学作品,值得注意的是,研究小组使用了不同的方法在啮齿动物造型HAAF现象,结果发表在《文学非常变量。下面我们总结最近也发现和描述自己的经历在造型HAAF老鼠。
5.1。非糖尿病的老鼠
5.1.1。注射胰岛素的给药
有三种路线,在大鼠胰岛素管理:(1)皮下(南),(2)腹腔内(i.p),和(3)静脉(注射)。一些研究已经采取了。胰岛素管理c路线生产前期(37]或前期和后续的那些事件(28,29日,32]。然而,据报道,皮下注射胰岛素产生深度和长度可变的低血糖与我相比。p政府(33]。许多研究已经完成。胰岛素诱导p管理前期低血糖(30.,33,34,38,61年]。虽然最喜欢给药途径在很多研究中是我。v路线(35,36,39,40,42- - - - - -44)(见表2),一些研究人员使用我的组合。p和我。v或年代。c和我。与我的v。p和s。c注射用于诱导前期低血糖和我。v管理或连续的我。v注入用于生产后续的那些事件(30.,31日,33,34,37,41]。静脉输液的优势实现所需的低血糖水平相对较快,但它需要手术的动物装有静脉导管使研究人员能够执行重复的我。v管理,因此需要专业技能可能是一个挑战。我在我们的实验室中,我们采用了。p方法诱导胰岛素行政单(62年]或复发性低血糖(见图3),发现这条路成功地降低了血糖水平一直在我们的实验。
(一)
(b)
(c)
(d)
5.1.2中。胰岛素剂量
使用的胰岛素剂量诱导前期和随后的那些事件被广泛不同的所有研究,试图在啮齿动物(见表建立HAAF现象2)。
大量使用啮齿动物的研究已经成功地复制现象的管理1 - 10 U /公斤胰岛素诱导前期和后续低血糖(28,32- - - - - -37,40- - - - - -43,61年]或诱导前期低血糖,然后使用一个连续输注胰岛素的20 - 50亩/公斤/分钟的速度引起后续低血糖(30.,33,34,38,41,61年]。必须指出高血浆胰岛素水平,是这些研究的一些可能不是人类状况相关。同时,政府的高胰岛素浓度不一定繁殖现象更成功。例如,Figlewicz et al。44]和Paranjape Briski [29日)管理6.75 U /公斤,12 U /公斤胰岛素,分别诱导前期和后续低血糖都无法实现显著减少血浆肾上腺素对随后的那些事件。然而,这两项研究没有报道低血糖达到的水平与这些胰岛素浓度。Osundiji et al。36)管理的胰岛素剂量,逐步从10 U的起始剂量减少到6 - 8 U /公斤,1和4之间的天,可以说占重复胰岛素治疗敏感性增加。相比之下,埃文斯et al。43)使用更高剂量的胰岛素第二天产生后续的低血糖,大概是为了克服胰岛素抵抗引起的重复注射胰岛素(63年]。在我们的研究中我们发现,每日10 U /公斤胰岛素注射nonfasted老鼠连续3天4天产生一个温和的低血糖(3更易/ L)比1天(2更易/ L)(未发表的观察),这表明重复大剂量胰岛素注射可能导致大鼠胰岛素抵抗。因为其他因素如给药途径、禁食条件下,深度、持续时间、和先行词集的数量(如强调在这个手稿)也可以改变血浆肾上腺素对随后的低血糖反应,胰岛素用量必须小心翼翼地建立与这些其他因素来实现成功的现象。
5.1.3。禁食条件下
如胰岛素剂量的情况下,不同的研究小组使用了不同的协议前禁食动物治疗。一些研究没有禁食动物(28,29日,36,37,39- - - - - -44),而其他人则通宵禁食动物只有前感应的后续低血糖(30.,34,35,38]。班等。32)禁食动物只有前一小时注射诱导前期那些集。在我们的实验室,我们通宵禁食大鼠只在最后的那些事件。
5.1.4。血液采样方法
血糖水平通常是测量从尾部或从体循环血管导管的使用。从尾静脉血糖水平测量有时会误导对低血糖的深度随着尾静脉血糖通常低于体循环。在我们的实验中我们注意到这个差异尾静脉和心脏血糖。心脏血糖水平一直高于尾静脉血糖水平在我们所有的老鼠(8更易与L和6更易与L,职责)。因此低血糖的深度如果从尾静脉应该使用与观察动物的福利,例如,如果动物敏感,能够移动,和控制时解除。分析的方法研究之间的血糖水平也是变量。大多数研究使用葡萄糖氧化酶方法而使用的一些研究手持设备来测量血糖水平(见表2)。
大多数研究收集血液样本的激素分析导管定期(30.,33- - - - - -35,37- - - - - -44,61年]。在我们的实验室中,肾上腺素分析血液样本收集通过的60分钟的时候心脏穿刺注射在前期和随后的低血糖在不同的动物。使用在大鼠心脏血液荷尔蒙的优势分析,可以获得大量的等离子体(4 - 5毫升)没有诱导血容量减少的压力;因此许多分析可以执行相同的血液样本。
是5.1.5。低血糖的深度和持续时间
低血糖的深度在一些研究介于2和3.2之间更易/ L (30.,32- - - - - -34,36,38,40,44]在前期那些事件而在其他研究已经降低血糖水平低于2更易/ L [28,35,37,39,42,43,61年)这可能不是人类状况相关。在随后的那些情节有些研究夹平均血糖水平在2.5更易/ L,以避免过度的低血糖。这种夹紧是通过定期监测尾静脉或系统性血糖与相应数量的葡萄糖输注。前期那些发作持续时间也高度研究小组之间的变量,从1小时到3小时。Figlewicz et al。44)没有报道的深度低血糖在前期低血糖和保持前期那些事件的持续时间只有一个小时和Paranjape Briski [29日)没有测量血糖水平在前期那些事件和事件的持续时间不是报道。可能是这些原因没有实现显著减少血浆肾上腺素水平,以应对后续低血糖中观察到这两个研究的重要性,从而意味着前期那些事件的深度和持续时间。在我们的实验室中,食物被注入的120分钟的时间在前期那些事件和血糖水平测量每隔30分钟在这段时间,直到120分钟时间点。这个协议降低了血糖水平低于3更易产生显著减少血浆肾上腺素L和随后的低血糖反应一个先行词后低血糖事件每天两天(见图3)。
5.1.6。前期低血糖发作
在人类,它已被证明,即使是一个集低血糖会明显降低counterregulatory对随后的低血糖的反应。然而,在老鼠,一至五前期那些情节已经实现显著减少血浆肾上腺素诱导响应后续低血糖。弗拉纳根et al。33]表明血浆肾上腺素反应降低后续低血糖后48小时一个前期低血糖。一些研究人员已经表明减少急性低血糖反应2集后前期低血糖的前一天(28,42- - - - - -44]而有些诱导1集前期低血糖每天2 - 4天(32- - - - - -35,37,39- - - - - -41,61年)测试前应对后续低血糖(见表2)。Kudrick et al。38)测试1和2前期那些一天发作,报道称,对后续低血糖血浆肾上腺素反应显著降低只在老鼠,每天有两个那些潜在的事件,这是许多上述矛盾的研究,已成功取得了显著降低血浆肾上腺素反应的前期低血糖事件1,2或3天。在我们的实验室中,我们测试了先前的那些潜在的影响一个或两个事件集每天连续两天的肾上腺素分泌,以应对后续低血糖3天(图3)。我们所有的实验中动物经SA病理动物伦理委员会(澳大利亚)。成年男性Sprague-Dawley老鼠为前2周的实验处理,随后被注射10 U /公斤胰岛素(Ins)或生理盐水(Sal)我。p为三天每天一次(Ins Ins Ins;萨尔Sal Sal)或连续两天一天两次,一次在第三天(Ins2Ins2Ins;萨尔2萨尔2Sal)。两组动物收到盐水一次或两次在头两天和胰岛素一旦第三天代表单一低血糖组(Sal Sal Ins;萨尔2萨尔2Ins)。动物是通宵禁食之前最后注入和去年注射安乐死60分钟的时间。血液采样对葡萄糖进行使用手持glucometer和血浆肾上腺素的测量进行了使用ELISA测定如我们之前所述62年]。单向方差分析之后,为多个比较图基的测试是用来评估治疗的影响群体之间使用棱镜V6.05 (GraphPad软件,Inc .)、美国)。
在我们的实验中,我们没有观察到任何显著差异在血浆肾上腺素对随后的低血糖反应,每天两集之间的协议(图3)与协议导致约50%的减少血浆肾上腺素对随后的低血糖反应相比各自的急性低血糖组(Sal Sal Ins和萨尔2萨尔2Ins、职责)达到类似水平的低血糖。
因此似乎一集前期低血糖每天1 - 3天或1或2天每天2集可以导致血浆肾上腺素显著减少后续低血糖反应非糖尿病的老鼠。
5.1.7。血浆肾上腺素反应
显著减少血浆肾上腺素后续低血糖反应相比,单一的低血糖事件标志着成功繁殖HAAF现象。分析血浆肾上腺素通常是由使用高效液相色谱电化学检测(32- - - - - -35,37,39- - - - - -41],ELISA [30.,36,38),或radioenzymatic试验28,42- - - - - -44,61年]。尽管大多数研究报道显著减少血浆肾上腺素反应随后的低血糖,血浆肾上腺素水平之间是高度可变的研究报道。例如,Al-Noori et al。42)报道,一个低血糖发作后血浆肾上腺素水平4080 pg / mL,减少后续事件后2358 pg / mL;然而,Osundiji et al。36)报告450 pg / mL血浆肾上腺素针对单一的低血糖发作后减少到大约175 pg / mL 4集的低血糖。然而,大多数的研究已经成功地取得了显著减少血浆肾上腺素后续低血糖反应,尽管使用不同协议和不同的胰岛素剂量,禁食条件下,前期的那些情节,先前的那些事件和深度和持续时间。
从我们的观察,胰岛素腹腔内持续产生显著减少血糖水平低于3更易/ L 30分钟内保持在低水平,直到120分钟nonfasted动物在前期那些集。也是这样那些每天一集两天显著降低血浆肾上腺素反应60分钟的时间注射在随后低血糖3天(图3)。
5.2。糖尿病大鼠
很少有研究小组试图重现HAAF现象在体外糖尿病大鼠(见表2)。McNay和舍温45)管理6 - 10 U /公斤胰岛素。p为3天每天一次,降低了血糖水平2.8更易与L。这个协议产生了显著减少血浆肾上腺素反应在第四天随后的低血糖。然而,没有差别在血浆肾上腺素后续低血糖反应的另一项研究中2 U /公斤胰岛素皮下注射诱导2集前期低血糖3天,每天一集在4天降低了血糖水平2.2更易/ L (46]。这可能是由于counterregulatory反应产生的变化相比,由于糖尿病并发症的非糖尿病的老鼠。面临的挑战在糖尿病大鼠繁殖这种现象似乎更高剂量的胰岛素需要克服胰岛素抵抗和改变counterregulatory响应由于糖尿病本身。另一个挑战可能需要更多动物的标准可以分为糖尿病不满足所有的链脲霉素治疗后大鼠和诱导糖尿病的过程本身可以挑战和更多的要求。然而,随着HAAF现象是糖尿病患者的主要问题,是很重要的,研究人员继续研究这一现象在糖尿病和非糖尿病的动物更好地理解其机制和糖尿病的影响。
5.3。非糖尿病的老鼠
繁殖HAAF现象在非糖尿病的老鼠已经尝试只有两个研究小组(见表2)。在雅各布森的研究等。47),前期与持续输注胰岛素低血糖20亩/公斤/分钟未能显著降低血浆肾上腺素在随后的情节。此外,我。p管理2.5 U /公斤胰岛素降低血糖水平2.2更易/ L一天一次3天实际上增加了对后续低血糖血浆肾上腺素反应,而不是减少(48]。因此,HAAF现象尚未成功复制非糖尿病的老鼠。
6。结论和未来的发展方向
总的来说,人类和动物模型HAAF极其有价值的探索现象的可能机制,尽管它们的局限性。然而,需要注意考虑物种用于模型的现象,给药途径,胰岛素用量,禁食条件下,深度、时间和数量的前期那些事件,确保成功繁殖的现象。未来研究重点考虑造型HAAF现象如下:(1)避免低血糖的糖尿病患者和动物实验之前,重要的是要确保counterregulatory和症状性低血糖的反应是完整的;(2)人类研究糖尿病患者应该报告中选择/排除标准被用于招募参与者证明他们的血浆肾上腺素和低血糖症状没有改变之前的实验;(3)动物研究应该避免使用胰岛素浓度过高导致严重的低血糖,这样的条件不代表人类现象;(4)大多数动物研究已在非糖尿病患者开展了动物;糖尿病动物需要更多的研究来建立如果HAAF现象在啮齿动物糖尿病患者也可以复制类似于人类;(5)需要进一步的研究来探讨肾上腺素释放减少和受损症状的持续时间在随后的低血糖反应前期低血糖后在非糖尿病患者和糖尿病患者和动物;这一信息将是成功的关键造型HAAF现象的未来。
相互竞争的利益
作者宣称没有利益冲突有关的出版这篇文章。
确认
作者感谢澳大利亚糖尿病研究信任和南澳大利亚大学(澳大利亚)支持这项工作。他们愿意承认米凯拉伊莉斯约翰逊校对这手稿和提供有价值的建议,里德动物设施人员的帮助照顾动物试验过程中。Manjula Senthilkumaran是接收方南澳大利亚大学的研究生奖。