文摘

目标。提供一个新的视角自身抗体的关键球员1型糖尿病的发病机制(近年来)最近出现了。我们的关键目标是检查是否增加自身抗体的水平β细胞自身抗原谷氨酸脱羧酶(同种型65)(先后)和胰岛瘤相关antigen-2A (IA-2A)反映了近年来发病率3.4%的年度增长。方法。从丹麦儿童糖尿病注册,我们随机选择500例患者和500兄弟姐妹先后和IA-2A分析(1997年到2005年)。血液样本在发病后的三个月内拍摄。一个健壮的对数正态分布使用回归模型。九百名儿童和青少年有完整的记录,包括在分析中。Cochran-Armitage测试是用来评估患病率的变化趋势的自体抗体积极性。结果。没有显著变化的先后和IA-2A被发现在我们的九年制研究期间。没有趋势自身抗体的积极性病人或兄弟姐妹们被发现。先后创作水平和IA-2A风险明显与HLA和先后与年龄。结论。积极的患病率,先后创作的水平和IA-2A没有改变在1997年和2005年之间在近年来新诊断的患者和他们的兄弟姐妹没有内转。

1。介绍

1型糖尿病(近年来)是一个瀑特异性自身免疫性疾病,慢性本质和严重的长期并发症(1]。近年来有很强的遗传因素的累积发病率近年来在同卵双生估计为65%,但随着延迟发病达到几十年这表明一个重要的角色的环境诱因和/或加速器在发病机理2- - - - - -4]。令人担忧的是,许多国家,包括丹麦,在过去的几十年里经历了发病率的增加(5,6]。特别是5岁前发病的增加已经指向一个更激进的自体免疫反应,例如,造成有害的早期环境暴露的增加(7,8]。

的破坏β胰岛中肽主要由t细胞引起的,但是新兴知识也预示着一个关键角色的b细胞和自身抗体(9,10]。更具体地说,自身抗体形成autoantigen-autoantibody情结;的恒定区autoantibodies-in这些complexes-then绑定到一个特定的受体(γ受体(货代可结晶的片段γ))上发现的抗原呈递细胞(apc),导致进一步的自身抗原呈现装甲运兵车,因此刺激自体免疫反应(10]。此外,一种更积极的胰岛炎(高CD20 + b细胞轮廓)已被确定在人类患者的胰腺解剖样本最近研究近年来在7岁之前(11]。另外,单克隆抗体anti-CD20(利妥昔单抗)针对b细胞已被证明部分停止β细胞的破坏在新诊断患者近年来(12]。这是否影响利妥昔单抗的原因是相声障碍与T - b细胞或/和改变的自身抗体水平还有待证明13]。因此,自身抗体针对特定的自身抗原在胰腺中不仅可以作为近年来发展的可靠预测,但也可能是活跃玩家在近年来的发病机理。此外,已发现的自身抗体水平反映近年来患者自身免疫反应的强度和并发自身免疫性疾病(14]。然而,这一领域的研究目前仍处于摇篮。

我们的关键目标是检查是否水平的提高autoantibodies-as代理一个更激进的自身免疫系统的反应β细胞自身抗原谷氨酸脱羧酶(同种型65)(先后)和胰岛瘤相关antigen-2A (IA-2A)反映了3.4%的年度增长的发病率近年来我们九年制研究期间。此外,我们想要评估自身抗体的时间趋势积极性是否存在于新诊断的患者没有内转至近年来和他们的兄弟姐妹。最后,我们想阐明/复制是否一套先天的协变量定义,身份,性别,季节,和HLA的风险,影响先后和IA-2A的水平。

2。材料和方法

2.1。设计和样本人口

本研究的数据是来自以人群为基础的内转至登记的孩子。开始在1996年,丹麦儿童糖尿病注册(DanDiabKids)包含的信息比0-18岁5000名新诊断的患者,都有一个关联的生物组成的血液样本大约75%的儿童和他们的一级亲属,其中下面的兄弟姐妹~ 3000 20岁。样品是随机选择500例血液样本被发病后不到三个月。发病日期被定义为第一个日期胰岛素注射,之后和近年来持续时间是几个月来衡量的。500兄弟姐妹有类似的样本年龄和样本分布被选中。来自同一家庭的血液标本在一个月内90%的家庭。十八岁患者和21岁的兄弟姐妹被排除在外由于材料不足的研究。病人和兄弟姐妹选择不一定是来自同一个家庭,但是所有的兄弟姐妹中有一个兄弟被诊断为近年来在18岁之前(15]。

四百八十二名患者被纳入研究其中有255(52.9%)是男性;478年的兄弟姐妹,266(55.6%)是男性。18岁的482名患者移民,13个未报告的种族,剩下的是丹麦的起源。兄弟姐妹的民族是没有报告,但是因为只有兄弟姐妹的父亲和母亲一样的病人,民族的分布是相同的兄弟姐妹群。样本包括203名完成与至少一个病人,一个nonpatient血亲关系,总共包括434名儿童。血亲关系被用来分析病人和兄弟姐妹之间的区别。

血清样本已经存储在80°C /−−112°F抽样后和之前使用。

这项研究是丹麦伦理委员会批准的h - ka - 20070009。随后的过程都是按照道德标准的负责任的人体试验委员会(机构和国家)和1975年的赫尔辛基宣言,就像2008年的修订。

知情同意是获得所有的病人或他们的父母或监护人被包括在研究。

2.2。先后和IA-2A分析

先后和IA-2A测量标准的放射性配体结合试验(16]。抗体抗原是分开自由标记抗原蛋白琼脂糖®和游离抗原被广泛的洗涤。97.5%的截止限制先后和IA-2A积极性31 5 U / mL,分别。先后和IA-2A化验显示意味着interassay变异系数(CV)的14%和intra-assays CV 8%。滴定法的价值高于500 U /毫升先后与250 U /毫升IA-2A没有执行。

2.3。HLA-DQB1基因分型

时间分辨荧光测定术用于HLA-DQB1等位基因的识别。该方法详细描述了在其他地方(17]。

2.4。统计分析

IA-2A相对变化(RC),先后被强劲的对数正态分布的回归建模考虑测量是左派和右派的审查,在兄弟姐妹对占相关。先后测量左审查在1 U /毫升(检测下限),审查500 U /毫升(检测上限)。IA-2A测量左审查1 U /毫升和右审查在250 U /毫升。在兄弟姐妹对占相关,一个推理是基于一个工作独立广义估计方程(GEE)方法。为结果,以下风险因素都包含在回归:状态(病人或兄弟姐妹),性别、年龄在抽样(< 5、5 - 10和10 +(年)),季节(春季(3月至5月),夏季(6月至8月),秋季(9月到11月),和冬季(12月到2月)),年的抽样(1997年到1999年,2000年到2002年,和2003年到2005年),和HLA-DQB1基因型(低风险、中度风险和高风险)(基因型分类表中指定1)。估计RCs的意思都伴随着瓦尔德95%置信区间(95% CIs)。95%的CIs计算对数尺度和随后back-transformed。 值对应于瓦尔德测试和执行在对数尺度。Cochran-Armitage测试趋势(皮尔逊卡方测试的修改版)被用来评估抗体积极性患病率的变化(先后、IA-2A或两者都有),病人和兄弟姐妹,在这三个定义3年时间。此外,后者在HLA测试也用于评估更改风险分组、病人和兄弟姐妹。

表1
描述性研究的人口特征。

进一步,我们进行了两种类型的灵敏度分析,因为我们想知道这是否改变了时间先后和IA-2A水平的影响在上述调整健壮的对数正态分布的回归模型。首先,我们在HLA-DQB1分层 02年然后HLA-DQB1 302年。此外,我们也想检查是否时间先后和IA-2A水平的影响是独立于其他自身抗体的积极性,所以二进制先后IA-2A“积极性变量”构造,包括在模型中。第二,我们分层个人是否高于或低于平均年龄。

所有 值评估在5%的显著性水平。由于本研究的解释自然,没有执行多个测试校正。

分析了在R版本3.2.0 (https://www.r-project.org/)使用函数survreg生存包(18]。

3所示。结果

完整的测量先后和IA-2A可供960名儿童。先后创作的完整记录,IA-2A, HLA-DQB1基因型可供900人。

的960名儿童,71.4%的患者和5.7%的兄弟姐妹先后积极(> 31 U /毫升),和66.8%的患者和2.1%的兄弟姐妹是IA-2A积极(> 5 U /毫升)。总的来说,87.6%的患者和6.1%的兄弟姐妹被至少一个自身抗体阳性。此外,50.6%的患者和1.7%的兄弟姐妹是自身抗体阳性。900名儿童的完整记录,autoantibody-status上面描述的结果几乎相同。

3.1。病人和兄弟姐妹

重要的更高层次的先后和IA-2A观察患者相比,兄弟姐妹:先后(RC (95% CI) = 17.71 (14.18;22.12), )和IA-2A (RC = 2.2(95%置信区间) 08(8.2 06;5.8 09), )。

3.2。期

我们没有观察统计显著差异在先后或IA-2A水平调整模型(表中的三个时期2和图1)。

表2
估计自身抗体水平相对差异根据调整后的协变量模型。

图1
组合框和散点图里,先后和IA-2A水平段和分层的病人状况。原理框图仅用于病人地层,由于没有视觉图形获得用于兄弟姐妹层时,由于低水平的两个自身抗体。

我们也进行测试使用抗体状态和周期趋势,分层情况下状态,这些测试是统计学意义(数据未显示)(抗体状态的时期出现在桌子上1)。

3.3。年龄和性别

先后创作水平明显高于老年组相比,最小的组:5 - 10年(RC (95% CI) = 1.62 (1.01;2.59), RC(95%)和10 +年(CI) = 1.92 (1.22;3.02), )。没有发现协会IA-2A水平(表2)。我们发现男孩和女孩之间没有差异水平。

3.4。HLA的风险

低风险导致显著降低先后(RC (95% CI) = 0.72 (0.58;0.90), )。IA-2A显示类似的模式为低风险(RC = 0.030 (0.004;0.21), )和温和的风险(RC = 0.014 (0.001;0.15), )(表2)。

我们还执行测试趋势利用HLA风险分组和时期,分层情况下状态,这些测试是统计学意义(数据未显示)(HLA高危人群见表1)。

3.5。敏感性分析

两个独立的分析局限于个人携带(1)HLA-DQB1 02年,(2)HLA-DQB1 302等位基因并没有显示任何统计显著差异在先后或IA-2A水平调整模型中的三个时期(数据没有显示)。此外,作为分层所有个人到高于或低于没有导致任何年龄中位数统计显著差异先后或IA-2A水平在三个时期(数据没有显示)。

剩下的没有发现反是与先后和/或IA-2A水平(表2)。

4所示。讨论

首先,我们的结果显示没有变化的迹象在1997 - 2005年间先后创作水平和IA-2A新诊断的患者没有内转至近年来和他们的兄弟姐妹。此外,我们没有观察到任何统计自身抗体的重要趋势积极或HLA风险分组学习期间。其次,我们发现水平的先后和IA-2A与HLA相关风险;因此,新诊断的患者较低的HLA风险有较弱的体液免疫反应反对他们的剩余β肽。

我们的研究在一定程度上是符合长et al。这项研究的结果没有发现的证据增加先后发病率越来越高的积极性,同意在英国近年来(1985 - 2002),但研究发现IA-2A积极性[时间增加19]。IA-2A发现我们的研究之间的差异可能有两种解释:(1)种族(因此,差异基因组成,也就是说,non-HLA风险位点,与IA-2A积极性),(2)不同的统计方法。长等人的研究期间较长,18年,使更高的检测小时间变化的可能性。长等人所使用的分析方法虽然不使用上面的实际自身抗体值检测信息只有无论是积极的还是消极的。因此,更少的信息可以提取与分析方法(20.- - - - - -22]。在体外研究证明,高水平的先后可以提高autoreactive t细胞反应,从而启动和/或燃料自身免疫反应(23]。我们不能排除的观念,这也是如此在活的有机体内观察,但没有时间先后创作水平变化在目前或之前提到的研究(19]。有趣的是,新兴的证据表明,anti-idiotypic抗体(anti-Id)可以中和自身抗体和表达下调他们的生产。Anti-Id绑定到变量地区自身抗体(个体基因型),在此形成免疫复合物,没有检测到标准等(24,25]。我们没有检查anti-Id的水平,但由于我们没有发现改变水平先后或IA-2A似乎两个场景可能;即anti-Id水平并没有改变我们的研究期间或水平的提高anti-Id面具的先后和IA-2A水平增加。然而,必须提到的存在和/或作用anti-Id仍争论[26]。

介绍近年来显示一个双峰模式与峰值附近的5 - 7年的年龄和青春期(1]。我们发现先后创作水平和年龄之间的正相关,这可能表明,先后在近年来的发病机制中扮演更重要的角色在青少年和因此可能反映了不同的疾病机制。但这个结果也可能是一个更大的结果β细胞质量,因此强刺激的自体免疫反应,但有趣的是我们没有找到IA-2A的年龄效应。

我们还发现高危HLA-DQB1等位基因与增加的先后和IA-2A水平调整模型。似乎合理的更改绑定的处理上的相似之处β细胞的自身抗原hla dq molecule-due差异基因make-up-result自身抗体的定性和定量差异生产,以前还发现了(20.,21,27,28]。

简而言之,我们的研究从多个优势。我们的研究是相对较大的,它是基于人群和患者充分验证。我们的结果是有限的,只有先后和IA-2A测量一次它当然会更好如果多个测量存在在前驱糖尿病的阶段。此外,锌转运蛋白自身抗体(ZnT8A)和胰岛素自身抗体(IAA)没有测量,因此我们无法评估是否积极> 2自身抗体显示时间变化,但我们测量两个最常见的自身抗体在近年来28]。

总之,积极的患病率,先后创作的水平和IA-2A没有改变在1997年和2005年之间在近年来新诊断的患者和他们的兄弟姐妹没有内转。此外,我们发现没有迹象表明在同期HLA-DQB1基因型遗传漂变。我们的数据表明,近年来先后可能更重要的病机岁以上的5年。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突。

确认

DanDiabKids一直资助从丹麦医学研究委员会(271-07-0657)和丹麦糖尿病协会。这项研究是由Aase和Ejnar Danielsens基金会,哥本哈根市和丹麦糖尿病协会。作者大大承认Rikke女仆为她娴熟的实验室协助,Ake Lernmark和分析水平的自身抗体,安妮塔·尼尔森和斯蒂芬妮eis的她的想法在最初阶段。本研究进行了代表丹麦儿童糖尿病寄存器。