丙型肝炎抗体水平在甲型肝炎血清阳性血液透析患者牙龈沟槽中的相关性

抽象的

在评估可能的血液速率的病毒传播路线时，在血液中寻找丙型肝炎病毒（HCV）在血液中的体液中是重要的。然而，口腔流体在HCV变速器中的作用仍存在争议。我们的目的是比较唾液中HCV抗体（HCV AB）水平的患病率，以及HCV血清阳性血液透析患者的牙龈沟槽（GCF）。从39例患者中收集血清，唾液和GCF样品。使用Ortho HCV 3.0保存酶联免疫吸附测定（ELISA）分析样品的HCV AB。统计上比较所有HCV-血清阳性患者的唾液和GCF中的HCH AB水平。这里报道的研究结果是旨在确定血清中HCV-RNA积极性与GCF和唾液中抗体之间的相关性的结果。39例患者的百分之百（100％）在其血清中对HCV有抗体，15.4％在GCF中具有HCV的抗体，并发现唾液。GCF和唾液中的HCV AB血清阳性显着相关（Kappa = 0.462;）.本研究支持GCF可能是唾液中HCV的重要来源的概念。

1.介绍

丙型肝炎病毒(HCV)感染与透析患者生存预后不良相关[1］．通过血清学测量和/或RT-PCR筛选的各个国家的血液透析患者的报告显示出12-29％的患病率[2］．诊断HCV感染是基于检测血清或血浆中的HCV特异性抗体(HCV Abs)。然而，在过去的十年中，一些作者描述了替代样本的适用性，如唾液和龈沟液(GCF)。在唾液的各种研究中HCV RNA的检出率从0%到100%不等[3.-9.］．唾液中HCV的出现机制尚不清楚。虽然HCV被认为基本上是肝细胞，但有些研究表明，病毒复制也发生在外周血单核细胞（BMC）和亚颌骨腺中[10.-12.］．然而，唾液中的HCV的可能源极可能包括血清渗出物，即GCF和含HCV的单核细胞的迁移来自令人毛骨悚然的界面的牙周炎进入唾液池。有限的研究在GCF中具有定性鉴定的HCV;HCV RNA以HCV患者的59％和85％的GCF标本检测到[13.那14.］．由于HCV透射效率可能与其病毒载荷有关，因此重要的是要定量地鉴定体液内的病毒RNA水平，以便适当地评估可能的HCV感染途径。然而，在一般人群中，牙周病是常见的，可能影响GCF中单核细胞排泄的增加[15.］．

已经开发了几种口腔流体收集方法;唾液测试的特异性与血清方法相似或更好的特异性[16.］．目前，HCV的常规诊断基于ELISA检测血清中的抗体（HCV ABS）[17.］．唾液易于获得，特别是在室外设置和儿童。因此，使用唾液样品检测感染可能具有重要的临床，经济和流行病学重要性[16.］．然而，由于任何装置收集的口腔流体样品中Ig G的浓度仍然低于血清中的浓度，因此已被修饰最初为血清或血浆开发的血清学试验以增强它们的敏感性。这些修饰包括增加样品体积，降低样品稀释，增加样品和缀合物孵育时间，并优化截止。在以前的研究中[18.那19.]，对HCV抗体检测的敏感性和特异性分别为94.4-99.1%和98.2-99.1%，这取决于收集的口服液和使用的HCV抗体筛查试验。

虽然血清病毒载量与唾液或GCF中的HCV水平之间没有统计学上的显著相关性，但血清HCV载量低的患者唾液中检测到HCV的可能性较小。这些发现对医务人员具有重要意义，并表明旨在了解口服途径传播HCV的意义的流行病学研究是有必要的[14.］．

在血液透析患者的唾液中已经发现HCV的存在[20.那21.］．因此，应考虑污染的风险。因此，唾液中的HCV RNA的潜在来源包括GCF，其在牙周炎的设定中可能含有HCV感染的BMC [13.那14.］．此外，已经表明，在透析患者中​​频繁出现泪腺和唾液分泌的动脉[22.］．据我们所知，目前尚无研究表明血液透析患者GCF中存在HCVAb。

因此，我们在口服液样本中使用ELISA测定检查了HCV血清阳性血液透析患者的唾液中对HCV的抗体和GCF的患病率作为血清可能的替代方法[16.那23.］．

2.材料和方法

39名透析患者(22名男性和17名女性)参与了这项研究。所有病人都住进了医学院和牙科学校的诊所。在土耳其Ondokuz Mayis大学血液透析中心进行血液透析的所有患者的血液样本，每月采集一次用于检测抗- hcv抗体，另外每年采集两次用于检测HCV-RNA的存在。使用Ortho HCV 3.0 SAVe ELISA (Ortho- clinical Diagnostics, Inc.)分析抗HCV抗体(HCV抗体)。美国力登,NJ)。一种用于血清检测的商品化检测方法最近已被用于口服液检测，其灵敏度和特异性分别为91.7%和99.2% [23.］．对血清HCV- rna和HCV- Ab阳性的患者进行GCF和唾液中HCV抗体(HCV Ab)检测。在捐献样本前，所有患者均提供知情同意，方案经机构审查委员会批准。排除有酒精中毒史、肝毒性药物暴露史、乙肝表面抗原、抗核抗体、HIV-1和HIV-2抗体存在的患者，血清HCV- rna阳性但HCV抗体不存在的患者。在研究期间，没有患者接受任何特定的抗病毒治疗。所有患者肝功能均在正常范围内。建议患者在手术前2小时内不要进食或保持口腔卫生。

２.１.收集GCF和唾液

从血液透析前参加肾病单位的每位患者获得血液和唾液样品。每个参与者在不同的日子里捐赠了两三个血液和唾液样本。收集血液样品在无菌管中收集，并且通过要求参与者吐到无菌塑料杯中获得唾液样品。通过首先用无菌棉干燥牙龈表面来收集GCF样本，之后分离出该区域以防止唾液污染。然后将纸条（2乘5毫米）近次插入30秒以收集样品。检查唾液和GCF样品对红细胞的存在，通过表达阳性反应1：100000的阳性反应。[24.]并立即加工。在可见的血液污染的情况下，将样品被拒绝，另一个位点取自另一个位点。30秒后，将具有吸收的流体的纸点置于含有500ml磷酸盐缓冲盐水（PBS）的塑料小瓶中，在0.05％吐温20中，在室温下立即放在摇杆1小时，以洗脱牙龈液。没有一个样品含有血液。血液，唾液和GCF样品立即以3000rpm离心15分钟C.同时收集所有样品并储存在 -C使用前。

２.２.实验室方法

所有血清、GCF和唾液样本使用Ortho HCV 3.0 SAVe ELISA检测抗-HCV抗体。光密度值在0.020和0.060之间的唾液和GCF样品被认为是不确定的(灰色区)，在最终解释前重新测试。等于或大于0.035的最终值被认为是正的，低于0.035的值被认为是负的。根据制造商的说明，使用Cobas Amlicor HCV 2.0试剂盒(罗氏诊断系统，巴塞尔，瑞士)检测血清HCV- rna，以评估活跃的病毒复制。本方法的检测下限为50 IU/mL。

2.3。统计分析

描述性统计采用卡方检验及其修正，配对比例采用McNemar卡方检验。采用SPSS 11.0软件进行统计分析，价值被认为具有统计学意义。

3.结果

所有患者都在研究其血清中的HCV-RNA和HCV-AB阳性。在74.4％的HCV血清阳性受试者中，研究HCV-AB被发现在GCF中为阴性，灰色区域中的10.3％的受试者，其余的15.4％表现出GCF。在唾液中，79.5％具有阴性，7.7％有灰色区域，12.8％有阳性结果。在GCF和唾液中，发现66.7％的受试者被认为是消极的。在5.1％的受试者中，发现HCV-AB是阳性的。10.3％的受试者表现出GCF的阳性导致占7.7％的受试者的唾液产生阳性。总共5.1％的患者均具有HCV-AB阳性GCF和唾液，而66.7％的液体均为HCV-AB阴性（表1）.GCF与唾液HCV水平的相关系数(kappa)为0.462;（）.MC NEMAR的Chi方形测试显示唾液和GCF之间的HCV免疫阳性没有统计学意义（）.

4。讨论

虽然没有完全澄清，存在相当数量的证据表明HCV在血液透析单元内的鼻孔传播。最近通过分子技术记录了透析单元中HCV感染的鼻腔传播[25.］．通过肠胃外暴露的HCV传递已经充分记录。然而，在30-40％的HCV阳性患者中没有肠外暴露的历史[26.］．虽然有几项研究已经研究了唾液中HCV的存在，但报告的水平从0到100％变化3.-9.那13.那14.那27.-33］．HCV- rna的检测表明唾液中存在HCV颗粒，从而确定唾液作为潜在的感染载体，确认HCV非肠外传播途径的可能性。确实，在黑猩猩模型和人类中已经报道过通过咬人传播HCV的可能性[31-33］．与某些研究相反，HCV-RNA是从整个唾液中提取的[6.那34］．一些细胞中HCV-RNA的存在已经被描述过，尽管这些细胞中HCV-RNA的存在与血清中HCV-RNA的存在并不相关[11.］．

口服液在HCV传播中的作用仍有争议。虽然几个研究小组已经报道唾液中存在HCV- rna，但只有有限的研究试图识别唾液中的HCV- rna，其中使用分支DNA检测检测了同时感染HCV和HIV的患者[35］．很少有研究已经研究了GCF中的人类病毒的发生[13.那14.那36那37］．最近，GCF和Saliva的分析对于HCV-RNA的浓度显示出较高的检测率和GCF与唾液中的更高水平的RNA [13.那14.］．这些数据支持GCF可能是唾液中肝炎病毒的一个重要来源的概念。

在这里，我们观察到HCV抗体在GCF中比HCV血清阳性血液透析患者的唾液中更常见(表)1）.我们的发现符合Matičič等人的研究结果。[13.和Suzuki等[14.］．此外，我们发现，尽管GCF中的HCV抗体水平略高于唾液中的HCV抗体水平(2%)，但差异无统计学意义(）.正如作者所提到的[13.那14.，这一结果可能部分是由于唾液中存在PCR抑制剂。在Maticic等人的研究中[13.和Suzuki等[14.]在GCF和唾液中具有定性确定的HCV，检测HCV-RNA分别为59.35％和85.31％。他们的结果高于我们。这些差异可能是由于收集来自GCF和唾液的标本。我们试图通过使用原浆方法排除少量出血的可能效果作为HCV AB的来源[24.]但铃木等人。不能排除少量出血的可能效果作为HCV-RNA的来源[24.］．此外，这种发现上的差异可能源于测量中体积与浓度的使用。

血清通过牙龈边缘与牙齿表面的连接处不断进入口腔[15.］．HCV已在慢性HCV感染患者的血液单核细胞(BMC)中广泛检测到，血清和BMC中准种鉴定的差异表明，病毒复制发生在BMC中[10.-12.那38］．HCV感染的BMC可使HCV浸润GCF和唾液。一般情况下，牙周炎症会增加富含bmc的GCF的排泄。然而，在唾液、口腔健康和病毒载量之间没有发现相关性[27.那36］．因此，在口腔扁平苔藓抗-HCV阳性患者的粘膜组织和唾液腺中已发现HCV [8.］．

因此，上面讨论的几种可能的源代表涉及HCV渗透到唾液和GCF中。然而，流行病学研究表明，唾液中HCV病毒颗粒的感染能力低，但尚未确定其感染潜力。此外，尚未在口腔上皮细胞上定义HCV特异性受体，也没有确定主机防御力学的作用。新的实验动物模型和最近描述的传染性HCV假寡颗粒，能够在体外模拟HCV复制，可用于在HCV感染传播中建立唾液的任何作用[39］．然而，需要进行进一步的调查，以了解唾液中HCV-RNA的来源，以及它是否代表传播风险的增加。

结论

很明显，患慢性肾脏疾病的病人日后在牙科病人人口中所占的比例将会增加[40］．我们的研究表明，HCV抗体存在于血液透析患者的唾液和GCF中。因此，从业人员在治疗血液透析患者时需要注意必要的预防措施。

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