线粒体的形态合胞体用串行Block-Face SEM环节动物雌性细胞囊肿

文摘

线粒体改变其形态和分布取决于细胞的代谢和功能状态。在这里,我们分析了线粒体在雌性细胞囊肿和选择结构的代表clitellate环节动物——白色的虫子Enchytraeus albidus每一个生殖细胞有一个胞质桥,连接到一个共同的胞质质量。使用串行block-face扫描电镜(SBEM),我们准备好的三维超微结构的重建整个选择的隔间的囊肿在卵子发生的高级阶段,即护士细胞,cytophore, 16个细胞的胞质桥(15护士细胞和卵母细胞)。我们暴露出大量的线粒体网络护士在细胞,cytophore和线粒体,通过胞质桥,这表明线粒体网络可以扩展在整个囊肿。动态hyperfusion国家提出这样的线粒体聚合。我们测量了线粒体分布和揭示他们的偏振分布在护士细胞内和更丰富的积累相比cytophore护士细胞。密切联系的线粒体网络分散nuage材料,似乎身体结构相当于一个巴尔比亚尼,没有描述clitellate环节动物到目前为止,也揭示了。

1。介绍

线粒体是高度动态的细胞器,主要是专业生产能源通过生成大部分的腺苷三磷酸腺苷(ATP)。保持适当的细胞能量代谢和体内平衡,他们也玩其他重要角色在中间代谢,钙信号和细胞凋亡1- - - - - -5]。在这种背景下,线粒体的形态、空间分布和活动改变的细胞根据其临时需求。线粒体的活力是两种对立的结果过程:融合,导致他们合并成更大的线粒体网络和裂变,即单个线粒体的分离过程的网络。线粒体的形态取决于这些过程之间的平衡(3,6- - - - - -16]。

一个基本角色,已经暗示了线粒体网络是他们使细胞器之间的沟通为了方便访问或交换产品的mtDNA表达式(3,12,17]。融合也可以缓冲瞬态缺陷出现在个体的线粒体。线粒体分裂,另一方面,可以作为线粒体选择的机制,导致线粒体的消除与有害组件内部排序(2,3,18]。已发现线粒体网络在不同类型的细胞。他们的遗传基础和他们如何融合成更大的分子机制系统或分成单独的细胞器已经深入研究了生物模型如酵母和哺乳动物组织细胞培养(18- - - - - -22]。

分析线粒体在不同的细胞活力和线粒体的分布网络系统主要是基于共焦荧光显微镜(21,23- - - - - -27)或高分辨率4π显微镜(28,29日]。研究揭示线粒体的形态和分布的复杂性在超微结构水平不是基于单一超薄部分但在三维(3 d)重建的形式是罕见的(30.]。最近,线粒体网络已被证明在超微结构水平巴尔比亚尼身体(Bb)昆虫的卵母细胞生长,Thermobia释放有(31日]。Bb(线粒体云),这是一个细胞器特征复杂,发生在许多无脊椎动物和脊椎动物(32),建议参与线粒体功能失调的选择性消除在卵子发生过程中(31日]。然而,卵子发生的Thermobia只代表一个例子在许多未来的卵细胞单独开发,在许多动物,卵细胞的形成发生在一个组织连接的生殖细胞(见下文)。

不管使用什么技术,致力于研究线粒体分布、活力和精力充沛的过程是基于个人体细胞,如神经元,胰腺β肽,肝细胞(28,33,34]。即使我们考虑合胞体系统,这些线粒体问题研究(例如老鼠心肌细胞、大鼠和人类骨骼肌,果蝇胚胎胚盘)(34- - - - - -38),还有合胞体细胞系统线路。

正如上面提到的,在许多动物,临时组相互联系的生殖细胞,这实际上是功能性合胞体,发生在卵子发生和精子发生33- - - - - -36]。这些系统被称为细胞囊肿,巢或克隆和高度可变的空间排列(其中最著名的是高度支化在果蝇卵巢囊肿)(30.,37- - - - - -41]。此外,在卵子发生的情况下,生殖细胞聚集成囊肿可能没有相同的发展潜力。随着卵子发生的发展,一些相互关联的生殖细胞(称为护士细胞;nc)开始工作的其他细胞(卵母细胞,即未来的卵细胞)通过提供不同种类的大分子(主要是rna)和细胞器如线粒体、越来越多的卵母细胞(40- - - - - -43]。细胞器和大分子的交换(细胞质共享)之间相互联系的细胞是通过广泛的存在(平均10μ米d .腹)细胞连接被称为细胞间桥或环形运河(RCs) [42,44- - - - - -46]。虽然nc不有可能发展成卵细胞,通常他们是高度专业化的,多倍体细胞,他们实现函数之后,他们消除囊肿通过程序性细胞死亡(凋亡[34,37,40,42- - - - - -50]。

细胞囊肿是一个有趣的模型研究合胞体系统的形成和功能,包括组织和活力的线粒体。做一个集群细胞内线粒体形成网络还是个人线粒体细胞器?如果网络存在,他们延长细胞之间通过RCs和线粒体可以接触另一个隔间的线粒体囊肿,或者他们相当孤立?本文是第一次尝试分析线粒体活力、形态和分布在这样的合胞体隔间。此外,我们选择了独特的合胞体,作为一个规则,生殖细胞没有直接连接到对方,如囊肿的生物模型d .腹和非洲爪蟾蜍光滑的(30.,39,51),而是每一个生殖细胞有一个RC连接到一个共同的细胞质和无核的质量位于中心的囊肿(cytophore) (52- - - - - -54]。这种囊肿配备中央胞质质量(不同的形态)被发现在clitellate环节动物(52,53),echiuran环节动物(55,56),秀丽隐杆线虫和其他线虫(57- - - - - -61年),在oribatid螨(62年,63年]。此外,在我们选择的囊肿,生殖细胞的分化发育命运和两类细胞- 15 nc和一个日益增长的卵母细胞聚集在一起。这样一个结构类型的女性细胞囊肿是在白色的虫子Enchytraeus albidus(属于clitellate环节动物),这是为我们的研究目的选择。

可视化中的线粒体细胞的形态和分布囊肿,我们准备好的三维使用SBEM超微结构的重建技术。这项技术是基于安装在扫描电镜室超微切片机,使连续的超微结构的显微图的结构进行分析,以得到EM决议,这是三维可视化的基础(64年,65年]。还值得一提的,我们没有单独的集中的一个片段一个细胞(如Bb已经重建t .释放有卵母细胞)[31日),甚至单个细胞(在其他几个研究)64年,66年),但我们重建整个选择细胞囊肿的隔间,即数控,cytophore和RCs互连所有16个生殖细胞。在生殖细胞中,我们集中在nc和尚未重建的分布越来越卵母细胞内线粒体是因为这是一个非常广泛的细胞(平均大小~ 200µ米)(52),应分别进行了分析。这也是值得一提的大肠albidusnc是不如在高度专业化的其他物种(如。d .腹),因为没有多倍化(只有4 C的倍性水平)和凋亡过程的缺乏是由卵母细胞吞噬的卵子发生的末尾。这些细胞被广泛连接到共同的cytophore环管(~ 4频道µ米直径)(52]。类似于其他物种,NC数控的胚系囊肿大肠albidus还在卵母细胞的发展(52]。

在我们的研究中,SBEM适合研究这些细胞器的形态和分布细节,连同经典光和透射电子显微镜显示nc的极化,由大量的线粒体网络体现出现在对面的杆细胞的细胞核附近的RC和密集的聚合cytophore线粒体。cytophore和RCs,线粒体也可以融合,似乎表明,线粒体网络扩展在整个细胞囊肿。我们的观察表明,线粒体在选择数控在动态hyperfusion状态。囊肿可以交换这些细胞器之间特定的隔间,这表明线粒体合胞体功能的存在。此外,我们还显示之间的密切关联数控线粒体与分散nuage聚合材料(具体的生殖细胞)以及大量的其他细胞细胞器(内质网,高尔基复合体)这似乎是结构性的Bb,卵母细胞的细胞器复杂重要的适当的形成和未来胚胎(67年,68年),发现在其他动物,没有描述大肠albidus和其他环节动物。

2。结果

2.1。细胞囊肿架构

的体系结构大肠albidus女性细胞囊肿就描述最近[52]。个人在卵巢囊肿代表卵子发生的连续的阶段。最初,所有的相互关联的细胞形态是相同的(直到年底粗线/早期双线期的1^圣减数分裂前期(图)1(一)),但后来,生殖细胞分化取决于他们的命运和发展成两种细胞类型:15护士细胞(nc)和一个卵母细胞(数字1,2(一),4(a))。只有继续卵母细胞减数分裂,大幅增长,成为卵细胞,而nc功能支持细胞和交付至少细胞细胞器的卵母细胞52,69年]。囊肿的架构总是相同的,生殖细胞是位于囊肿外围,它们连接到一个共同的质量细胞质(cytophore)位于囊肿的中心。cytophore是小,约球胞质质量缺乏核和每个生殖细胞连接由一个环管(RC)(数据1(一),1(c),2(一),4(a))。RCs大约4胞质通道开放µ米直径(nc)的情况下,稳定的环状内边缘,富含f -肌动蛋白(图1(c))。的结构和超微结构囊肿已经详细描述(52,69年,70年]。在这里,我们分析了囊肿的卵母细胞已经开始吸收蛋黄(所谓的早期卵黄的卵母细胞)和显然是区分从剩下的15细胞,不吸收蛋黄,作为支持细胞(数据1,2(一),4(a))。在3 d重建线粒体和其他选定的结构(如nuage材料)在超微结构水平在一个随机选择的数控,整个cytophore 16的RCs。

2.2。排列的线粒体

图像的分析使用一个光和透射电子显微镜(TEM)以及超薄切割和串行扫描得到的数据块的表面(SBEM)透露大量的线粒体在数控和cytophore(数字2,3(一)-3(c)4补充视频1- - - - - -5在线)。线粒体总量的测量显示964µ米³在选定的数控和221年µ米³cytophore。当测量数控卷每卷的线粒体的细胞质和cytophore相比,清晰可见,有25%多积累的线粒体cytophore数控(表1)。nc,细胞质中的线粒体分布不平等和更丰富的积累是位于细胞核周围,特别是在细胞极相反RCs(数字2(一),2(b)4(b) -4(d)、补充视频1和2在线)。线粒体较少(见图5RCs附近);因此有一个明显的梯度分布的轴RC -细胞中的线粒体磁极相反RC(数据2(一),2(b),4(一)-4(d)5)——因此nc显然是两极分化。数控所选择的重建、线粒体的聚合是连接在一起,形成广泛的网络,由长而分支线粒体,在3 d重建清晰可见,也观察到在超薄部分重建细胞和其他NC囊肿(数字2,3(一)-3(c)4(b) -4(d)、补充视频1和2在线)。应该注意的是,在相互联系的线粒体,小,个人和豆型线粒体也显示(图4(b) -4(d)、补充视频1和2在线)。我们已经测量了单(个人)线粒体的体积和均值为0.0259±0.01µ米³( )。这些数控中单个线粒体的数量是726年,它声明关于数控线粒体总额的3%。检查连接的线粒体水平,我们测量了多少这样的个体线粒体是包含在互联的时间越长。分析显示3大(融合)线粒体(包括超过1.000个人线粒体),是关于数控线粒体总量的65%,也和许多连接但较小的(表示数控线粒体总额的32%)(图6)。

正如上面提到的,还有更多丰富的线粒体内积累cytophore比分析数控(表1)。线粒体定位的分析表明,他们cytophore细胞质内均匀分布数据2(b),4(b),4(e)5、补充视频1- - - - - -3)。的3 d分析cytophore还透露,线粒体融合,形成一个长,网络分支细胞器(数字4(b)和4(e)、补充视频2和3在线)。类似于重建数控,个别小线粒体记录它们之间(数字4(b)和4(e)、补充视频2和3在线)。测量水平的线粒体连接显示一个大连接线粒体(包括4650个体的线粒体)cytophore线粒体总量的55%,和许多较小的连接线粒体41%,同时还有241个小个体的线粒体,线粒体cytophore总额的4%。测量值的声明和线粒体分布示意图在数控和cytophore展示在表1,数据5和6。

线粒体也观察到接近RCs(从侧面nc的卵母细胞和cytophores)以及在RCs的细胞质运河(数字2(b) -2(d),4(b),4(e)4(f),补充视频2- - - - - -4在线)。3 d重建每个16 RCs的表明,线粒体在不同囊肿隔间相互密切接触和通过RCs细胞质,但在两个重建RCs没有线粒体传递(数字4(b),4(e)4(f),补充视频2- - - - - -4在线)。

在TEM分析我们观察到单自噬囊泡(自噬小体)nc也在生殖细胞的细胞质内在卵子发生的早期阶段(cystocytes undiffrentiated未成护士细胞和卵母细胞)。自噬体含有残余的细胞器,如线粒体和高尔基复合体(数字3(e) -3(我))。

值得注意的是,在我们的研究中我们已多次试图监视线粒体功能和他们的角色在细胞合胞体,使用可用的化验。我们尝试使用以下:(1)荧光染料JC-1 (60-tetrachloro - 1 5, 50岁,6日,10日,3,30-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine碘),这是一个标记线粒体活动并允许一个检测的电化学势的变化内线粒体膜,(2)活跃MnSOD抗体(兔子Anti-MnSOD多克隆抗体)检测线粒体超氧化物歧化酶(MnSOD), (3) MitoTracker橙色CMTMRos为线粒体可视化(线粒体膜电位的基础上)在活细胞中,(4)DiOC6(3)染料线粒体膜和其他内部,如活细胞的内质网。尽管许多尝试和试验修改使用的染料都是始终无法穿透生殖细胞和cytophore,没有发现线粒体染色在细胞质中。唯一的细胞线粒体标记在某种程度上是卵母细胞生长。这可能是由于低渗透的外体信封,由夷为平地的体细胞,紧密覆盖囊肿表面。就像先前所示研究[52),卵母细胞生长时,躯体信封覆盖它分解,可能因为这个原因唯一获得的信号来自周围的卵母细胞和体细胞胚系囊肿(补充图1在线)。有趣的是,在类似的研究中,但在男性细胞囊肿,标签在实现生殖细胞(71年),但没有集群周围的体细胞,所以试剂可以自由穿透囊肿内。来弥补缺乏分析在荧光显微镜分析线粒体超微结构的透射电子显微镜,以同样的方式使用材料加工SBEM,它允许良好的可视化的生物膜。因此我们观察到大量线粒体嵴,尽管他们在线粒体基质电子密度的不同:一种线粒体拥有电子光矩阵,而另一种基质电子密度较高(在这些线粒体的嵴有时几乎不可见,由于类似的对比矩阵,嵴)(数据3(一)-3(c))。

2.3。Nuage材料

我们也分析了选择数控组件与线粒体网络密切相关,如内质网、高尔基复合体和电子致密积累无界granulo-fibrillar材料特性的众多动物的细胞细胞统称为“nuage材料”(32,51,53,54]。使用TEM和分析获得的3 d重建SBEM显示斑块的发生的电子致密granulo-fibrillar nuage材料,分散在线粒体也直接与他们联系(数字3(b)和3(c),补充视频5在线)。值得一提的是,细胞囊肿沾thioflavin T,报告为淀粉样蛋白结构的标记,表明小nc的荧光信号,标志着nuage amyloidal结构区域(图3(d))。长膜性小管网络的内质网和高尔基复合体也位于nc包围他们,特别是在细胞极相反RC(数据2(b),3(一)-3(c),4(g)4(h)、补充视频5在线)。TEM分析细胞囊肿也在cytophore nuage材料(图所示3(c)插图)。

3所示。讨论

3.1。线粒体的空间组织合胞体胚系囊肿

线粒体融合与分裂似乎所需细胞的生存和适应不断变化的环境,和细胞生长所需,部门和线粒体的分布在细胞分化[28,36]。这些对立的过程使受损的线粒体“获救”结合在一个网络和补偿任何现有的缺陷和/或消除受损的线粒体(积累突变)的分离和降解通过mitophagy(一种程序性细胞死亡,自噬)(19,72年,73年]。

线粒体明显可以不同程度的连通性,从而有不同的形态(11]。这些差异是由于不同比例的聚变裂变事件,并根据这个比例,下面的线粒体活力可以区分:(1)线粒体碎片没有融合或裂变;(2)微和mesofused线粒体分裂的优势融合;(3)动态hyperfusion融合的优点,但也会发生裂变,(4)静态hyperfusion裂变非常罕见和线粒体活力体现了高水平的线粒体融合,有时只存在一个巨大的线粒体(11]。我们的观察表明,在分析了数控和cytophore,线粒体是在动态hyperfusion状态(分类和命名取自Hoitzing和同事,2015),因为在分析了网络,我们没有观察到一个,大型数控和cytophore线粒体,而是许多广泛,长而分支线粒体,加上个人的小。它同意一般建议静态hyperfusion细胞应力响应,如饥饿,而动态hyperfusion状态观察是一种优化的生产ATP和选择线粒体的数量(1,11,14]。与静态hyperfusion、动态hyperfusion使线粒体囊肿隔间之间交换;因为发生裂变,部分线粒体网络可以把自己和保险丝与另一个网络在不同的隔间里,或者可以毁灭mitophagy的过程中1,11,14]。

因为丰富的线粒体聚合的特征细胞具有高能源需求(即使是一个细胞的特殊领域,如精子中段的)(19,66年),还因为卵子发生过程中能源消耗,也就不足为奇了大量线粒体网络也存在于细胞囊肿,进行了研究。我们的观察同意广为接受的声明,线粒体的形态变化影响能源生产,和一般细长(融合)线粒体ATP生产比分散的人群(19,27,74年,75年]。分析了nc,线粒体周围形成一个广泛的互联网络的管状细胞器细胞核和扩展在一个较小的杆细胞的线粒体分布于细胞质中。线粒体的存在的近距离原子核被认为在基因表达调控中发挥作用通过产生活性氧(ROS) (76年,77年]。线粒体的偏振分布在nc可能也会允许更有效的能源生产。因为大多数线粒体是位于一个极nc相反的RCs,从而在外面部分的囊肿,它可以确保更好的氧气可用性所必需的ATP生产(78年]。分析选择囊肿隔间内的线粒体的分布表明,线粒体聚合(线粒体密度)cytophore更丰富的比数控。线粒体还通过RCs,连接cytophore的生殖细胞。这些网络可以整合整个合胞体,有助于强化能源生产。未来研究线粒体网络和监控他们的活力在卵子发生的其他阶段的囊肿可以提供更全面的数据。连接线粒体的分布网络和他们的活动在合胞体囊肿,两极分化细胞和共同cytophore还将提供有趣的信息,最近被发现在clitellate环节动物雄性囊肿(27,79年)和女性生殖和体细胞卵巢的蚯蚓Dendrobaena veneta(80年]。在d . veneta卵巢,并不是所有的线粒体的活性和线粒体活动水平不同的特定类型的生殖细胞(oogonia nc,卵母细胞)测量;然而,它总是低于体卵巢细胞线粒体活动(80年]。不幸的是,我们试图监控线粒体功能和活动使用可用的化验(JC-1 MnSOD抗体,MitoTracker橙色CMTMRos DiOC6(3)未果(见结果部分)。使用的试剂都无法渗透细胞囊肿。由于体细胞信封,紧紧地覆盖了囊肿,只有体细胞和不断增长的卵母细胞,由体细胞信封,不包括紧紧地显示标记线粒体。然而,线粒体的形态在TEM分析的合胞体囊肿(线粒体与众多嵴的低或高电子密度矩阵)显示高的活动。到目前为止,我们只能推测线粒体的大型聚合在nc和特别是在cytophore,线粒体连接的重要程度的形式广泛的网络也扮演一个角色在能源生产和更好的应用程序更有效地推动/支持日益增长的卵母细胞。

线粒体的形态的活力,因此他们的行为在未来卵细胞的形成(即在卵子发生)影响的传播这些细胞器的后代(并因此线粒体DNA的继承)。因此,保持良好的状态通过消除受损的线粒体和/或他们的选择机制在卵子发生过程中对后代的健康是至关重要的(81年,82年]。这尤其重要,因为众所周知,线粒体在未来的生物都继承自只卵母细胞(83年),只有少数例外发生在一些双壳类(84年,85年]。

应该记住,尽管nc特定类型的生殖细胞不可能发展成功能性配子,他们在卵母细胞的形成扮演重要角色,为他们提供大量的结构——细胞器和大分子如核糖核蛋白(rnp) [43,86年]。因为这些组件存储在卵母细胞的胚胎发展是至关重要的,他们应该免受任何危险的条件。它已经表明,线粒体网络的形成与降低活性氧的生产,这是已知的一个主要因素,可以破坏细胞组件。线粒体网络提出的功能之一是提供抗氧化保护,防止细胞死亡和mitophagy28,66年- - - - - -68年]。未解决的问题是线粒体nc的线粒体为未来的胚胎的来源,是否挤进cytophore和退化卵子发生的结束。无数单身线粒体中观察到大量线粒体网络数控和cytophore和单自噬囊泡(自噬小体)含有线粒体的残余和其他细胞细胞器被发现在NC和年轻的生殖细胞。它表明,生殖细胞可能选择和消除有害的线粒体进行消除的过程(mitophagy)。因此,线粒体网络可能从事线粒体分裂和消除他们从网络。没有迹象表明mitophagy cytophore细胞质中分析囊肿。另一方面,这很让人困惑的原因是什么大cytophore聚合的线粒体网络。男性囊肿配有cytophore, cytophore用作细胞质残余精子形成过程中及其释放囊肿(87年]。在囊肿cytophore含有精子,聚合大量的线粒体形成,最后他们一起被cytophore和囊肿(残余71年]。然而,在雌性细胞囊肿cytophore nc之间充当中介结构和日益增长的卵母细胞,是细胞细胞器和大分子的路线转移(52,88年]。考虑到卵母细胞的收集大量的线粒体当它生长,cytophore可能选择的线粒体的地方存储,最后进入卵质。此外,就像前面的研究中,所示在卵子发生在年底大肠albidus大量的卵黄的卵母细胞周围其余的囊肿,建议卵母细胞可以吞噬它结束时52]。

3.2。Nuage材料的等效巴尔比亚尼身体吗?

在许多动物的卵母细胞中,线粒体是组织成一个瞬态结构称为巴尔比亚尼身体(线粒体云;Bb)。除了线粒体,Bb由其他细胞结构如内质网、高尔基复合体和nuage积累(67年,89年,90年]。细胞细胞[Nuage是一个无所不在的组成部分67年,91年]。简而言之,它来源于原子核,从而构成的rnp来源,参与各种mrna的正确定位种质(即生殖系的决定因素)的卵母细胞(32,51,53,54,92年]。Bb成分之间的关系最近昆虫的卵母细胞中所示Thermobia释放有在线粒体活力的背景下,线粒体的融合网络和线粒体单从这些聚合的裂变。这种机制被认为来自未来的选择和消除不正常的线粒体卵细胞(31日]。虽然黑莓没有被描述在环节动物门,在许多环节动物物种的研究到目前为止,一个granulo-fibrillar电子致密nuage物质被发现在卵母细胞和数控(72年,73年,93年]。我们的观察的密集的线粒体网络不仅nuage材料密切相关但内质网和高尔基复合体表明这种聚合可能更少的形态突出结构相当于Bb(发生在整个细胞囊肿,不仅在卵母细胞)。nuage材料cytophore细胞质内的存在表明,数控可能参与生产和运输种质卵母细胞的决定因素。尽管nuage材料的组成环节动物不知道到目前为止,值得注意的是,它包含amyloidal结构,由thioflavin证实T染色。尽管缺乏一个合适的,结构性分离Bb在环节动物,分散nuage材料密度和线粒体网络延伸通过囊肿组件可能弥补它。积累nuage材料与细胞细胞器也可以预期在环节动物卵母细胞和他们的分析应该是下一步在将来的研究中。广泛接受,诱导细胞的命运可能是两个起源:受精卵的感应或产妇细胞质遗传92年,94年,95年]。第一个情况发生在胚胎发生和细胞间信号初始化;它是普遍的动物类群,可能代表了祖先的机制。生殖细胞系来源的第二种方式是基于细胞决定因素,信使rna和蛋白质,沉积在卵子发生在特定区域(种质)的卵母细胞。孕产妇的形成细胞的遗传信息被发现等模型系统秀丽隐杆线虫,d .腹和x光滑的,它被认为是一个衍生条件(92年,94年,95年]。nc nuage物质的存在和cytophore代表母体细胞命运的决定。它表明细胞决定因素,尽管最初传播囊肿的所有细胞,将最终通过cytophore转移到未来配子。如在发生类似的情况d .腹nc,细胞生产因素,通过环形运河后卵母细胞和他们成为本地化的后极卵母细胞,形成了极质。此外,据信种质宿主健康的线粒体在开发过程中传递给后代(96年]。在动物细胞,如脊椎动物的受精卵的感应,巴尔比亚尼身体也形成,其显示质量的作用是保护线粒体等细胞器在长久的卵子发生(68年,96年]。染色的大肠albidus生殖细胞与thioflavin T染料,染色淀粉样βsheet-rich结构,(96年,97年)透露,nuage包含amyloid-like结构。最近被观察和分析了类似的结构非洲爪蟾蜍卵母细胞。在这个模型物种,Xvelo,高纯度蛋白在巴尔比亚尼身体,富含amyloid-like总成(96年]。这个amyloid-rich蛋白质也有prion-like域,实验显示,建议结构组织巴尔比亚尼的身体。这个领域可以形成一个稳定的矩阵,线粒体等细胞器的嵌入,可以从事绑定和细胞器和RNA浓度(96年]。在大肠albidusnuage材料的密切接触,因此,线粒体可能显示它的作用在集群保护线粒体的质量和可能在mitochondrial-nuage聚合在一起,这可能通过环形运河和进一步通过在一起。这也暗示amyloid-like蛋白质可能形成一个进化保守机制在某种程度上参与规范的细胞,如就证明了这一点。奥斯卡·RNA在d .腹,这是一个主要的蛋白质参与极质组织(89年,91年,98年),并显示相似非洲爪蟾蜍Xvelo [96年),也由amyloid-like聚合酵母rna结合蛋白的重要监管的配子形成和有性生殖99年]。

综上所述,本文提供的观测是研究的第一步的过程中线粒体活力合胞体胚系囊肿常见的细胞质。使用串行block-face SEM方法,使我们能够分析线粒体及其相关细胞器的分布和结构首次使用高分辨率的三维重建。使用SBEM和其他微观方法是证明:(我)线粒体的nc极化——密集的积累是位于细胞核附近的杆细胞对RCs。(2)cytophore有25%多积累的线粒体,而护士细胞和线粒体是均匀分布在细胞质中。(3)线粒体是连接到一些大型和众多细胞器少联系,小个体的线粒体也发生;线粒体的水平连通性与个体的表示,他们是在动态hyperfusion状态。(iv)线粒体可以通过RCs;因此他们之间可以交换特定囊肿隔间。(v)分散nuage材料似乎是结构性的Bb。

4所示。材料和方法

4.1。动物材料

标本的白色蠕虫Enchytraeus albidus(亨利,1837)从商业来源获得。他们饲养在实验室条件下用塑料盒充满盆栽土壤。他们是美联储每周有面包和蔬菜浸泡在水里。只有成熟的标本清晰可见环带被用于分析。

4.2。准备材料使用微分干涉对比和荧光显微镜分析

标本的大肠albidus固定在4%甲醛(刚做好的从多聚甲醛)在PBS(磷酸缓冲盐,氯化钠,137毫米;氯化钾,2.7毫米;Na₂HPO₄8毫米;KH₂阿宝₄1.5毫米,pH值7.4)30 - 40分钟在室温和清洗在PBS。包含带有的卵巢囊肿是切割,安装在一个奥林巴斯BX60显微镜下微观幻灯片和分析配备Nomarski微分干涉对比,或双沾rhodamine-conjugated phalloidin (2μg / ml;σ)和DAPI (1μ在黑暗中g / ml) 40分钟,洗在PBS和分析相同的显微镜下配备合适的过滤器。

检测amyloid-like聚合在生殖细胞中,上面的身体部位与生殖腺固定,脱水,持续15分钟在一系列的30%,50%,70%,96%,和100%的乙醇溶液,在乙醇/ Steedman饱和蜡解决方案:在3:1,1:1,1:3和100%乙醇为24小时。然后材料嵌入Steedman蜡,留给聚合,切成7μ米厚的部分在蔡司岩狸M40切片机。染色之前,部分被安装到显微镜载玻片和脱蜡使用反向系列乙醇:2×15分钟和90年的100%,70年50%,重蒸馏的水(ddH₂O)为15分钟。de-waxed部分被用在PBS 1% Triton x - 100,然后在纯PBS,然后孵化1 h在1% BSA(牛血清白蛋白)PBS。1%的材料是彩色水thioflavin T在室温下20分钟的黑暗。染色组织部分分析了在奥林巴斯BX60显微镜下观察配备合适的过滤器。

4.3。准备材料进行分析使用光学显微镜、透射电子显微镜和SBEM

解剖体与性腺在2.5%戊二醛固定段0.1磷酸盐缓冲剂(pH值7.4)在室温下1 h。洗后在同一个缓冲区,3%的样本你找找亚铁氰化钾的0.3甲次砷酸盐缓冲与同等体积的4%的水溶液混合1 h。组织的四氧化锇在ddH然后洗了三次5分钟₂O和孵化1%解决方案通过二氨基硫脲(Ted斗篷)的20分钟60°C。之后,样本在ddH 5分钟洗了三次₂O和放置在2%水四氧化锇了30分钟,然后组织又洗了三次在ddH 5分钟₂O和孵化一夜之间在1%醋酸水铀酰4°C。样本然后冲洗5分钟在ddH的三倍₂O和投入刚做好的沃顿的第一天冬氨酸为30分钟60°C,洗五次在ddH 3分钟₂O和脱水系列的10分钟30、50、70和96%乙醇的解决方案,然后放置在无水100%乙醇三次20分钟,1:1丙酮和乙醇溶液为15分钟和15分钟的两次100%丙酮。脱水后,50%的样本被放置在一个混合环氧树脂包埋介质(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)在丙酮3 h,然后留给丙酮在一夜之间蒸发。两层之间的准备材料嵌入论(EMS)和聚合。

使用光学显微镜分析材料,semithin部分(0.8µ米厚)与亚甲蓝染色和分析使用一个奥林巴斯显微镜BX60配有XC50数码相机(奥林巴斯、东京、日本)和cellSens标准软件(奥林巴斯、东京、日本)。使用透射电子显微镜分析材料,超薄部分(80海里)削减在徕卡Ultracut开普敦大学超微切片机(徕卡微系统公司,位于德国)和日立H500透射电子显微镜下检查(日立、东京、日本)在75千伏。

的3 d重建,树脂硬化后,广场,削减了刀片,附着在铝针(金属铆钉,牛津仪器)和少量的cyanoacrylate胶水,然后安装到超微切片机(Ultracut开普敦大学超微切片机,徕卡微系统公司位于德国)和样本块的削减。接下来,样本与接地银漆(Ted斗篷,16062 - 15)销和干24 h。成堆的照片系列150纳米超薄收集部分使用一个σVP(蔡司)扫描电子显微镜配备超微切片机室3视图(Gatan)和数码显微照片(Gatan)和背散射电子探测器。扫描参数:变压18 Pa,过去4 kV,孔径15μ米,停留时间7μ年代,像素大小15海里。

4.4。三维重建

选择囊肿组件的三维重建是基于一系列的超薄部分。显微镜的图像浏览器(MIB),这是一个方便的工具,图像管理(One hundred.),被用来准备三维模型。有趣的细胞车厢在MIB使用刷子和手动分割阈值的工具。得到的模型可视化的试用版阿米拉(热科学、沃尔瑟姆,MA。美国)。

4.5。测量的线粒体

基于三维重建的一系列超薄部分线粒体和线粒体聚集分段使用表面对象检测函数建立在伊万里瓷器(定制开发的软件Bitplane科学软件,苏黎世瑞士)。同样的方法在营养细胞和cytophore单独使用。cytophore,营养细胞和环管分段使用表面建模,可以在伊万里瓷器手册大纲。在每个检测线粒体聚集对象线粒体数量计算估计固定线粒体大小。线粒体大小是由精确的手动波状外形的几个单一的线粒体的形状在一系列超薄部分。3 d对象建立了为每一个对象使用表面对象检测和估计计算量。25个随机选择的对象的平均体积值被用来确定最后的线粒体大小。使用线粒体的体积计算总量和评估单一线粒体,线粒体数量在每个聚合计算。独立计算总量的元素与线粒体的体积cytophore和护士细胞,分别可以确定相对线粒体集中度cytophore关于护士细胞。

所有的3 d位置坐标的线粒体内发现cytophore和护士细胞测量。结果,我们之间的欧式距离计算每一个线粒体和cytophore环管和中心的护士细胞。的距离,计算归一化的最大长度cytophore或护士细胞基于线粒体的本地化。统计分析是使用R环境(版本执行。3.4.2)。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

研究和设计概念,研究准备材料:安娜z Urbisz。进行了实验,分析了数据和数据准备:安娜•z . Urbisz卡罗尔Małota。采集的数据使用SBEM: MałgorzataŚliwińska。卡罗尔Małota进行三维重建。塞巴斯蒂安学生进行测量,准备图。安娜z Urbisz和卡罗尔Małota分析和解释数据。安娜z Urbisz和卡罗尔Małota写主要的手稿文本。安娜·z . Urbisz卡罗尔Małota Sebastian学生和Małgorzata aŚliwińska执行关键的修订手稿。

确认

作者感谢教授彼得亚雷Świątek(波兰西里西亚大学卡托维兹)他宝贵的讨论,修正和建议。衷心感谢博士也由于Łukasz Chajec(波兰西里西亚大学卡托维兹)重要的协助准备和分析材料。这项工作是由美国国家科学中心、波兰(合同授予数量:DEC-2017/01 / X / NZ3/00736)。

补充材料

补充1。补充1:视频的视频序列分析细胞的超微结构的显微图囊肿,SBEM获得的技术,三维可视化的基础。

补充2。补充视频2:可视化重建护士细胞与细胞中线粒体可见cytophore (深蓝色)和cytophore内(亮绿色)。线粒体(黄色的)通过环管(浅蓝色的),护士细胞核(蓝色的)。

补充3。补充视频3:16环形运河的可视化:15从护士细胞(浅蓝色的从卵母细胞)和一个(红色的)与线粒体(细胞囊肿黄色的)通过它们。Cytophore线粒体(亮绿色)。

补充4。补充视频4:放大重建环管(红色的),连接cytophore的卵母细胞和线粒体通过它(黄色的)。

补充5。补充视频5:可视化的地区护士细胞nuage材料。护士细胞核(蓝色的),nuage材料(亮绿色),线粒体(深红色),高尔基复合体(紫色的),内质网(浅蓝色的)。

补充6。补充图1:(一)——(C) Live-cell成像的胚系囊肿沾(A) DiOC标记线粒体(绿色= 50),酒吧µm (B) MitoTracker橙色CMTMRos线粒体染色(红色的)和赫斯特33342年复染色细胞核(蓝色的= 50),酒吧µm (C) JC-1活跃(形象化绿色)和一般(红色的线粒体和赫斯特33342年复染色细胞核(蓝色的),酒吧= 40µ米(D) Immunolabeling MnSOD抗体检测线粒体超氧化物歧化酶(绿色= 50),酒吧µm NC -护士细胞,O -卵母细胞。

引用

1. 比比海德、g .树枝和o . s . Shirihai“Organellar vs细胞线粒体动态的控制,”研讨会在细胞和发育生物学,21卷,不。6,575 - 581年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. r . j . Youle和a . m . Van Der Bliek“线粒体裂变、聚变和压力,”科学,卷80,不。337年,第1065 - 1062页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. d . c . Chan“线粒体:动态细胞器在疾病、衰老和发展,“细胞卷,125年,第1252 - 1241页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. m·皮卡德o . s . Shirihai b . j .让蒂尔和y Burelle“线粒体形态转换和功能:对逆行信号?”美国Physiology-Regulatory杂志、综合和比较生理学,卷304,不。6,393 - 406年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. a . Kaniak-Golik和a . Skoneczna Mitochondria-nucleus网络基因组稳定。”自由基生物学和医学卷,82年,第104 - 73页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. b··“生物能量学线粒体融合与分裂的作用,”Biochimica et Biophysica学报(BBA)生物能疗法,卷1817,不。10日,1833 - 1838年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 即斯科特和r . j . Youle“线粒体核裂变和核聚变,”论文在生物化学47卷,第98 - 85页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. s·w·g·泰特·d·r·格林:“线粒体和细胞信号。”《细胞科学卷,125年,第815 - 807页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. s . l . Meeusen和j . Nunnari线粒体融合融合,”当前细胞生物学的观点,17卷,不。4、389 - 394年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. d·j·帕克,a·莫兰和k . Mitra”研究线粒体的结构和功能果蝇卵巢,”《可视化实验,没有。119年,e54989页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. h . Hoitzing i g·约翰斯顿和n s·琼斯”,线粒体的功能网络是什么?理论评估假设和建议未来的研究,“BioEssays,37卷,不。6,687 - 700年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. k·g·黑尔斯和m·t·福勒”发育调控线粒体融合由一种守恒的,小说,预测GTPase,”细胞,卷90,不。1,第129 - 121页,1997。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. s . a . Detmer和d . c . Chan“线粒体动态的功能和障碍,”自然评论分子细胞生物学,8卷,不。11日,第879 - 870页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. k . Mitra c . Wunder b . Roysam g .林和j . Lippincott-Schwartz”hyperfused线粒体状态实现在G1-S调节细胞周期素E累积和进入S期,“美国国家科学院院刊》上,卷106,不。29日,第11965 - 11960页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. d·j·帕克,A·艾耶美国沙et al .,“一个新的线粒体的细胞周期素E,受Drp1,与cell-density-dependent细胞增殖,”《细胞科学,卷128,不。22日,第4182 - 4171页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. j . Ramalho-Santos s Varum s Amaral p·c·莫塔a·p·苏萨和a·阿马拉尔”在繁殖线粒体功能:从胚胎性腺和配子和胚胎干细胞,”人类生殖更新,15卷,不。5,553 - 572年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. f . De Giorgi l·拉提,f . Ichas“电耦合和线粒体网络的可塑性,”细胞钙,28卷,不。5 - 6,365 - 370年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. g .别人和m . Karbowski线粒体融合与分裂:监管和角色在细胞生存能力,”研讨会在细胞和发育生物学,20卷,不。3、365 - 374年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. p . Mishra和d . c . Chan“线粒体动态的代谢调节,”《细胞生物学》杂志上,卷212,不。4、379 - 387年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. w·杨,k . Nagasawa c·蒙克et al .,“线粒体sirtuin蛋白网络揭示动态SIRT3-dependent脱乙酰作用膜去极化,”细胞,卷167,不。4、985 - 1000页。e21, 2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. e . Cherok徐,s .李et al .,“小说监管角色Mff和Drp1 E3泛素连接酶MARCH5-dependent退化MiD49 Mcl1和线粒体动态的控制,”细胞的分子生物学,28卷,不。3、396 - 410年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. k . s .调光器和l . Scorrano”(De)构建线粒体:为了什么?”生理学,21卷,不。4、233 - 241年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. g .别人和m . Karbowski Photoactivatable绿色荧光蛋白质可视化和量化的线粒体融合在活细胞和线粒体网络复杂性,”方法酶学卷,547年,页57 - 73,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. m·j·r·Anand t .围贝克et al .,“i-AAA蛋白酶YME1L和OMA1裂开OPA1平衡线粒体融合与分裂,”《细胞生物学》杂志上,卷204,不。6,919 - 929年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. j . Gobel大肠Motori, m . Bergami“时空astroglial细胞线粒体网络动力学的控制,”生物化学和生物物理研究通信,卷500,不。1,17-25,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. A·j·瓦伦特洛杉矶托·e·l·罗伯f . Moradi和j·A·斯图尔特”一个简单ImageJ宏工具分析线粒体网络形态在哺乳动物细胞培养,“Acta Histochemica,卷119,不。3、315 - 326年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. k . Małota美国学生,p .Świątek“低中线粒体活动发展蚯蚓男性细胞囊肿JC-1透露,“线粒体,44卷,第121 - 111页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. p . Ježek和l . Plecita-Hlavata线粒体网网络动力学与氧化应激、氧化还原调控,缺氧,”国际生物化学与细胞生物学杂志》上第41卷。。10日,1790 - 1804年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. a . Dlaskova t .Špaček j .Šantorova et al .,“4π显微镜显示一个三维的线粒体受损的胰岛β-cells网络,2型糖尿病的一个实验模型,”Biochimica et Biophysica学报(BBA)生物能疗法,卷1797,不。6 - 7,1327 - 1341年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. m .代码量s Biliński m·t·多尔蒂·e·m·Brey和l . d . Etkin”形成、结构和极性的女性生殖系囊肿在非洲爪蟾蜍,”发育生物学,卷266,不。1,页43 - 61,2004。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. w·Tworzydlo e . Kisiel w . Jankowska a . Witwicka和s . m . Bilinski”排除不正常的线粒体从Thermobia巴尔比亚尼的身体在卵子发生早期,“细胞和组织的研究,卷366,不。1,第201 - 191页,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. e·m·艾迪,“种质和生殖细胞的分化,“细胞学的国际评论,43卷,第280 - 229页,1976年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. a·j·a·莫利纳j . d . Wikstrom l·斯泰尔斯et al .,“线粒体网络保护从nutrient-inducedβ-cells凋亡,”糖尿病,卷。58岁的没有。10日,2303 - 2315年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. a . v .“库兹涅佐夫”m·赫尔曼诉萨克斯,p . Hengster和r . Margreiter“程控特异性线粒体动力学”,国际生物化学与细胞生物学杂志》上第41卷。。10日,1928 - 1939年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. m·a .怡安和美国Cortassa“线粒体网络能量的心,”威利跨学科评论:系统生物学和医学,4卷,不。6,599 - 613年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. f·t·Kurz t . Derungs m·a .怡安b . O’rourke和a . a . Armoundas“心肌细胞动作电位的线粒体网络揭示动态耦合行为,”生物物理期刊,卷108,不。8,1922 - 1933年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. a·e·文森特,k .白色,t·戴维et al .,“定量三维映射人类骨骼肌线粒体网络,”细胞的报道,26卷,不。4、996 - 1009页。e4, 2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. s . Chowdhary d·托马·d·迪拜铝业,d . Sambre和r . Rikhy线粒体组织和功能分析果蝇胚盘胚胎。”科学报告,7卷,不。1,p。5502年,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. m . e .人们m . De Cuevas和a·c·Sprading“生殖系囊肿:生殖细胞的守恒的阶段发展?”细胞生物学的趋势,9卷,不。7,257 - 262年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. n Matova l .地中海,“动物卵子发生的比较方面,”发育生物学,卷231,不。2、291 - 320年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. l·雷和a·c·Spradling”小鼠卵母细胞分化通过从妹妹囊肿生殖细胞,细胞器浓缩”科学,卷352,不。6281年,第99 - 95页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. s . Ganguly l·s·威廉姆斯,i m·帕拉西奥斯r·e·戈尔茨坦和h·l . Swinney”胞质环流果蝇卵母细胞随驱动蛋白活动和与微管细胞骨架体系结构”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷109,不。38岁,15109 - 15114年,2012页。视图:谷歌学术搜索
43. j .包昆虫卵巢:超微结构,Previtellogenic增长和演化查普曼和大厅,1994。
44. k . Haglund i . p . Nezis, h . Stenmark”结构和功能不完整的胞质分裂形成的稳定的细胞间桥在开发期间,“生物交流与综合,4卷,不。1、1 - 9,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. l . r . Serbus B.-J。Cha, w·e·考夫和w·m·萨克斯顿“动力蛋白和肌动蛋白细胞骨架控制kinesin-driven细胞质流果蝇卵母细胞,”发展,卷132,不。16,3743 - 3752年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. 美国Ventela、j . Toppari和m . Parvinen“细胞间通过胞质细胞器交通桥梁早期大鼠的精子:单倍体基因产物共享的机制,”细胞的分子生物学,14卷,不。7,2768 - 80年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. 美国Ong c·富特,c . Tan“DMYPT突变引起收缩环的收缩和环形运河中果蝇生殖系囊肿形成。”发育生物学,卷346,不。2、161 - 169年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. d·n·罗宾逊和l .地中海”稳定的细胞间桥发展:细胞骨架衬砌隧道,”细胞生物学的趋势》第六卷,没有。12日,第479 - 474页,1996年。视图:谷歌学术搜索
49. Poprawa, m . Hyra m . Kszuk-Jendrysik和m . m . Rost-Roszkowska滋养细胞的超微结构变化和程序性细胞死亡的性腺Isohypsibius granulifer granuliferThulin, 1928(缓步类、真缓步纲Isohypsibiidae),“微米卷。70年,26-33,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. m .Żelazowska和s . m . Biliński”护士phthirapterans细胞的超微结构和功能。可能的函数有分枝的护士在细胞质细胞核转移,”节肢动物的结构与发展,30卷,不。2、135 - 143年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. Ong和c . Tan“生殖系囊肿形成和不完整的过程中胞质分裂黑腹果蝇卵子发生。”发育生物学,卷337,不。1,第98 - 84页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. a . z . UrbiszŁ。Chajec, a . Brąszewska-Zalewska j . Kubrakiewicz和p .Świątek卵巢的白虫(Enchytraeus albidus环节动物门,有环类)是由16-celled meroistic细胞囊肿,”发育生物学,卷426,不。1,28-42,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. p .Świątek j . Kubrakiewicz, j . Klag”与中央细胞囊肿形成细胞质核心是伴随着特定方向的有丝分裂纺锤波和分区现有细胞间的桥梁,”细胞和组织的研究,卷337,不。1,第148 - 137页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. a . z . UrbiszŁ。Chajec, p .Świątek”的卵巢水丝蚓颤蚓(有环类、Naididae Tubificinae)是由一个巨大的细胞囊肿与细胞骨架成分丰富,“《公共科学图书馆•综合》,10卷,不。5 p . e0126173 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. 苏珥Geschlechtsbestimmung和Gametogenese·冯·r·Leutert。裂螠属冬青罗兰多。”胚胎学和实验形态学》杂志上32卷,第193 - 169页,1974年。视图:谷歌学术搜索
56. j·f·皮尔格”,卵子发生的年度周期,产卵,幼虫echiuran结算Listriolobus pelodes南加州,”太平洋科学34卷,第142 - 129页,1980年。视图:谷歌学术搜索
57. d·赫希d·奥本海姆和m . Klass”的生殖系统的发展秀丽隐杆线虫”,发育生物学卷,49号1,第219 - 200页,1976。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. w·e·Foor”胞质桥的卵巢蛔虫”,杜兰大学医学院的公告卷。27日,23-30,1968页。视图:谷歌学术搜索
59. m·a·吉波特j·斯塔克,b . Beguet”角色的性腺细胞质的核心在卵子发生过程中线虫秀丽隐杆线虫”,细胞生物学,50卷,不。1,第85 - 77页,1984。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. 美国沃克、大肠Jezuit和j .祭祀”Actin-dependent细胞质流秀丽隐杆线虫卵子发生。”发展,卷134,不。12日,第2236 - 2227页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. r·C·Amini e . Goupil s Labella et al .,”C。线虫Anillin蛋白调节细胞间桥稳定和生殖系合胞体组织,”《细胞生物学》杂志上,卷206,不。1,第143 - 129页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. m·伯格曼,p . Cloetens, m . Heethoff”的内部生殖器官的形态Archegozetes longisetosus青木(壁虱,Oribatida),“土壤生物,卷80,不。2、171 - 195年,2008页。视图:谷歌学术搜索
63. m .藤本植物和w . Witaliński甲螨的女性和男性生殖系统Hermannia gibba(科赫,1839)(Oribatida: Desmonomata)”国际期刊的蜱螨学,38卷,不。8,648 - 663年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. r·d·Leapman j . d . Hoyne公元前郭,g . n . Calco g . Zhang和m . a . Aronova“线粒体网络的连续块面SEM分析,“显微镜和显微分析,22卷,不。S3, 1104 - 1105年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. b . j . Płachno p .Świątek上r . w . k . Małota和w·Brutkowski”系列块面SEM可视化不寻常的植物核管扩展食肉植物(Utricularia Lentibulariaceae)”《植物学,卷120,不。5,673 - 680年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. k·穆克吉,h·r·克拉克诉Chavan e·k·本森g . j .基德和s·斯利瓦斯塔瓦,“使用串行block-face脑线粒体的扫描电镜分析,“《可视化实验,没有。113年,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. m代码,即Jedrzejowska、w . Tworzydlo和s . m . Bilinski”巴尔比亚尼身体,nuage海绵、身材魁梧,种质通路的球员,”节肢动物的结构与发展,43卷,不。4、341 - 348年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. m . e .人j·e·威廉a·l·奥哈拉,g·w·格普哈特和a·c·Spradling”小鼠卵母细胞在生殖细胞囊肿和原始卵泡包含巴尔比亚尼的身体,“美国国家科学院院刊》上,卷104,不。1,第192 - 187页,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
69. m . Paschma”卵巢和卵子发生的结构Enchytraeus albidus亨利。”动物Poloniae》12卷,第188 - 145页,1962年。视图:谷歌学术搜索
70. j·n·杜蒙特”环节动物的卵子发生Enchytraeus albidus有特殊的起源和细胞化学蛋黄,”杂志的形态,卷129,不。3、317 - 343年,1969页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
71. k . Małota美国学生,p .Świątek“低中线粒体活动发展蚯蚓男性细胞囊肿JC-1透露,“线粒体,44卷,第121 - 111页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
72. a .牧野,b·t·斯科特和w·h·Dillmann,“冠状动脉内皮细胞线粒体分裂和超氧化物阴离子生产从1型糖尿病小鼠模型,”Diabetologia,53卷,不。8,1783 - 1794年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
73. g .树枝、b·海德和o . s . Shirihai“线粒体融合、裂变和自噬作为一种质量控制轴:生物能量学的观点,“Biochimica et Biophysica学报-生物能源,卷1777,不。9日,第1097 - 1092页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
74. 诉Soubannier和h . m .麦克布莱德”定位线粒体在细胞信号级联可塑性,”Biochimica et Biophysica学报(BBA)——分子细胞研究,卷1793,不。1,第170 - 154页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
75. m . v .大炮、k .武田和c . a . Pinkert“线粒体在生殖生物学,”生殖医学和生物学,10卷,不。4、251 - 258年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
76. k . t . Turpaev“活性氧和调节基因表达”,生物化学(Mosc),卷67,不。3、281 - 92年,2002页。视图:谷歌学术搜索
77. s . Kohlgruber a . Upadhye n . Dyballa-Rukes c·a·麦克纳马拉和j . Altschmied”调节转录因子由活性氧和一氧化氮在血管生理学和病理学,”抗氧化剂和氧化还原信号,26卷,不。13日,679 - 699年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
78. j . Van Blerkom“线粒体作为监管力量在卵母细胞,胚胎植入前的胚胎干细胞,”生殖医学在线,16卷,不。4、553 - 569年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
79. k . Małota和p .Świątek分析细胞骨架组织及其可能的功能在雄性蚯蚓细胞囊肿配备cytophore,”细胞和组织的研究,卷366,不。1,第189 - 175页,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
80. j . Faron t . Bernaśh . Sas-Nowosielska和j . Klag”行为的分析线粒体卵巢的蚯蚓Dendrobaena veneta罗莎1839。”《公共科学图书馆•综合》,10卷,不。2、21、2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
81. w .粉丝,k . g . Waymire: Narula et al .,“线粒体疾病的小鼠模型揭示生殖系选择对严重mtDNA突变,”科学,卷319,不。5865年,第962 - 958页,2008年。视图:谷歌学术搜索
82. j·b·斯图尔特N.-G。拉尔森,a . Mourier j·斯图尔特,c . Koolmeister“两代人之间保持mtDNA形状。”公共科学图书馆遗传学p . e1004670卷。10日,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
83. d . c . Chan和e·a·舍恩“精子线粒体DNA的清除,”细胞发育22卷,第470 - 469页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
84. h . Doucet-Beaupre布列塔尼人,e·g·查普曼et al .,“线粒体phylogenomics的双壳纲(软体动物类):寻找原点和mitogenomic mtDNA双重单亲的继承、相关”BMC进化生物学,10卷,不。1,p。2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
85. h·b·温z . m .曹d .华et al .,从父本继承了“完整的母亲般地和线粒体基因组的淡水贻贝Potamilus alatus(双壳纲:珠蚌科),“《公共科学图书馆•综合》,12卷,不。1,p . e0169749 2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
86. 人们和a·c·Spradling“老鼠卵巢生殖细胞囊肿进行程序分解形成原始卵泡,”发育生物学,卷234,不。2、339 - 351年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
87. g .布鲁诺Martinucci b . Felluga s Carli g·布鲁诺,“开发和变性cytophorus spermiohistogenesis中Eisenia麻(干腊肠)。”Bolletino di Zoologia,44卷,不。4、383 - 398年,1977页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
88. t·b·Aisenstadt w . j . Brodskii和k . g . Gazarian”的autoradiographic研究RNA和蛋白质合成与不同类型的卵子发生动物性腺,”Citologiya9卷,第406 - 397页,1967年。视图:谷歌学术搜索
89. r·t·考克斯和A·c·Spradling“巴尔比亚尼身体和fusome调节线粒体中继承果蝇卵子发生”,发展,卷130,不。8,1579 - 1590年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
90. m代码,m . Jaglarz m·多尔蒂·m·斯图尔特,l . Nelthemaat和s Bilinski”小鼠卵母细胞早期瞬变极性:三维和超微结构的分析,“实验细胞研究,卷314,不。17日,第3254 - 3245页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
91. a . p .马浩德”组装的果蝇种质。”细胞学的国际评论卷,203年,第213 - 187页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
92. s . m . Bilinski m . k . Jaglarz和w·Tworzydlo“北极(生殖)等离子体在昆虫的卵母细胞,”结果和细胞分化的问题Ed, m代码量,63卷,第126 - 103页,施普林格,2017年。视图:谷歌学术搜索
93. s . m . Bilinski m . k . Jaglarz和w·Tworzydlo”细胞器组合涉及胚胎卵母细胞的转移组件:昆虫的角度来看,“目前昆虫科学的观点31卷,1 - 7,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
94. c . g . Extavour和m . Akam生殖细胞机制规范在后生动物:渐成说,进化论”发展,卷130,不。24日,第5884 - 5869页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
95. c·g·m·Extavour“进化的两侧对称动物生殖细胞系:血统起源和调制的规范机制,“综合比较生物学卷,47号5,770 - 785年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
96. e .博客m .街m . Wuhr et al .,“Amyloid-like自组装细胞室。”细胞,卷166,不。3、637 - 650年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
97. 阿尔贝蒂,r . Halfmann s林奎斯特,”生物化学、细胞生物学和基因化验分析淀粉样蛋白在酵母朊病毒聚合,”方法酶学卷,470年,第734 - 709页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
98. j . r . Huynh和d St约翰斯顿,“不对称的起源:早期分化的果蝇生殖系囊肿,卵母细胞。”当代生物学,14卷,不。11日,第449 - 438页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
99. l . e . Berchowitz g . Kabachinski m·r·沃克et al .,“监管amyloid-like转化阻遏支配配子发育,形成“细胞,卷163,不。2、406 - 418年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
100. Belevich, m . Joensuu d·库马尔h . Vihinen和e . Jokitalo“显微镜图片浏览器:细分和分析,多维数据集的平台,”公共科学图书馆生物学,14卷,不。1,p . e1002340 2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2020年安娜z Urbisz等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。