识别错误折叠的蛋白质在体液的朊病毒疾病的诊断

文摘

传染性海绵状脑病(TSE)或朊病毒疾病是致命的罕见神经退行性疾病影响人与动物和传染性传染病引起的。谢霆锋疾病特点是海绵状脑损伤与神经损失和中枢神经系统的异常沉积,在较少的程度上其他组织,一种不溶性和抗蛋白酶的细胞的朊病毒蛋白(),名叫。通常在人,谢霆锋疾病影响60岁以上的人没有明显疾病有关的危险因素。在某些情况下,然而,谢霆锋明确疾病与传染性事件相关的使用prion-contaminated药品、医疗设备、肉类产品变异克雅氏病(CJD)。临床症状发生在感染后几个月或几年,在这沉默的时期感染,唯一可靠的标记,不轻易衡量在血液或其他访问组织或体液导致公共健康问题。克服的极限检测,一些高度敏感的化验方法已被开发,但是尝试这些技术应用于血液感染的主机已经失败或未验证。一个更新的最新进展错误折叠蛋白的检测体液。

1。介绍

有几种形式的传染性海绵状脑病(TSE)疾病或朊病毒疾病影响人类和不同种类的农场和野生动物(即。、羊、牛、和cervids)。其中一些显然有一个自发的发生(即。零星的和遗传的传染性海绵状脑病;某些形式的非典型牛海绵状脑病或痒病),而另一些则与prion-contaminated食品的消费在变异克雅氏病(CJD) (1),饲料的牛海绵状脑病(BSE) [2),或医疗和手术设备在医源性库贾氏症(3]。通过输血传播的变异型克雅氏病,可能plasma-derived VIII因子从无症状捐助者(4]表明朊病毒传染性存在于血液临床发作之前几个月或几年。因此,在农场动物疫病的发生和事件相关的人类病例朊病毒感染造成严重的公共卫生问题,通常很难解决5]。一个有说服力的例子还由不明原因的死亡率差异(176年死于1995年到2013年6月)6]和估计发病率数据(1 10000年到4000年的1人)英国人口的变异型克雅氏病(7]。这种不协调是导致大问题因为健康和感染捐助者不及时发现可能通过输血传播疾病,手术器械,或者plasma-derived产品。

感染的唯一验证代理标记是异常细胞的朊病毒蛋白的错误折叠对碘氧基苯甲醚(PrP)^C)尽管密集但令人失望寻找其他针对疾病的生物标记物的鉴定容易组织或体液8,9]。错误折叠PrP (PrP^谢霆锋)积累在中枢神经系统和其他组织受感染的主机相关的假设不同的构象的应变朊病毒(10]。PrP^谢霆锋后很容易检测到免疫印迹和免疫组织化学方法去除细胞同种型(PrP吗^C)。大多数anti-PrP抗体,事实上,并不区分PrP^谢霆锋和PrP^C需要移除细胞同种型实现针对疾病的信号。这通常是意识到通过预处理样品蛋白酶部分消化PrP(通常是蛋白酶K)^谢霆锋但是完全消除PrP^C。使用蛋白酶K (PK),然而,删除聚合错误折叠不佳的PrP的分数^谢霆锋通常出现在血(11),可能其他体液减少检测的机会。最后,它仍然是辩论是否PrP^谢霆锋明确相关与朊病毒传染性有场合PrP吗^谢霆锋要么是不与传染性12)或没有受感染的主机(13]。尽管有这些限制,PrP^谢霆锋仍然是最好的选择对于确认朊病毒疾病的诊断和识别prion-associated传染性的组织和体液。此外,假定PrP的概要文件^谢霆锋在免疫印迹,反映不同病理构象,是很大的帮助做出正确的零星库贾氏症的分子诊断和区分零星的变异型克雅氏病(14]。

在过去15年里几种方法已经开发了PrP的敏感性增加^谢霆锋检测,目的是找到一个可靠的朊病毒疾病的早期诊断化验容易组织或体液。这些进展的概述是这个工作的目的。

2。蛋白质错误折叠循环放大(PMCA)

2001年,Saborio和他的同事们15)开发了一个新的协议错误折叠蛋白的体外扩增基于分解PrP的原则^谢霆锋孵化的PrP大量过剩^C产生新颖的PrP^谢霆锋。纤维需要声波降解法步骤的解集,可以重复几次,在循环过程中,让敏感的检测错误折叠PrP最初的种子。蛋白质错误折叠循环放大(PMCA)最初开发使用仓鼠脑匀浆和已被证明是一个有效的大脑PrP方法放大^谢霆锋其他物种包括鼠标、羊、牛、银行田鼠,cervids,和人类16- - - - - -23]。在人类样本,PrP的放大^谢霆锋强烈影响的正确匹配蛋氨酸/缬氨酸129残留的PrP,表明这种多态的PrP错误折叠的蛋白质是重要的放大PMCA试验(24- - - - - -26]。

10个周期的声波降解法是充分的增加的敏感性标准6 - 12皮克经由上述西方墨点法大脑PrP的0.3 - -0.5皮克^谢霆锋,用一种改进的自动化协议使放大周期,数量的大幅度增加,毫微微克水平(27]。PMCA因此承诺平台朊病毒诊断体液(血液、尿液、脑脊液)PrP的水平^谢霆锋估计在每毫升皮克。

索托领导的小组报告第一次成功PrP的识别^谢霆锋血液中(淡黄色的大衣)痒病影响了仓鼠的敏感性89%,特异性100% (27)和积极的信号样本的50%临床前阶段的疾病早在20天后腹腔内注射263 k痒病(28]。PrP的检测^谢霆锋在临床前的血scrapie-infected仓鼠与传染性检测血液中(数据是一致的8]。

从那时起,自动PMCA透露PrP的存在^谢霆锋在等离子体分数(29日),尿29日- - - - - -31日,脑脊髓液(CSF) (32scrapie-diseased仓鼠的敏感性从50(等离子体)到100% (CSF)(表1)。在脑脊液样本scrapie-infected仓鼠,PMCA使用进一步改进的协议是由PrP (rPrP-PMCA)^C取而代之的是重组PrP (recPrP),允许PMCA协议与先前的敏感性大于观察(32]。

除了在仓鼠模型,PrP^谢霆锋从血液白细胞的自然是放大20.,34)和实验scrapie-infected羊(33]PrP在哪里^谢霆锋早在90年发现了乐队天postinoculation和与传染性滴定度(33]。白细胞的自然scrapie-infected羊,PrP^谢霆锋动物被发现在所有测试通过使用一个增强(即特异性为100%。,添加多聚腺苷酸PMCA)协议(20.]。

试图发现PrP^谢霆锋血液中其他物种如牛的疯牛病和cervids慢性消耗病产生消极的或有争议的结果(34,37,58]。各种形式的朊病毒疾病,患者PrP的检测^谢霆锋PMCA没有尝试(或结果不发表)在血液样本,血液衍生品、血浆、尿液、或脑脊液尽管PrP的放大^谢霆锋成功报道人类大脑样本和零星的变种库贾氏症(16,24- - - - - -26]。

最后,PMCA PrP的放大^谢霆锋在体液样本,除了血,取自朊病毒感染主机成功实现在不同的物种,包括唾液和尿液在羊痒病(36,36];唾液、尿液和CSF在cervids(慢性消耗性疾病38,58];CSF和唾液与疯牛病(牛37]。朊病毒感染体液分析列表通过PMCA获得敏感性和特异性表所示1。

总之,PMCA无疑是检测微量的PrP的突破^谢霆锋可能存在于体液,因此是一个候选方法发展敏感测试在动物和人类朊病毒疾病的诊断。此外,放大PMCA保留PrP的产物^谢霆锋签名的原始种子允许库贾氏症的分子诊断在人类和羊搔痒症的发病率具有重要的公共卫生意义。在过去的10年中,PMCA经常被修改,添加多聚腺苷酸(20.]或硫酸葡聚糖(37),通过使用重组PrP大脑PrP的相反^C(32),或通过耦合敏感分析(34),一边改进PrP的敏感性^谢霆锋检测,但另一方面,由不同的实验室的数据比较困难。与PrP PMCA coamplifies传染性^谢霆锋(59,60模仿特定疾病致病事件但需要诊断实验室的安全预防措施。最后,PrP^谢霆锋乐队可能出现在控制准备几个PMCA周期后(61年]。这一发现,是否相关新创PrP的形成^谢霆锋(20.,60,61年)或交叉污染的样品(22),提出关心PMCA诊断应用的可靠性。这个不便,但是,很容易由使用低PMCA周期和适当的技术建议,以避免可能的朊病毒污染(22]。

3所示。嘎嘎叫诱导转换(QuIC)

PMCA剥离的方法得到声波降解法与自动管震动recPrP基质的转换(62年]。这部小说“诱导转换就发出嘎嘎声”(QuIC)协议允许1毫微微克PrP的放大^谢霆锋痒病的仓鼠一天内脑匀浆,减少错误折叠的复杂性和时间放大。仓鼠recPrP促进大脑的转换错误折叠蛋白质的其他物种如羊痒病和人类和零星的变种库贾氏症,无论主PrP的序列^谢霆锋种子(41]。一些自发PK-resistant少于12 kD的碎片偶尔观察到非种子的控制样品(32),但他们减弱通过减少反应的培养时间(41]。

错误折叠放大方法的一个最重要的改进是实现当西方墨迹取而代之的是一种实时荧光颜色反应(实时QuIC) (40,42]。这部小说读出系统,基于荧光amyloid-sensitive thioflavin染料(阻)63年),允许整个QuIC过程的实现高吞吐量96 -格式。实时QuIC (RT-QuIC)是一种有效的定量方法检测微量的PrP^谢霆锋估计的50%播种剂量(SD₅₀仓鼠痒病的大脑在同一个数量级的传染性剂(LD₅₀)[40]。

RT-QuIC协议已经适应大脑PrP的检测^谢霆锋其他物种如CWD-infected鹿,scrapie-infected羊,和零星的库贾氏症患者通过使用特有的recPrP [40,42,64年]。完整的人类recPrP截断和全身的仓鼠recPrPs PrP的放大是有效的基质^谢霆锋零星的库贾氏症大脑中无论129密码子的表型(43,64年]。失望的是,在播种RT-QuIC变异型克雅氏病的大脑反应的疗效持续低于零星的样本库贾氏症(64年]。

PrP的存在^谢霆锋在脑脊液QuIC化验最初透露Atarashi和他的同事(62年)263年k-scrapie感染仓鼠和Orru和他的同事们41在scrapie-infected羊。2010年,Wilham和他的同事们40揭示了PrP的存在^谢霆锋在263 k的CSF scrapie-infected仓鼠RT-QuIC和估计大约10的滴定度⁻²SD₅₀每µL。脑脊液样本控制动物没有透露任何PrP的存在^谢霆锋表明高特异性的检测。这些令人鼓舞的结果患者CSF scrapie-infected主机提升进一步研究各种形式的朊病毒疾病。盲实验最初执行明确的零星库贾氏症患者的脑脊液样本30日澳大利亚国立库贾氏症提供的注册表和155名对照(25疑似库贾氏症病例和130年神经控制)实现87.5%的特异性和灵敏度为100%。库贾氏症病例阳性无关地129密码子的基因型(42]。同样,麦奎尔和他的同事们(43]筛选零星的脑脊液样本库贾氏症患者提供的国家克雅二氏症研究与监测单元,爱丁堡,英国,包括所有三个129 -密码子的基因型和获得灵敏度特异性99%和94%。在相同的研究中,14-3-3蛋白的特异性和灵敏度,目前代理标记用于零星库贾氏症的诊断,分别为65%和94%。RT-QuIC输出的一个示例零星库贾氏症患者的CSF在图给出1。

最后,佐野和他的同事们(44)报道,RT-QuIC测定患者的CSF基因朊病毒疾病在GSS敏感性78%,100%在FFI, E200K基因库贾氏症,87%和100% V203I遗传库贾氏症,这表明RT-QuIC PrP的检测分析^谢霆锋CSF中可能成为一个有效的方法来改善患者的诊断临床怀疑人类朊病毒疾病。

除了CSF, RT-QuIC试验揭示了PrP^谢霆锋从仓鼠感染了传染性鼻灌洗貂皮脑病(身上)超紧张40),通过使用immunoaffinity珠子加上15 b3反PrP构象^谢霆锋等离子体的抗体(增强QuIC), scrapie-infected仓鼠(39]。分析显示100%的敏感性和特异性,能够探测到一个积极的信号出现很久之前的痒病的临床症状。

最后,应用15 b3-conjugated珠子QuIC协议和使用hamster-sheep嵌合recPrP作为反应底物增加了敏感性(attogram水平)和检测的速度(28小时)变异型克雅氏病的大脑错误折叠蛋白上升到人血(39]。尽管如此好的成绩仍然没有报告的使用增强QuIC人类血液化验。

总的来说,RT-QuIC方法论是一个强大的平台检测和大规模筛查错误折叠PrP在人类和动物。attogram水平的错误折叠PrP能被探测到的几小时内,妥善量化利用高通量96 -格式。特异性获得高水平的各种组织和利用柔性基板展示了小说的多功能性重组方法。的注意,RT-QuIC PK-resistant产品非传染性的(引用(43]),因此可能更安全的大规模筛查诊断程序。这个试验的两个缺点放大PrP相对贫穷的性能^谢霆锋从变异型克雅氏病组织64年复制原始的PrP)和失败^谢霆锋签名阻碍零星库贾氏症的分子诊断和零星的区别和变种库贾氏症。

4所示。其他潜在的化验检测错误折叠的PrP的血液

4.1。Immunocapillary电泳(ICE)

分析,最初由Schmerr和他的同事们开发(65年)和基于竞争与PrP荧光免疫测定肽,很快就被证明有效的PrP的检测^谢霆锋scrapie-infected羊的血和比较慢性消耗病(66年]。然而,这些结果并不确认在其他实验室使用CJD-infected黑猩猩或零星的血样,医源性,遗传,变异型克雅氏病的病人45,67年]。因此,本试验将任何用于人类朊病毒疾病的诊断。

4.2。表面荧光强度分布分析(Surface-FIDA)

这个分析由单一PrP聚集在一个固定的捕获抗体涂层表面,然后伴随的可视化的绑定有两个anti-PrP荧光抗体和double-laser光束扫描系统(surface-FIDA)。方法聚合PrP形式区别于单体的PrP不使用蛋白酶K (PK)消化步骤,因此识别PK-resistant和PK-sensitive PrP^谢霆锋。Surface-FIDA启用牛的计数和仓鼠PrP聚集在脑匀浆和牛脑脊髓液(47]。PrP总量也blind-detected scrapie-infected羊的血()具有高特异性和敏感性46),尽管它仍然不安PrP总量的检测是否与传染性。注意,飙升的PrP的血浆^谢霆锋从大脑不成功的表明PrP的属性^谢霆锋从血液大脑不同于内源性错误折叠PrP (46]。

4.3。Ligand-Based免疫测定

特里和他的同事们(48PrP的检测报告^谢霆锋在55%的血液单核细胞(PBMC)从scrapie-affected羊()和71%的实验BSE-affected羊的改性阴离子配体测定IDEXX HerdCheck方法(68年]。试验结果也积极的一个子集scrapie-infected羊出现临床症状前几个月暗示PrP^谢霆锋可以发现在无症状的朊病毒感染宿主。然而,相对较低的灵敏度在朊病毒感染羊,长时间的样品准备,所需的血液量的净化PBMC预言这个试验将不会很容易适用于大规模的诊断范围。

4.4。固态结合矩阵

分析,基于PrP的亲和力^谢霆锋对不锈钢粒子(69年,70年),是用于检测错误折叠PrP在各种形式的库贾氏症患者的血49]。PrP的选择性吸收^谢霆锋在金属矩阵集中错误折叠的蛋白质,由ELISA检测可以检测出信号。由于金属基体的选择性只绑定错误折叠PrP,不需要预处理样品PK,可能删除PrP的引人注目的部分^谢霆锋的血液。这种方法最初是测试人类血液中掺入vCJD脑匀浆错误折叠粒子在10⁻¹⁰大脑发现了稀释。随后,血液的变体和零星的库贾氏症患者盲法试验进行了分析,包括其他神经系统疾病患者的样本和控制。只有样品活性的两个独立化验得分为正数。大约三分之二的变异型克雅氏病的血液样本但没有从零星的库贾氏症患者和神经或神经控制产生积极的信号在分析导致变异型克雅氏病(特异性为100%49]。

4.5。EP-vCJD血液筛检试验

2003年,Paramithiotis和他的同事们71年]报道制造抗体针对PrP抗原表位,只暴露在蛋白错误折叠,因此针对PrP^谢霆锋。这种构象anti-PrP^谢霆锋抗体被用于epitope-protection (EP) vCJD-screening化验,后来由Amorfix实现。的高通量分析1000年实现了100%的敏感性和特异性蒙蔽人血浆样本,其中包括样本与变体CJD-infected飙升和正常的大脑50]。2009年,特异性的方法确定大规模筛查开始在法国在人类血液样本(超过2000051]。结果表明,在486年第一次运行样本积极特异性(97.6%),其中20然后证实[看好二次筛选51]。repeat-reactive样本终于被认为是消极的第三筛查(51]。随后,Amorfix测试三个变异型克雅氏病的血液样本国家生物研究所提供的标准和控制(英国NIBSC)导致负52]。测试的灵敏度因此进一步提高检测的1:5000000稀释的变体CJD-infected大脑上升变为血(52]。然而,尽管这种增强敏感性,测试仍无法在血液检测朊病毒变异型克雅氏病的病人,并最后得出结论,更多的研究需要重新评估前的试验(53]。

4.6。Conformation-Dependent免疫测定(CDI)

1998年,回历2月和他的同事们10)开发了一个ELISA-formatted dissociation-enhanced时间分辨荧光检测系统基于特定的抗体与抗原表位结合PrP中访问^C但这是只在变性PrP揭露^谢霆锋。该方法不需要PK处理,能够识别敏感和耐药PK错误折叠的蛋白质和PrP不同^谢霆锋构象。分析,改进,通过融合一个捕捉抗体,能够辨别PrP^谢霆锋签名在不同分子形式的零星库贾氏症,医源性库贾氏症和遗传的传染性海绵状脑病(72年10)和检测⁻⁵稀释的PrP^谢霆锋从变异型克雅氏病的大脑用于强化人类正常的等离子体(54,73年]。然而,内生PrP^谢霆锋在零星的患者的白细胞检测不到CDI [55),但我们不知道它的使用在变异型克雅氏病的血液。

4.7。错误折叠蛋白诊断化验(MPD)

这项技术是基于pyrene-labeled回文序列转化成的朊病毒多肽β表在PrP的存在^谢霆锋(56,74年]。这个过程导致一个excimeric信号的共轭芘传播到其他肽与放大PrP的最终目标^谢霆锋信号。MPD化验检测PrP^谢霆锋在263 k scrapie-infected仓鼠的大脑疾病的临床前和临床阶段(74年)和小卷朊病毒感染小鼠的血浆和羊与灵敏度1感染剂量每毫升(56]。同样的试验歧视蒙蔽小规模实验控制等离子体的零星的库贾氏症和松鼠猴与实验库贾氏症患者特异性和敏感性为100% (56]。

4.8。多聚体检测系统(MDS)

这种技术是一种改良ELISA试验,只承认multimeric PrP的形式^谢霆锋不使用任何与蛋白酶预处理,这可能删除PrP^谢霆锋形式可能存在于体液(57]。本试验使用先前描述的同样的原则由锅里和他的同事们(75年),是基于两种单克隆抗体的使用份额重叠的抗原表位。单体(PrP^C)被抗体附着在板的表面,不被第二抗体由于没有任何暴露抗原表位。另一方面,多聚体(PrP)^谢霆锋)很容易被第二抗体,因为他们公开更多相同的抗原决定基的副本。血浆样品的化验测试九scrapie-infected和9个控制仓鼠导致100%的特异性和敏感性57]。这个简单的试验,但是,需要验证在其他实验室和更基本的工作决定multimeric形式MDS相关试验检测到的传染性。

5。最后的评论

这是毫无疑问的,在过去的15年里已经有一位杰出的进步在改善PrP的检测^谢霆锋发展中敏感和具体诊断化验。这些复杂和高度敏感的方法成功检测到attogram PrP的水平^谢霆锋在不同物种的体液(表中1)。一个重大突破的发展RT-QuIC PrP的检测技术^谢霆锋在患者的CSF零星的43,64年)和基因(44]的传染性海绵状脑病,一旦被其他组验证将改变人类朊病毒疾病的诊断标准。

内源性PrP^谢霆锋已被确认的血液scrapie-infected仓鼠PMCA [27,28]和RT-QuIC [39变异型克雅氏病的患者的化验和固态结合矩阵分析(49]。然而,尽管有这些成功的观察,没有发表报告的应用PMCA或增强RT-QuIC患者血液样本的任何形式的朊病毒疾病表明两种化验仍然需要大量的改进在使用它们之前诊断设置。尽管RT-QuIC技术发展的PrP的检测^谢霆锋在血液样本比PMCA最近,额外的障碍RT-QuIC测定的干扰可能来自血液分子——快乐阅读。另一方面,固态绑定矩阵分析可能是一个有效的替代发展的变异型克雅氏病的血液测试,但相对低敏感性(71%)和发现一些控制样本结果积极的2分(49)做这个试验的使用远程的野心。

仍然是难以捉摸的是可再生的检测内源性PrP^谢霆锋血液中尽管成功识别大脑PrP微量的飙升^谢霆锋健康的血液。它变得越来越明显,PrP的属性^谢霆锋在大脑不同于那些在血液和一些组件的血抑制和干扰PrP^谢霆锋检测造成假阳性和阴性结果和影响测定的重现性46,51,76年]。一个明显的例子是由的失败EP-vCJD化验血液有优秀的和可再生的表演越来越多但是完全未能确定积极的和消极的人类血液样本(50- - - - - -53]。

这些发现提出的问题是否标准划定的国家标准和控制研究所生物(英国NIBSC) [77年)朊病毒的满意的敏感性和特异性诊断试验验证对飙升的血液和变型库贾氏症血液样本的要求仍然相关定义成功的最佳状态的潜在朊病毒在血液测试。

我们认为原则分析验证和可访问性变异型克雅氏病的血液样本应该关注可再生的和大规模的盲法研究血液来自朊病毒疾病的动物模型,在羊痒病或疯牛病等紧随其后健康献血者的大规模筛选确定足够水平的特异性。

最后,我们的印象是,研究朊病毒检测血液中并不需要进一步的敏感性分析,而是需要进一步研究旨在干扰血液成分的识别和理解朊病毒在血液的新陈代谢。

确认

作者感谢安娜Ladogana,安娜Poleggi,米歇尔Equestre引火物提供PrP的检测数据^谢霆锋零星的库贾氏症患者的CSF RT-QuIC化验。这部分工作是由神经退行性疾病的联合项目(JPND)研究”的CSF RT-QuIC分析优化,协调和标准化的诊断零星库贾氏症”。

引用

1. h·j·t·沃德,d . Everington s . n . Cousens et al .,”克雅二氏病的危险因素:一项病例对照研究,“神经病学年鉴卷,59号1,第120 - 111页,2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. j . w . Wilesmith g·韦尔斯·m·p·克伦威尔和j·b·瑞恩“牛海绵状脑病:流行病学研究,”兽医记录,卷123,不。25日,第644 - 638页,1988年。视图:谷歌学术搜索
3. 佐藤p .布朗,j . p . Brandel t . et al .,“医源性克雅二氏症,最终评估,”新发传染病,18卷,不。6,901 - 907年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. r·奈特”传输朊病毒疾病的风险通过血液或血浆产品,”输血和Apheresis科学,43卷,不。3、387 - 391年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. a . Ladogana m . Puopolo d . Tiple s Graziano和m . Pocchiari“克雅二氏症:公共卫生观念,”欧洲神经退行性疾病杂志》上,1卷,不。1,第113 - 101页,2012。视图:谷歌学术搜索
6. 国家库贾氏症研究和监测单元,http://www.cjd.ed.ac.uk/documents/figs.pdf。
7. 危险的病原体,咨询委员会2012年年度报告,ACDP / 100 / P7a, 2013年,http://www.hse.gov.uk/aboutus/meetings/committees/acdp/ar2012.pdf。
8. p .布朗,“血液传染性,处理和筛选试验在传染性海绵状脑病,”肝病杂志,卷89,不。2、63 - 70年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. e . Campisi f . Cardone s Graziano r . Galeno和m . Pocchiari“蛋白质组学在理解朊病毒感染的作用,”在蛋白质组学专家审查,9卷,不。6,649 - 666年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. j .回历2月h·威利诉工研院et al .,“八朊病毒株PrP (Sc)分子构象不同,“自然医学,4卷,不。10日,1157 - 1165年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. p .布朗,l . Cervenakova l·m·麦柯肖恩·巴伯r·鲁宾斯坦和w . n . Drohan”进一步研究血液传染性的传染性海绵状脑病的实验模型,并解释为什么血液成分不传播人类克雅氏病,”输血,39卷,不。11 - 12,1169 - 1178年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. p . Piccardo j·c·曼森·d·王,b .多和r·m·巴伦”朊蛋白积累的大脑并不是与传染性疾病有关,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷104,不。11日,第4717 - 4712页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. c . i Lasmezas j . Deslys o . Robain et al .,“疯牛病的传播代理老鼠没有检测到异常朊病毒蛋白质,”科学,卷275,不。5298年,第405 - 402页,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. p . Gambetti卡利,s . Notari问:香港,w .邹和w . k . Surewicz“朊病毒毒株的分子生物学和病理学零星人类朊病毒疾病,”Acta Neuropathologica,卷121,不。1,第90 - 79页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. g . p . Saborio b Permanne, c·索托”敏感的病理检测循环放大朊蛋白的蛋白质错误折叠,”自然,卷411,不。6839年,第813 - 810页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. c·索托l .安德利果汁s Suardi et al .,“Pre-symptomatic循环放大检测朊病毒的蛋白质错误折叠,”2月的信,卷579,不。3、638 - 642年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. y Murayama,吉冈m . h . Horii et al .,“蛋白质错误折叠循环放大作为评估的快速检测朊病毒失活,”生物化学和生物物理研究通信,卷348,不。2、758 - 762年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. t·d·库尔特·m·r·Perrott c . j . Wilusz et al .,“有效的慢性消耗性疾病体外扩增PrPRES,”病毒学杂志,卷81,不。17日,第9608 - 9605页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. c . Meyerett b·米歇尔·b·Pulford et al .,“鹿朊病毒的体外应变适应连环蛋白错误折叠循环放大,“病毒学,卷382,不。2、267 - 276年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. l·索恩和洛杉矶特里朊蛋白的体外扩增来自羊痒病感染的大脑和血液,“《普通病毒学杂志》上,卷89,不。12日,第3184 - 3177页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. n . j .哈利·d·m·Seelig m·d·扎贝尔·g·c, e·a·胡佛,“检测尿液和唾液的鹿鹿朊病毒的转基因小鼠,测定”《公共科学图书馆•综合》,4卷,不。第三条ID e4848, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. 通用Cosseddu, r . Nonno g . Vaccari et al .,“车改PrPSc放大突出PMCA技术的潜力和陷阱,”PLoS病原体,7卷,不。11日文章ID e1002370, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. n . j .哈雷c . k . Mathiason雕工,g . c .告诉m·d·扎贝尔和e·a·胡佛“敏感的蛋白质错误折叠循环放大和免疫组织化学检测前慢性消耗性疾病,”《普通病毒学杂志》上,卷93,不。5,1141 - 1150年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. m·琼斯,a . h . Peden c v普劳斯et al .,”克雅二氏病朊蛋白的体外扩增和检测,”病理学杂志,卷213,不。1日,第21到26 2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. m·琼斯,a . h . Peden d·怀特et al .,“影响人类朊蛋白的类型和PRNP基因型在体外转化试验,”NeuroReport,19卷,不。18日,第1786 - 1783页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. m·琼斯,a . h . Peden h . Yull et al .,“人类血小板体外扩增的底物来源异常朊蛋白(PrPSc)与克雅二氏病有关,”输血卷,49号2、376 - 384年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. p . j .卡斯蒂利亚Saa, c·索托,“检测朊病毒的血液,”自然医学,11卷,不。9日,第985 - 982页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. p . Saa、j·卡斯提拉和c·索托,“检测朊病毒的血液,发生前症状”科学,卷313,不。5783年,第94 - 92页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. y Murayama,吉冈m . t . Yokoyama et al .,“有效的体外扩增mouse-adapted痒病朊病毒蛋白质,”神经学字母,卷413,不。3、270 - 273年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. d . Gonzalez-Romero m·a·巴里亚·莱昂r·莫拉莱斯和c·索托,“尿液中检测感染朊病毒,”2月的信,卷582,不。21 - 22日举行,3161 - 3166年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. b . Chen r·莫拉莱斯m·a·巴里亚和c·索托,“估计朊病毒浓度定量PMCA体液和组织中,“自然方法,7卷,不。7,519 - 520年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. r . Atarashi r·a·摩尔v . l . Sim et al .,“超灵敏检测痒病朊蛋白重组朊蛋白使用播种的转换,“自然方法,4卷,不。8,645 - 650年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. c . Lacroux d Vilette: Fernandez-Borges et al .,“Prionemia和leukocyte-platelet-associated传染性羊传染性海绵状脑病模型,”病毒学杂志,卷86,不。4、2056 - 2066年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. r·鲁宾斯坦,b . Chang, p .灰色et al .,“朊蛋白的新方法用于临床检测血液,“《普通病毒学杂志》上,卷91,不。7,1883 - 1892年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. r·鲁宾斯坦,b . Chang, p .灰色et al .,“朊病毒疾病检测、PMCA动力学和免疫球蛋白在尿液从羊自然/实验感染痒病与临床前或临床慢性消耗性疾病和鹿,”病毒学杂志,卷85,不。17日,第9038 - 9031页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. b·c·麦迪森h . c . Raes c·贝克et al .,“朊病毒被分泌到口腔与临床前羊痒病,”《传染病杂志》上的研究,卷201,不。11日,第1676 - 1672页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. y Murayama,吉冈m . k . Masujin et al .,“硫酸葡聚糖增强体外扩增的牛海绵状脑病朊蛋白,使超灵敏检测牛朊蛋白”《公共科学图书馆•综合》,5卷,不。10篇文章ID e13152 2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. t·a·尼科尔斯t·r·Spraker t Gidlewski et al .,“朊蛋白的检测脑脊液麋鹿(Cervus黄花nelsoni)慢性消耗性疾病使用蛋白质错误折叠循环放大,“《兽医诊断调查,24卷,不。4、746 - 749年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. c·d·Orru j . m . Wilham l·d·雷蒙德et al .,“朊病毒疾病血液测试使用免疫沉淀反应和改进quaking-induced转换,“mBio,卷2,不。3,pp. e00078-e00011, 2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. j . m . Wilham c, d . Orru r . a . Bessen et al .,“朊病毒的快速端点定量播种活动比较敏感的生物,”PLoS病原体》第六卷,没有。12篇文章ID e1001217 2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. c·d·Orru j . m . Wilham a·g·Hughson et al .,“人类变异克雅氏病羊痒病PrPres检测使用播种重组朊病毒蛋白质的转换,“蛋白质工程、设计和选择,22卷,不。8,515 - 521年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. 佐藤晴r . Atarashi k . k .佐et al .,“人类朊病毒超灵敏检测脑脊液中实时quaking-induced转换,“自然医学,17卷,不。2、175 - 178年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. l·麦奎尔,a . h . Peden c d Orru et al .,“实时quaking-induced转换分析脑脊液的零星克雅二氏症,”神经病学年鉴,卷72,不。2、278 - 285年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. 佐藤晴Sano k . k . r . Atarashi et al .,“早期发现异常朊蛋白基因人类朊病毒疾病现在可以使用实时QUIC分析,“《公共科学图书馆•综合》,8卷,不。1,文章ID e54915, 2013。视图:谷歌学术搜索
45. p c . Lourenco m . j . Schmerr麦格雷戈,r . g ., j·w·艾恩赛德和m . w .头,“应用程序的一个immunocapillary电泳测定大脑异常朊蛋白的检测,从患者脾和血speciemens变体Creuzfeldt-Jakob疾病,”《普通病毒学杂志》上,卷87,不。10日,3119 - 3124年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. o . Bannach e . Birkmann大肠Reinartz et al .,“检测血浆的朊蛋白粒子羊痒病感染,”《公共科学图书馆•综合》,7卷,不。5篇文章ID e36620 2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. e . Birkmann f·亨特:Weinmann et al .,“计数单朊病毒粒子绑定到一个捕获抗体表面(surface-FIDA)”兽医微生物学,卷123,不。4、294 - 304年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. 洛杉矶特里,l·豪厄尔斯j .山楂et al .,“检测朊蛋白在血液感染的羊痒病和牛海绵状脑病药物,”病毒学杂志,卷83,不。23日,第12558 - 12552页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. j·a·埃奇沃思m .农民,a .西西里岛et al .,”克雅二氏病朊病毒感染的检测:blood-based化验,”《柳叶刀》,卷377,不。9764年,第493 - 487页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. Amorfix生命科学,新闻稿,“Amorfix vCJD测定敏感度达到100%,特异性100% 1000年英国献血者的新鲜样本,”2008年,http://www.amorfix.com/pdf_press/pr_2008/2008_10_17_AMF_vCJD_NIBSC_Fresh_Results.pdf。视图:谷歌学术搜索
51. p . Guntz c·沃尔特·Schosseler·莫雷尔j . Coste和j . Cazenave”筛查的可行性研究分析,识别异常朊蛋白在等离子体PrPTSE:初步结果与20000年样本,”输血,50卷,不。5,989 - 995年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. Amorfix生命科学,新闻稿,“Amorfix宣布第三季度,2010个结果,”2010年,http://www.amorfix.com/pdf_press/pr_2010/2009_02_08_amf_q3_results_2010.pdf。视图:谷歌学术搜索
53. Amorfix生命科学,新闻稿,“企业更新vCJD测试发展,”2010年,http://www.amorfix.com/pdf_press/pr_2010/2010_05_31_corporate_update_on_vCJD.pdf。视图:谷歌学术搜索
54. j·k·库珀、k . Ladhani和p .未成年人“比较候选人vCJD体外诊断试剂使用相同的样本集,“肝病杂志,卷102,不。2、100 - 109年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. 崔e . m . m . d . Geschwind c -迪尔岭et al .,“朊病毒蛋白质的亚种群从零星的克雅二氏症患者白细胞,”实验室调查,卷89,不。6,624 - 635年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. t·潘j . Sethi et al . c·尼尔森”错误折叠蛋白在血液检测肽构象上敏感,”输血卷,47号8,1418 - 1425年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. s . s . a一个k t . Lim h j .哦et al。”区分发生和未发生疫情的仓鼠痒病的血液样本使用多聚体检测系统,通过检测疾病有关的朊病毒蛋白质”生物化学和生物物理研究通信,卷392,不。4、505 - 509年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. n . j .哈雷c . k . Mathiason雕工,m·扎贝尔·g·c .告诉和e·a·胡佛”检测慢性消耗性疾病朊病毒在唾液、尿、鹿和肠道组织:朊病毒排出和传播的潜在机制,“病毒学杂志,卷85,不。13日,6309 - 6318年,2011页。视图:谷歌学术搜索
59. p . j .卡斯蒂利亚Saa、c . Hetz和c·索托“体外代传染性痒病朊病毒,”细胞,卷121,不。2、195 - 206年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. n . r . Deleault b·t·哈里斯,j·r·里斯和s . Supattapone”形成的原生朊病毒体外,从最小的组件”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷104,不。23日,第9746 - 9741页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. m·a·巴里亚穆克吉,d . Gonzalez-Romero r·莫拉莱斯和c·索托”新创代感染朊病毒在体外产生一种新的疾病表型,”PLoS病原体,5卷,不。5篇文章ID e1000421 2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. r . Atarashi j . m . Wilham l·克里斯滕森et al .,“简化超灵敏的朊病毒的检测重组PrP转换用颤抖的,”自然方法,5卷,不。3、211 - 212年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
63. d·w·科尔比问:张先生,s . Wang et al .,“朊病毒检测淀粉样蛋白的播种试验,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷104,不。52岁,20914 - 20919年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. a . h . Peden l . i McGuire n e . j . Appleford et al .,“敏感和零星的克雅二氏症大脑的特定检测朊蛋白使用实时quaking-induced转换,“《普通病毒学杂志》上,卷93,不。2、438 - 449年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. m . j . Schmerr k·r·古德温,r . c . Cutlip“毛细管电泳羊痒病朊蛋白的大脑,”杂志的色谱,卷680,不。2、447 - 453年,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. m . j . Schmerr a . l .珍妮,m . s . et al .,纤维环破裂”使用毛细管电泳和荧光标记肽检测血液中的异常朊蛋白感染的动物传染性海绵状脑病,”杂志的色谱,卷853,不。1 - 2、207 - 214年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. l . Cervenakova p .布朗,美国Soukharev et al .,“失败immunocompetitive毛细管电泳测定检测特异朊蛋白在巴菲克雅二氏症外套从人类和黑猩猩,”电泳,24卷,不。5,853 - 859年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. 欧洲食品安全局(EFSA),“科学评估报告的快速事后剖析谢霆锋测试用于小反刍动物,”欧洲食品安全署杂志卷,49岁,硕士论文,2005页。视图:谷歌学术搜索
69. e . Zobeley e . Flechsig a . Cozzio m . Enari和c·韦斯曼”痒病朊病毒的传染性绑定到一个不锈钢表面,”分子医学,5卷,不。4、240 - 243年,1999页。视图:谷歌学术搜索
70. j·a·埃奇沃思·g·s·杰克逊,a·r·克拉克和j . Collinge c·韦斯曼”高度敏感,以定量分析为朊病毒吸附到固体表面,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷106,不。9日,第3483 - 3479页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
71. e . Paramithiotis m . Pinard t·劳顿et al .,“病态的朊病毒蛋白抗原决定基选择性错误折叠构象,”自然医学,9卷,不。7,893 - 899年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
72. j·g .回历2月m . d . Geschwind c -迪尔岭et al .,“人类朊病毒疾病的诊断,美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷102,不。9日,第3506 - 3501页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
73. a . Bellon w . Seyfert-Brandt w·朗h .男爵,a .格和m .一“改善conformation-dependent免疫测定:适合人类朊病毒检测和增强敏感性,”《普通病毒学杂志》上,卷84,不。7,1921 - 1925年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
74. a . Grosset k·莫斯科维茨,c·尼尔森,t·潘e·戴维森和c . s . Orser说道“快速检测朊蛋白通过构象上反应发生前症状复发的PrP肽,”肽,26卷,不。11日,第2200 - 2193页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
75. 黄t, b . Chang p . et al .,”一个aggregation-specific酶联免疫吸附试验:检测重组PrP构象差异蛋白质二聚体和朊蛋白聚集,“病毒学杂志,卷79,不。19日,12355 - 12364年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
76. m·h·Tattum s琼斯,美国朋友,A . Khalili-Shirazi j . Collinge g·s·杰克逊,“一个高度敏感的检测朊病毒感染的免疫测定材料在整个人类血液不使用蛋白酶K,”输血,50卷,不。12日,第2627 - 2619页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
77. 国家标准和控制研究所生物(NIBSC),“评估流程图潜在的访问测试库贾氏症罕见的样品(如等离子体)从vCJD症患者,”http://www.nibsc.org/pdf/CJDtest-draft1.pdf。视图:谷歌学术搜索

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