研究文章| 卡拉詹妮娜Zilli,迭戈马里奥•圣克鲁斯Gustavo Gabriel Yannarelli Guillermo Osvaldo诺列加,玛丽亚Lujan Tomaro,卡琳娜Beatriz Balestrasse血红素加氧酶有助于缓解盐度损伤
文摘
植物常常受到各种各样的压力,如盐度,像其他生物一样,他们已经进化策略预防和修复细胞损伤由盐胁迫造成的。 大豆是世界上越来越多的培养由于其在食品和饲料行业广泛使用。然而,它的收益率可能受不同环境负面影响的侮辱。非生物压力,如干旱,盐碱,极端温度严重威胁农业和环境的自然状态。由于全球加热,增加耕地盐渍化预计将有毁灭性的影响。最近,据报道,盐度激起的橄榄叶活性氧(ROS)之间的不平衡生产和抗氧化防御系统,诱导的氧化应激(<一个href="#B1">1一个>]。抵消ROS的毒性,防御系统清除细胞活性氧在植物应对发达国家通过非酶的氧化应激和酶系统(<一个href="#B2">2一个>]。增强抗氧化防御植物可以增加宽容不同的压力因素。抗氧化剂(ROS拾荒者)包括诸如猫和SOD酶、以及nonenzyme分子如抗坏血酸盐、谷胱甘肽、类胡萝卜素、花青素。
之间的各种基因编码蛋白具有抗氧化特性,已经被越来越多的兴趣在过去年血红素加氧酶系统(HO EC 1.14.99.3),酶家族控制的初始和病原反应一步血红素分解代谢。血红素加氧酶催化作用的血红素氧化胆绿素第九 盐胁迫是一种最重要的非生物应力影响自然生产力和造成重大全球农作物损失。盐度一直被认为是一个严重的限制农业生产率(<一个href="#B13">13一个>]。几乎每一个方面的植物生理学和生物化学的影响。盐胁迫是一个复杂的现象,涉及形态和发展变化。两个主要组件已确定在这个现象,渗透胁迫和离子毒性<一个href="#B14">14一个>]。高等植物有多种保护机制对盐胁迫包括离子稳态,osmolyte生物合成,ROS清除,水上运输和长途的传感器响应协调。人们普遍认为许多压力,包括盐度、诱导活性氧的生产过剩,如H 目标是获得一个更好的理解的体内盐度对氧化应激防御系统的影响,我们分析了氧化压力参数,著名的抗氧化剂酶CAT和SOD的行为,以及HO-1不同氯化钠浓度的反应。
表面消毒 叶子都收获了,切成30 mm的块。他们在去离子水清洗去除表面添加电解质和放置在培养皿中有15毫升的去离子水为3小时25°C。电导率在洗澡方案确定(C1)。然后,样本加热在80°C的电导率又读了2小时,洗澡的解决方案(C2)。相对离子泄漏后被表示为一个百分比的总电导率加热在80°C(相对离子渗漏% = C1 / C 脂质过氧化作用是测量的数量TBARS硫代巴比土酸(稍后通知)反应而被希斯和封隔器<一个href="#B19">19一个>]。新鲜的叶子(0.3 g)控制和治疗均质3毫升的20% (w / v)三氯乙酸(TCA)。匀浆离心机在3500年 叶子(0.5 g(鲜重)与96%乙醇(均质 叶子从控制和治疗植物被切除,沉浸在1%解决方案3, 叶子从控制和治疗植物被切除,沉浸在0.1%解决氮蓝四唑(电视台)K-phosphate缓冲区(pH值6.4),包含10毫米Na-azide vacuum-infiltrated 5分钟,照明,直到出现黑斑,蓝色甲瓒沉淀的特点。叶子被沉浸在漂白沸腾乙醇黑点形象化。超氧化物存款被扫描量化点从叶图片如前所述<一个href="#B21">21一个>]。
提取测定过氧化氢酶(EC 1.11.1.6猫)和超氧化物歧化酶(SOD, EC 1.15.1.1)活动准备从0.3 g的叶子在冰冷的条件下均质3毫升的缓冲区,提取含有50 mM磷酸盐缓冲剂(pH值7.4),1毫米EDTA, 1 g PVP, 0.5% (v / v)特里同x - 100在4°C。匀浆离心机在10 000 叶子(0.3 g)在Potter-Elvehejm均质机均质使用1.2毫升的冰冷的0.25米蔗糖溶液包含1毫米phenylmethyl磺酰氟,EDTA 0.2毫米和50毫米磷酸钾缓冲(pH值7.4)。匀浆在000离心机 匀浆获得HO活性测定也分析了西方免疫印迹技术。四十 从大豆叶片总RNA提取试剂盒的使用试剂(Gibco BRL)。4微克的总RNA治疗RNase-free DNase我(美国加州Promega),然后1.0 蛋白质含量是评价方法的布拉德福德(<一个href="#B27">27一个>)使用牛血清白蛋白作为标准。
所有治疗都重复4次,用新种植的植物。文字和表中的数据表明平均值 氧化应激是氧化剂物种的过度生产的结果和/或消耗细胞内的抗氧化防御系统,导致细胞的氧化还原状态的失衡。活性氧被视为细胞过氧化损伤的发起者。因此,TBARS形成植物暴露于不良环境条件组织自由基的形成是一个可靠的指标。如表所示<一个href="//www.newsama.com/journals/ijcb/2009/848516/tab1/" target="_blank">1一个>22、增加37%发生在植物处理100和200毫米氯化钠,分别地。,whereas no difference respect to controls were observed in 50 NaCl-treated plants. 失去膜完整性在压力测量电解质的渗漏研究大豆叶子(表<一个href="//www.newsama.com/journals/ijcb/2009/848516/tab1/" target="_blank">1一个>)。盐度压力诱导最大相对损伤(192%),当大豆植物受到与100毫米200毫米氯化钠和53%氯化钠,而植物处理50 mM氯化钠对控制并没有发现差异。
减少叶绿素含量可以作为指标来衡量盐度的影响强调叶绿体的完整性。表<一个href="//www.newsama.com/journals/ijcb/2009/848516/tab1/" target="_blank">1一个>表明该参数下100和200毫米减少生理盐水治疗(24和58%,分别地。),当植物受到50 mM不不同于控制。
为了评估盐胁迫造成的氧化损伤,积累的H1。介绍
2。材料和方法
2.1。植物材料和治疗
2.2。离子泄漏试验
2.3。硫代巴比土酸活性物质(TBARS)的决心
2.4。叶绿素含量测定
2.5。H
2.6。
2.7。抗氧化剂酶制剂和化验
2.8。血红素加氧酶制备和测定
2.9。Western-Blots分析何
2.10。隔离的RNA和rt - pcr分析
2.11。蛋白质的测定
2.12。统计分析
3所示。结果
3.1。盐的毒性评价
治疗
TBARS (nmol g 相对离子渗漏(%)
叶绿素(a + b) (mg g
控制
50 mM氯化钠
100毫米氯化钠
200毫米氯化钠
数据的平均值±SD四个独立的实验。列内不同字母表示显著差异(
3.2。H